食管鳞癌中hMLH1、E-cadherin、p16^INK4a基因启动子甲基化及其意义

背景与目的:目前认为抑癌基因启动子甲基化导致转录抑制是恶性肿瘤发生的重要机制之一,hgLH1、E-cadherin及p16INK4a基因在多种恶性肿瘤中都已被证实存在较高频率的甲基化.本研究通过检测食管鳞癌组织及癌旁组织中hMLH1、E-cadherin,p16INK4a基因启动子甲基化的发生情况,探讨hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因启动子甲基化在食管鳞癌发生发展中的作用.方法:采用酚-氯仿法提取105例食管鳞癌组织及癌旁组织的基因组DNA,应用甲基化特异性PCR对所提DNA进行hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因甲基化检测.采用EnVison免疫组织化学二步法对癌组织中上述3种基因蛋白表达进行检测.结果:癌组织中E-cadherin、hMLH1、p16INK4a基因启动子甲基化的阳性率分别为57.1%(60/105)、20.9%(22/105)和50.5%(53/105),而癌旁食管组织中相应的3个基因的甲基化率分别为10.5%(11/105)、1.9%(2/105)和7.6%(8/105),均显著低于癌组织.E-cadherin(P=0.021)及p16INK4a(P=0.026)基因甲基化与蛋白表达缺失密切相关,而hMLH1基因甲基化与蛋白表达无显著相关性.E-cadherin基因启动子甲基化与淋巴结转移有关(P=0.016),p16INK4a基因启动子甲基化与低分化癌有关性(P=0.024).hMLH1基因甲基化与各项临床病理特征均无关.结论:食管鳞癌中p16INK4a基因启动子甲基化与相应蛋白表达缺失密切相关,且在低分化癌中更多见;E-cadherin基因启动子甲基化与相应蛋白质表达缺失有相关性,并且有淋巴结转移多见的显著特征,这2个基因的甲基化位点与食管鳞癌密切相关.hMLH1基因甲基化可能并不直接参与食管鳞癌的发生、发展.     

非小细胞肺癌INK4a和ARF基因甲基化与其蛋白共表达关系的探讨

目的:分析INK4a和ARF基因启动子甲基化与其蛋白共表达之间的关系.方法:选择前期实验中p14ARF和p16INK4a蛋白共表达阴性的非小细胞肺癌(NSCLC)患者35例,共表达阳性的NSCLC患者20例作为研究对象,分别称为(p14 p16)阴性组和(p14 p16)阳性组.运用甲基化特异性PCR(MSP)方法对两组患者癌组织INK4a和ARF基因启动子的甲基化状态进行检测.结果:(p14 p16)阴性组有18例发生INK4a基因甲基化,(p14 p16)阳性组有2例发生INK4a基因甲基化,两组差异有显著意义(P＜0.01).(p14 p16)阴性组有8例发生ARF基因启动子甲基化,(p14 p16)阳性组有2例发生ARF基因启动子甲基化,两组差异无显著意义(P＞0.05).INK4a和ARF基因异常申基化相互之间无显著相关性(P＞0.05).结论:NSCLC患者肺癌组织INK4a基因甲基化是导致p16INK4a蛋白表达阴性的重要机制;INK4a和ARF基因甲基化可能是相对独立的事件.     

非小细胞肺癌中hMLH1启动子的甲基化

目的 探讨在非小细胞肺癌（NSCLC）中DNA修复基因hMLH1启动子甲基化与基因转录失活的关系,观察5-Aza-CAR的干预作用。方法 甲基化特异的PCR（methyl-specific PCR,MSP）和RT-PCR法分别测定基因的甲基化率和转录水平。结果 NSCLC癌／癌旁组织中的甲基化率分别是hMLH1为55％和14％;〉65岁组hMLH1甲基化率明显高于≤65岁组（P〈0．01）,hMLH1甲基化率随吸烟指数增高而升高（P〈0．05或P〈0．01）;hMLH1的甲基化率随TNM临床分期进展而逐渐增加（P〈0．05或P〈0．01）。甲基化的NSCLC标本hMLH1基因mRNA转录下降或失活,在细胞株水平5-Aza-CdR处理后hMLH1恢复转录活性。结论 启动子甲基化是调节hMLH1转录活性的重要机制,5-Aza-CDR具有逆转甲基化而恢复转录的作用。     

RASSF1A和p16 转录本在非小细胞肺癌中的表达及启动子区甲基化

 目的 研究RASSF1A和p16基因在国人非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的转录及启动子区甲基化情况，探讨其转录失活的机制，为NSCLC的诊断和治疗寻找新的途径。方法 应用半定量RTPCR和甲基化特异性PCR法分析96例NSCLC及远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因mRNA的表达和启动子区甲基化情况。结果 （1）53．12％（51／96）的NSCLC中RASSF1A表达明显下调或缺失；36．46％（35／96）的p16表达下调或缺失，而远癌正常肺组织均表达良好。（2）96例NSCLC中RASSF1A甲基化率48．96％（47／96），该基因表达明显下调或缺失的51例中39例（76．5％）出现甲基化，表达正常的45例中8例（17．8％）出现甲基化，两组对比差异有统计学意义（P〈0．05）；96例NSCLC中33例（34．38％）检测到p16启动予区甲基化，p16基因表达明显下调的35例中20例（57．1％）出现该基因CPG岛的甲基化，而表达正常的61例中13例（21．3％）出现甲基化，两组比较差异显著（P〈0．05）。96例远癌正常肺组织均未检测到此两基因启动子有甲基化。结论 RASSF1A和p16基因mRNA在国人NSCLC中较高比例的表达下调或缺失；甲基化可能是两基因表达失活的主要原因。     

鼻咽鳞癌组织RASSF1A基因表达失活及其临床意义的探讨

目的:研究鼻咽鳞癌组织中的抑癌基因RASSF1A的表达及其基因启动子区异常甲基化的情况.并分析DNA异常甲基化与鼻咽鳞癌临床病理因素之间的关系.方法:利用RT-PCR和MS-PCR的方法,分析38例鼻咽鳞癌组织标本、10例鼻咽炎性组织标本、4例正常鼻咽黏膜组织标本、两种鼻咽癌细胞株中RASSF1A基因的表达和其基因启动子区异常甲基化的情况.采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理鼻咽癌细胞株,观察RASSF1A重新表达的情况.结果:38例鼻咽癌组织标本和两种细胞株的RASSF1A基因表达显著低于对照组(P<0.05);71.05 %的鼻咽癌标本及两种鼻咽癌细胞株发生异常甲基化;甲基化与年龄、性别、临床分期和颈部淋巴结转移无相关性(P>0.05),与RASSF1A基因表达和肿瘤分化程度有关(P<0.05);用5-Aza-CdR处理的低表达RASSF1A基因的鼻咽癌细胞株,RASSF1A基因表达上调.结论:鼻咽癌患者肿瘤组织中存在RASSFIA基因的表达下调现象,基因转录启动区的异常甲基化是导致鼻咽癌组织中RASSF1A基因表达下调的主要原因.     

慢性乙型肝炎病毒感染与p16INK4A基因启动子甲基化关系的研究

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染对p16INK4A基因启动子甲基化的影响及其在HBV相关肝细胞癌(HCC)形成中的作用。方法选取23例HBV相关HCC癌及癌旁组织、25例慢性乙型肝炎肝穿刺组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测p16INK4A基因启动子的甲基化状态;免疫组化EnVision二步法测定肝组织内HBsAg、HBcAg、HBeAg和HBx蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测肝组织HBV DNA含量;PCR扩增和直接测序检测HBV x基因变异。结果癌组织p16INK4A基因启动子甲基化阳性率(47.83%)明显高于癌旁组织(17.39%),慢性乙型肝炎患者p16INK4A基因启动子甲基化阳性率(36.00%)与癌组织、癌旁组织差异无统计学意义。在癌旁组织和慢性乙型肝炎, p16INK4A基因启动子甲基化者HBx蛋白表达中位数分别为3.000和0.250,明显高于非甲基化者(0.500和0.000),但在癌组织中,HBx蛋白的表达与p16INK4A基因启动子甲基化状态无关。HBsAg、HBcAg、组织HBV DNA含量和x基因突变均与p16INK4A基因启动子甲基化状态无关。结论在癌前病变中,p16INK4A基因启动子甲基化与HBx蛋白高表达有关,HBx蛋白可能通过诱导p16INK4A基因启动子甲基化而使该抑癌基因失活,在HBV相关HCC形成中起重要作用。     

非小细胞肺癌组织中3p区抑癌基因启动子的甲基化

目的：探讨3p位点上3个抑癌基因RASSF1α、RAR-β和FHIT启动子甲基化在非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer．NSCLC）组织中的作用。方法：应用甲基化特异的PCR（methyl-specific PCR,MSP）和RTPCR方法分别测定53例NSCLC组织中RASSF1α、RAR-β和FHIT的甲基化率与转录水平。结果：NSCLC癌组织和癌旁组织中的甲基化率分别是FHIT为53％和8％,RAR-β为42％和6％,RASSF1α为57％和9％;FHIT、RASSF1α的甲基化率在吸烟指数〉400年支组高于≤400年支组（P值分别为0．004与0．008）;FHIT、RASSF1α的甲基化率Ⅱ期高于Ⅰ期（P值分别为0．016与0．008）,Ⅲ期高于Ⅱ期（P值分别为0．033与0．029）。结论：3P位点RASSF1α、RAR-β和FHIT基因甲基化的发生与NSCLC的病理生理密切相关,而启动子CpG岛甲基化是导致转录沉默的重要机制。     

食管鳞癌抑癌基因甲基化表达的相关性分析

[目的]研究食管鳞癌肿瘤组织及外周血多基因甲基化状态,以及不同基因甲基化的相关性。[方法]应用real-time MSP技术对76例食管鳞癌患者肿瘤组织、配对的癌旁正常组织、术前外周血中APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A抑癌基因的甲基化状态进行检测。随机选取60名年龄配对的健康志愿者外周血浆DNA作对照。[结果]肿瘤组织APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A的甲基化率显著高于对应癌旁正常组织（P=0.000）。术前外周血中这5种基因的甲基化率显著高于健康对照组（P=0.000）。RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A甲基化有显著性相关,APC与这4个基因甲基化无相关性。[结论]食管癌患者癌组织及外周血抑癌基因APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A高甲基化,RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A甲基化有显著相关性。     

食管鳞癌组织DNA甲基化与肿瘤侵袭相关性的探讨

目的:研究食管鳞癌组织中多基因甲基化状态及其与临床病理特征的相关性.方法:提取76例食管鳞癌患者的新鲜冷冻肿瘤组织及癌旁正常组织,用酚氯仿法抽提组织中的DNA,然后用亚硫酸氢盐进行甲基化处理,最后用Real-time MSP技术分别检测了APC、RARβ2、CDH1、p16INK4a和RASSF1A 5个抑癌基因的甲基化状态,结合临床及病理资料用统计软件SPSS 17.0进行统计学分析.结果:食管癌组织中5个基因DNA甲基化率显著高于癌旁正常组织(P＝0.000).肿瘤组织中5个基因DNA甲基化率与临床病理分期、淋巴结转移及神经脉管浸润均显著相关,P＜0.050,且APC、p16INK4a和RASSF1A甲基化与肿瘤T分期显著相关,P＜0.050,RARβ2及CDH1基因甲基化与肿瘤T分期无显著相关性(P值分别为0.320,0.105).这5个抑癌基因甲基化与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤长度、分化程度、吸烟和饮酒等7项指标无显著相关性.经Logistic分析,家族肿瘤史是肿瘤组织APC基因DNA甲基化的独立相关因素[P=0.036,Exp(B)=34.675,95％CI(1.253～959.844)].结论:食管癌患者肿瘤组织APC、RARβ2、CDH1、p16INK4a和RASSF1A均存在高甲基化现象,肿瘤组织中DNA甲基化与肿瘤侵袭程度显著相关;家族肿瘤史是肿瘤组织APC基因DNA甲基化的独立相关因素.     

乳腺癌中NDRG-1基因甲基化及其体外逆转研究

目的:探讨N-myc下游调节基因(N-myc downstream regulated gene-1,NDRG-1)基因在乳腺癌组织中的甲基化状态,研究甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine, 5-Aza-CdR)对乳腺癌细胞株T47D的生长增殖及NDRG-1 mRNA表达的影响.方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法检测乳腺癌组织、相应癌旁组织和乳腺良性病变组织中NDRG-1基因启动子甲基化状态;5-Aza-CdR处理T47D细胞后,MTT法观察细胞生长活性的变化,RT-PCR法检测处理前后抑癌基因NDRG-1的mRNA表达变化.结果:NDRG-1基因在乳腺癌组织中甲基化率为46.8%,癌旁组织中甲基化率为21.3%,而乳腺良性病变组织均未检测到甲基化.T47D细胞经5-Aza-CdR处理后,与对照组相比,细胞生长受到明显抑制.RT-PCR检测发现,与对照组相比,不同浓度处理组细胞的NDRG-1 mRNA表达增多. 结论:NDRG-1基因甲基化状态与乳腺癌发生有密切关系.5-Aza-CdR逆转T47D细胞NDRG-1基因甲基化,恢复该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞生长.