用硝酸镧示踪测定大鼠脑损伤后血脑屏障通透性改变的电镜技术

0引言用硝酸澜作为示踪剂,以探测某些生物屏障通透性改变的电镜技术,近年来应用广泛,不断出现用其对血脑、血睾、血气等屏障的示踪研究的报道’”．本实验是用李学荣等卜‘的硝酸澜示踪技术．对大鼠弥漫性脑损伤后血脑屏障通透性改变进行测定,取得了良好效果．现介绍如下．l材料和方法l．1动物及模型选用wistar成年大鼠22只．雌仍不拘．随机分为5组,实验组分别在弥漫性脑损伤后5n。in．3（）。nin．12h,24h四个时间点取材,每个时间点5只．正常对照组2只．运用贺氏自制动物头颅瞬间旋转致伤装置制备弥漫性脑损伤模型．1．2灌注固定液…     

喂饲克山病病区粮大白鼠心肌细胞膜通透性的变化——用硝酸镧作示踪物的电子显微镜观察

以硝酸镧作示踪物用电子显微镜观察喂饲克山病病区粮3个月的大白鼠心肌细胞膜通透性的变化。结果发现喂饲克山病病区粮的动物心肌细胞肌丝间和部分线粒体内均有镧盐沉着,而非病区粮饲养的动物镧盐颗粒只见于心肌细胞外间隙。表明喂饲克山病病区粮的大白鼠心肌肌膜和部分线粒体膜通透性增大。     

用硝酸镧检测心肌顿抑兔微血管的超微结构改变及呋喃丙吡 …

目的：观察心肌顿抑后微血管可逆性损伤的超微结构改变，以及钙拮抗剂呋喃丙吡啶对微血管损伤是否具有保护作用。     

用硝酸镧检测心肌顿抑兔微血管的超微结构改变及呋喃丙吡啶的保护作用

观察心肌顿抑后微血管可逆性损伤的超微结构改变，以及钙拮抗剂呋喃丙吡啶对微血管损伤是否具有保护作用．方法：建立兔心肌顿抑模型，采用镧醛灌注固定法制备电镜样品．缺血再灌注前用呋喃丙吡啶预防性给药．结果：闭塞15min再灌注15min时，血管扩张，间隙水肿，血管内外附着大量的镧颗粒．再灌注30min时损伤进一步加重，但血管膜结构完整，直至再灌注120min血管通透性损伤基本恢复正常．预防性给予呋喃丙吡啶后，闭塞15min再灌注15min，血管内皮结构完整，仅在血管腔内有镧颗粒附着在血管壁上，血管外间隙水肿减轻．结论：心肌顿抑时微血管通透性增加，血管内膜结构完整，随着再灌注时间延长，血管通透性恢复正常．缺血再灌注前预先应用呋喃丙吡啶防治可以限制微血管顿抑．     

用硝酸镧示踪法观察渗透性血脑屏障开放后的超微结构变化

用兔颈内动脉注入1.4M甘露醇法、制作了渗透性血脑屏障开放的模型。选硝酸镧作示踪剂,用血管灌注法和块染法对血脑屏障开放后的超微结构变化进行了观察。电镜检查表明镧可由血管内通过内皮细胞间的紧密连接,达内皮下层和细胞外间隙,或从血管外进入血管内。实验提示:渗透性血脑屏障开放的形态学基础是血管内皮细胞间的紧密连接开闭的可逆性改变。镧血管灌注法的示踪效果优于镧的块染法。     

巨噬细胞和组织血管紧张素Ⅱ在动脉粥样硬化兔腹主动脉狭窄前后血管内膜的变化

目的观察巨噬细胞和组织血管紧张素Ⅱ在动脉粥样硬化兔腹主动脉狭窄近远端血管内膜的变化情况。方法25只新西兰大白兔随机分为对照手术组(n=10)、高脂手术组(n=10)、高脂假手术组(n=5),饲养28周后,对照手术组和高脂手术组行腹主动脉缩窄术,高脂假手术组行假手术。术后继续以原来的饲养方法饲养4周,在测量狭窄近远端压力后获取标本。采用HE染色和免疫组织化学分析检测血管内膜厚度、巨噬细胞数量、血管紧张素Ⅱ水平。结果平均内膜厚度(μm):高脂手术组狭窄近端(204.7±8.3)较高脂假手术组相同位置(175.8±4.3)增厚(P=0.001);而高脂手术组狭窄远端(140.1±1.3)较高脂假手术组相同位置(166.2±5.1)厚度降低(P=0.000)。巨噬细胞数量(/μm):高脂手术组狭窄近端(0.31±0.05)较狭窄远端(0.16±0.04)显著升高(P=0.000);高脂手术组狭窄近端(0.31±0.05)较高脂假手术组相同位置(0.20±0.02)显著升高(P=0.000)。组织血管紧张素Ⅱ水平(/μm):高脂手术组狭窄近端(0.26±0.01)较狭窄远端(0.12±0.01)显著升高(P=0.000),高脂手术组狭窄近端(0.26±0.01)较高脂假手术组狭窄远端(0.17±0.01)明显升高(P=0.000),高脂手术组狭窄近端(0.12±0.01)较高脂假手术组狭窄远端(0.15±0.02)明显降低(P=0.000)。结论在动脉粥样硬化兔腹主动脉狭窄近端,压力增高,血管组织内膜厚度和巨噬细胞数量增加,血管紧张素Ⅱ水平明显升高;在狭窄远端,血管组织内膜厚度变薄,巨噬细胞数量减少,血管紧张素Ⅱ水平降低。     

异丙酚对假死大鼠脑组织血管通透性变化的影响

目的探讨假死状态下大鼠脑组织血管通透性变化及异丙酚对它的影响。方法90只Wistar大鼠随机取9只为手术对照组（C组）,其余随机均分为假死组（SA组）、假死＋镇静剂量异丙酚组（SA＋S．P组）和假死＋麻醉剂量异丙酚组（SA＋A．P组）,制备20℃条件下大鼠假死模型。测定大鼠股动静脉插管后和假死模型建立后30min,60min和90min脑组织的组织含水量、瞬时组织通透性和MPO活性并取材用单盲法做病理学检查。结果①组织含水量：与C组相比,在30min时,其余3组大鼠脑组织含水量升高,但无异差（P〉0．05）;在60min和90min时,其余3组高于C组,P值分别为〈0．05和〈0．01;②瞬时组织通透性：在30min时,SA＋A．P组低于其他组（P〈0．01）;在60min时,SA组和SA＋S．P组高于C组（P〈0．05）,与SA＋A．P组相比时,SA组和SA＋S．P组较高（P〈0．01）;在90min时,其余3组高于C组（P〈0．05）,与SA＋A．P组相比,SA和SA＋S．P组较高（P〈0．05）;③MPO活性：在30min、60min和90min3个时间点,其余3组均高于C组（P〈0．05）。从30min→60min→90min,除C组外,其余3组的组织含水量、瞬时组织通透性和MPO活性随时间推移逐渐增高（P〈0．05）;④病理学光镜检查：C组各时间点病理切片显示脑组织血管轻度扩张充血,细胞周围间隙略增宽;其余3组,在30min时,显示脑组织血管扩张充血,血管周围及细胞周围间隙增宽,在60min时,显示血管周围及细胞周围间隙明显增宽,可见散在的软化灶;90min显示血管周围及细胞周围间隙显著增宽,可见多灶性软化灶。结论在时间为30min的20℃假死状态下,假死大鼠脑组织的组织通透性、组织含水量与正常脑组织无显著性差异;病理学光镜检查结果与正常脑组织非常相接近。麻醉剂量异丙酚能减轻假死状态下大鼠脑组织血管通透性,但未能改善其病理学结果。结果提示在20℃假死状态下,30min可能为其可复苏时限,改善假死状态下的复苏用药尚待进一步研究。     

硝酸镧示踪电镜观察兔心复灌损伤和山莨菪碱的保护作用

本实验采用硝酸镧示踪法,在电镜下观察兔心复灌损伤和山莨菪碱(654-2)的保护作用。复灌损伤组心肌超微结构有严重的破坏,镧颗粒绝大多数出现在心肌细胞内;加654-2保护组心肌超微结构基本正常,镧颗粒绝大多数沉积在心肌细胞膜外。实验结果表明654-2确实有抗兔心复灌损伤的作用;硝酸镧示踪法是一种探讨膜性损伤的好方法。     

着床前后兔子宫内膜糖蛋白变化的电泳分析

本文以二种凝集素ＷＧＡ、ＬＣＡ为探针，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、印迹转移及ＡＢＣ免疫酶标染色方法，连续观察了着床期间（Ｄ５－Ｄ９，交配日为Ｄ０）兔子宫内膜糖蛋白表达的动态变化。发现ＷＧＡ结合４１Ｋｄ、８５Ｋｄ，ＬＣＡ结合４５Ｋｄ、８３Ｋｄ糖蛋白在胚泡进入子宫腔，但尚游离时（Ｄ５，Ｄ６）开始升高，在着床始发的Ｄ７天达高峰，胚泡植入后（Ｄ７．５，Ｄ８）下降，着床完成时（Ｄ９）多已消失。其中４１ＫｄＷＧＡ结合和４５ＫｄＬＣＡ结合特异性糖蛋白变化尤为突出，其含量在未孕时极微，Ｄ７显著增高，着床开始后（Ｄ７．５）即迅速下降，且这两条带主要存在于胚泡着床侧。结果表明：着床期间子宫内膜表面糖蛋白有阶段特异性变化，并该变化可能受到胚泡的局部调节作用。     

着床前后兔子宫内膜糖变化的电泳分析

本文以二种凝集素ＷＧＡ、ＬＣＡ为探针，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、印迹转移及ＡＢＣ免疫酶标染色方法，连续了着床期间（Ｄ５－Ｄ９，变配日为Ｄ０），兔子吕内膜糖表达的动态变化。发现ＷＧＡ结合Ｋｄ、８５Ｋｄ，ＬＣＡ结合４５Ｋｄ、８３Ｋｄ糖蛋白在胚泡进入子宫腔，但尚游离时（Ｄ５，Ｄ６）开始升高，在着床始发的Ｄ７天达高峰，胚泡植入后（Ｄ７．５，Ｄ８）下降着床完成时（Ｄ９）多已消失。其中４１ＫｄＷＧＡ结合和４５Ｋdi     

功能性子宫出血子宫内膜血管变化的研究

目的　探讨内分泌功能紊乱和避孕药具引起的功能性子宫出血(DUB)病理变化的共同点。方法　应用组织学、免疫组织化学方法对DUB的子宫内膜进行组织形态学、血管内皮细胞CD34和基膜层粘连蛋白(LN)的比较研究。结果　避孕药具引发的出血为弥散性,内膜发育受抑制;而内分泌紊乱引发的出血为局灶性,内膜发育呈不同步状态。2组共同点是出血部位的血管呈断裂像,血管内皮细胞中CD34 和血管基膜中LN的阳性表达都明显减弱。结论　不同诱因的DUB导致子宫出血的直接因素均是毛细血管内皮细胞中CD34和基膜中LN的减少。     

实验兔急性肺损伤血管内皮标记物的变化

目的：观察实验兔急性肺损伤中血管内皮标记物的变化。方法：采用同种骨髓提取液（ＢＭＥ）经兔颈静脉缓慢恒流注入致伤的方法,复制兔骨髓型急性肺损伤（ＡＬＩ）模型,连续ｈ多时相点观察血中循环内皮细胞（ＣＥＣ）,血浆颗粒膜蛋白－１４０（ＧＭＰ－１４０）和内皮素（ＥＴ－１）以及肺组织ＧＭＰ－１４０含量,并行常规病理及电镜检查。     

模拟潜水过程中兔血管内皮细胞的变化

目的:观察模拟潜水前、后血管内皮标记物及血管内皮细胞形态的变化。方法:14只新西兰白兔,在0.55MPa下停留35min,再升至0.7MPa停留35min,阶段减压出舱,检测加压前与减压后血浆内皮素1(ET1)和第Ⅷ因子(vWF),比较加减压前后的变化;电镜下观察阶段减压后血管内皮细胞形态变化。结果:减压后较加压前血浆ET1水平由(1.33±0.23)ng/L增至(2.99±0.35)ng/L,vWF活性由(2.35±0.47)%降至(1.89±0.34)%;减压后部分血管内皮细胞肿胀、脱落。结论:加减压过程能造成血管内皮的损伤。     

聚乙二醇—硝酸镧配位聚合物的表征研究

以聚乙二醇(PEG)为配位体,首次合成了三价稀土金属镧与PEG的配位聚合物。实验测定了该配位聚合物的红外光谱、示差扫描量热谱(DSC)、热失重分析(TGA)和凝胶渗透色谱(GPC),并就配位反应、热分解以及配位前后分子流体力学体积的变化进行了讨论。     

功能性子宫出血内膜血管CD34和LN的变化

为探讨功能性子宫出血的原因 ,采用组织学和免疫组织化学方法 ,对功能性子宫出血的内膜与正常内膜进行了组织学和CD34及层粘连蛋白 (LN)的比较观察。组织学观察显示 :功能性子宫出血的内膜发育呈不同步状态 ,并有不同程度的局灶性出血 ,出血部位的血管多呈断裂像。经图像分析仪测定显示 :出血内膜组织的血管内皮细胞CD34和血管基膜的LN阳性反应明显减弱。提示功能性子宫出血与血管中CD34和LN的减少有关。     

PDGF-β mRNA反义寡核苷酸抑制兔血管内膜损伤后血管平滑肌细胞增生

目的 以PDGF-β的反义寡核苷酸作为药物抑制血管平滑肌细胞表达PDGF-βmRNA和增生,为反义药物预防经皮血管内膜成形术后再狭窄提供实验依据.方法 用球囊导管损伤兔髂动脉内膜建立再狭窄模型,于内膜损伤后1周观察血管平滑肌细胞表达PDGF-β mRNA和增殖细胞核抗原的情况.结果 计数200个内膜细胞中的PCNA阳性反应的细胞数,与对照组相比,反义药物显著抑制内膜平滑肌细胞表达PCNA,抑制率为93.44%(P＜0.001).显微镜高倍视野下(400X)计数血管内膜每平方毫米中的PDGF-βmRNA阳性细胞的平均数,与对照组相比,反义药物显著抑制内膜平滑肌细胞表达PDGF-β mKNA,抑制率为88.40%(P＜0.001).结论 根据不同种属PDGF-β的同源性设计的反义药物显著下调血管内膜表述PDGF-β mRNA并可抑制血管内膜增生,这为临床应用反义寡核苷酸防治经皮血管内膜成形术后再狭窄提供实验依据.