Th1/Th2分化的转录调节

Th1/Th2平衡在机体免疫反应调节中具有关键性作用。许多普遍性转录因子和细胞特异性转录因子参与了对Th1/Th2分化的转录调节 ,对这些转录因子在Th1/Th2分化中作用的研究 ,将有助了解免疫性疾病的发病机理和探索新的治疗方法。     

急性MCMV感染对小鼠脾Th1/Th2/Th17细胞亚群分化的影响

目的:在整体水平观察小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠脾Th1/Th2/Th17细胞亚群分化及其主要的效应性细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17A)表达的影响.方法:建立MCMV感染模型,8只BALB/c小鼠分别于接种MCMV Smith株后3天和14天各处死4只;另设8只接种唾液腺匀浆的模拟感染小鼠作为对照.用空斑形成试验测定肝、脾和唾液腺组织病毒滴度;流式细胞术检测脾T淋巴细胞中Th1(CD4+ IFN-γ+)、Th2(CD4+ IL-4+)、Th17(CD4+IL-17A+)细胞比例,双抗体夹心ELISA法检测脾细胞培养上清中病毒特异性IFN-γ、IL-4、IL-17A水平.结果:MCMV感染早期肝、脾和唾液腺组织中病毒呈低水平复制,而感染后14天仅在唾液腺组织呈高水平复制;Th1细胞比例及病毒特异性IFN-γ主要在MCMV感染早期呈显著升高(P ＜0.01);Th2细胞及IL-4均无明显表达及改变;Th17细胞及病毒特异性IL-17A则主要在感染后14天升高(P＜0.05).结论:MCMV感染早期,机体通过上调Th1细胞分化比例及IFN-γ的表达发挥抗病毒效应,而MCMV诱导Th17细胞分化及IL-17A的高表达可能是MCMV感染致宿主特异性细胞免疫功能失调并逃避机体特异性细胞免疫攻击的原因之一.     

细胞信号转导介导与日本血吸虫特异性Th1/Th2免疫偏移

分别于小鼠感染日本血吸虫后 0、 4、 6、 8和 12周 ,取脾淋巴细胞体外培养 ,进行细胞信号转导抑制试验 ,观察酪氨酸蛋白激酶 (TPK )、蛋白激酶C (PKC )和磷酯酰肌醇 3 激酶 (PI 3 K )特异性抑制剂 (Tyrphostin 2 5、D sphingosine和Wort mannin )分别特异性抑制和不同组合抑制TPK、PKC和PI 3K后 ,对小鼠脾淋巴细胞经虫卵可溶性抗原 (SEA )诱生IL 2、IFN γ和IL 4的表达水平及对Th1/Th2免疫偏移的影响。结果发现Tyrphostin 2 5对IL 2、IFN γ和IL 4水平的抑制作用均非常显著(P <0 0 1) ,D sphingosine主要影响IL 4的表达 (P <0 0 1) ,而Wortmannin则主要影响IFN γ的表达 (P <0 0 1) ,Tyrphostin 2 5和Wortmannin联合应用可完全阻断IL 2的表达及增强对IFN γ的抑制作用 ,Tyrphostin 2 5和D sphingosine联合应用可完全阻断IL 4的表达。对反映Th1/Th2免疫平衡的Th2分化指数分析表明 ,D sphingosine可使Th2免疫应答优势减弱 ,而Wort mannin则可使Th2免疫应答优势增强。研究结果表明 ,干预细胞信号转导可调节日本血吸虫特异性Th1/Th2细胞因子表达水平及Th1/Th2免疫偏移 ,为探索控制日本血吸虫卵肉芽肿病变的潜在新途径 ,提供了实验依据。     

在单个细胞水平上分析抗原特异性Th1/Th2细胞因子产生的关联性

目的　在单个细胞水平上 ,观察抗原特异性Th1和Th2细胞因子产生的关联性 ,为进一步阐明CD4 T细胞的分化 ,细胞因子产生的相互关系及其特征提供理论依据。方法　从OVA TCR转基因小鼠的脾和淋巴结中分离CD4 T细胞 ,在体外在抗原提呈细胞存在下 ,用卵白蛋白 (OVA)抗原多肽刺激 3d后 ,再以同样的培养条件刺激 5～ 6h ,固定细胞 ,然后进行细胞表面和细胞内细胞因子染色 ,最后利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析Th1和Th2细胞因子产生的关联性。结果　抗原特异性CD4 T细胞经抗原再一次刺激后 ,分泌Th1(IFN γ和IL 2 )和Th2 (IL 4、IL 5和IL 10 )细胞因子。IL 12促进IFN γ的表达 ,控制Th2细胞的分化。此外 ,大多数抗原特异性CD4 T细胞只产生 1种细胞因子 ,1个细胞同时产生 2种细胞因子极少见。结论　在单个细胞水平上的研究结果表明 ,经抗原短暂刺激后 (3d) ,不同的CD4 T细胞亚群只产生 1种Th1和 或Th2细胞因子 ,同时产生两种以上者占有很低的比率     

不同Aβ多肽与佐剂组合免疫小鼠对Th1/Th2平衡的调节作用

目的 观察野生型和突变型Aβ40及Aβ42与不同佐剂组合对T淋巴细胞亚型的不同刺激和调节作用,以探讨降低Aβ免疫毒性反应的可能途径。方法 BALB/c小鼠随机分组：铝（Al）佐剂对照组、Aβ42+福氏佐剂（CFA）组、Aβ42+Al组、Aβ40+Al组、Aβ40（E22A）+Al组,每组8只。经初次免疫和3次加强免疫,检测抗体效价,培养脾淋巴细胞,分别用各自抗原刺激,48h后用双抗夹心ELISA试剂盒检测培养液中IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-4的含量。72h后用CCK-8法检测脾淋巴细胞特异性增殖反应。结果 经Aβ免疫的4个试验组血清中均有特异性抗Aβ的抗体产生。脾淋巴细胞经各自抗原刺激后,均出现脾淋巴细胞特异性增殖反应。细胞培养上清中细胞因子检测结果显示,Aβ42+CFA组分泌的代表Th1型的细胞因子含量最高,Aβ40（E22A）+Al组则有显著降低（P <0.01）。其中Aβ40及突变型+Al组与Aβ42+Al组相比,分泌的Th1型细胞因子也有明显降低（P<0.05）。结论 Aβ40（E22A）+Al组对T细胞的毒性作用最低,在机体的免疫反应中可能具有更好的安全性。     

Th1／Th2分化的转录调节

Th1/Th2平衡在机体免疫反应调节中具有关键性作用。许多普遍性转录因子和细胞特异性转录因子参与了对Th1/Th2分化的转录调节，对这些转录因子在Th1/Th2分化中作用的研究，将有助了解免疫性疾病的发病机理和探索新的治疗方法。     

089 Th1／Th2分化的转录调节

Th1／Th2平衡在机体免疫反应调节中具有关键性作用。许多普遍性转录因子和细胞特异性转录因子参与了对Th1／Th2分化的转录调节，对这些转录因子在Th1／Th2分化中作用的研究，将有助了解免疫性疾病的发病机理和探索新的治疗方法。     

Th17/Treg失衡在肺炎支原体肺炎患儿中的作用及其机制

目的：探讨Th17/Treg失衡在肺炎支原体肺炎患儿中的作用及其机制。方法：纳入2013年6月至2015年1月我院收治的60例肺炎支原体肺炎急性期患儿和30例同期体检的健康儿童为研究对象。流式细胞术分析两组儿童外周血Th17和Treg的百分率,ELISA分析Th17和Treg特异性细胞因子IL-17和IL-10的分泌水平,定量PCR测定Th17和Treg特异性转录因子RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平,以及Notch信号分子(Notch1,Hes1和Hey1)的表达水平。结果：与健康儿童相比,肺炎支原体肺炎急性期患儿外周血的Th17的百分率,IL-17分泌水平以及特异性转录因子RORγt的表达水平均明显增高,差异均具有统计学意义(P<0.05),而急性期患儿外周血的Treg的百分率,IL-10分泌水平以及特异性转录因子Foxp3的表达水平均较健康儿童明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。进一步分析显示急性期患儿Notch1、Hes1和Hey1的表达水平均明显高于健康儿童,其差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论：Th17/Treg失衡参与儿童支原体肺炎的发生发展,Notch信号通路可能通过调节免疫细胞分化和细胞因子分泌参与Th17/Treg失衡。     

大鼠发育早期接触变应原对Th1/Th2亚群功能及哮喘发生的影响

目的探讨妊娠期母鼠及其子代接触尘螨点刺液（Derp）对发育后期个体Th1/Th2平衡及哮喘发生的影响。方法Wistar大鼠根据母体妊娠期及新生早期是否接触Derp随机分为对照组、母Derp-仔Derp-组（母鼠和其子代均未接触Derp）、母Derp＋仔Derp＋组（母鼠和其子代均接触Derp）和母Derp＋仔Derp-组（母鼠接触Derp,其子代未接触Derp）,分别皮下注射Derp或生理盐水,30d龄时除对照组外,其余3组以卵白蛋白（OVA）为变应原致敏并雾化吸入,诱发哮喘发生。取血浆检测OVA特异性IgE抗体、收集外周血单个核细胞（PBMC）用ELISA法检测培养上清中细胞因子IL-4和IFN-γ水平,行支气管肺泡灌洗记录支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞的计数,留取肺组织行病理学检查。结果母Derp＋仔Derp＋组在哮喘建模后PBMC培养上清中IFN-γ水平显著低于母Derp-仔Derp-组,IL-4水平显著升高,IL-4/IFN-γ比值升高,OVA特异性IgE、BALF中嗜酸性粒细胞计数显著高于母Derp-仔Derp-组;母Derp＋仔Derp-组与母Derp-仔Derp-组IL-4和IFN-γ水平差异均无统计学意义,OVA特异性IgE水平虽有增高,但差异不具统计学意义,BALF中嗜酸性粒细胞计数差异无统计学意义。母Derp＋仔Derp＋组Th2优势显著高于母Derp＋仔Derp-组。结论胎鼠对于Derp跨胎盘的致敏作用可通过母体妊娠期间的免疫来完成,这一过程会根本上导致Th2优势免疫的发生,增加了变态反应性疾病的危险性。     

支气管哮喘与Th1/Th2/Th17的相关性分析

支气管哮喘是一种涉及多种临床症状,例如咳嗽、气喘、呼吸困难等常见的呼吸系统疾病,其发病率之高严重威胁着人类的健康.哮喘的发病与遗传和环境都有着密切的联系,因其发病机制十分复杂至今尚未明了.众多的细胞及其细胞因子均参与了哮喘的发病过程,其中辅助性T细胞(Thelper,Th)及其亚群(Th1、Th2和Th17)已被证实与支气管哮喘的发生有着十分密切的关系.     

Th1和Th17细胞在活动期肺结核病患者外周比例失衡的临床研究

结核病是全球性严重危害人类健康的传染性疾病之一,深入解析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染过程中宿主免疫应答特征是研发和评价有效的结核疫苗的重要前提。本研究以Th1、Th17和Th22细胞免疫应答为切人点,检测抗原特异性和非特异性活化后的Th1、Th17和Th22型细胞因子分泌细胞的比例。结果显示,和正常人群相比,结核病患者的T细胞在非特异性刺激下的Th1型细胞免疫应答能力明显高于健康人,即分泌IFN-γ和TNF-α的细胞数量明显增多,但IL-17型应答能力则低于健康人群;经M.tb特异性抗原ESAT6-CFP10刺激后,活动期肺结核病患者分泌IFN-γ的T细胞比例高于健康人,而分泌TNF-α的T细胞的比例与健康人相比却显著下降,分析Th1型与Th17型细胞之比显示结核病患者要高于健康人,而Th22型细胞应答在活动期结核病患者中的水平和正常人群相近。上述研究结果显示活动性肺结核病患者外周Th1型和Th17型细胞和正常人相比存在应答失衡,这一比例失调有望为评价结核疫苗效果和抗结核免疫应答的免疫学特征提供新依据。     

接种纯化人用狂犬病疫苗对Th1/Th2类细胞因子谱的影响

目的 研究人用狂犬病纯化疫苗(RV)对人体抗原特异性Th1/Th2细胞因子谱的影响.方法 对20例暴露者进行RV的全程接种,在开始接种RV的第0天、14天、45天时分别采血并分离人外周血单个核细胞(PBMC)与RV进行培养,采用ELISA法检测血清抗狂犬病病毒抗体,体外培养检测淋巴细胞转化增殖能力(MTT法),流式微球分析技术(CBA)法检测细胞培养上清液中Th1类细胞因子(IFN-γ、TNF、IL-2)及Th2类细胞因子(IL4、IL-5、IL-10)的水平.结果 暴露组全程注射RV后,19例于第45天、1例于第60天检测血清抗狂犬病病毒抗体阳性,阳性率100%.RV刺激后,暴露组第14天、第45天淋巴细胞增殖能力显著增高,第45天淋巴细胞增殖能力明显高于第0天(P<0.05);当RV刺激后,暴露组第14天、第45天产生IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5的含量高于未刺激组及暴露组第0天水平(P<0.05);TNF、IL-10的含量各组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 RV在刺激机体产生体液免疫的同时,可以诱导机体产生特异性细胞免疫,Th1的免疫应答尤为显著,提示细胞免疫在预防和控制狂犬病病毒感染中发挥重要的协同作用.     

实时荧光定量PCR检测RAW264.7巨噬细胞中Th1/Th2型细胞因子转录水平方法的建立及初步应用

目的 建立小鼠RAW264.7巨噬细胞的Th1和Th2型细胞因子荧光定量PCR检测方法.方法 依据GenBank中小鼠的β-actin基因序列、Th1型及Th2型细胞因子的核苷酸序列设计特异性引物,以RAW264.7巨噬细胞mRNA反转录后的cDNA为模板,通过构建质粒阳性标准品,建立检测上述细胞因子转录水平的real-time PCR方法.结果 用建立的荧光定量PCR方法,检测牛型布鲁氏菌S2308株感染RAW264.7巨噬细胞后,巨噬细胞Th1和Th2型细胞因子的转录水平.最低检测量为102拷贝/μL,线性关系很好,R2≥0.982,该方法具有良好的特异性和重复性.结论 成功建立了检测巨噬细胞中Th1和Th2型细胞因子转录水平的荧光定量PCR方法.     

Th1/Th2与慢性乙型肝炎

慢性乙型肝炎发病机制复杂 ,与机体的免疫状态密切相关 ,CD4 + Th细胞是机体的重要调节细胞 ,根据其产生细胞因子的不同分为Th1和Th2亚型 ,分别参与调节细胞免疫和体液免疫 ,Th1和Th2可相互调节 ,影响免疫应答的格局 ,Th1 Th2在多种感染性疾病中发挥重要作用 ,慢性乙肝患者存在Th1 Th2失衡 ,本文就Th1 Th2与慢性乙肝的关系研究进展进行简述。     

乳杆菌对原代淋巴细胞中Th1/Th2细胞平衡的影响

目的:分析7种乳杆菌对原代淋巴细胞增殖和细胞因子(CK)分泌的作用,进而探讨其对Th1/Th2细胞平衡的影响。方法:用不同种属、不同浓度的活的/热致死的乳杆菌体外作用于小鼠脾淋巴细胞培养60 h后,采用MTT比色法检测淋巴细胞的增殖效果。用ELISA法检测Th1型细胞因子(IL-12、IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)和调节型细胞因子(TGF-β)的分泌量。结果:活的/热致死的乳杆菌单独作用,就能促进淋巴细胞体外增殖并表现出剂量依赖关系(P<0.05)。当菌的浓度为107集落形成单位(CFU)/mL(即细菌与细胞的比例为10∶1)时,热致死的发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌的免疫活性近似于活菌。而且,这两株热致死菌还可适当提高淋巴细胞分泌IL-12和IFN-γ,抑制IL-4、IL-10和TGF-β的分泌,使其IFN-γ/IL-4的比值(代表Th1/Th2细胞平衡)均显著高于刀豆蛋白A(ConA)对照组(P<0.05)。结论:乳杆菌可通过提高淋巴细胞的IFN-γ/IL-4分泌率来促进Th1优势状态的Th1/Th2细胞平衡,并具有菌株特异性。     

Th1/Th2细胞与纤维化疾病

纤维化可以发生在不同组织器官和系统，是细胞外基质成分过度积聚、组织瘢痕形成的过程，是致病和致死的主要原因。纤维化疾病中Th1细胞/Th2细胞对纤维增生的反应失衡有重要影响。随着IFNγ对Th1细胞的免疫反应作用研究的深入，IL-4拮抗剂、IL-5和IL-13已经被用于纤维化疾病的治疗。这些细胞因子拮抗剂在临床试验中发挥着重要作用。     

抗原特异性Th17细胞的分化与调节

目的: 探讨影响抗原特异性Th17细胞分化和调节的因素.方法: T细胞受体转基因小鼠(DO11.10)CD4 T细胞, 与同背景正常小鼠的脾细胞混合, 经OVA多肽刺激后, 在不同的Th17极化的培养条件下, 观察Th17细胞及细胞因子的产生. 结果: 单纯OVA抗原刺激主要诱导特异性Th1型反应, 在TGF-β和IL-6存在的条件下, 主要诱导Th17反应; 当加入IL-23之后, 促进了Th17细胞的分化.阻断了IFN-γ和IL-4之后, Th17细胞的百分率明显增加.LPS可以促进Th1型细胞因子的产生, 但对抗原特异性Th17细胞的分化没有明显的促进作用.结论: 抗原特异性Th17细胞是与Th1、 Th2相对独立的细胞亚群, TGF-β、 IL-6和 IL-23可诱导或促进Th17的分化, 而Th1和Th2细胞因子抑制其分化.     

Th1/Th2和Th17/Treg模式与复发性流产相关性的研究进展

复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)是一种严重影响育龄期女性身心健康的生殖并发症,目前已成为世界性难题,影响家庭幸福指数并威胁生命正常延续.随着对该病认识的不断深入,人们发现该病更多的病因和发病机制有待被阐明.除很多已知因素外,越来越多的学者认为母胎界面Th1/Th2失衡(...     

Graves'病患者Th1/Th2免疫应答及性激素对Th1/Th2的影响

Graves'病(GD)是最常见的自身免疫性甲状腺疾病(AI-TD),其发病机理以体液免疫异常为大家所熟知,但细胞因子在GD中的发病作用越来越受到国内外学者的重视,研究的焦点主要侧重于Th1/Tb2细胞平衡紊乱.GD及其他自身免疫性疾病女性显著高发,提示性激素是影响机体免疫功能的重要因素.本文就近年来国内外对GD患者Th1/Th2免疫应答的研究及性激素对Th1/Th2平衡的影响作一综述.     

过敏性哮喘患者调节性T细胞对Th17细胞和Th9细胞的影响

目的:深入研究过敏性哮喘病人(轻到中度)急性发作期的调节性T细胞对Th17和Th9细胞功能影响的异常。方法:招募30例过敏性哮喘病人(轻到中度)急性发作期和30例健康者,采集外周静脉血30 ml,分离PBMC,然后应用磁珠法体外分离CD4+CD25+CD127-/low调节性T细胞(Tregs)和CD4+CD25-效应T细胞(选取分离纯度90%以上的标本继续下一步试验)。在PHA刺激下体外培养,检测效应T细胞增殖情况和Th17细胞、Th9细胞特异性基因(RORC和PU.1)表达及特异性细胞因子(IL-17和IL-9)分泌情况,检测哮喘病人Th17细胞和Th9细胞的异常情况;并给予Tregs干预,检测Tregs对Th17细胞和Th9细胞分化的影响。结果:哮喘组和健康对照组的Tregs均可以抑制CD4+CD25-效应细胞增殖反应,但哮喘组Tregs的抑制功能较健康对照组明显下降(P=0.03)。哮喘病人RORC表达和IL-17分泌均高于对照组(P0.05),Tregs对RORC表达的抑制能力在哮喘组有所下降(P0.05),但对IL-17分泌的抑制能力在哮喘组和对照组没有显著差别(P0.05);哮喘病人IL-9分泌无论是否加入Tregs干预均高于对照组(P0.05),但PU.1表达只有在加入Tregs干预后才高于对照组(P=0.04);Tregs对PU.1表达和IL-9分泌的抑制能力在哮喘组和对照组没有显著差别(P0.05)。结论:过敏性哮喘病人(轻到中度)急性发作期Tregs数量和功能下降,而Th17细胞和Th9细胞的特异性基因表达和特异性细胞因子生成增加,哮喘病人的Tregs在体外对Th17细胞的抑制功能有所下降,但尚未发现Tregs对Th9细胞的抑制功能明显降低。