应用液体蛋白芯片飞行时间质谱系统研究胃癌、肝癌血清差异蛋白表达

目的：研究胃癌、肝癌和正常人的血清差异蛋白表达,寻找具有潜在诊断意义的血清标志物,以利于胃癌、肝癌的早期诊断.方法：收集胃癌患者20例和肝癌患者10例以及正常人20例血清样本,经ClinProt磁珠纯化、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析及ClinPro-Tools生物信息学方法研究其血清蛋白表达谱.结果：质荷比（m/z）为2863u和4965u的蛋白峰能较好地鉴别胃癌和非癌组.m/z为1618u和4965u的蛋白峰能较好地鉴别肝癌和非癌组.m/z为4965u的蛋白峰在胃癌、肝癌中较正常人均异常高表达.结论：液体蛋白芯片飞行时间质谱系统作为研究蛋白表达谱的工具,具有较好的重复性与精度,筛选得到的m/z为2863,1618,4965u的蛋白可能为潜在的胃癌、肝癌肿瘤标志物.     

应用SELDI-TOF-MS技术筛选2型糖尿病肾病血清差异表达蛋白

目的 采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术建立2型糖尿病肾病血清蛋白指纹图谱,筛选其差异表达蛋白.方法 收集2型糖尿病肾病(T2DN)患者31例、2型糖尿病(T2DN)不伴肾病患者32例和正常对照血清30例,采用SELDI-TOF-MS技术建立蛋白指纹图谱,应用BioMarker Wizard 3.1软件对实验数据进行分析.结果 糖尿病肾病组与糖尿病不伴肾病组相比较,有14个差异表达蛋白峰(P＜0.05),其中糖尿病肾病组有2个蛋白峰高表达,12个蛋白峰低表达;糖尿病肾病组与正常对照相比较,有25个差异表达蛋白峰(P＜0.05),其中糖尿病肾病组有13个蛋白峰高表达,12个蛋白峰低表达.结论 糖尿病肾病具有多种差异表达蛋白,这些蛋白可能为其诊断的潜在标志物.     

应用表面增强激光解吸附离子化飞行时间质谱技术筛检博莱霉素肺纤维化大鼠血清蛋白标志物

目的鉴定博莱霉素肺纤维化大鼠模型血清差异表达蛋白,寻找肺纤维化疾病早期诊断标志物。方法48只雄性大鼠随机分为博莱霉素组和对照组,每组24只,分别于建模后7、14、28 d各取8只动物处死,取肺组织制作石蜡切片,苏木精-伊红和天狼星红染色,普通光学显微镜和偏振光显微镜观察肺纤维化反应;表面增强激光解吸附离子化飞行时间质谱和弱阳离子蛋白芯片检测血清样本,生物信息学软件分析获得的蛋白指纹图谱,鉴定差异蛋白表达。结果在博莱霉素组大鼠血清中找到4个差异表达的蛋白质,用生物信息学分析软件产生1个肺纤维化动物诊断模型,由质荷比分别为3 530.7、7 043.5、8 332.6和9 068.0的蛋白质组成,与对照组比较,其峰强度均显著升高。结论博莱霉素诱导的肺纤维化血清蛋白表达谱发现的4个差异表达蛋白有可能成为早期诊断博莱霉素肺纤维化大鼠模型的特异血清生物标志物。     

MB-WCX联合SELDI-TOF-MS在胃癌诊断中的应用

目的 研究WCX纳米磁珠联合表面增强激光解析电离化飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)对胃癌及其癌前病变诊断的意义。方法 应用纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS对26例胃癌、35例癌前病变患者(萎缩性胃炎15例,胃溃疡20例)及30例正常人血清标本进行分析,Swiss蛋白数据库搜索鉴定差异蛋白,建立诊断模型。结果 与健康对照相比较,质荷比为2741.2、7963.6和15904.3的蛋白质分子随病变程度表达上调,质荷比为13732.6的蛋白质在癌前病变组无统计学差异,但在胃癌患者中下调。质荷比2741.2、7963.6、15904.3及13732.6的蛋白质组成的诊断模型可以准确鉴别胃癌与正常对照,敏感性为92.3%,特异性为96.7%。结论 WCX纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS是筛选胃癌早期诊断标志物的有效手段,2741.2、7963.6、15904.3及13732.6的蛋白质组成的诊断模型有可能成为潜在的胃癌早期诊断标志物。     

SELDI蛋白质芯片技术在结直肠癌临床诊断中的应用研究

目的：利用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF—MS）技术及蛋白质芯片检测结直肠癌病人血清蛋白质指纹图谱,初步探讨其用于结直肠癌诊断的临床价值。方法：利用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术及弱阳离子交换表面CM10蛋白芯片监测70例结直肠癌患者和48例良性病变对照及25例正常对照的血清蛋白质谱。分为训练集（40例患者40例对照）和验证集（30例患者和33例对照）,前者用于筛选结直肠癌的差异蛋白标志物并建立人工神经网络（ANN）诊断模型,后者用于诊断效度的盲法验证。结果：结直肠癌患者和对照组血清蛋白指纹图谱共有148个明显表达差异的蛋白峰,筛选质荷比（m／z）为2957、2974、2982、3016、3282、5928、5948、6647、6661的9个蛋白质峰作为标志蛋白（P〈0．01）建立人工神经网络诊断模型,利用该模型对结直肠癌进行盲法预测,结果表明该诊断模型检测结直肠癌的灵敏度为94．2％,特异度为91．3％。结论：应用蛋白芯片技术检测到对结直肠癌有鉴别意义的血清蛋白标志物,可能为结直肠癌的早期诊断提供了新的手段。     

糖尿病视网膜病变患者血清高敏C反应蛋白的变化

近年来,研究发现C反应蛋白（CRP）与2型糖尿病及其大血管并发症密切相关,而CRP与2型糖尿病视网膜病变是否有关尚不清楚.本研究旨在观察2型糖尿病视网膜病变患者血清高敏CRP（hsCRP）水平,并与无视网膜病变的2型糖尿病患者及健康志愿者进行比较,探讨血清hsCRP水平与糖尿病视网膜病变的关系.……     

SELDI筛选绒癌耐氨甲喋呤细胞株耐药相关蛋白

目的 应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片分析筛选人绒毛癌细胞株JAR及其与人绒毛癌耐氨甲喋呤细胞株JAR/MTX之间的蛋白质表达差异,寻找出绒癌耐药的相关蛋白.方法 采用体外细胞培养来提取两种细胞的胞浆蛋白和分泌蛋白,应用SELDI-TOF-MS技术检测各细胞株提取的胞浆蛋白和分泌蛋白,采用CM-10型弱阳离子交换芯片检测.结果 经SELDI技术检测发现质荷比(m/z)为8132.043,10738.36的胞浆蛋白在JAR/MTX细胞中呈高表达;质荷比(m/z)为11555.09的分泌蛋白及m/z为4896.68的胞浆蛋白在JAR细胞中高表达,在JAR/MTX中呈低表达.结论 应用飞行时间质谱技术结合弱阳离子交换芯片,可有效筛选绒癌耐氨甲喋呤细胞株中的特异性表达蛋白;寻找到的差异蛋白与绒癌耐药密切相关,并可能成为本病耐药的标志物.     

乙型肝炎病毒相关肝癌血清差异表达蛋白的筛选、鉴定及其诊断价值

目的:筛选、鉴定乙型肝炎病毒(HBV)相关肝癌的血清差异表达蛋白,探讨其可能的早期诊断价值.方法:采用蛋白芯片及表面增强激光解析电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术对正常人、HBV相关肝炎、肝硬化患者及原发性肝癌患者术前血清分别进行检测,筛选肝癌血清差异表达蛋白;通过离子交换柱分离纯化其中表达差异最明显的蛋白,并进行质谱鉴定.根据筛选结果,建立肝癌诊断决策树模型,评价其诊断肝癌的准确性和敏感度.结果:与正常组相比,肝癌组有44个差异蛋白质波峰(P＜0.05),其中21个上调,23个下调;与肝硬化组相比,肝癌组有51个差异蛋白质波峰(P＜0.05),其中47个上调,4个下调.质荷比为5 805的蛋白质表达在正常人群＜慢性肝炎组＜肝硬化组＜肝癌组,在肝癌组中表达最高,差异具有统计学意义(P＜0.01);对其酶解消化产物进行肽指纹谱(PMF)鉴定发现其中有2条肽段序列与硫酸软骨素合酶Ⅱ部分序列相匹配.根据筛选的差异表达蛋白成功建立肝癌诊断决策树模型,其判断肝癌的准确率为94.82%[(23 32)/58]、敏感性88.46%(23/26)、特异性100%(32/32).结论:成功筛选HBV相关肝癌血清差异表达蛋白,其中差异最显著蛋白(质荷比为5 805)酶解产物中有2条肽段与硫酸软骨素合酶Ⅱ部分序列相匹配;根据筛选结果建立的肝癌诊断决策树模型有助于早期诊断HBV相关肝癌.     

2型糖尿病视网膜病变患者的血清低分子量蛋白质指纹图谱

目的研究2型糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）患者特异的血清低分子量蛋白质指纹图谱。方法应用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-MS）技术,选用H4蛋白质芯片,优化技术参数,对16例正常人,27例2型糖尿病不伴DR患者及21例2型糖尿病伴DR患者的血清标本进行检测,应用Biomarker Wizard软件筛选DR患者血清中差异表达蛋白质。结果H4芯片在激光强度210,灵敏度为9的条件下可获得较理想的图谱。在m／z2000至20000范围内共出现31个蛋白质／多肽峰;其中有5个差异表达蛋白质或多肽,m／z为7440,7639,7839,8147和8925（P〈0．05）。结论SELDVTOF-MS蛋白质芯片技术是一种快速、简便和高通量分析方法,能直接筛选出DR患者血清中的潜在标记物。     

应用SELDI-TOF-MS技术联合CT鉴别肾脏良恶性占位

目的 探讨表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在肾脏占位的良恶性鉴别诊断中的应用以及联合CT进行鉴别诊断的价值.方法 96例血清标本取自62例肾癌和34例肾脏良性占位患者,患者术前均接受过CT检查.应用SELDI-TOF-MS技术获得所有患者的金属亲和-铜离子(IMAC-Cu2+)蛋白芯片的表达图谱,随机采用42例肾癌和22例肾脏良性占位患者的血清蛋白质谱建立决策树诊断模型,并用其余患者进行双盲验证.结果 利用质荷比分别为4657.56、2955.95和3278.00的3个蛋白峰建立了1个决策树诊断模型,其敏感性为85.7%(36/42),特异性为90.9%(20/22),双盲法验证后的敏感性为75.0%(15/20),特异性为83.3%(10/12).而联合CT的诊断结果,建模组和验证组的诊断特异性和阳性预测值均可达100%.结论 利用质荷比分别为4657.56、2955.95和3278.00的3个蛋白峰所建立的诊断决策模型有助于鉴别肾脏占位的良恶性,联合临床CT诊断可明显提高诊断的效率.     

血清microRNA-873在2型糖尿病视网膜病变患者中的作用机制

目的 探讨microRNA-873在2型糖尿病视网膜病变患者血清中的表达水平及其作用机制。方法 选取2018年1月~2019年12月我院收治并确诊为2型糖尿病的患者150例作为研究对象,根据是否存在视网膜病变将所有的入组对象分为2型糖尿病合并视网膜病变组（DR组）78例和2型糖尿病不合并视网膜病变组（NDR组）72例,检测患者血清microRNA-873表达量、炎症介质及血管内皮功能等相关指标,进一步分析microRNA-873表达量与2型糖尿病视网膜病变的关系。结果 相对于NDR组患者,DR组患者体内microRNA-873表达量、TNF-α、IL-6及IL-17表达量均明显较高（P＜0.05）;DR组患者的Ecs水平明显高于NDR组,而EPCs水平明显低于NDR组（P＜0.05）。通过Pearson相关性分析结果显示,患者组血清microRNA-873表达量与TNF-α、IL-6、IL-17表达量及Ecs百分比间均存在明显正相关（P＜0.05）,与EPCs百分比间均存在明显负相关（P＜0.05）。结论 2型糖尿病视网膜病变患者血清中存在microRNA-873表达量改变,且与血清炎症介质表达量改变和血管内皮功能改变密切相关。     

精神分裂症患者血清中发现特征蛋白

目的:采用蛋白组学高灵敏高通量研究工具-表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测血清蛋白指纹图,通过差异蛋白组学筛选精神分裂症特有的蛋白标记物,为研究精神分裂症的病理过程和实验诊断奠定基础.方法:用Ciphergen公司生产的PBSⅡ/C型蛋白质指纹图谱仪和ProtienChip CM10(弱阳离子交换表面)蛋白芯片采集32例精神分裂症和44例对照组血清蛋白质谱图,采用Biomaker Wizard3.1版分析软件筛选差异蛋白和Biomaker pattern software5.0.2版建立诊断模型.结果:发现精神分裂症患者与对照组血清蛋白质指纹图谱有115个差异表达的蛋白质,其中6个有明显表达差异的标志蛋白,其质荷比(M/Z)分别为2 821、3 219、3 317、4 284、4 347和4 357,建立诊断模型对精神分裂症的诊断灵敏度和特异性分别为93.75%和93.18%,阳性预测值和阴性预测值分别为90.09%和95.35%.结论:精神分裂症患者血清具有高表达的特征蛋白,对精神疾病的鉴定、诊断、治疗和基因研究具有重要意义.     

2型糖尿病周围神经病变靶向基因与蛋白的初步研究

目的：筛选2型糖尿病周围神经病变（DPN）靶向基因与蛋白,探讨DPN发病机制。方法：利用基因芯片分析2例2型糖尿病伴有DPN患者、2例2型糖尿病不伴周围神经病变（DM）患者以及2例正常对照（CON）外周血单个核细胞基因表达谱的差异;利用蛋白芯片技术比较50例DPN患者、50例DM患者以及15例CON者血清蛋白质谱的差异,寻找DPN可能的致病因子。结果：与DM患者和CON者比较,DPN患者外周血单个核细胞中上调基因4条,     

应用液体蛋白芯片飞行时间质谱技术研究原发性肝癌门静脉癌栓形成相关标志物

 目的 应用液体蛋白质芯片飞行时间质谱技术研究肝癌门静脉癌栓（portal vein tumor thrombus,PVTT）形成相关标志物,并建立预测模型。方法 采取非PVTT和PVTT原发性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者血清各20例,采用磁珠分离系统纯化、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）分析及ClinProTools生物信息学方法研究其血清蛋白表达谱,通过神经网络算法（statistical neural networks,SNN）建立图谱诊断模型并进行验证。结果 经数据对比分析找到39个差异有统计学意义的质荷比（m/z）峰（P<0.05）,从中筛选出最具划分能力的8个质荷比峰（m/z=4 420.43、4 055.19、2 988.80、4 091.46、4 072.24、6 935.04、4 109.53和5 321.17）,并以此建立HCC的PVTT诊断模型,模型识别率达到97.5%,而预测率达到92.73%。非PVTT组和PVTT组的准确性分别为100%和95%。结论 筛选得到的蛋白可能成为原发性肝癌PVTT的相关标志物,诊断模型可能对预测PVTT的形成具有重要临床意义。     

糖尿病小鼠玻璃体视网膜中Opticin的表达

目的:观察opticin在1型、2型糖尿病小鼠及正常小鼠玻璃体视网膜mRNA和蛋白表达的变化。方法:50只雄性小鼠随机分为柠檬酸钠缓冲液对照组(A)10只,链脲佐菌素诱导1型糖尿病组(B)10只,2型糖尿病组30只,并将其随机分为1,2,3月组(C、D、E),各10只。于1,2,3月后处死2型糖尿病组小鼠,3月后处死1型糖尿病组小鼠和柠檬酸钠缓冲液对照组,取玻璃体视网膜组织,保存于液氮中。实时聚合酶链反应检测玻璃体视网膜中opticin mRNA表达,Western-blot检测opticin蛋白表达。结果:1型糖尿病组玻璃体视网膜的opticinmRNA表达量是正常组玻璃体视网的68%,P<0.01;2型糖尿病1,2,3月组玻璃体视网膜的opticin mRNA表达量分别是正常组玻璃体视网的37%,36%,27%,P<0.01;但1,2,3月组之间的差异无统计学意义,P>0.05;1型、2型糖尿病组玻璃体视网膜的opticin蛋白表达量较正常小鼠玻璃体视网膜显著下降,P<0.01。2型糖尿病的2月、3月组小鼠玻璃体视网膜mRNA和蛋白表达均低于1月组小鼠。结论:1型、2型糖尿病小鼠玻璃体视网膜中opticin的mRNA和蛋白表达量较正常小鼠显著减少,2型糖尿病组小鼠玻璃体视网膜mRNA和opticin蛋白表达随时间延长逐渐降低。说明opticin在糖尿病视网膜病变的发生机制中可能起着重要作用。     

WCX纳米磁珠在子宫内膜癌血清蛋白质组中的应用

目的利用弱阳离子交换型(WCX)纳米磁珠联合表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析子宫内膜癌患者血清蛋白质谱,筛选潜在的特异性肿瘤标志物,探讨其临床意义。方法应用WCX纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS对24例子宫内膜癌患者及28例正常人血清标本进行蛋白质质谱分析,用BiomarkWizard软件分析差异蛋白峰,并在Swiss蛋白数据库中搜索鉴定差异蛋白,受试者工作特征(ROC)曲线评价该技术的应用价值。结果在质荷比(m/z)2 000~20 000范围内,子宫内膜癌患者血清中筛选出与正常人血清有统计学意义的差异蛋白11个(P<0.05),其中6个高表达:m/z分别为4 175、5 315、7 970、8 047、15 930、16 074;5个低表达:m/z分别为4 592、4 675、7 019、9 188、9 358。m/z为7 970的差异蛋白与子宫珠蛋白(UG)相符。应用ROC曲线分析,确定11个差异蛋白对子宫内膜癌有中等诊断价值,灵敏度为70.5%~96.4%,特异度为89.3%~100%。结论 WCX纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS能在子宫内膜癌患者血清中筛选出灵敏度和特异度较好的差异表达蛋白,其有助于子宫内膜癌的筛查、早期诊断及预后监测。     

Fibulin-1在2型糖尿病微血管病变患者血清中的表达

目的：探究2型糖尿病微血管病变患者血清中腓骨蛋白-1(Fibulin-1)的表达,初步分析Fibulin-1与糖尿病微血管病变的相关性。方法：选取糖尿病合并微血管病变患者62例、单纯糖尿病患者18例及健康体检者20例,采用酶联免疫吸附法检测患者血清中Fibulin-1的含量,并应用SPSS软件分析Fibulin-1与糖尿病微血管病变的相关性。结果：糖尿病患者血清Fibulin-1含量显著高于健康人群(P<0.05);合并微血管病变的糖尿病患者血清Fibulin-1含量显著高于单纯糖尿病患者(P<0.05),血清中Fibulin-1浓度与空腹血糖值呈正相关。同时,合并糖尿病视网膜病变和糖尿病肾病患者血清中Fibulin-1表达显著高于仅合并一种微血管病变者(P<0.05)。结论：Fibulin-1在糖尿病微血管病变发生、发展过程中发挥重要作用。     

糖尿病性视网膜病变不同阶段血清唾液酸变化规律

目的探讨血清唾液酸在Ⅱ型糖尿病视网膜病变不同阶段的作用关系。方法 54例Ⅱ型糖尿病患者纳入本研究作为观察组,另设健康对照组54例,观察比较不同程度糖尿病视网膜病变患者和健康对照组之间血清唾液酸浓度、血糖、血脂。结果两组患者血脂无差异(P>0.05),观察组血糖和血清唾液酸水平均较对照组高,且唾液酸水平与视网膜病变程度呈正相关(P<0.05)。结论血清唾液酸浓度增加与2型糖尿病视网膜病变各阶段之间有关联,可以用于视网膜病变的诊断和预后监测。     

类风湿关节炎合并间质性肺疾病差异蛋白的初步筛选

目的筛选类风湿关节炎合并间质性肺疾病(RA-ILD)血清差异蛋白,初步建立血清差异蛋白指纹图谱分类树。方法应用表面加强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术获得15例RA-ILD患者(RA-ILD组)和13例健康成人(对照组)的血清蛋白质指纹图谱,采用SPSS 13.0、Biomarker Patterns软件、Bio-Marker Wizard软件进行相关统计学分析并初步建立诊断分类树。结果 RA-ILD组患者血清共检测出143个蛋白峰,其中4个蛋白峰强度与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),质荷比分别为2 876.75、3 382.59、11 525.30和11 886.00。以质荷比11 525.30、2 876.75建立诊断分类树,灵敏度为93.33%(14/15),特异度为92.31%(12/13)。结论 SELDI-TOF-MS技术用于RA-ILD血清蛋白质谱分析可筛选出有意义的差异表达蛋白,有进一步研究价值。     

应用SELDI—TOF—MS技术分析多发性骨髓瘤患者血清差异表达蛋白

目的研究多发性骨髓瘤患者血清蛋白质谱的变化,从而筛选出特异性蛋白标志物。方法利用CM10蛋白芯片和SELDI-TOF—MS技术对30例初诊为多发性骨髓瘤的患者和33例健康人的血清蛋白进行分析。获得的蛋白质谱图采用Ciphergen公司的BiomarkerWizard软件分析。结果通过对多发性骨髓瘤患者血清与健康人血清蛋白质谱图分析发现有30个蛋白峰表达量有明显差异（P〈0．05）,与健康对照组相比,10个蛋白峰表达上调,20个蛋白峰表达下调,质荷比为3472．79、7778．39、4093．01、4971．15、5343．98的蛋白更具意义。结论结果表明通过多发性骨髓瘤患者与健康对照血清蛋白质谱的比较,有助于筛选得到多发性骨髓瘤的特异性标志物。