消渴颗粒剂对大鼠系膜细胞TGF-β1表达的影响

目的 :观察高糖和消渴颗粒剂含药血清对大鼠系膜细胞增殖及TGF - β1表达的影响 ,探讨消渴颗粒剂治疗糖尿病肾病的机制。方法 :采用系列筛网法分离肾小球 ,经胶原酶消化后 ,分装至塑料培养瓶中 ,在 5 %CO2 ,37℃恒温恒湿培养箱内孵育培养。 2 - 3周后进行转种。经相差显微镜、扫描电镜观察 (scaningelectronmicroscope,SEM) ,免疫细胞化学染色actin和desmin染色均为阳性 ,证实为系膜细胞后 ,进行以下实验。用 2 0mmol/L葡萄糖刺激系膜细胞 12h、2 4h、4 8h、72h和 96h ,以 5mmol/L葡萄糖为正常对照 ,MTT比色法观察系膜细胞的增殖情况…     

EGR-1基因转染对环境中小鼠肾小球系膜细胞TGF-β及PDGF-B表达的影响

目的:观察EGR-1基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞TGF-β及PDGF-B表达的影响,探讨EGR-1在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法:高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,采用LipofectamineTM2000瞬时转染EGR-1质粒,于培养12、24、48小时末,应用MTT法检测细胞增殖程度,免疫细胞化学和Western印迹法检测系膜细胞EGR-1、TGF-β及PDGF-B蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。结果:高糖环境中肾小球系膜细胞EGR-1、TGF-β及PDGF-B表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,EGR-1基因转染后上述变化较高糖组更加显著。结论:EGR-1可上调TGF-β及PDGF-B表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,是加速肾小球硬化的可能机制之一。     

醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白和TGF-β1表达的影响

目的：研究醛固酮（ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（SPI）对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白（FN），以及对转化生长因子B1（TGF-β1）基因表达的影响。方法：（1）以不同浓度的ALD（10^-11、10^-9、10^-7mol／L）及／或10^-7mol／L SPI刺激肾小球系膜细胞48h后，用ELISA法测定培养上清中FN的浓度。用半定量RT-PCR法检测该细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。（2）以10^-9mol／L的ALD刺激系膜细胞不同时间（24、48、72h）后，分别用上述方法测定培养上清中FN的浓度和细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。结果：（1）ELISA的结果显示，ALD可促进系膜细胞合成分泌FN，且呈剂量和时间依赖性，SPI能拮抗ALD的作用。（2）半定量RT-PCR的结果显示，ALD可促进系膜细胞FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达，也呈剂量和时间依赖性，SPI也能拮抗ALD的作用。结论：ALD在蛋白和基因水平上均可促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN，及TGF-β1mRNA的表达，SPI能拮抗ALD的作用，具有一定的肾脏保护作用，从而有益于延缓肾小球硬化的进展。     

Defensin α1对大鼠系膜细胞增殖的影响

目的： 探讨defensin α₁ 对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞株1097增殖的影响以及可能的机制。方法： 利用MTT掺入观察不同浓度的基因重组人类defensin α₁在不同作用时间对系膜细胞增殖的影响，选择能够刺激系膜细胞生长的浓度及作用时间给予U0126预孵育，观察能否阻断defensin α₁促系膜细胞增殖作用，使用Western blotting了解defensin α₁对系膜细胞ERK1/2磷酸化及Ⅳ型胶原合成的影响。结果： Defensin α₁在3-20 mg/L 范围内对系膜细胞具有促生长作用，12 h达到峰值（P＜0.01）。当浓度大于20 mg/L时可抑制系膜细胞的生长，浓度在15-25 μmol/L U0126可以阻断defensin α₁对系膜细胞的促生长作用。浓度为3 mg/L defensin α₁刺激5 min后可使ERK1/2磷酸化明显增加，作用12 h后系膜细胞的IV胶原蛋白表达高于对照组并持续到48 h（P＜0.01）。结论： 一定浓度的defensin α₁可以促进系膜细胞的增殖和细胞外基质的合成，这种促增殖作用可能是通过MAPK途径实现的。     

环磷酰胺在体外对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响增殖及凋亡的影响

目的：研究环磷酰胺（CTX）在体外对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖及细胞凋亡的影响。方法：采用MTT法检测CTX、甲基强的松龙（MP）、低分子肝素（LMWH）对GMC细胞增殖的影响；采用光镜、荧光镜、流式细胞仪检测GMC细胞凋亡；GMC的Fas、Bcl-2蛋白质水平采用免疫组化法检测。结果：CTX、MP、LMWH均对GMC生长有抑制作用；CTX诱导GMC细胞凋亡，使GMC的Fas蛋白水平增加。结论：CTX在体外可以抑制GMC细胞增殖，可能通过Fas蛋白调节途径诱导GMC细胞凋亡。     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞活性氧和TGF-β1表达的影响

目的 探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧(ROS)和转化生长因子β1，(TGF-β1)表达的影响及茶多酚的干预作用。方法 培养人肾小球系膜细胞，分为正常对照组、高糖组、茶多酚组和茶多酚干预组，培养0、12、36h后，用分光光度比色法测定细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，用半定量RT-PCR和免疫细胞化学法检测细胞内TGF-β1，mRNA和蛋白表达的变化。结果 高糖导致系膜细胞SOD活性下降和MDA含量升高，上调TGF-β1，mRNA和蛋白表达，随时间延长更为明显；茶多酚干预可拮抗高糖时系膜细胞的上述改变。结论 高糖能促进人肾小球系膜细胞ROS产生增加，上调TGF-β1 mRNA和蛋白表达，茶多酚能抑制高糖对系膜细胞的作用。     

醛糖还原酶对大鼠肾脏系膜细胞表达纤连蛋白和Ⅳ型胶原蛋白的影响

目的探讨醛糖还原酶(AR)对大鼠肾脏系膜细胞(MsC)表达细胞外基质成分纤连蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白的影响,以及AR在肾小球硬化病变过程中的可能作用及其机制。方法采用酶切、连接方法构建真核表达质粒pCDNA3-AR,采用脂质体介导以及G418筛选的方法,将pCDNA3-AR稳定转染至MsC中,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法和免疫荧光检测转染MsC表达AR情况;以Western印迹法检测正常MsC、AR转基因MsC、应用AR抑制剂Sorbinil和Zopolrestat的正常MsC、转化生长因子-β1(TGF-β1)作用后的正常MsC的FN和ColⅣ蛋白表达情况。结果与正常MsC相比,TGFβ1作用后的正常MsCFN和ColⅣ蛋白表达水平分别增高1.6和1.7倍(P<0.01);AR转基因MsC的FN、ColⅣ表达分别增加1.8倍和1.5倍;应用Sorbinil时,FN和ColⅣ分别降低1.8倍和1.4倍(P<0.05);应用Zopolrestat时,FN和ColⅣ分别降低1.7倍和1.4倍(P<0.05)。结论AR高表达或活性受抑制时可以明显影响MsCFN、ColⅣ的蛋白表达,提示AR可能与肾小球硬化的病理过程有关。     

芪丹颗粒剂对大鼠肺纤维化模型的干预作用及对TGF-β1、TNF-α表达的影响

目的：探讨芪丹颗粒剂对博莱霉素A5所致大鼠肺纤维化的干预作用及可能的机制。 方法： SD大鼠经气管内一次性灌注博莱霉素A5(5 mg/kg)诱导肺纤维化，随后分别每日给予芪丹颗粒剂灌胃（芪丹组，3 125 mg/kg）、氢化可的松腹腔注射（氢可组，25 mg/kg）进行干预。对照组气管内灌注和灌胃均用生理盐水。各组动物均于药物干预后第7、14、28 d分别处死。用苏木素-伊红（HE）评价肺组织病理学变化、免疫组化（SABC法）测定肺组织TGF-β1、TNF-α蛋白的表达。 结果： 芪丹组肺泡炎及肺纤维化程度均明显轻于模型组和氢可组，TGF-β1、TNF-α蛋白的表达亦显著低于模型组和氢可组（P<0.01）。 结论： 芪丹颗粒剂可明显减轻博莱霉素A5诱导的大鼠肺纤维化的程度, 其作用机制可能部分通过降低TGF-β1、TNF-α蛋白的表达而实现。     

芳维A酸乙酯对体外培养小鼠肾小球系膜细胞增殖、凋亡及TGF-β1分泌的影响

目的研究芳维A酸乙酯(AE)对体外培养小鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响。方法采用MTT法检测芳维A酸乙酯(AE)、全反式维A酸(atRA)对GMC增殖的影响;采用流式细胞仪检测AE干预后GMC的凋亡情况;采用ELISA法检测AE干预后GMC培养上清液中TGF-β1的含量。结果与正常组对比,AE干预组GMC增殖受到抑制(P<0.05),且当浓度在10~(-8)到10~(-5)mol/L范围内时,作用成剂量依赖性。AE能够诱导GMC的凋亡,正常组、10~(-7)mol/L、10~(-5)mol/L的AE干预组的GMC细胞凋亡率分别为(1.13±0.36)%、(9.52±0.99)%和(27.23±2.88)%。AE能够抑制GMC的TGF-β1分泌,与空白对照组,AE干预组TGF-β1表达降低(P<0.05)。AE抑制GMC增殖、诱导GMC凋亡及抑制GMC TGF-β1分泌的作用明显强于atRA。结论AE可以抑制体外GMC增殖并能诱导凋亡,其抑制增殖的作用可能与TGF-β1表达降低有关。AE可干预狼疮性肾炎病理病理进程。     

血管紧张素-（1-7）对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:研究血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响并初步探讨其机制.方法:采用WST法检测培养系膜细胞增殖;RT-PCR法检测细胞内信号传递分子Smad3/7基因mRNA的表达.结果:与对照组比较, Ang-(1-7)明显抑制TGF-β1诱导的GMC增殖(P＜0.05);同时, Ang-(1-7)对TGF-β1诱导的系膜细胞内Smad3, Smad7基因mRNA表达有明显的抑制作用(P＜0.05).结论:Ang-(1-7)对TGF-β1诱导的系膜细胞增殖有抑制作用, 其机制可能是通过下调细胞内信号传递分子Smad3/7的表达.     

TGF-β1对醛糖还原酶在大鼠系膜细胞及Thy-1肾炎中表达的影响

目的　研究转化生长因子β1(TGF- β1)对醛糖还原酶(AR)在大鼠系膜细胞(MsC)及大鼠抗Thy 1肾小球肾炎模型 (ATG)中表达的影响。方法　采用RT PCR和Westernblot技术分别检测TGF β1刺激后体外培养大鼠系膜细胞AR的表达以 及TGF -β1和AR在ATG中的表达;应用免疫组化检测ATG中TGF -β1、AR的表达,并对染色强度进行图像分析。结果　外源 性TGF- β1作用后,大鼠系膜细胞中AR表达升高,并显示出一定的时间与剂量依赖性。ATG中,随着病程的延长,TGF -β1、AR 表达升高,对免疫组化结果进行图像分析显示,二者表达之间具有相关性(r=0.65,P<0.05)。结论　TGF -β1可以上调其相 关反应性基因AR的表达,后者可能参与了肾小球肾炎发生发展的过程。     

丹酚酸B对活化的系膜细胞TGF-β_1受体和Smad2表达的影响

目的:通过观察丹酚酸B对活化的系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)受体和Sma与Mad的同源基因2(Smad2)分子表达的影响,探讨丹酚酸B拮抗系膜细胞活化及肾纤维化的机制。方法:分离纯化大鼠肾小球系膜细胞,TGF-β1刺激建立系膜细胞活化模型并检测Smad2、Smad7信号分子表达。丹酚酸B(剂量分别为10-6mol/L、10-5mol/L)进行干预,免疫荧光及蛋白印记法观察对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响,蛋白免疫印迹法检测系膜细胞TGF-β1两型受体(TβRⅠ、TβRⅡ)和Smad2信号分子表达的变化。结果:5μg/L TGF-β1刺激系膜细胞24h可成功制备系膜细胞活化模型,在系膜细胞活化早期即可见Smad2分子的显著磷酸化;10-6mol/L、10-5mol/L丹酚酸B均可明显抑制其活化标志蛋白α-SMA的表达;丹酚酸B干预可致系膜细胞TGF-β1两型受体表达减少,Smad2的磷酸化状态被抑制。结论:丹酚酸B可通过抑制大鼠肾小球系膜细胞TβRⅠ、TβRⅡ表达和信号分子Smad2的磷酸化而拮抗其活化,这可能是丹酚酸B抗肾纤维化的细胞学机制之一。     

环磷酰胺在体外对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究环磷酰胺(CTX)在体外对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及细胞凋亡的影响。方法: 采用MTT法检测CTX、甲基强的松龙(MP)、低分子肝素(LMWH)对GMC细胞增殖的影响;采用光镜、荧光镜、流式细胞仪检测GMC细胞凋亡;GMC的Fas、Bcl-2蛋白质水平采用免疫组化法检测。结果:CTX、MP、LMWH均对GMC生长有抑制作用;CTX诱导GMC细胞凋亡, 使GMC的Fas蛋白水平增加。结论:CTX在体外可以抑制GMC细胞增殖, 可能通过Fas蛋白调节途径诱导GMC细胞凋亡。     

rhIL-1受体拮抗剂对大鼠肾小球系膜细胞增殖和合成细胞外基质-胶原的影响

采用肾小球系膜细胞(GMC)培养、~3H-TdR掺入及羟脯氨酸测定的方法,首次观察了重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的大鼠GMC增殖和合成细胞外基质-胶原的影响。结果表明:rhIL-1Ra能拮抗hIL-1β诱导的GMC的增殖和胶原的合成;其拮抗增殖的剂量是rhIL-1β的2～50倍,拮抗胶原合成者为rhIL-1β的25～50倍。提示:rhIL-1Ra有望用于治疗由IL-1参与、介导的以系膜细胞增殖和系膜基质扩大为主要病理改变的肾小球肾炎。     

中药活脑康对脑缺血大鼠脑组织中TGF-β1与P38表达的影响

目的 观察中药活脑康对脑缺血大鼠脑组织中TGF-β1和突触素P38表达的影响.方法 用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型;应用SABC免疫组化染色法观察脑组织中TGF-β1和P38的表达.结果 TGF-β1和P38在正常脑神经细胞中均呈弱阳性表达,脑缺血后,TGF-β1和P38的表达量均明显增强(与正常对照组相比P<0.01,有统计学意义);中药活脑康对缺血脑组织中TGF-β1和P38的表达有上调作用(与模型组相比分别为P<0.01和P<0.001,有统计学意义).结论 中药活脑康可能是通过增加TGF-β1和P38的表达减少脑细胞的凋亡,促进突触再建,增强和完善再建突触效能发挥脑保护作用.     

含RGD肽基因导入系统介导TGF-β1基因转染对兔骨髓基质干细胞增殖和体外诱导成骨的影响

目的 探讨一种新型靶向性非病毒载体—含RGD肽K16GRGDSPC（记作K16-RGD）介导外源基因转染骨髓基质干细胞（BMSCs）的可行性，观察转化生长因子β1（TGF-β1）基因：转染对BMSCs的增殖和体外诱导成骨的影响。方法固相合成法合成K16-RGD，以其为载体将转化生长因子β1质粒pcDNA3-TGF-β1导入兔BMSCs，以导入空载体pcDNA3作为对照，G418筛选得到阳性细胞集落（分别命名为BMSCs-TGF-β1和BMSCs-pcDNA3），逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β1基因的表达；采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTr）和流式细胞仪（FCM）检测细胞体外增殖活性，并进行成骨诱导扩增，检测转基因细胞经成骨诱导后碱性磷酸酶（ALP）活性、骨钙蛋白（OCN）含量、核心结合因子a1（Cbfal）的表达、矿化（钙结节形成）情况。以经诱导的BMSCs—pcDNA3和未转染BMSCs作为对照。结果 RT-PCR显示转基因细胞能高表达TGF-β1，BMSCs-TGF-β1的体外增殖活性明显高于对照组（P〈0．01）；BMSCs-TGF-β1经成骨诱导后表达的成骨特征性表型（ALP、OCN、Cbfal的表达和矿化）与对照组有显著的差异（P〈0．01）。结论 含RGD肽K16-RGD可以作为一种较理想的新型基因转移载体介导外源基因转染BMSCs；TGF-β1可以作为骨组织工程种子细胞BMSCs向成骨细胞定向分化的理想调控因子之一。     

厄贝沙坦对2型糖尿病模型大鼠心肌TGF-β1和CTGF表达的影响

目的 探讨厄贝沙坦对2型糖尿病模型大鼠心肌TGF-β1和CTGF表达的影响.方法 对正常大鼠、糖尿病大鼠和厄贝沙坦给药的糖尿病大鼠进行体重、心脏重量指数、血糖和胰岛素的测定和比较,分析其心肌组织中TGF-β1和CTGF的表达.结果 两组动物3个月和6个月的体重、心脏重量指数、血糖和胰岛素表达的差异具有统计学意义,P＜0.05.厄贝沙坦能够降低干预组TGF-β1和CTGF的表达,且差异具有统计学意义,P＜0.05.结论 厄贝沙坦对2型糖尿病模型大鼠的心肌组织具有一定的保护作用,值得进一步的探讨和研究.     

Avastin对小鼠角膜新生血管形成和TGF-β1表达的影响

目的探讨Avastin对小鼠角膜新生血管形成和转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)表达的影响。方法制作小鼠角膜碱烧伤模型,随机分为碱烧伤组和Avastin治疗组,碱烧伤组连续两周内每日左氧氟沙星滴眼液滴眼3次,Avastin治疗组连续两周内应用25mg/ml Avastin结膜下隔日注射5μl+每日左氧氟沙星滴眼液滴眼3次,分别于碱烧伤后3d、7d和12d取材。体视显微镜观察角膜新生血管形成情况,应用HE染色法观察角膜组织的损伤情况,采用免疫组化法观察TGF-β1在碱烧伤后不同时间段角膜组织内的表达情况。结果在不同时间段,Avastin治疗组角膜新生血管的形成均少于碱烧伤组。在正常小鼠角膜组织内,TGF-β1表达于角膜上皮层和内皮层。在碱烧伤对照组角膜内,TGF-β1主要表达于角膜上皮细胞和角膜基质内入侵的炎性细胞,在碱烧伤后3d,TGF-β1的表达达到高峰(P0.05),在碱烧伤后12d,TGF-β1的表达恢复至正常水平。在Avastin治疗组角膜内,各时间段TGF-β1的表达均低于对照组。结论 Avastin能够抑制小鼠碱烧伤后角膜新生血管的形成,其机制可能与下调碱烧伤角膜组织TGF-β1的表达相关。     

脂肪来源的干细胞移植对大鼠脑缺血后TGF-β1表达的影响

目的:探讨脂肪来源的干细胞(ADSC)移植促进大鼠脑缺血后微血管生成作用的可能机制。方法:108只成年雄性Sprague-Darley大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、局灶性脑缺血组(MCAO组)、溶剂对照组(vehicle组)和ADSC治疗组(ADSC组),采用改良的Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,ADSC移植前用CFSE标记,ADSC组于造模成功1 d后经侧脑室注射入30μL的ADSC细胞悬液,内含1×106细胞,vehicle组则注射同等剂量的PBS。术后4d、7 d和14 d分批断头取脑,检测缺血区脑组织TGF-β1表达的变化。结果:ADSC组术后4 d、7 d和14 d脑组织中TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平均较MCAO组和vehicle组明显增高,同时显示脑缺血后经侧脑室移植的ADSC能够存活并分泌生长因子TGF-β1。结论:ADSC移植促进脑缺血大鼠缺血区微血管生成的机制可能与促进TGF-β1的表达有关。     

WPY对重症急性胰腺炎大鼠肺内IL-1βmRNA表达的影响

目的：观察中药WPY对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肺组织内IL-1βmRNA表达的影响。方法：SD大鼠48只随机分为4组，正常对照组、SAP模型组、WPY高，低剂量治疗组。采用牛磺胆酸钠胰腺被膜下注射诱导大鼠SAP模型，分别于术后3、6、12小时检测血清淀粉酶，半定量RT-PCR检测肺组织IL-1βmRNA的表达。结果：造模组血清淀粉酶显著升高，WPY治疗后血清淀粉酶显著下降；正常对照组、造模组和治疗组肺组织均可见IL-1β的表达，造模组较正常对照组表达高，且随时间3、6、12h变化肺组织内IL-1β表达呈递增趋势，用WPY后，随着药物剂量增加IL-1β表达呈递减趋势。结论：中药WPY可以降低大鼠急性胰腺炎早期3，6，12h血清淀粉酶和肺内IL-1βmRNA的表达，从而提示WPY可以减轻细胞因子介导的全身炎症反应。