PCR检测HBVDNA的初步研究

在我国 ,ＨＢＶ是引起病毒性肝炎的主要病原之一。目前对其感染导致的乙肝特异性诊断仍以ＥＩＡ或ＲＩＡ为主。近年来 ,国内外学者一直尝试利用ＲＣＲ法检测ＨＢＶ。本文设计了一对ＨＢＶ引物 ,并对之检测ＨＢＶ的扩增产物进行了探讨。1　材料与方法1.1　标本来源用于确定ＰＣＲ产物分子量的ＨＢＶ阳性血清(ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＤＮＡＰ、ＨＢＶＤＮＡ均阳性 ) ,及ＨＢＶＤＮＡ阴性血清由北京医科大学肝病研究所惠赠。用于临床考核的ＨＢｅＡｇ阳性血清的来自本院门诊及住院病人 ,阴性血清取自健康献血员。1.2　引物通过计算机检索Ｇｅ…     

用套式PCR检测新生儿先天性巨细胞病毒感染

选取ＨＣＭＶＡＤ１６９株ＥｃｏＲＩＪ片段区的ＩＥＡ基因第四外显子为扩增靶序列，合成两对引物，外引物扩增２４２ｂｐ片段，内引物扩增１４６ｂｐ的片段，此方法很灵敏，可检测５－１０ｆｇＨＣＭｖＤＮＡ。我们随机采集５１名新生儿脐带血，应用ＮａＩ法提取全血ＤＮＡ为模板进行扩增，结果表明：３２名为ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，以口腔粘液ＤＮＡ（４０名）为模板进行扩增，２４名为ＨＣＭＶＤＮＡ阳性。因此，套式ＰＣＲ可用于临床上快速准确地检测ＨＣＭＶ。     

POLYMORPHISMS OF THE HUMAN LIPOPROTEIN LIPASE GENE：POSSIBLE ASSOCIATION WITH LIPID LEVELS IN PATIENTS WITH CORONARY HEART DIS

ＰＯＬＹＭＯＲＰＨＩＳＭＳＯＦＴＨＥＨＵＭＡＮＬＩＰＯＰＲＯＴＥＩＮＬＩＰＡＳＥＧＥＮＥ：ＰＯＳＳＩＢＬＥＡＳＳＯＣＩＡＴＩＯＮＷＩＴＨＬＩＰＩＤＬＥＶＥＬＳＩＮＰＡＴＩＥＮＴＳＷＩＴＨＣＯＲＯＮＡＲＹＨＥＡＲＴＤＩＳＥＡＳＥＩＮＢＥＩＪＩＮＧＡＲＥ...     

致腹泻大肠埃希菌及其检验诊断进展

无论在发展中国家还是在发达国家 ,由大肠埃希菌 (简称大肠杆菌 )所致的腹泻仍然严重威胁着人类健康 ,重要的致腹泻大肠杆菌已明确者有产毒素大肠杆菌 (ＥＴＥＣ)、肠致病性大肠杆菌 (ＥＰＥＣ)、肠出血性大肠杆菌 (ＥＨＥＣ)、肠侵袭性大肠杆菌 (ＥＩＥＣ)、肠聚集性大肠杆菌 (ＥＡＥＣ ,ＥＡｇｇＥＣ)、细胞脱落性大肠杆菌 (ＤＡＥＣ) ,尚有产坏死性毒素大肠杆菌、产志贺毒素且具侵袭力的大肠杆菌 (ＥＳＩＥＣ)等。其病原学诊断常被忽视 ,原因之一是除ＥＨＥＣ可致严重临床问题外 ,一般均易于治疗 ,服用抗生素加补液可迅速见效 ;其二是缺…     

PCR法检测尿毒症病人血清HCV—RNA结果分析

应用ＰＣＲ技术检测尿毒症病人血清ＨＣＶ—ＲＮＡ１６５例，结果显示：ＥＩＡ检测病人血清抗ＨＣＶ阳性率为６３．０％；抗ＨＣＶ阳性病人ＨＣＶ—ＲＮＡＰＣＲ检出阳性率为６５．３％；抗ＨＣＶ阴性病人检出率为９．８％；ＰＣＲ总阳性检出率为７５．１％。提示：ＣＲＦ病人抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ检出率与输血呈正相关。ＣＲＦ病人接受透析与输血次数愈多，感染ＨＣＶ的机会就愈大。在血清中单独出现抗ＨＣＶ或同时检出抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ者，表明与早期输血感染ＨＣＶ者已产生抗ＨＣＶ，ＨＣＶ—ＲＮＡ阳性与近期输血再次感染者关系极为密切。用ＰＣＲ法直接检测病毒毒粒要早于ＥＩＡ检出抗ＨＣＶ的阳性结果，有利于早期诊断。     

肾细胞癌中脆性组氨酸三联体基因异常及其意义

目的 检测肾细胞癌（ＲＣＣ）组织脆性组氨酸三本（ｆｒａｇｉｌｅ ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ ｔｒａｉｄ,ＦＨＩＴ）基因蛋白编码外显子及ｍＲＮＡ表达情况,了解ＲＣＣ组织中ＦＨＩＴ基因异常特征,探讨ＦＨＩＴ基因与ＲＣＣ发生发展的关系。方法 收集ＲＣＣ及相应癌周肾组织标本,提取组织ＤＮＡ及ＲＮＡ。ＤＩＧ标记ＦＨＩＴ全长ｃＤＮＡ探针。ＰＣＲ法扩增ＦＨＩＴ基因Ｅ５～Ｅ９。扩增产物电泳转膜后行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｏｌ     

检测人巨细胞病毒的免疫—PCR方法的建立

目的：依据免疫－ＰＣＲ基本原理，建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）活动性感染的免疫＿ＰＣＲ方法。方法：我们建立的免疫－ＰＣＲ方法与酶联免疫ＥＬＩＳＡ不同之处是，用ＰＣＲ扩增生物素化线性ＰＢＶ２２０ＤＮＡ代替ＥＬＩＳＡ的酶催化底物，经琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色观察分析扩增产物异条带，判断结果。结果：用本法检测ＨＣＭＶ的敏感性高于ＥＬＩＳＡ法１０＾３－１０＾５倍，可检测到５个感染ＨＣＭＶ细胞；而检测ＨＳ     

用双重PCR快速诊断新生儿巨细胞病毒感染

用双重ＰＣＲ法检测新生患儿及随访新生儿期诊断为巨细胞包涵体病患儿的尿及血标本中巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＤＮＡ。两对引物序列取自ＨＣＭＶＩＥＡ基因区，第一对引物扩增片段为７２１ｂｐ，第二对引物扩增片段为１６７ｂｐ。新生患儿２３份尿标本，１７例检出阳性；１８份白细胞提取物，１２份阳性。随访患儿７例，４例在尿或血中检出ＣＭＶＤＮＡ。ＰＣＲ结果与病毒分离比较，两法的符合率为９５．６％，ＰＣＲ获得结果仅需１～２天。尿标本用于ＰＣＲ较血标本检出率高，预处理简便     

地高辛掺入法检测HCV RNA含量在肝病诊断中的应用

目的;研究血清ＨＣＶ ＲＮＡ含量与ＨＣＶ感染者肝病程度的关系。方法：应用地高辛掺入法检测血清ＨＣＶ ＲＮＡ含量。在ＰＣＲ过程中将ＤＩＧ－ｄＵＴＰ掺入到ＰＣＲ产物叶地用ＰＣＲ ＥＬＩＳＡ法检测ＰＣＲ产物,结合标准参考样本而达定量目的。结果;丙肝后肝硬化组血清ＨＣＶ ＲＮＡ含量显著高于丙型肝炎组。     

载脂蛋白E基因型分型方法研究

目的：为调查海南省老年性痴呆患者载脂蛋白Ｅ（Ａｐｏ Ｅ）基因频率,建立一种简便、快速、准确的人载脂蛋白Ｅ基因型检测方法。方法：应用碘化钠法提取模板ＤＮＡ,聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增Ａｐｏ Ｅ基因含１１２ 位和１５８ 位氨基酸的基因序列,扩增产物用限制内切酶Ｈｈａ Ｉ酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳后,观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＩＰ）图谱。结果：碘化钠法提取模板ＤＮＡ 与经典法无差异;运用ＰＣＲ－ ＲＦＩＰ法检测３０ 名健康人Ａｐｏ Ｅ基因型,实验成功。结论：该方法简单、快速、准确,适合于一般实验室开展Ａｐｏ Ｅ基因型调查     

EFFECT OF THE EXCITATION OF ADRENOCEPTORS ON THE PACEMAKER CURRENT I_f OF SHEEP CARDIAC PURKINJE FIBRES IN “ISCHEMIA” SOLUTIO

ＥＦＦＥＣＴＯＦＴＨＥＥＸＣＩＴＡＴＩＯＮＯＦＡＤＲＥＮＯＣＥＰＴＯＲＳＯＮＴＨＥＰＡＣＥＭＡＫＥＲＣＵＲＲＥＮＴＩ_ｆＯＦＳＨＥＥＰＣＡＲＤＩＡＣＰＵＲＫＩＮＪＥＦＩＢＲＥＳＩＮ“ＩＳＣＨＥＭＩＡ”ＳＯＬＵＴＩＯＮＸｕＹｏｕｑｉｕ（徐有秋），Ｚｈａ?..     

聚合酶链反应检测载脂蛋白E表型及其临床应用的研究

用人工合成的寡核苷酸引物，进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），体外扩增合成载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因的特异性ＤＮＡ片段，用此引物检测１０４例健康成人和３５例冠心病人（ＣＨＤ）载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）的表型，共检出５种常见的ＡｐｏＥ表型，健康成人与ＣＨＤ患者比较，ＣＨＤ患者的ＡｐｏＥ３／３型频率明显降低，而含Ｅ２或Ｅ４异构体的频率增加．等位基因频率分布，ＣＨＤ患考与健康成人比较，其ε明显减少，而ε２和ε４有升高趋势，故对人群进行ＡｐｏＥ表型普查，确定不同ＡｐｏＥ表型个体，并寻找其与脂类代谢之间的关系，在动脉粥样硬化（ＡＳ）和ＣＨＤ的防治中有重要意义．     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＥＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射生标记制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶ ＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｍｇ ＨＣＭＶ ＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。     

SERUM AMYLOID P COMPONENT NOT ASSOCIATED WITH C4B一BINDING PROTEIN IN HUMAN SERUM SHOWN BY CROSSED IMMUNOELECTROPHORESIS IN TH

ＳＥＲＵＭＡＭＹＬＯＩＤＰＣＯＭＰＯＮＥＮＴＮＯＴＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤＷＩＴＨＣ４Ｂ一ＢＩＮＤＩＮＧＰＲＯＴＥＩＮＩＮＨＵＭＡＮＳＥＲＵＭＳＨＯＷＮＢＹＣＲＯＳＳＥＤＩＭＭＵＮＯＥＬＥＣＴＲＯＰＨＯＲＥＳＩＳＩＮＴＨＥＰＲＥＳＥＮＣＥＯＦＣＡＬＣＩＵ...     

乙型肝炎病毒IgG类抗体致丙型肝炎抗体测定假阳性研究

采用直接交叉反应试验，抗体中和试验，增强抗体浓度试验反转录一聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法扩增ＨＣＶ，ＲＮＡ，对丙型肝炎抗体（抗ＨＣＶ，ＥＩＡ）测定假阳性研究，进一步认识抗ＨＣＶ临床意义，结果表明，乙肝病毒核心抗体（ＩｇＧ）可致抗ＨＣＶ测定假阳性，乙肝高滴度抗ＨＢＣ可能是临床乙型肝炎／丙型肝炎混合感染高检出及献血员丙肝抗体阳性高比率的原因之一。     

随机多肽噬菌体展示载体pCANTAB5X的构建

构建适用于外源性随机多肽的噬菌体展示载体,方法在引物中加入ＸｂａⅠ识别序列,将用该引物扩增的ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ中,再将该片段插入ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ中构建成噬菌体展示载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ。结果限制酶切点ＸｂａＩ和ＨＧＶＣ片段被引入到新构建的噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ中。     

黑色素瘤抗原-1基因在肝细胞癌中的表达

目的 检测黑色素瘤抗原－１（ＭＡＧＥ－１）ｍＲＮＡ在肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达,为用ＭＡＧＥ－１基因编码蛋白作为疫苗对ＨＣＣ患者进行免疫治疗提供依据。方法 用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法对４５例ＨＣＣ患者组织和相应癌旁肝组织以及１６例肝硬化组织和１２例正常肝组织的ＭＡＧＥ－１ｍＲＮＡ表达情况进行了研究,对６例ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物的目的基因片段进行ＤＮＡ序列测定,并以测序证实为ＭＡＧＥ－     

幽门螺杆菌CagA基因的克隆

目的 为在大肠杆菌表达幽门螺杆菌ＣａｇＡ蛋白,建立ＥＬＩＳＡ法检测ＣａｇＡ抗体,克隆幽门螺杆菌ｃａｇＡ基因片段。方法 根据ｃａｇＡ基因序列,设计引物ＰＣＲ扩增ｃａｇＡ基因片段,用Ｔ－Ａ克隆的方法将ＰＣＲ产物克隆入质粒载体ｐＧＥＭ－Ｔ,并转化大肠杆菌ＪＭＩ１０９。结果 经蓝白斑筛选,ＰＣＲ及限制性内切酶酶切分析,获得ｃａｇＡ基因片段的克隆,序列测定结果与文献报道一致。结论 ＰＣＲ产物可采用Ｔ－Ａ法克     

套式聚合酶链反应检测丙肝病毒核酸

对７０例血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）异常、疑是丙型肝炎（ＨＣＶ）患者血清标本，用ＨＣＶ基因５＇非编码区引物作套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ），扩增产物为２６０ｂｐ，结果显示５２例丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）阳性，１８例阴性，阳性率为７４．２％。１０例助血员血样ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，阳性ＰＣＲ产物为ＨＣＶ－ＲＮＡ所特异。作者认为，采用高保守区核苷酸序列引物作套式ＰＣＲ检测ＨＣＶ－ＲＮＡ，可提高实验的敏感性和特异性。     

Relationship between chondroitin sulfate proteoglycan and coronary atherosclerosis in the youth.

ＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰＢＥＴＷＥＥＮＣＨＯＮＤＲＯＩＴＩＮＳＵＬＦＡＴＥＰＲＯＴＥＯＧＬＹＣＡＮＡＮＤＣＯＲＯＮＡＲＹＡＴＨＥＲＯＳＣＬＥＲＯＳＩＳＩＮＴＨＥＹＯＵＴＨＹａｎｇＦａｎｇ杨方，ＺｈａｏＰｅｉｚｈｅｎ赵培真，ＺｈａｎｇＹｉｎｇｓｈａｎ张...