特异性脱氧核酶对小鼠呼吸道合胞病毒感染的抑制作用

目的 研究特异性抑制呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)N基因的脱氧核酶DZ1133在小鼠体内对病毒复制和气道炎症的影响.方法 RSV感染BALB/c小鼠滴鼻给予DZ1133及其变异体、反义寡核苷酸AS1133,空斑形成实验检测肺组织病毒滴度,RT-PCR检测病毒mRNA表达,支气管肺泡灌洗液白细胞计数,ELISA检测TNF-α、IL-12、IFN-γ和IL-10水平,肺组织病理学分析炎症情况.结果 0.2、0.4 mg和0.8 mg DZ1133治疗组小鼠肺组织病毒滴度分别为(2.75±0.21)×105、(1.86±0.20)×105PFU/g和(1.02±0.22)×103PFU/g,与感染对照组小鼠(7.94±0.42)×105PFU/g比较明显下降(P<0.01),上述各剂量治疗组小鼠肺组织病毒mRNA表达与感染对照组比较分别下降30.51%、47.38%(P<0.05)和53.97%(P<0.01).0.4 mg DZ1133治疗降低RSV感染小鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞总数,改善肺组织病理学损伤(P<0.05),对TNF-α、IL-12、IFN-γ和IL-10水平无显著性影响(P>0.05).结论 特异性脱氧核酶DZ1133在小鼠体内有效抑制RSV复制、减轻气道炎症,是有效的抗RSV途径.     

呼吸道合胞病毒增加小鼠肺组织的高迁移率族蛋白B1的表达和释放

探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠模型肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达和释放.方法 18只Balb/C小鼠,随机分成3组,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、RSV组、RSV+利巴韦林治疗组;RSV感染小鼠7d后处理:支气管肺泡灌洗液(BALF)作细胞分类计数,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BALF上清中自细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)及HMGB1含量,左肺行苏木精-伊红(H E)染色,蛋白免疫印迹方法检测右肺组织HMGB1表达.结果 1、RSV感染诱导了小鼠肺组织TH1型反应:BALF中的IFN-γ含量增加,IL-4含量减低.与对照组比较,RSV组BALF中细胞总数、中性粒细胞、巨噬细胞均显著增加(P<0.05),RSV+利巴韦林治疗组上述细胞数显著减低(P<0.05).HE染色:RSV组可见黏膜下及管壁周同中性粒细胞,淋巴细胞等炎症细胞浸润.2、BALF中HMGB1含量变化:与对照组比较,RSV组显著升高(P<0.05)、利巴韦林治疗组显著降低(与RSV组比较,P<0.05).3、肺组织HMGB1的表达情况:与对照组比较,RSV组明显升高(P<0.05)、治疗组无显著降低(与RSV组比较,P>0.05).结论 HMGB1在RSV感染小鼠的肺组织中表达和释放明显增加,提示其可能参与了RSV感染相关肺疾病的发生发展.     

利巴韦林抑制呼吸道合胞病毒诱导的A549细胞凋亡

目的:探讨利巴韦林抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用过程中,对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将A549细胞分为4个组:细胞对照组(C组)、利巴韦林组(Rib组)、呼吸道合胞病毒组(RSV组)、利巴韦林干预组(RR组),分别在RSV感染的1,2,4,12,24h收集RSV组和RR组培养上清,空斑实验检测各个时间段病毒滴度;应用Western blot技术检测pAKT、AKT、IκBα、Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果:利巴韦林干预后,pAKT表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);IκBα蛋白4,12,24h表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);Bax蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白12,24h表达高于RSV组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:利巴韦林不仅可以抑制RSV的复制,同时可以激活AKT-NF-κB途径、上调Bcl-2、下调Bax蛋白表达,从而抑制RSV感染诱导的A549细胞早期凋亡。     

麻杏石甘汤体外抗A型流感病毒作用靶点的研究

目的研究麻杏石甘汤体外抗A型流感病毒的作用靶点。方法运用细胞培养技术、血凝试验和MTT法检测麻杏石甘汤在4种给药方式中对流感病毒血凝滴度和流感病毒感染的MDCK细胞活性的影响。结果在直接灭活病毒作用中,麻杏石甘汤在3.19￣31.25 mg/mL浓度范围内的血凝滴度低于病毒对照组,在15.63￣31.25mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组;在干预病毒吸附作用中,麻杏石甘汤在1.95￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度低于病毒对照组,在7.81￣31.25 mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组;在保护宿主细胞作用中,麻杏石甘汤在3.19￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度低于病毒对照组,在7.81￣31.25 mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组,差异均有统计学意义(P<0.01￣0.05)。在这3种给药方式中,麻杏石甘汤对流感病毒感染的MDCK细胞的治疗指数高于利巴韦林。在抑制病毒增殖的作用中,麻杏石甘汤在7.81￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度显著低于病毒对照组,差异有统计学意义(P<0.01￣0.05)。与利巴韦林组比较,检测的麻杏石甘汤5个浓度点的作用不明显,在给药方式中,麻杏石甘汤对MDCK细胞的治疗指数也低于利巴韦林组。结论麻杏石甘汤通过直接杀伤病毒、干预病毒吸附、抑制病毒增殖、保护宿主细胞而发挥抗流感病毒作用,该方直接杀伤病毒、干预病毒吸附和保护宿主细胞的作用优于利巴韦林片,抑制病毒增殖的作用不及利巴韦林片。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对呼吸道合胞病毒的抑制作用

目的:为探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体内和体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用。方法:在体外以不同浓度的EGCG分别作用于RSV复制周期的3个阶段,用CPE法观察EGCG抑制RSV的致细胞病变作用,用MTT法检测EGCG作用RSV的病毒抑制率;在体内建立RSV感染的BALB/c小鼠的动物模型,通过观察肺外观和HE染色镜下观察、计算肺指数、实时定量RT-PCR检测RSV核酸水平和空斑试验检测肺组织匀浆病毒滴度,探讨EGCG对RSV感染的保护作用。结果:在体外,EGCG对RSV有抗生物合成作用和预防作用,但是无直接杀伤作用。在体内,口服EGCG能够减少RSV感染的BALB/c小鼠肺组织病变程度,肺指数、RSV核酸水平表达和病毒滴度较RSV组明显降低。结论:EGCG在体内外均具有较好的抗RSV感染与复制作用。     

清肺口服液减轻RSV感染加重哮喘小鼠气道炎症作用的研究(英文)

清肺口服液是临床治疗儿童呼吸道合胞病毒(RSV)性肺炎的有效经验方.前期研究发现,清肺口服液可以减轻RSV感染加重哮喘小鼠的气道炎症,本研究拟探讨清肺口服液对RSV感染的哮喘小鼠肺组织自噬及凋亡蛋白表达的影响.将50只雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、RSV感染+哮喘组、清肺口服液组、利巴韦林组.采用卵清蛋白...     

金欣口服液不同化学部位对呼吸道合胞病毒感染的影响

目的 观察金欣口服液不同化学部位在体内的抗呼吸道合胞病毒（RSV）作用。方法 小鼠经滴鼻感染RSV建立肺炎模型,随机分为正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、金欣口服液组、金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液组及母液组,光镜下观察肺组织的炎症病变情况,计算小鼠肺指数和肺指数抑制率、脾指数、胸腺指数、死亡保护率。结果 金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液对RSV感染后小鼠的肺指数增高均有显著的降低作用(P<0.01),减轻感染小鼠肺组织炎症病变,同时能增加脾指数和胸腺指数(P<0.01)。金欣口服液正丁醇提取液能降低RSV感染小鼠的死亡率。结论 金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液对RSV具有一定的抑制作用,并且能提高RSV感染小鼠的免疫功能。正丁醇提取液对RSV感染小鼠具有一定的死亡保护作用。     

连花清瘟颗粒抗呼吸道合胞病毒感染BALB/c小鼠的药效作用研究

【目的】观察连花清瘟颗粒体内抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染的药效作用。【方法】采用BALB/c小鼠RSV感染模型,通过观察小鼠体质量变化、肺病毒滴度、肺内炎症因子m RNA表达及肺组织病理变化评价药物的体内抗病毒药效。【结果】连花清瘟颗粒高剂量组可显著降低RSV感染小鼠肺内病毒滴度(P0.05)。连花清瘟高、低剂量组可显著降低RSV感染小鼠肺内炎症因子白细胞介素IL-6,IL-1βm RNA的表达量(P0.01);肺组织病理检查结果显示:连花清瘟颗粒高、低各剂量组均可以缓解病毒所致肺组织病理性炎症。【结论】连花清瘟颗粒可有效抑制RSV感染小鼠肺内病毒滴度,对小鼠病毒性肺炎具有一定的改善作用。     

清肺口服液黄酮类成分改善RSV感染小鼠肺上皮屏障损伤的机制研究

  目的  探讨清肺口服液黄酮类成分(Fla)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠肺上皮屏障损伤的保护机制。  方法  将BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,Fla低、高剂量组(30、60 mg·kg-1·d-1),阳性药利巴韦林组(46 mg·kg-1·d-1)。建立RSV感染的小鼠模型, 持续给药4 d后, HE染色观察肺组织病理学变化; ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量; 以BALF蛋白含量和BALF/血清荧光比评估肺上皮通透性; Western blot检测肺组织紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、p-p38 MAPK、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)的蛋白表达。  结果  与模型组相比, Fla高、低剂量组小鼠肺组织病理损伤减轻(P < 0.05, P < 0.01), BALF中IL-1β、TNF-α含量下降(P < 0.05, P < 0.01), BALF蛋白含量和BALF/血清荧光比降低(P < 0.05, P < 0.01), 肺组织中Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达升高(P < 0.05, P < 0.01), p-p38 MAPK/p38 MAPK、TLR4、MyD88蛋白表达下降(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  Fla可能通过抑制TLR4/MyD88/p38 MAPK通路, 促进紧密连接蛋白表达, 减轻肺部炎症, 从而改善RSV导致的肺上皮屏障损伤。      

利巴韦林对肠道病毒体外抑制作用的研究

目的研究抗病毒药物利巴韦林体外抗肠道病毒（EV）的效果。方法采用细胞病变效应（CPE）法和MTT分析法,观察利巴韦林对肠道病毒（EV71、CAV16、CBV3、ECH011、EV84）的抑制作用。结果利巴韦林对Vero细胞的半数毒性浓度（TC50）为2．09mg／mL,0．2mg／mL浓度的利巴韦林对5种肠道病毒均有抑制作用,对CAV16、EV71、ECHO11、EV84、CBV3的抑制率分别为13％、27％、36％、23％、58％。对EV84、EV71病毒,利巴韦林浓度为0．1mg／mL时其抑制率为16．5％、29．5％;对CBV3病毒,利巴韦林抗病毒作用与其剂量呈正相关,半数有效浓度（IC50）为0．125mg／mL,治疗指数（TI）为16．72。结论利巴韦林在体外对肠道病毒具有抑制作用,对不同的肠道病毒其抑制效率不同,对CVB3的抑制率较高。     

甘草水提液、甘草酸体外抗呼吸道合胞病毒作用的比较

目的 比较甘草水提液、甘草酸体外抑制呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法 以病毒唑为阳性对照药物,用细胞病变抑制(CPEI)实验比较甘草水提液与甘草酸对RSV的体外抑制作用.结果 甘草水提液半数中毒浓度(TC50)为5.1mg/ml,抑制RSV的半数有效浓度(EC50)为0.215mg/ml,治疗指数(TI)为23.72;甘草酸的TC50为0.47mg/ml,没有明显抑制RSV的作用.结论 本研究发现甘草水提液在Hela细胞培养中对RSV有明显的抑制作用,而甘草酸则未见明显抑制作用,因此,甘草中可能存在其它抑制RSV的活性成分.     

荔枝核黄酮类化合物体外抗呼吸道合胞病毒的作用

目的: 探讨荔枝核黄酮类化合物体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用. 方法: 采用细胞培养技术,以病毒唑为阳性对照,观察比较荔枝核黄酮类化合物对RSV引起的细胞病变(CPE)的抑制作用. 结果: 荔枝核黄酮类化合物半数中毒浓度(TC50)为152.9 mg/L,其抗RSV的半数有效浓度(IC50)为58.6 mg/L,治疗指数(TI)为2.6,体外抗RSV作用与病毒唑相当,且对RSV抑制作用存在明显的量效关系. 结论: 荔枝核黄酮类化合物在Hep-2细胞中对呼吸道合胞病毒有抑制作用.     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及其病毒蛋白特异性的识别

应用呼吸道合胞病毒(RSV)武汉地方株滴鼻加用病毒感染的Hela细胞免疫Balb/C鼠,取脾细胞与来自实体瘤的SP2/0细胞融合,培育出分泌抗RSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株8株其中3株有中和病毒作用。应用RSV感染Hela细胞作为RSV抗原建立了RSV的免疫转印方法,并应用免疫转印对各单抗的病毒蛋白特异性进行了初步识别:发现1株单抗识别RSV M蛋白,1株识别22 K蛋白,2株识别G蛋白,另外4株单抗的蛋白特异性尚待进一步研究确定。     

IL-33在呼吸道合胞病毒(RSV)感染致哮喘急性发作中的作用

 目的 研究IL-33在呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染致哮喘急性发作中的作用。方法 将24只3周龄SPF级BALB/c雌性小鼠随机分为PBS组、RSV组、卵清白蛋白（ovalbumin,OVA）组和OVA/RSV组,每组6只。首先应用OVA或PBS激发并致敏小鼠,再感染RSV致哮喘急性发作。麻醉后处死小鼠。ELISA法测小鼠血清总IgE水平、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）及肺组织IL-33蛋白水平;瑞氏/吉姆萨染色后测BALF细胞总数及各细胞分类计数;取肺组织病理切片HE染色;real-time PCR测T辅助细胞2型（T helper 2,Th2）细胞因子、IL-33等mRNA表达。结果 OVA组与PBS组相比,血清IgE水平明显升高（P<0.05）。OVA/RSV组中BALF细胞总数较OVA组显著增加,主要表现为巨噬细胞和中性粒细胞的增加。病理切片HE染色可见OVA/RSV组小气道周围炎性细胞浸润更加明显。以上表明RSV感染OVA诱导哮喘急性发作的小鼠模型成功建立。real-time PCR显示：与OVA组相比,OVA/RSV组IL-13以及IL-33 mRNA表达显著增加（P<0.05）,IL-5和ST2表达有所增加,但差异无统计学意义。ELISA结果显示：与OVA组相比,OVA/RSV组肺组织中IL-33浓度增高更加显著（P<0.05）,BALF中IL-33浓度也有所增加,但差异无统计学意义。结论 IL-33可能通过启动Th2型免疫反应在RSV感染诱导哮喘急性发作小鼠模型中起重要作用。     

白藜芦醇对呼吸道合胞病毒感染小鼠肺部病毒滴度及其气道炎症的影响

目的 研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染小鼠肺部病毒滴度及其所致气道炎症的影响。方法6～8周龄雌性BALB/c小鼠,环磷酰胺100 mg/kg腹腔注射后,随机分为对照组、RSV感染组、白藜芦醇腹腔注射组、白藜芦醇雾化组,每...     

抗病毒Ⅰ号中药有效部位体外抗呼吸道合胞病毒作用

目的　了解抗病毒Ⅰ号中药有效部位 (AD1)对呼吸道合胞病毒 (RSV)的抑制作用。方法　采用细胞培养技术 ,以病毒唑为阳性对照药 ,比较观察AD1对RSV的抑制作用。结果　AD1的半数中毒浓度 (TC50 )为 2 5 .98mg/ml,抗RSV的半数有效浓度 (EC50 )为 0 .75 8mg/ml,治疗指数 (TI)为 34.2 9,且对RSV抑制作用存在明显的量效反应关系 (P <0 0 1)。感染RSV 2h、6h、12h后加药均可抑制RSV活性 (P <0 .0 1)。结论　AD1在Hela细胞中对RSV有明显抑制作用     

Antiviral and interferon-inducing effect of fang-gan mixture

The present study was carried out by using the plaque formation test, microdosage cytopathic effect (CPE) method, and mice nasal-cavity-attacking method to observe the antiviral and interferon-inducing effect of Fang-Gan mixture (FGM). The results showed that FGM has direct respiratory syncytia virus (RSV) inactivation effect, and protection effect after mice infected by RSV. FGM could also decrease mice death rate (P less than 0.01) in the experimentation of using parainfluenza virus to attack them, and work in coordination with interferon induced by Newcastle disease virus. After 8, 16, 24, 32 hours of injecting FGM into mice abdominal cavity, the authors used CPE method to determine interferon titer of L929 cells, and found that the highest interferon titer was 98.23 mu/m at the 24th hour. The interferon induced by FGM was in keeping with the nature of Type I interferon. The results suggested that FGM might have strong antiviral effect which is achieved by inducing interferon.