激光损伤致猪视网膜色素上皮细胞中游离钙变化的实验研究

目的探讨激光照射后视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞中游离钙的变化规律。方法用不同输出功率的氩离子激光照射培养的猪ＲＰＥ细胞（光斑直径２００μｍ,照射时间０２ｓ）,用激光扫描共聚焦显微镜测量光凝斑周围ＲＰＥ细胞中游离钙的浓度。结果用０．９、１．８及２．７Ｗ的激光照射后,ＲＰＥ细胞中游离钙浓度（ｎｍｏｌ／Ｌ）分别为４１５±１４８、５２５±２４７、９９４±２０３,而空白对照组为２２２±６４,各组之间差异均有非常显著意义（均为Ｐ＜００１）。结论激光损伤可使ＲＰＥ细胞中游离钙浓度明显升高,升高程度与激光能量的大小呈正相关。     

特发性浆液性视网膜色素上皮脱离影像学观察

特发性浆液性色素上皮脱离(idiopathicmultipleserousdetach mentsofretinalPigmentepithelium)国内鲜见报道。作者用荧光眼底血管造影、吲哚青绿脉络膜眼底血管造影、光学相干断层扫描法观察其影像学表现,旨在为临床提供诊断治疗依据。患者男性,5 2岁,右眼视力下降、视物变形4年,曾服用中药治疗无效。全身检查正常。眼部检查矫正视力右眼0 0 8,左眼0 5 ,外眼及眼前节无异常,双眼视盘边界清楚,视网膜血管正常,右眼底黄斑颞上方囊性外观,灰白色局限性隆起,左眼底黄斑部色素紊乱,无水肿,中心凹反射消失。荧光眼底血管造影显示,早期黄斑中心…     

ZnPcS4-光动力疗法对人视网膜色素上皮细胞的作用

目的探讨四磺酸酞菁锌（ZnPcS4）介导的光动力疗法（PDT）对人视网膜色素上皮细胞的作用。方法从意外死亡者眼球中分离出视网膜色素上皮（RPE）细胞，用紫外可见光谱分析仪观察RPE细胞对ZnPcS4的摄取及代谢的规律，确定PDT的最佳时间点，根据激光能量密度分为50和100J／cm^2组。用MTT计算RPE细胞的抑制率。PDT后1h，用荧光显微镜及流式细胞仪观察和检测细胞内活性氧的含量。结果光照对RPE细胞的抑制率随激光能量密度增强而增强。ZnPcS。介导的PDT作用后，RPE细胞内活性氧含量PDT组与对照组比较，差异有非常显著意义。结论RPE细胞对ZnPcS~的吸收4h达到高峰。ZnPcS。介导的PDT作用后，RPE细胞内活性氧含量显著增加，对细胞有一定的损伤作用。     

缺氧和高浓度葡萄糖对体外培养人视网膜色素上皮衍生因子表达的影响

视网膜血管形成调节因子血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)间存在一个动态的平衡,平衡改变会促进病理状态的发展。在糖尿病视网膜病变病因学上,慢性高血糖引起糖尿病微血管并发症的作用已被证实,葡萄糖转运进视网膜发生糖毒性假说是重要内容。但在体外还没有文献报道缺氧和高糖直接干预PEDF的调节。为此,作者研究了缺氧和高糖培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞和PEDF和VEGF的产生和分泌,以了解其动物和人的体内实验研究的异同。作者通过实验性研究在氧正常或缺氧(1%O2 )加或不加高浓度葡萄糖的条件下,培养的人RPE细…     

超氧化物歧化酶和大剂量地塞米松对兔视网膜冲击伤的防治作用

目的 探讨超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｎｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ,ＳＯＤ）和大剂量地塞米松（ｈｉｇｈ ｄｏｓｅ Ｄｅｖａｍｅｔｈａｓｏｎｅ,ＨＤＤ）对视网膜冲击的防治作用。方法 应用ＢＳＴ－Ⅲ型生物激波管致伤兔眼,建立视网膜 动物模型,家兔１８只,随机分为致伤组（等渗盐水对照）、ＳＯＤ治疗组（６０００Ｕ／ｄ）,ＨＤＤ治疗组（６ｍｇ／ｋｇ）,每组６只,采用ＳＯＤ及ＨＤ进行分组对照治疗。结果 ＳＯＤ     

地塞米松对海水浸泡人肺泡上皮细胞钠通道的影响

目的 探讨地塞米松对海水浸泡的人肺泡上皮细胞(A549)钠通道的影响.方法 将常规培养的A549细胞分为海水处理组(SG)、阴性对照组(NG)和地塞米松处理组(DG).SG组经灭菌配方海水常规孵育,DG组在经海水处理后,加入地塞米松(终浓度1μmol/L)处理,NG组常规培养至实验终点.配方海水渗透压1 300mmol/L,pH 8.2,相对密度1.05.采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪榆测细胞的凋亡和坏死情况,Western blotting法检测钠钾泵al亚单位(NKA-al)、钠通道a亚单位(a-ENaC)的表达,水解比色法检测NKA活性.结果 流式细胞术检测结果显示,海水孵育30min后A549细胞的存活率为90.60%±2.11%,地塞米松(1μmaol/L孵育6h)处理对海水孵育后细胞的存活率无影响.NG组的NKA-al和a-ENaC蛋白表达(0.113±0.041、0.396±0.124)显著高于SG组(0.038±0.009、0.093±0.038;P＜0.01)或DG组(0.067±0.015、0.165±0.078;P＜0.01),但DG组显著高于SG组(P＜0.05).与NG组[31.298±5.779μmol/(mg·h)]比较,SG组NKA酶活性[14.211±3.885μnlol/(mg·h)]明显降低(P＜0.05);DG组的NKA酶活性[18.641±1.921pmol/(mg·h)]较SG组有升高(P＜0.05).结论 在不影响人肺泡上皮细胞存活状况的情况下,地塞米松可以抑制海水孵育导致的a-ENaC、SKA-al含量及NKA活性的下降.     

人无排卵功血子宫内膜上皮细胞培养的实验研究

目的:培养无排卵功血子宫内膜上皮细胞(EEC),以使其可作为无排卵功血的体外实验模型之一。方法:在取材、培养条件和细胞纯化等方面对EEC原代培养的方法作了改进。结果:培养成活率:无排卵型功血EEC与正常增殖期EEC相比无差异;单纯性增生过长EEC高于增生期样EEC。结论:.通过改进培养方法,克服了污染、纯化及细胞数少等问题,成功分离培养了无排卵型功血EEC,为研究无排卵功血提供了一个重要的实验工具。     

氩激光光凝诱导兔视网膜色素上皮变性后其功能与形态的变化

目的通过氩离子激光诱导建立兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)局部变性模型,观察光凝前、后视网膜功能及形态特征。方法青紫蓝兔10只,其中7只兔左眼行氩离子眼底激光光凝,分别检测激光光凝前及光凝后不同时间点的闪光视网膜电图(flash-electroretinography,F-ERG),分析视功能改变情况。另3只实验兔按同样方法建模后7d摘除眼球做病理切片,HE染色后光镜下观察其组织病理学改变。结果激光光凝后1 d F-ERG中视杆细胞反应b波波幅降至最低,3d后有小幅回升并趋于平稳,但仍低于光凝前水平,峰潜时无显著变化;光凝后4h最大混合反应a、b波波幅降至最低,1d后略有回升,7d后呈平稳状态低于光凝前水平,峰潜时无显著变化;光凝后1d振荡电位OPs的∑O值降至最低,3d后逐步回升,但仍低于光凝前水平。光凝后7dRPE细胞变性破坏,深层脉络膜及节细胞层无明显影响。结论激光光凝可以破坏RPE细胞及邻近光感受器细胞,建立RPE局部变性模型,其功能与形态均有改变。     

地塞米松对血管内支架介入术后再狭窄作用的实验研究

目的 观察地塞米松对体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖的作用,探讨其对血管内支架介入术后远期再狭窄的防治价值.方法 组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉SMC,取第6～10代作实验用,MTT法检测地塞米松不同浓度和不同作用时间对SMC增殖的效果,并用RT-PCR法检测不同浓度地塞米松作用下大鼠胸主动脉SMC增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA的表达情况.结果 ①地塞米松呈剂量依赖性抑制体外培养的大鼠SMC增殖,不同时间和不同浓度对其抑制程度不同.各浓度组之间总A值变化经方差分析差异有显著性,F=36.02,P＜0.001;两两比较较高浓度组10-6及10-5 mol/L抑制率相似,A值无显著性差异,P=0.065;低浓度组10-11 mol/L与对照组相比差异无显著性,P=0.567;余各两两比较差异均有显著性,P＜0.001;②地塞米松以浓度依赖模式抑制大鼠SMC的PCNA mRNA表达.方差分析F=15.407,P＜0.001.较低浓度组(10-9 mol/L及10-11 mol/L)与对照组相比,无显著性差异,P值分别为0.48及0.56.其余各组同对照组相比,差异有显著性,P＜0.05.结论 地塞米松呈剂量依赖性抑制大鼠SMC增殖,10-7 mol/L浓度以上可起效,并能持续抑制96 h以上,较低浓度地塞米松在作用时间延长时也有可能抑制SMC的增殖.     

RGS4在HUEVCs凋亡中的作用及地塞米松对其的影响

目的研究RGS4对常氧和低氧培养条件下HUEVC细胞凋亡的影响及地塞米松在其中的作用,以探讨RGS4在HUEVC细胞凋亡中的作用及地塞米松处理对其的影响。方法采用O2／N2／CO2三气培养箱模拟常氧和低氧条件培养HUEVC细胞,RGS4真核表达载体转染HUEVC细胞后采用流式细胞仪（Annexin-V-FITC-PI法）检测细胞凋亡。结果常氧条件下RGS4转染细胞和地塞米松处理对细胞凋亡无明显影响,低氧培养条件下细胞凋亡增加（P〈0．01）,RGS4转染后可使HUEVC细胞凋亡显著减少（P〈0．01）,地塞米松和RGS4同时处理后HUEVC细胞的凋亡与单纯RGS4转染无显著差别。结论RGS4不影响常氧条件下的HUEVC细胞凋亡,但可明显抑制低氧条件下的HUEVC细胞凋亡,地塞米松抑制细胞凋亡的作用可能与RGS4有关或者通过相同的细胞信号通路抑制低氧条件下的细胞凋亡。     

电磁脉冲对离体角膜上皮细胞损伤的实验研究

目的 :探讨电磁脉冲 (EMP)辐射对离体培养兔角膜上皮细胞的损伤作用。方法 :6× 10 4V/m场强的EMP重复照射离体培养的角膜上皮细胞 5次 ,应用原子力显微镜和生化检测仪 ,对辐射前后的细胞膜状态及上清液多种离子浓度进行检测。结果 :EMP照射后角膜上皮细胞膜表面出现多处大小不等的凹陷和穿孔。培养细胞上清多种离子浓度在照射后不同时间均有明显变化 ,其中K+ ,Ca2 + ,Fe2 + 浓度在照射后 2 4h明显升高。结论 :细胞膜是EMP作用于细胞的敏感靶部位 ,细胞膜穿孔是EMP非热效应的损伤作用机制之一。     

帕金森病大鼠模型细胞移植的PET在体显像研究

目的 探讨PET在体显示移植于帕金森病(PD)大鼠模型脑内的视网膜色素上皮(RPE)细胞分化结果及治疗效果.方法 将RPE细胞移植于治疗组PD模型大鼠(12只,其中1只用于组织化学染色)纹状体内,对照组(11只)移植相同体积的生理盐水.移植前后分别进行11C-雷氯必利(raclopride)、"C-N-甲基-213-甲基酯-3B-(4-F-苯基)托烷(a-CFT)PET显像,并用感兴趣区(ROI)法分析2组移植前后显像变化.移植后观察大鼠行为学改善情况及分析细胞免疫组织化学染色结果.结果 移植前PET显像示大鼠模型损伤侧纹状体11C-raclopride摄取增高,而11C-B-CFF摄取下降.移植RPE细胞后,治疗组大鼠损伤侧纹状体11C-raclopride摄取降低,11C-B-CFT摄取上升.ROI分析纹状体/小脑放射性比值11C-raclopride由1.870±0.465(移植前)降至1.601±0.257(移植后);11C-B.CFT由1.827±0.347(移植前)升至2.336±0.326(移植后).大鼠旋转行为有所改善.免疫组织化学染色显示移植的RPE细胞可分化为多巴胺神经元.结论 PET显像可为监测移植细胞存活、分化及转归提供一种在体、无创、可视化评价工具.     

巨噬细胞条件培养基对人视网膜色素上皮细胞活性和增殖的影响

 目的探讨激活的巨噬细胞和未激活的巨噬细胞刘视网膜色素上皮(Retinal pigment epithelial,RPE)细胞活性和增殖的影响.方法制备脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)激活的和未激活的人腹腔巨噬细胞条件培养基(MψCM),取3种不同的浓度,分别施加于纯化培养的胎眼RPE细胞,作用24、48、72 h,用MTT比色法测定RPE细胞的OD值.结果LPS激活的MψCM(L-MψCM)和未激活的MψCM(N-MψCM)取不同浓度作用不同时间后均能不同程度地促进RPE细胞的活性和增殖,其中L-MψCM的作用明显强于N-MψCM.结论MψCM中含有促RPE细胞增殖的因子,可能L-MψCM中的促增殖因子在质和量上优于N-MψCM.     

缺氧对体外培养的大鼠肾成纤维细胞PEDF和VEGF表达的影响

目的：探讨缺氧对不同浓度葡萄糖培养的大鼠肾成纤维细胞（NRK细胞）血管内皮生长因子（VEGF）与色素上皮衍生因子（PEDF）表达和变化情况。方法：将NRK细胞分为：正常组、甘露醇组、缺氧对照组、高糖A、B组、缺氧A、B组。用四唑盐比色实验法检测各组NRK细胞的数目,用ELISA法测定NRK细胞VEGF与PEDF蛋白的表达情况。结果：与正常对照组相比,高糖组和缺氧组的NRK细胞数目显著减少（P〈0．01）。在缺氧条件下NRK细胞VEGF蛋白含量明显升高（P〈0．01,P〈0．05）,PEDF蛋白含量明显下降（P〈0．01）,并呈剂量依赖性;随着时间的延长,各组NRK细胞的VEGF蛋白含量呈上升趋势（P〈0．01）,PEDF蛋白含量呈下降趋势（P〈0．01）。结论：缺氧使不同浓度的高糖诱导的肾成纤维细胞VEGF与PEDF的表达失衡,这可能是糖尿病肾病发生的重要机制。     

脑胶质瘤SHG-44细胞株照射后子代辐射敏感性

目的 探讨脑胶质瘤SHG-44细胞株照射子代生长特性及辐射敏感性变化。方法 培养人脑胶质瘤SHG-44细胞株照射后的存活子代细胞,测定其群体倍增时间,并进行集落形成实验和流式细胞仪检测,分析其辐射敏感性和细胞周期变化。结果 SHG-44细胞群体倍增时间为(22.78±2.61) h,SHG-44细胞经6 MV X射线10 Gy照射后存活子代SHG-44.10细胞群体倍增时间为(30.46±2.73) h (F=7.878,P<0.05)。SHG-44细胞和SHG-44.10细胞再次2 Gy照射后的存活分数分别为70.8%、80.6%。与SHG-44细胞相比,SHG-44-10细胞在G2/M期比例减少,S期比例增多。结论 SHG-44细胞照射后存活子代细胞增殖延缓,辐射敏感性下降。     

人胃腺癌SGC-7901细胞与125I-叶酸体外结合特性研究

目的　探讨人胃低分化腺癌SGC 790 1细胞与1 2 5I 叶酸体外结合特性及其细胞表面存在高密度、高亲和力叶酸受体的可能性。方法　采用放射配基受体结合分析法 ,观察SGC 790 1细胞和1 2 5I 叶酸结合与时间的关系、特异结合位点及亲和程度、不同竞争剂对SGC 790 1细胞结合1 2 5I 叶酸的影响及SGC 790 1细胞内化1 2 5I 叶酸的程度。结果　SGC 790 1细胞与1 2 5I 叶酸结合具有特异性、高亲和性、饱和性、竞争性及温度依赖性 ,其最大叶酸特异结合位点Bmax为 14 3 2 6fmol 10 6 细胞 ,平衡解离常数Kd 为 2 86× 10 - 1 0 mol L ,1 2 5I 叶酸可通过叶酸受体途径内化入SGC 790 1细胞。结论　SGC 790 1细胞表面具有高密度和高亲和力的叶酸受体及可供介导叶酸靶向诊断和治疗的靶点。     

木醋杆菌纤维素对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原含量的影响

目的研究木醋杆菌纤维素对人皮肤成纤维细胞（HSFb）的增殖及胶原蛋白合成的影响．探讨其促进创面愈合的可能机制。方法体外培养的HSFb随机分为2组,1组为实验组与木醋杆菌纤维素敷料共同培养．1组设为空白对照组。应用流式细胞仪检测细胞周期变化,应用碱水解法检测培养液中羟脯氨酸的含量变化,检测2组HSFb培养72h后的培养上清液中I型与Ⅲ型胶原含量及其比值的变化。结果细胞周期时项分析结果显示实验组细胞周期S＋G州期细胞百分率及增殖指数PI值较空白组增高（P〈0．05）。实验组在不同时间段时其成纤维细胞培养液中羟脯氨酸含量均明显高于空白组（P〈0．05）。实验组与空白组比较,培养上清液中I型与Ⅲ型胶原含量增高,I型与Ⅲ型胶原比值下降（P〈O．05）。结论木醋杆菌纤维素能有效促进人皮肤成纤维细胞的增殖和胶原的合成,可能与其促进创面愈合的机制有关。     

回转器模拟失重对人胃癌SGC-7901细胞形态和生物学特征的影响

目的 探讨模拟失重对人胃癌SGC-7901细胞形态、增殖、周期和凋亡的影响.方法采用回转器模拟失重,用图像分析系统软件分析HE染色后SGC-7901细胞形态的改变,用免疫组化法观察细胞增殖细胞核抗原（PCNA）表达的变化,用流式细胞仪测定细胞周期,并用TUNEL法检测细胞凋亡.结果 回转器模拟失重后,回转组SGC-7901细胞12 h、24 h、36 h、48 h及72 h各时间段的细胞面积均较对照组缩小（P＜0.01）;在36 h时,其长短径之比较对照组增大（P＜0.01）,其余时间段无明显差异.12 h、24 h和36 h回转组SGC-7901细胞PCNA抗体阳性细胞比率与对照组相比无明显差异,48 h、72 h回转组的PCNA抗体阳性细胞明显减少（P＜0.05或P＜0.01）.12 h、24 h和36 h回转组SGC-7901细胞的细胞周期与对照组相比无明显差异,48 h、72 h回转后G0＋G1期细胞显著增多（P＜0.01或P＜0.05）,S＋G2＋M期细胞则显著减少（P＜0.01或P＜0.05）.12 h、24 h、36 h和48 h回转组SGC-7901细胞凋亡比例与对照组相比无明显差异,72h回转组细胞凋亡比例较对照组明显增多（P＜0.01）.结论 回转器模拟失重使胃癌SGC-7901细胞的形态发生了变化,48 h、72 h时出现细胞周期阻滞、增殖抑制,72 h时凋亡增加.