转化生长因子抑制视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

 目的探讨转化生长因子(TGF-β1)对人视网膜色素上皮((hRPE)细胞增殖的抑制作用.方法用不同浓度的TGF-β1(0.01 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml)处理hRPE细胞24 h后,用MTT和氚-标记脱氧核苷(3H-TdR)方法检测TGFF-β1对hRPE细胞和DNA合成的抑制率的影响,用流式细胞仪检测TGF-β1对hRPE细胞周期的影响.结果不同浓度TGF-β1处理hRPE细胞24 h后细胞和DNA合成的抑制率随TGF-β1浓度的增加而增加,TGF-β1将细胞阻滞在G1期.结论TGF-β1能抑制hRPE细胞的增殖且呈剂量依赖性,TGF-β1是通过将hRPE细胞阻止在G1期而发挥抑制作用的.     

不同浓度胡桃醌对HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察不同浓度胡桃醌对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响,探讨胡桃醌的抗肿瘤作用.方法 常规体外培养人宫颈癌HeLa细胞24h,加入10、20、50、100、200μmol/L浓度的胡桃醌再培养24h.通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况,分光光度计检测细胞Caspase-3蛋白活性.结果 细胞形态学观察显示,不同浓度胡桃醌均可导致细胞形态学发生改变;MTT实验表明,胡桃醌对HeLa细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度的增加而增强(P＜0.05或P＜0.01);流式细胞仪检测结果表明,加入胡桃醌培养24h后HeLa细胞出现G2/M期阻滞,10、20、50、100、200μmol/L胡桃醌处理后,HeLa细胞G2/M期的比例分别增加至12.92％、16.23％、23.64％、34.22％、52.64％.Caspase-3活性检测结果显示,不同浓度胡桃醌均可使Caspase-3蛋白活性增加,且具有剂量依赖性.结论 胡桃醌可抑制HeLa细胞的增殖,且具有剂量依赖性,有望用于抗肿瘤治疗.     

伊班膦酸钠对人肺巨细胞癌高转移株PLA-801D体外生长的抑制作用

目的 研究伊班膦酸钠(IBN)对体外培养的人肺巨细胞癌高转移株PLA-801D细胞生长增殖的影响及其潜在的作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度IBN、及相同浓度不同作用时间的IBN对PLA-801D细胞系生长增殖的影响,应用流式细胞仪检测不同浓度IBN作用下,PLA-801D细胞周期的变化.结果 在10～100μg/ml的浓度范围内,IBN对PLA-801D细胞生长增殖均有抑制作用(P＜0.01),抑制效果与IBN的药物浓度和作用时间呈正相关(r药物浓度=0.987,r作用时间=0.985);IBN可使细胞明显阻滞于S期,G2/M期细胞比例则明显减少.结论 在10～100μg/ml的浓度范围内,IBN对体外生长的PLA-801D细胞的抑制作用呈剂量、时间依赖性,其机制可能与其将细胞阻滞在DNA合成期(S期),阻碍肿瘤细胞分裂增殖有关.     

三氧化二砷对内皮细胞增殖和一氧化氮分泌的影响

 目的 通过观察不同浓度三氧化二砷(As₂O₃)对内皮细胞增殖及分泌一氧化氮(NO)的影响, 初步从内皮细胞角度评价As₂O₃防治PTCA术后再狭窄的作用。方法 以不同浓度As₂O₃溶液(0.01、0.1、0.5、1、5、10 μmol/L)作用于传代培养的EVC-304细胞, 分别培养24、48、72 h测定内皮细胞对 3H-TdR摄取量, 以硝酸还原酶法测定内皮细胞培养液NO含量。结果 As₂O₃浓度低于1 μmol/L时对内皮细胞摄取3H-TdR无抑制作用。As₂O₃浓度低于0.1 μmol/L时对内皮细胞分泌NO无明显抑制作用;As₂O₃浓度0.5~10 μmol/L时抑制内皮细胞分泌NO。结论 As₂O₃ 浓度低于0.1 μmol/L对内皮细胞增殖及分泌NO均无明显抑制作用;0.1~1 μmol/L范围内只对内皮细胞分泌NO的功能有轻度影响, 但不抑制内皮细胞的增殖;而较高浓度的As₂O₃对内皮细胞增殖及分泌NO均有明显抑制, 而且抑制作用随浓度增高而增强。As₂O₃ 用于防治PTCA术后再狭窄应采取低较浓度。     

巨噬细胞条件培养基对人视网膜色素上皮细胞活性和增殖的影响

 目的探讨激活的巨噬细胞和未激活的巨噬细胞刘视网膜色素上皮(Retinal pigment epithelial,RPE)细胞活性和增殖的影响.方法制备脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)激活的和未激活的人腹腔巨噬细胞条件培养基(MψCM),取3种不同的浓度,分别施加于纯化培养的胎眼RPE细胞,作用24、48、72 h,用MTT比色法测定RPE细胞的OD值.结果LPS激活的MψCM(L-MψCM)和未激活的MψCM(N-MψCM)取不同浓度作用不同时间后均能不同程度地促进RPE细胞的活性和增殖,其中L-MψCM的作用明显强于N-MψCM.结论MψCM中含有促RPE细胞增殖的因子,可能L-MψCM中的促增殖因子在质和量上优于N-MψCM.     

三苯氧胺促进大鼠子宫平滑肌细胞增殖

目的 :研究三苯氧胺 (tamoxifen ,TAM)对大鼠子宫平滑肌细胞增殖的影响及其可能的机制。方法 :采用细胞培养、细胞计数、MTT、流式细胞技术和激光共聚焦显微镜技术。结果 :TAM(10 -6mol·L-1)使大鼠子宫平滑肌细胞的生长曲线上移。TAM(10 -8～ 10 -6mol·L-1)剂量依赖性的促进大鼠子宫平滑肌细胞的增殖作用。TAM(10 -6mol·L-1)使大鼠子宫平滑肌细胞周期由G1期加速向S期转化 ,G1期的DNA含量由对照组的 5 5 .5 %下降到加药组的 32 .8% ,S期的DNA含量由对照组的 2 9.0 %上升到加药组的 4 9.4 %。激光共聚焦检测到TAM(10 -6mol·L-1)可使大鼠子宫平滑肌细胞内的Ca2 + 浓度显著升高。结论 :TAM可以通过调节细胞周期各阶段DNA含量和细胞内Ca2 + 浓度水平 ,从而调节大鼠子宫平滑肌细胞的增殖活动。     

PPARγ依赖和非依赖途径参与吡格列酮对人肝癌细胞的增殖抑制作用

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）特异性外源配体吡格列酮（Pio）对体外培养的HepG2细胞增殖作用的影响,并探讨其是否通过PPARγ依赖途径发挥作用。方法将不同浓度的Pio作用于体外培养HepG2细胞,MTT比色法检测HepG2细胞增殖情况,3H-TdR掺入实验检测细胞DNA合成速率,采用RT-PCR和Western印迹检测PPARγmRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期;同时观察PPARγ特异性拮抗剂GW9662和（或）瞬时转染pSG5-PPARγ真核表达质粒、PPARγ小干扰RNA（pGCsi-PPARγ）表达质粒稳定转染对Pio细胞增殖作用的影响。结果 Pio作用于HepG2细胞后,导致HepG2细胞的增殖受到抑制、DNA合成速率减慢,呈一定的剂量依赖关系;在此过程中,G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,但PPARγmRNA和蛋白的表达没有显著变化;GW9662可以部分拮抗Pio的增殖抑制效应,但转染pSG5-PPARγ真核表达质粒可以逆转GW9662的作用;利用pGCsi-PPARγ表达质粒将PPARγ基因沉默后,Pio在高浓度（20μmol/L）时亦表现出细胞增殖抑制作用。结论 Pio能够抑制HepG2细胞的增殖,该作用与其诱导细胞G0/Gl期的停滞有关,PPARγ依赖和非依赖途径参与上述过程。     

血小板衍生生长因子C对体外培养的人卵巢透明细胞癌细胞的增殖和趋化作用

 目的 观察血小板衍生生长因子-C(platelet-derived growth factor-C,PDGF-C)对体外培养的人卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma,OCCC)ES-2细胞的增殖和趋化作用。方法 体外培养ES-2细胞,添加不同浓度的PDGF-C进行干预,应用CCK8试剂盒法评价细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,利用Transwell细胞迁移实验、细胞划痕实验测定细胞迁移能力。结果 与未加PDGF-C的对照组相比,PDGF-C能明显刺激ES-2细胞的增殖,在第4天增殖达高峰,PDGF-C促增殖最佳作用浓度是20 μg/L;经不同浓度PDGF-C的刺激,处于细胞周期G1期的ES-2细胞比例较对照组明显降低(P<0.05),处于S期的ES-2细胞比例显著升高(P<0.05),而处于G₂+M期的细胞比例则无明显变化(P＞0.05)。同时,PDGF-C提高了ES-2细胞的迁移能力。结论 PDGF-C可促进体外培养的ES-2细胞的增殖、迁移能力。     

地塞米松对M胆硷受体上行调节的特点

M胆硷受体上行调节具有以下特点:(1)用100nmol/L的人工合成的糖皮质激素地塞米松(dexamethasone,DEX)孵育细胞48h,细胞中M受体量从726.0±25.9增加至1092.0±39.0fmol/10~6细胞,DEX不影响M受体与配基结合的亲和力.(2)DEX的调节作用在一定范围内依赖于时间和浓度,10~(-8)mol/L的DEX达最大效应.(3)DEX可使细胞对标记前体向DNA、RNA和蛋白质的参入量分别增加80.8±5.1%,29.8±3.3%和20.0±3.2%,表明DEX对M胆硷受体的调节作用与促进DNA复制、RNA砖录和受体蛋白质的合成过程有关.     

聚乳酸羟基乙酸CXCR4-miRNA纳米微粒抑制人肾癌细胞生长的研究

目的探讨聚乳酸羟基乙酸CXCR4-miRNA纳米复合微粒在体外对人肾癌细胞增殖的抑制作用。方法运用二次超声乳化和溶剂挥发法制备聚乳酸羟基乙酸CXCR4-miRNA纳米粒;通过MTT法观察纳米微粒对肾癌细胞A498增殖的抑制作用;并运用流式细胞术检测纳米微粒作用后A498细胞的凋亡情况。结果制备的聚乳酸羟基乙酸CXCR4-miRNA纳米粒外观呈圆型,平均粒径为280 nm,平均载药量为(0.515±0.023)%,平均包封率为50.2%。通过MTT实验证明纳米微粒可以较好的抑制人肾癌细胞(A498)的增殖,随着聚乳酸羟基乙酸CXCR4-miRNA纳米微球浓度的增加,药物作用时间越长,细胞增殖受到抑制的效果越明显。流式细胞术检测可见凋亡峰出现,细胞周期阻滞在S+G2/M期。结论聚乳酸羟基乙酸CXCR4-miRNA纳米粒具有抑制肾癌细胞A498增殖的作用,其效果与药物浓度及作用时间长短有关。     

缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的效应

本实验应用免疫组织化学染色 ,3H -TdR掺入 ,流式细胞仪检测技术探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PSMC)增殖的影响。结果 :缺氧 12h其增殖细胞核抗原 (PCNA)阳性反应颗粒增加 ,2 4h明显增加 ,其含量是常氧组 2 .1倍。低氧 8h可使PSMC的3H -TdR摄取量减少 (P <0 .0 5 ) ,12h则促进其摄取 ,2 4h则明显较常氧对照组增多 (P <0 .0 5 )。流式细胞仪检测显示其G2 /M期细胞比例明显增多 (P <0 .0 1) ,G0 /G1 期细胞比例明显减少 (P <0 .0 1) ,细胞内总蛋白含量有所降低 (P <0 .0 1)。结论 :缺氧早期抑制或损害PSMC增殖 ,而后促使PSMC的表型改变 ,出现增殖 ,从一侧面证实缺氧可以直接促进PSMC增生。     

6-溴异香兰素对HeLa细胞的增殖抑制及放射增敏作用

目的研究香兰素衍生物中的6-溴异香兰素（6-溴-5-羟基-4-甲氧基苯甲醛,BVAN08）对HeLa细胞增殖和放射敏感性的影响,为开发新的抗癌和放射增敏药物提供理论依据。方法利用MTT法检测细胞增殖,单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤,流式细胞术检测细胞周期,克隆形成率法检测细胞放射敏感性,AnnexinⅤ/PI染色法检测细胞凋亡。结果研究表明BVAN08在10～20μmol/L以上浓度就显示出对HeLa细胞增殖的抑制作用,抑制程度具有剂量依赖性,抑制细胞存活的IC50值为19.07μmol/L。BVAN08能诱发细胞DNA双链断裂损伤,作用4h就开始诱发细胞周期G2/M阻滞,随时间延长阻滞更加明显。BVAN08明显降低DNA修复蛋白DNA-PKcs的表达水平,20μmol/LBVAN08与2Gyγ射线复合作用可以显著增加细胞对射线的敏感性,增加细胞凋亡率。结论 BVAN08抑制HeLa细胞增殖,提高细胞的放射敏感性,其放射增敏作用与降低DNA-PKcs蛋白表达水平和G2/M阻滞有关。     

茶多酚对高转移性人肺癌细胞间隙连接通讯功能的上调研究

应用MTT法体外观察不同浓度茶多酚对PG细胞的杀伤作用，激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测用药后PG细胞内Ca^2 浓度、细胞间隙连接通讯(GJIC)、Cx43表达和细胞增殖周期分布的变化。结果显示，4个浓度的茶多酚对PG细胞均有杀伤作用，呈剂量依赖关系。细胞增殖受到明显抑制，使细胞阻滞于G0／G1期，不能进入S期及G2／M期，细胞增殖指数明显下降。与对照组相比，随着茶多酚浓度的增加，细胞内Ca^2 浓度、GJIC和Cx43表达水平逐渐上升。提示茶多酚对PG细胞具有生长抑制作用，其机制可能与上调细胞间隙连接通讯功能有关。     

18氟-氟代脱氧葡萄糖对Lewis肺癌细胞增殖的影响

目的 研究不同浓度¹⁸氟-氟代脱氧葡萄糖(¹⁸F-FDG)对Lewis肺癌细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法 以0、0.37、1.85、3.70 和 7.4 (×10⁶ Bq/ml) ¹⁸F-FDG处理细胞24 h,用倒置显微镜与电子显微镜观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期时相分布,³H-TdR掺入法检测细胞DNA合成,比色法检测细胞脂质过氧化水平,免疫组织化学法检测细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 细胞的累积吸收剂量分别为0、0.11、0.55、1.10与2.20 Gy。受照细胞出现凋亡形态学改变,在0～2.20 Gy剂量范围内,细胞凋亡率由(4.05±0.01)%增大为(25.6±0.28)%(t=188, P<0.01),³H-TdR掺入率从100%下降为(22.0±0.51)%( t=27.6, P<0.05),细胞内丙二醛(MDA)含量由(0.08±0.03)上升到(0.67±0.12)μmol/L(t=11.7, P<0.01)。Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增高,细胞周期发生G₂/M期阻滞。结论 ¹⁸F-FDG能诱导Lewis肺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

常氧与缺氧状态下脑啡肽和吗啡对兔肺动脉平滑肌增殖的调控作用

探讨常氧与缺氧状态下脑啡肽对兔肺动脉平滑肌增殖的调控作用及机制,为解决经皮腔内冠脉成形术支架后冠脉再狭窄问题提供新的理论依据。无菌取出新西兰白兔动脉段,在常氧和缺氧条件下胺照Ｒｏｓｓ贴片培养平滑肌,和相差显微镜,透射电镜和（－肌动蛋白体鉴定平滑肌细胞,四唑盐比色法及３－ＨｄＲ参人实验检测平滑肌的生长状况。     

细胞内钙调控对心肌成纤维细胞增殖的作用

目的:探讨不同来源的细胞内Ca2+([Ca2+]i)对心肌成纤维细胞(fibroblasts,PBs)丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)介导的增殖反应的作用。方法:以培养的大鼠FBs为模型,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激FBs细胞外Ca2+跨膜内流、三磷酸肌醇(IP3)刺激胞内Ca2+释放,应用钙荧光指剂Fura-2/AM动态观测心肌细胞[ca2+]i浓度,γ-32P-ATP掺入法和免疫印迹(westen blot)测MAPK活性及蛋白含量,氚-亮氨酸(3H-Leu)、氚-胸腺嘧定(3H-TdR)掺入量作为FBs增殖的指标。结果:AngⅡ、IP3均能显著增加FBs[Ca2+]j浓度、MAPK活性及蛋白含量,并提高3H-Leu、3H-TdR掺入量,与对照组FBs相比差异显著,P<0.01。结论:激活[Ca2+]i使MAPK活性及含量明显增加而促进FBs的增殖,FBs的增殖与[ca2+]i浓度增加有关,与[Ca2+]i的来源无关。     

中华猕猴桃根乙酸乙酯部分抑制结肠癌SW480细胞增殖作用

目的探讨中华猕猴桃根乙酸乙酯提取部分(EE-ACP)对SW480的增殖抑制及诱导凋亡的作用及其可能的机制。方法运用MTT比色法、Hochest33258染色法、流式细胞术和Western Blot法检测EE-ACP对SW480细胞的作用。结果不同浓度的EE-ACP作用于SW480细胞在24、48、72 h后均能明显的抑制细胞的增殖(P<0.05),且存在时间-浓度依赖性,IC50分别为224.344、195.376和160.459μg/ml。Hochest33258荧光染色可见不同浓度EE-CAR干预SW480细胞48 h后,凋亡小体逐渐增多。FITC-Annexin V/PI双染法提示EE-ACP诱导细胞凋亡,并随剂量的增加作用增强。PI染色结果提示,EE-ACP将SW480细胞周期阻滞于G_1期。Western Blot结果显示,随着加药浓度的增加,周期相关蛋白P53和P21表达逐渐增大,周期相关蛋白Cyclin D1表达减少。结论中华猕猴桃根乙酸乙酯提取部分可以抑制SW480细胞的增值,其发生可能与其促进P53、P21基因,抑制Cyclin D1基因表达有关。     

三氧化二砷对人结肠癌细胞增殖及凋亡影响的研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）对人结肠腺癌LS-174T细胞增殖的抑制及凋亡的诱导作用。方法：应用MTT法、细胞集落形成试验、流式细胞仪技术和TUNEL法观察不同浓度的As2O3(1.0μmol,2.0μmol，4.0μmol，8.0μmol，16.0μmol/L）对LS-174T细胞增殖和凋亡的影响。免疫组化技术观察As2O3对bcl-2基因表达的影响。结果：LS-174T细胞经As2o3作用后，细胞生长抑制率上升，细胞集落形成率下降，细胞周期中G1期细胞比例上升，S期和G2/M期细胞比例下降，TUNEL法显示凋亡细胞数增加，免疫组化结果显示bcl-2的表达明显减弱。结论：As2O3能抑LS-174T细胞增殖并诱导该细胞株凋亡，其机理可能与下调bcl-2表达有关。     

模拟失重对成骨样细胞细胞周期变化的影响

目的 探讨空间骨丢失的机理,研究模拟失重时人成骨样细胞细胞周期的变化。方法 利用回转器模拟失重,观察测定了成骨样细胞增殖、周期的变化及其恢复作用和中药三花接骨散对细胞周期的影响。结果 模拟失重作用后,成骨细胞增殖受到明显抑制,Ｇ１期细胞显著增多、Ｓ与Ｇ２＋Ｍ期细胞显著减少,模拟失重１２ｈ后再经１２ｈ以上正常生长,细胞周期可恢复至对照水平。三花接骨散能促进Ｇ１期细胞减少,Ｓ与Ｇ２＋Ｍ期细胞增多,具有     

缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞STAT3表达及细胞增殖的影响

目的探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)信号转导及转录活化因子3(STAT3)表达及细胞增殖的影响。方法采用组织块法原代培养PAsMCS并进行缺氧处理,半定量RT-PCR,Western blot法分别检测缺氧2、6、12和24h STAT 3mRNA和酪氨酸活性水平的变化;。H-TdR掺入法观察缺氧6、12和24h细胞增殖情况。结果缺氧2hSTAT3mRNA表达升高,6h达高峰。12h开始下降,但仍高于常氧组;Western blot定量分析示缺氧6hSTAT3酪氨酸磷酸化水平升高,12h达高峰,24h下降;^3H-TdR掺入法测定结果示PASMCs。H-TdR掺入量在缺氧6h开始增加,随着缺氧时间延长,。H-TdR掺入量逐渐增加,至缺氧24h。HTdR掺入量最高。结论缺氧诱导PASMCs中STAT3 mRNA和蛋白酪氨酸活性水平增加,提示STAT3在缺氧致PASMCs增殖过程中可能发挥重要作用。