斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原分析及其应用

目的探索斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原(ES-Ag)的诊断价值.方法采用SDS-PAGE和EITB分析斯氏狸殖吸虫幼虫ES-Ag,以幼虫ES-AgDot-ELISA检测人血清抗体.结果幼虫ES-Ag在20kD～60kD间可显示4条蛋白区带,主带24kD抗原蛋白对人体斯氏狸殖吸虫感染具有诊断价值.幼虫ES-AgDot-ELISA检测28例肺吸虫病人血清抗体均为阳性,最低阳性反应滴度为1320,滴度倒数几何均数为1160.6份日本血吸虫病人血清、4份华支睾吸虫病人血清、20份健康人血清皆呈阴性反应.结论斯氏狸殖吸虫幼虫ES-AgDot-ELISA为诊断肺吸虫病敏感、特异的诊断方法.     

斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原分析及其应用

目的 探索斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原（ES-Ag)的诊断价值。方法 采用SDS-PAGE和EITB分析斯氏狸殖吸虫幼虫ES-Ag,以幼虫ES-AgDot-ELISA检测人血清抗体。结果 幼虫ES-Ag在20kD-60kD间可显示4条蛋白区带,主带24kD抗原蛋白对人体斯氏狸殖吸虫感染具有诊断价值。幼虫ES-AgDot-ELISA检测28例肺吸虫病人血清抗体均为阳性,最低阳性反应滴度为1：320,滴度倒数几何均数为1160。6份日本血吸虫病人血清,4份华支睾吸虫病人血清,20份健康人血清皆呈阴性反应。结论 斯氏狸殖吸虫幼虫ES-AgDot-ELISA为诊断肺吸虫病敏感,特异的诊断方法。     

免疫印渍技术诊断斯氏狸殖吸虫病的初步研究

本文在免疫印渍技术分析斯氏狸殖吸虫成虫抗原成分,显示22、24、26kD抗原蛋白对该病具诊断价值的基础上,将免疫印渍技术诊断16例斯氏狸殖吸虫病人,结果全呈阳性反应;同时检测的24例对照血清中,10例日本血吸虫病人、4例华支睾吸虫病人、10例正常人均呈阴性反应。结果进一步表明22、24、26kD抗原蛋白为斯氏狸殖吸虫的特异性诊断抗原,免疫印渍技术为斯氏狸殖吸虫病的高度特异、敏感的一种新型诊断方法。     

斯氏狸殖吸虫抗原分析和血清学诊断方法的研究

[目的 ]分析斯氏狸殖吸虫囊蚴、童虫和成虫各期抗原和建立特异性抗原的斯氏狸殖吸虫病血清学诊断方法。 [方法 ]用SDS PAGE分离斯氏狸殖吸虫的各虫期抗原 ,经免疫印迹识别成虫期特异性诊断抗原。采用电洗脱技术分离 10～ 30kDa蛋白组分 ,建立纯化抗原的dot ELISA血清学诊断斯氏狸殖吸虫病。 [结果 ]斯氏狸殖吸虫病患者血清与成虫抗原的 10～ 30kDa显示较多免疫识别带 ,主带为 2 2、2 4和 2 6kDa。与血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清的交叉反应带出现于 6 0～ 90kDa。斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA与成虫粗抗原的ELISA检测 2 8例疑诊病人血清 ,两法阳性率间差异无显著性。而检测 38例感染其它吸虫和肺部疾病患者血清 ,粗抗原的ELISA交叉反应率为 13 2 % (5 /38)。 [结论 ]斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA为斯氏狸殖吸虫病高度特异和敏感的血清学诊断方法。     

酶免疫转移印迹试验分析斯氏狸殖吸虫成虫抗原

本文应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离斯氏狸殖吸虫成虫抗原,并通过转移电泳亚硝酸纤维薄膜(NC)上,然后用酶联免疫试验观察成虫抗原蛋白与感染斯氏狸殖吸虫的病人、犬及大鼠血清的反应,检测和识别特异性虫体抗原蛋白。实验结果显示:虫体抗原经SDS-PAGE分离,染色后可显示20余条蛋白区带,分子量分别为22、24、26KD的抗原蛋白对人体和动物的斯氏狸殖吸虫感染具有诊断价值。     

一维和二维电泳分析斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原

人不是斯氏狸殖吸虫的适宜宿主，幼虫寄生后可引起多种肺外型感染，病原学检查困难［1］，临床诊断主要依靠免疫学检查，除检测方法外,诊断用抗原的特异性是影响检测效果的关键因素。故分析和检测并殖吸虫的特异抗原组分，在并殖吸虫病的免疫诊断和抗原的分离纯化方面均具有重要意义。本文采用一维、二维电泳和免疫印迹技术分析斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原，试图鉴别特异的、高免疫原性斯氏狸殖吸虫蛋白和多肽，为开发特异、敏感的免疫学诊断方法、研制抗斯氏狸殖吸虫药物和疫苗提供参考资料。     

免疫酶染色试验检测斯氏狸殖吸虫抗体的研究

目的探索用免疫酶染色试验检测斯氏狸殖吸虫病抗体的敏感性和特异性。方法从病犬肺虫囊中收集斯氏狸殖吸虫成虫,冰冻切片,制作抗原片。采用免疫酶染色试验(IEST)检测斯氏狸殖吸虫病人和病鼠血清抗体。试验设健康大鼠血清对照及其他寄生虫病血清对照。结果斯氏狸殖吸虫病人和病鼠血清特异抗体阳性率分别为96.7%和97.4%。实验动物从感染后第2周开始抗体检测阳性,第4周阳性率达97.4%,持续10周。结论免疫酶染色试验敏感性高、特异性强,对斯氏狸殖吸虫病的早期诊断有重要参考价值。     

免疫酶染色试验检测斯氏狸殖吸虫抗体的研究

目的 探索用免疫酶染色试验检测斯氏狸殖吸虫病抗体的敏感性和特异性。方法从病犬肺虫囊中收集斯氏狸殖吸虫成虫，冰冻切片，制作抗原片。采用免疫酶染色试验（IEST）检测斯氏狸殖吸虫病人和病鼠血清抗体。试验没健康大鼠血清对照及其他寄生虫病血清对照。结果斯氏狸殖吸虫病人和病鼠血清特异抗体阳性率分别为96．7％和97．4％。实验动物从感染后第2周开始抗体检测阳性，第4周阳性率达97．4％，持续10周。结论免疫酶染色试验敏感性高、特异性强，对斯氏狸殖吸虫病的早期诊断有重要参考价值。     

斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白质分析

目的分析和检测斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原的特异抗原组分。为建立特异、敏感的免疫学诊断方法、研制抗斯氏狸殖吸虫药物和疫苗提供理论基础。方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、双向电泳（Two—dimensional gel eleetrophoresis，2-DE）和免疫印迹（Western blot）等方法，对斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原进行分析。结果SDS-PAGE分离出22条蛋白带，其中主带8条，分子质量单位为13～64ku，未见65ku以上条带。Western blot显示20条显色带，主带6条，分子质量单位分别为13、18、22、28、35和64ku。2-DE电泳分离出斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原48个多肽斑点，分子质量单位为14～70ku，绝大部分分布于pI3．10～7．14，少数分布于pI8．78～9．85，在pI7．14～8．78之间几乎未见多肽斑点。Western blot分析出其中的10个主要多肽斑点能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别，大部分为集中在酸性区域的小分子多肽。结论斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原经SDS-PAGE电泳分离出的22条蛋白带中，有6条蛋白含量较高，能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别。2-DE电泳分离出的48个多肽斑点中，有10个含量较高，能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别，大部分为偏酸性的小分子多肽。     

斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白质分析

目的分析和检测斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原的特异抗原组分,为建立特异、敏感的免疫学诊断方法、研制抗斯氏狸殖吸虫药物和疫苗提供理论基础。方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、双向电泳(Two-dimension-al gel electrophoresis,2-DE)和免疫印迹(Western blot)等方法,对斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原进行分析。结果SDS-PAGE分离出22条蛋白带,其中主带8条,分子质量单位为13~64 ku,未见65 ku以上条带。Western blot显示20条显色带,主带6条,分子质量单位分别为13、18、22、28、35和64 ku。2-DE电泳分离出斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原48个多肽斑点,分子质量单位为14~70 ku,绝大部分分布于pI 3.10~7.14,少数分布于pI 8.78~9.85,在pI 7.14~8.78之间几乎未见多肽斑点。Western blot分析出其中的10个主要多肽斑点能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别,大部分为集中在酸性区域的小分子多肽。结论斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原经SDS-PAGE电泳分离出的22条蛋白带中,有6条蛋白含量较高,能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别。2-DE电泳分离出的48个多肽斑点中,有10个含量较高,能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别,大部分为偏酸性的小分子多肽。     

斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原的特性及其应用

对斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解抗原(P_sAWU)和盐水浸出抗原(P_sAWS)部分特性分析表明,两者氨基酸种类一致,但P_sAWU 酪氨酸和蛋氨酸含量明显高于 P_sAWS;IEP、SDS-PAGA 及 EITB 显示前者活性部分主要在67KD_a 以上,后者则主要在 43KD_a 以下。用于ELISA检测40份该虫病人和感染者血清抗体均阳性,但OD均值及终点滴度 OD 对数均值,P_sAWU 显著高于P_sAWS(P<0.01);检测54份正常人、20份血吸虫病及20份肝吸虫病人血清,均未出现假阳性和交叉反应。此外,两种抗原用于CIEP、IT 检测,效果相同。提示P_sAWU 具有实用价值。     

抗卫氏并殖吸虫单克隆抗体的筛选及其在诊断中的应用

本文报道测定16种抗卫氏并殖吸虫(Pw)囊蚴和成虫单克隆抗体(McAb)的同型及其交叉反应。其中,抗Pw成虫McAb A_3D_3为IgM,k型。应用Dot-ELISA方法,以McAb A_3D_3检测痰卵阳性患者21例和痰卵阴性疑似患者63例血清循环抗原(CAg)),结果痰卵阳性患者CAg阳性率为100％(21/21),痰卵阴性疑似患者CAg阳性率为85.7％(54/63);同法检测45例日本血吸虫病、55例华支睾吸虫病、24例丝虫病、49例肠线虫感染、31例肺结核患者以及93例健康人对照血清均为阴性。结果表明,McAb A_3D_3的特异性及敏感性强,因而在Pw活动性感染和Pw病的早期诊断上均具有应用和推广前景。     

Dot-IGSS检测日本血吸虫病人血清抗体的研究

运用斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)检测了日本血吸虫病人血清抗体,并与斑点酶联免疫试验(Dot-ELISA)作了比较。检测了急性血吸虫病人血清38份,两法结果全部阳性;慢性血吸虫病人血清70份,Dot-IGSS阳性69份(98.6％),Dot-ELISA阳性65份(92.9％);治疗后血吸虫病人血清40份,Dot-IGSS阳性15份(37.5％),Dot-ELlSA阳性11份(27.5％)。用两法检测华枝睾吸虫病人血清20份,均有1份为阳性;检测正常人血清40份,均未出现阳性反应。将8份阳性血清作倍比稀释(1:20～1:61440)后分别用该两法检测,Dot-IGSS的敏感性明显高于Dot-ELISA(P<0.05)。对120例过去无血吸虫病史、接触疫水且皮试阳性者血清检测结果表明,Dot-IGSS的阳性检出率明显高于Dot-ELISA、COPT及循环抗原测定法(P<0.01)。     

用抗牛丝虫抗体Dot—ELISA检测人体丝虫循环抗原的研究

应用抗牛丝虫抗体及抗马来丝虫抗体进行Dot-ELISA检测49例班氏丝虫微丝蚴(mf)阳性血清,CAg阳性率分别为89.7％及91.8％;36例班氏丝虫mf(—)血清,CAg阳性率分别为47.2％及50.0％;31例马来丝虫mf(+)血清,CAg阳性率分别为87.0％及93.5％,非流行区肠线虫感染44例及正常人血清40例全部阴性,华支睾吸虫感染血清70例,两种抗体检测CAg的假阳性率分别为8.5％及7.1％,囊虫病血清76例,假阳性率均为3.9％。     

用虫体抗原进行斑点酶联免疫吸附试验检测弓形虫抗体的研究

应用完整弓形虫速殖子为抗原,以HRP-SPA代替酶标第二抗体进行Dot ELISA检测58例兔血清中弓形虫抗体,同时用速殖子可溶性抗原检测比较。两种抗原检测结果一致。阳性反应最高稀释度为1:25600。本法检测阿米巴阳性兔血清、感染球虫的兔血清,血吸虫阳性兔血清无交叉反应。阻抑试验显示高抗体滴度的阳性兔血清经抗原吸收后,反应明显抑制。实验表明本法特异性强、敏感性高、重复性好抗原制备简单不需特殊设备。为人畜弓形虫病临床诊断、流行病学现场调查、单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选提供了一种较理想的简易可行的方法。     

斑点免疫金银染色法诊断囊虫病的研究

用斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)和Dot-ELISA检测40份确诊为囊虫病患者的血清。两种方法检测的阳性率均为100％,用Dot-IGSS检测,40份血清的平均滴度为1:27470,显著高于用Dot-ELISA检测的平均滴度1:9069(P<0.01)。检测50份义务献血员血清,假阳性率分别为2％和4％。10份日本血吸虫病人血清分别有1份和2份出现假阳性。与肝吸虫病人血清无交叉反应,与包虫病人血清有明显的交叉反应。     

日本血吸虫与斯氏狸殖吸虫交叉抗原的筛选和鉴定

目的筛选和鉴定可与斯氏狸殖吸虫病患者血清产生交叉反应的日本血吸虫成虫抗原或其排泄分泌（ES）抗原组分,为筛选血吸虫病特异性诊断抗原奠定基础。方法首先采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离日本血吸虫成虫蛋白和ES蛋白,然后采用Western blot鉴定其中能够与斯氏狸殖吸虫病人血清反应的蛋白条带,最后取下对应的阳性条带进行质谱检测,对该蛋白进行分析和鉴定。结果成功采用SDS-PAGE对日本血吸虫成虫蛋白和ES蛋白进行了分离。Western blot结果显示,在ES蛋白中出现了一阳性条带,分子量约为53kDa;质谱检测结果显示该蛋白为未知蛋白。结论日本血吸虫成虫ES成分中的53kDa蛋白可能是日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫的交叉抗原。