丙戊酸钠在γδT细胞对肺癌A549细胞免疫中的作用

目的:研究丙戊酸钠(Sodium Valproate,VPA)作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂对肺癌A549细胞MICA蛋白的影响,并探讨丙戊酸钠在人外周血γδT细胞对肺癌A549细胞免疫中的作用.方法:用Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周血单核细胞(PBMC),用流式细胞仪分选纯化γδT细胞,用IL-2及唑来磷酸刺激γδT细胞扩增.用不同浓度的丙戊酸钠处理肺癌A549细胞,培养24小时后用PCR及Western blot检测MICA的变化.将分离纯化的γδT细胞与处于对数期生长的肺癌A549细胞混合培养,并加入VPA、MICA抗体处理,24小时后用LDH法检测γδT细胞的细胞毒性.结果:加入VPA后,PCR及Western blot结果显示肺癌A549细胞MICA蛋白在转录及表达上均增强;分离纯化的γδT细胞经体外扩增后,对肺癌A549细胞有较强的细胞毒性作用;加入VPA后γδT细胞对肺癌A549细胞的细胞毒性作用较未加入组增强(P＜0.05).结论:体外扩增的γδT细胞对肺癌A549细胞产生较强的细胞毒性杀伤作用;组蛋白脱乙酰酶抑制剂-丙戊酸钠可上调A549细胞MICA的表达,并增强γδT细胞对肺癌A549细胞的杀伤作用.     

应用丙戊酸钠调节组蛋白乙酰化对肿瘤细胞周期相关蛋白的调控作用

目的 探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)调节染色体组蛋白低乙酰化修饰水平对肿瘤细胞增殖周期相关蛋白Cyclin A、Cyclin DI、Cyclin E和P21waf/cipl的调控作用. 方法 应用0.75～4.00 mmol/ VPA干预肝癌细胞HepG2、胃癌细胞BGC-823、乳腺癌细胞MCF-7 48 h后,PI标记流式细胞术检测细胞周期;间接免疫荧光法分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21waf/cip1蛋白表达;RT-PCR检测分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21waf/cip1 mRNA表达. 结果 HepG2、BGC-823、MCF-7这3种细胞系培养48 h后,流式细胞术分析可见0.75～4.00 mmol/L、VPA实验组随药物浓度的增加而出现逐渐递增的细胞增殖周期G1期阻滞趋势.HepG2、BGC-823细胞Cyclin A蛋白及mRNA表达被明显下调;MCF-7细胞Cyclin A蛋白及mRNA表达在两个浓度组均未见明显变化;Cyclin D1蛋白及mRNA表达在3个细胞系均被明显下调;P21waf/cip1蛋白及mRNA表达在3个细胞均被明显上调;Cyclin E蛋白及mRNA表达则未见明显变化. 结论 应用VPA干预组蛋白乙酰化修饰可对HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Cyc-lin D1、P21waf/cip1表达起明显的调控作用;对Cychn A的调控作用则随肿瘤细胞来源及表型的不同而有所差异,而对Cyclin E则无明显的调控作用.在VPA诱导肿瘤细胞增殖周期G1期阻滞过程中,下调CyclinD1和上调P21waf/cip1蛋白及mRNA表达可能是其共同作用途径.     

丙戊酸钠诱导K562细胞周期阻滞和凋亡并上调p21WAF1基因mRNA的表达

目的：探讨丙戊酸钠（VPA）对慢性粒细胞白血病急变期细胞株(K562细胞)细胞周期和凋亡的影响及其可能机制。方法：利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞周期和细胞凋亡情况；利用RT-PCR方法检测p21WAF1基因的mRNA的表达。结果：VPA引起K562细胞凋亡增加［（11.47±0.25）% vs （4.77±0.40）%, (P<0.05)］和细胞周期阻滞在G0/G1期［(82.30±9.41)% vs (40.13±2.12)%, (P<0.05)］。同时处理后的细胞中p21WAF1基因mRNA的表达增加［(1.65±0.91) vs (0.25±0.04), P<0.05］。结论：VPA可能通过上调p21WAF1基因，导致K562细胞周期阻滞并引起细胞凋亡。     

三七总皂甙诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的 :观察三七总皂甙是否能诱导人白血病细胞株HL 60细胞凋亡及相关基因的关系。方法 :取 2 0 0～ 1 60 0ug/ml三七总皂甙处理HL 60细胞 ,光镜下观察细胞形态 ;MTT法测细胞生长抑制率 ;流式细胞仪检测细胞周期 ;免疫组化法检测 p5 3 ,bcl 2凋亡相关基因的表达 ,采用真彩色图像分析仪定量分析免疫组化的结果 ;其结果表明 2 0 0～ 1 60 0ug/ml三七总皂甙可抑制HL 60细胞生长 ,抑制率随着剂量的增加而增加。流式细胞仪检测凋亡峰随药物浓度增大而增加。80 0 ,1 60 0ug/毫升三七总皂甙可使 p5 3基因表达上调 ,bcl 2表达明显下降 ,这两种基…     

缺血性脑损伤与细胞凋亡

细胞凋亡是内源性ＤＮＡ内切酶激活而发生的细胞自然死亡过程。现已证明脑缺血性损伤时的延迟性神经细胞退化即细胞凋亡，并在动物缺血模型中测得ｂｃｌ－２，ｐ５３，ｆａｓ等细胞凋亡相关基因的表达，亚胺环己酮可抑制细胞凋亡，对脑卒中有明显的治疗作用。     

丙戊酸钠诱导K562细胞周期阻滞和凋亡并上调P^21WAF1基因mRNA的表达

目的：探讨丙戊酸钠（VPA）对慢性粒细胞白血病急变期细胞株（K562细胞）细胞周期和凋亡的影响及其可能机制。方法：利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞周期和细胞凋亡情况；利用RT—PCR方法检测P^21WAF1基因的mRNA的表达。结果：VPA引起K562细胞凋亡增加[（11．47&#177;0．25）％vs（4．77&#177;0．40）％，（P〈0．05）]和细胞周期阻滞在G0／G1期[（82．30&#177;9．41）％vs（40．13&#177;2．12）％，（P〈0．05）]。同时处理后的细胞中P^21WAF1基因mRNA的表达增加[（1．65&#177;0．91）vs（0．25&#177;0．04），P〈0．05]。结论：VPA可能通过上调P^21WAF1基因，导致K562细胞周期阻滞并引起细胞凋亡。     

全国端粒酶,p53和细胞凋亡的研究及应用研讨会会议纪要

由中华医学会病理学分会和中华病理学杂志编辑委员会主办的全国端粒酶、ｐ5 3和细胞凋亡的研究及应用研讨会 ,于 1999年 4月 2 0日至 2 5日在福建省福州市召开。来自全国各地的 146名代表参加了本次会议。会议共收到论文130篇 ,其中大会交流 2 6篇。这些论文主要涉及端粒酶、ｐ5 3和细胞凋亡的检测方法、判断标准及其在肿瘤发生、发展中的分子机制以及应用意义。这些论文基本反映了我国目前在这些领域研究的新水平、新成果。会议进行得紧凑而又活跃 ,代表们互相磋商、讨论热烈 ,对当前存在的一些问题进行了有益而深入的探讨与交流。一、有关…     

野生型p53基因诱导肝癌细胞凋亡及p21（WAF1／CIP …

目的：研究野生型ｐ５３基因对人肝癌细胞系细胞凋亡的作用。方法：通过脂质体转染方法将野生型ｐ５３基因（ｗｔ－ｐ５３）导入ｐ５３缺陷的ＨＣＣ－９２０４细胞系中，并获稳定表达。结果：转染ｗｔ－ｐ５３后细胞生长缓慢，Ｇ１期细胞数量由转基因前的４８．５％增加到７８．０％，并有较多细胞逐渐死亡。电镜观察和ＤＮＡ分析证实细胞死亡方式主要是细胞凋亡。免疫组化结果显示细胞转染ｗｔ－ｐ５３后，ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１     

PIG7基因与Litaf/Simple蛋白

PIG7基因是与p53诱导凋亡密切相关的基因,与代谢、炎症、肿瘤等关系紧密。该基因可能存在2种不同的转录本——Litaf与Simple,Litaf在LPS诱导TNF-α表达过程中起转录激活作用,Simple可能参与溶酶体介导的细胞内蛋白分选和降解过程。     

丙戊酸钠对视网膜色素变性小鼠光感受器细胞的保护作用

观察在视网膜变性小鼠（retinal degeneration mouse,rd小鼠）视网膜色素变性过程中,丙戊酸钠（valproate sodium,VPA）是否对光感受细胞具有保护作用。取48只新生rd小鼠,随机分为VPA组和正常对照组,每组24只。（1）VPA组,出生后每日以VPA100mg/kg的剂量进行腹腔注射;（2）对照组,出生后每日腹腔注射与VPA相同体积的生理盐水。于出生后7天、14天、21天、28天分别将VPA组和对照组的6只小鼠处死,取眼球做冰冻切片,行HE染色,对两组视网膜光感受器细胞数进行计数,并测量外核层厚度;用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal deoxy-nucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL法）检测凋亡细胞数,并对凋亡细胞数目进行统计分析。结果显示：（1）出生后7天VPA组光感受器细胞数和外核层厚度与对照组相比并无统计学差异,出生后14天、21天、28天,VPA组光感受器细胞和外核层厚度多于对照组,两者具有统计学差异（P〈0.05）;（2）两组光感受器细胞均于出生后7天开始出现凋亡,在出生后7天、14天VPA组外核层凋亡数少于对照组,两者具有统计学差异。提示VPA具有对抗视网膜色素变性小鼠光感受器细胞凋亡的作用,能延缓光感受器细胞的进行性退变。     

The role of p38 MAPK in valproic acid induced microglia apoptosis

Valproic acid (VPA), a widely prescribed drug for seizures and bipolar disorder, induces apoptosis in microglia, but the underlying mechanism by which microglia apoptosis in response to VPA is not yet known. In this study, we found that the mitochondrial pathway played an important role in VPA-induced apoptosis in both BV-2 microglia and mouse primary microglial cells. In addition, VPA increased the level of phospho-p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK), but had no effects on phospho-ERK and phospho-JNK MAPKs. Moreover, p38 inhibitor SB203580 strongly inhibited VPA-induced apoptosis and caspase-3 activation. Taken together, our results clearly demonstrated that VPA could induce apoptosis of microglia via p38 MAPK and mitochondrial apoptosis pathway.     

佛波酯对人早幼粒白血病细胞系细胞分化和凋亡的诱导作用

目的: 探讨佛波酯(TPA)对人早幼粒白血病细胞系(HL-60)分化和凋亡的影响。方法: 利用TPA体外培养HL-60细胞, 依据形态学和细胞化学的变化, DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等技术进行分析。结果: 7.2×10^-6 mol/L的TPA可使HL-60细胞出现向单核/巨噬细胞分化的形态特征, 随培养时间延长, 可见HL-60细胞核固缩、染色体断裂、凋亡小体形成等细胞凋亡的形态学改变。TPA处理24 h可使酸性非特异酯酶(α-NAE)的活性和四氮唑蓝(NBT)还原能力显著增强, DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的“梯子”状带纹。TPA处理0、24、48 h凋亡细胞百分数分别为(4.31±1.23)%、(15.10±1.31)%和(23.20±3.36)%, 在整个实验过程中细胞周期时相、Bcl-2蛋白含量无明显变化。结论: TPA可诱导HL-60细胞向单核/巨噬样细胞分化与凋亡, 且此凋亡过程可能与细胞周期时相、Bcl-2蛋白无关。     

Induction of superficial cortical layer neurons from mouse embryonic stem cells by valproic acid

Within the developing mammalian cortex, neural progenitors first generate deep-layer neurons and subsequently more superficial-layer neurons, in an inside-out manner. It has been reported recently that mouse embryonic stem cells (mESCs) can, to some extent, recapitulate cortical development in vitro, with the sequential appearance of neurogenesis markers resembling that in the developing cortex. However, mESCs can only recapitulate early corticogenesis; superficial-layer neurons, which are normally produced in later developmental periods in vivo, are under-represented. This failure of mESCs to reproduce later corticogenesis in vitro implies the existence of crucial factor(s) that are absent or uninduced in existing culture systems. Here we show that mESCs can give rise to superficial-layer neurons efficiently when treated with valproic acid (VPA), a histone deacetylase inhibitor. VPA treatment increased the production of Cux1-positive superficial-layer neurons, and decreased that of Ctip2-positive deep-layer neurons. These results shed new light on the mechanisms of later corticogenesis.     

Smad7和组蛋白去乙酰化酶1在小鼠马兜铃酸肾病中的表达

目的 探讨Smad7、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在小鼠马兜铃酸肾病(AAN)中的表达及两者在马兜铃酸肾病发生、发展中的作用.方法 将32只体重(20±2)g 的SPF(无菌)雄性昆明小鼠随机分为4组,其中3组为实验组,灌胃给予不同剂量的马兜铃酸(AA)Ⅰ,分别为4 mg/(kg·d)、8 mg/(kg·d)、16mg/(kg·d).另设对照组,PBS灌胃.应用免疫组织化学、免疫印迹法及RT-PCR技术,检测AAN小鼠和正常对照组中Smad7和HDAC1的表达情况.结果 HDAC1阳性着色主要分布于细胞核上,且在AAN中的表达强度明显高于正常对照组.免疫印迹法检测和RT-PCR提示,Smad7在AAN中的表达低于对照组,而HDAC1的表达显著高于对照组.结论 在AAN中Smad7低表达以及HDAC1高表达,提示Smad7和HDAC1可能在AAN的发生、发展中起重要作用.     

白血病Ph染色体与p53基因的关系及其临床应用

目的：建立Ph染色体和p53基因突变的检测方法,并在白血病中临床应用,方法：研究通过对慢性粒细胞白血病（CML）患者Ph染色体及p53基因突变的检测,在细胞遗传学水平和基因分子水平动态检测CML的进展及其临床治疗效果。结果：我们共分析各医院筠达有怀疑的慢粒标本35例,其中Ph染色体阴性者14例,占总例数的40%;Ph染色体阳性者21例,占总倒数的60%,均为典型的Ph易位即t(9;22)(q34;q11)。用PCR-SSCP法检测了p53外显子的突变,结果发现其中有5例Ph阴性病人,未检出p53基因突变情况。在10例Ph阳性病人中,有8例呈现p53阳性突变,Ph阳性病人中有80%呈现53基因突变。结论：Ph染色体与p53基因有一定的相关性,Ph染色体的变异及p53基因突变可以作为疾病进展的有用指标,对监测CML进展及治疗、预后具有重要价值。     

Fine structure and cytochemistry of human leukemia HL-60 cells during etoposide-induced apoptosis

To examine the morphological changes of HL-60 cells undergoing apoptosis, we induced apoptosis by etoposide treatment, and compared the findings obtained with an electron microscopic cytochemical method with those obtained with in situ end-labeling (ISEL) of DNA and a DNA fragmentation assay. Apoptotic cells were detected by ISEL of DNA 1h before the ladder formation in the DNA fragmetation assay, and an accumulation of DNA was observed simultaneously around the nucleoli and nuclear membrane by DNA-staining electron microscopy. These findings revealed that the apoptosis-related changes occurred in the DNA before the appearance of ladder formation. DNA staining with osmium ammine B revealed, at higher magnification, a rough fiber formation of DNA before apoptosis and an accumulation of small particles with the course of apoptosis. The number of primary granules stained for peroxidase in the cytoplasm decreased as apoptosis progressed. An examination by the periodic acid-thiocarbohydrazide-silver proteinate (PA-TCH-SP) method revealed in number after the induction of apoptosis. Thus, apoptosis-related changes were observed not only in the nucleus but also in the cytoplasm.