淋巴细胞对人原代甲状腺滤泡上皮细胞凋亡的影响

目的研究淋巴细胞对人原代甲状腺滤泡上皮细胞凋亡的影响及其临床意义。方法以不同浓度的淋巴细胞刺激单层培养的原代甲状腺滤泡上皮细胞,采用MTT、流式细胞术及荧光定量PCR法检测刺激前后甲状腺细胞的增殖抑制率及凋亡率。结果淋巴细胞可以剂量依赖性地抑制甲状腺细胞增殖,增加甲状腺细胞凋亡相关mRNA的表达,促进甲状腺细胞凋亡。结论淋巴细胞可抑制甲状腺细胞增殖,促进甲状腺细胞凋亡的发生。     

地塞米松对小鼠甲状腺滤泡细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制

目的:探讨地塞米松对小鼠甲状腺滤泡细胞的增殖及凋亡的影响。方法:取BALB/ c 小鼠甲状腺组织,以胰酶+域胶原酶联合消化组织获得甲状腺滤泡细胞,并以甲状腺球蛋白表达与否判断是否为目的细胞。随后采用不同浓度地塞米松刺激目的细胞,并采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖抑制率、凋亡率并对相关凋亡基因表达情况进行分析。结果:胰酶联合域型胶原酶处理甲状腺组织可获得稳定传代的甲状腺滤泡上皮细胞,且细胞稳定表达甲状腺球蛋白。同时,不同浓度地塞米松对细胞增殖抑制差异具有统计学意义(F=8.544,P<0.05),且抑制情况与药物作用时间具有交互作用(F=4.532,P<0.05);此外,不同的地塞米松浓度10-6 、10-5 、10-4 mol/ L 下,细胞凋亡率分别为13.39% ±0.79%、17.43%±1.38%、26.42%±1.74%,均与0 mol/ L 地塞米松细胞凋亡率4.51%±0.06%差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),而该差异趋势在凋亡基因表达中仍表现出剂量依赖性。结论:地塞米松可有效抑制小鼠甲状腺滤泡细胞增殖,并通过多种凋亡途径促进细胞凋亡。     

米诺环素调控P2X7受体抑制BV-2细胞活化的研究*

 目的：探索P2X7受体在米诺环素(Mino)抑制脂多糖（LPS）刺激的BV-2细胞活化中的作用。方法：将体外培养的BV-2细胞分为5组：空白对照组、LPS处理组、LPS+ 0.1 μmol/L Mino组、LPS+ 1 μmol/L Mino组和LPS+ 10 μmol/L Mino组。分组处理8 h后行real-time PCR检测P2X7受体mRNA表达;处理24 h后观察各组细胞形态学变化,Western blotting检测P2X7受体蛋白表达,取细胞培养液上清行ELISA检测TNF-α和IL-1β的分泌情况。结果：经LPS处理后,BV-2细胞P2X7受体mRNA及蛋白的表达均升高,细胞培养液上清的TNF-α和IL-1β表达升高,同时伴有形态学的改变,而0.1～10 μmol/L Mino能抑制这一趋势,差异有统计学意义（P<0.01）。 结论： Mino抑制BV-2细胞活化的机制可能与抑制P2X7受体的活性相关。     

内源性H2S抑制angiotensin II引起的神经元活性氧水平的升高*

 目的：探讨内源性硫化氢（H2S）对血管紧张素II（Ang II）引起的延髓神经元活性氧（ROS）水平升高的作用及其可能机制。方法：首先培养原代延髓神经元;免疫荧光双标法鉴定神经元及内源性H2S生成酶胱硫醚β-合成酶（CBS）在神经元的表达;同时或单独给予Ang II （1 μmol/L）和丁酸钠（NaBu,一种CBS激动剂;100 μmol/L、250 μmol/L和500 μmol/L）,二氢乙啶荧光探针法测定ROS水平;采用总超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒观察总SOD的活性;real-time PCR观察CBS mRNA的表达。结果：（1）原代培养的90% 以上的细胞为神经元,Ang II（1 μmol/L）升高延髓神经元ROS水平;（2）Ang II抑制神经元总SOD的活性;（3）荧光双标显示CBS在延髓神经元有表达,Ang II可降低CBS mRNA的表达;（4）NaBu（250 μmol/L和500 μmol/L）显著抑制Ang II引起的ROS水平的升高,且呈剂量依赖性效应。而NaBu单独对延髓神经元ROS水平作用不明显。结论：Ang II引起的延髓神经元ROS水平升高至少部分是通过降低总SOD的活性和CBS mRNA的表达而实现的;而内源性H2S可能通过相反的作用抑制这一过程。     

奥沙利铂调控PI3K/Akt信号通路抑制脑胶质瘤细胞株U87生长的作用研究

目的：研究奥沙利铂（Oxaliplatin,Ox）调控PI3K/Akt信号通路抑制脑胶质瘤细胞株U87生长的作用。方法：培养U87脑胶质瘤细胞,分别利用0、20、40、80 μg/ml的奥沙利铂处理U87细胞24、36、48、72 h,利用MTT检测各处理组细胞增殖情况;利用流式细胞仪检测40 μg/ml的奥沙利铂处理48 h对U87细胞周期及细胞凋亡的影响;Western blot检测40 μg/ml 的奥沙利铂处理48 h对U87细胞凋亡相关蛋白及PI3K/Akt信号通路蛋白表达的影响。结果：奥沙利铂处理抑制U87细胞增殖,与0 μmol/L处理相比,差异显著（P<0.01）,40 μg/ml的奥沙利铂处理48 h差异最显著。40 μg/ml的奥沙利铂处理48 h后,U87细胞周期被阻滞在S期,U87细胞凋亡显著增加（P<0.01）,抑凋亡因子Bcl-2蛋白表达明显下降,促凋亡因子Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达明显升高（P<0.01）,PI3K及p-Akt的表达量明显降低（P<0.01）,Akt表达量无明显差异（P>0.05）。结论：奥沙利铂可能通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制U87细胞增殖,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡。     

高浓度花生四烯酸诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡的研究

目的：探讨花生四烯酸是否能诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡及其可能机制。方法：噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率,比色法测定乳酸脱氢酶（LDH）释放率,硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核形态变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解。结果：L929细胞在40-160 μmol/L花生四烯酸作用24 h后,细胞存活率明显下降,LDH释放率和细胞MDA含量显著增加（P<0.01）。经160 μmol/L花生四烯酸处理后的L929细胞呈现典型的凋亡核固缩表现。琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯带。结论：高浓度花生四烯酸（80-160 μmol/L）能诱导小鼠成纤维细胞L929凋亡,可能与其促脂质过氧化作用有关。     

二苯乙烯苷对同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞凋亡及bcl-2、bax、caspase-3表达的影响

 目的：研究何首乌二苯乙烯苷（TSG）对同型半胱氨酸（Hcy）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡及bcl-2、bax和caspase-3 mRNA表达的影响。方法：建立Hcy （3 mmol/L）所致培养HUVECs核损伤模型,TSG（1和10 μmol/L）提前2 h预孵育,然后再以Hcy处理,作为TSG保护组。用Hoechst 33342核染色法观察HUVECs细胞核损伤状态,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,用实时荧光定量RT-PCR法检bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的表达。结果：经3 mmol/L Hcy处理后,与正常培养的细胞相比,HUVECs核损伤加重,凋亡细胞比例升高,bcl-2表达降低（P＜0.01）,bax和caspase-3表达增加（P＜0.01）。TSG 1 μmol/L和10 μmol/L预孵育后再经3 mmol/L Hcy处理,与单经3 mmol/L Hcy损伤模型组相比,HUVECs细胞核损伤降低,凋亡率下降,bcl-2的表达增加（P＜0.05）,bax和caspase-3表达降低（P＜0.05）。结论：TSG具有降低Hcy所致HUVECs的细胞损伤和抑制凋亡的作用,其机制可能与影响bcl-2、bax和caspase-3的表达有关。     

辛伐他汀对小鼠胰腺β细胞功能的影响及机制研究

 目的：观察辛伐他汀对小鼠胰腺β细胞株MIN6胰岛素分泌功能的影响并探讨其可能机制。方法：将MIN6细胞随机分为正常对照组和低、中、高浓度辛伐他汀组,分别用含0、2、5、10 μmol/L辛伐他汀和15%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养48 h。采用放射免疫分析法检测辛伐他汀对MIN6细胞胰岛素分泌功能的影响;生物化学发光法测定细胞内ATP含量;用实时荧光定量PCR检测内向整流钾离子通道62（Kir62）、电压依赖性钙离子通道12（CaV12）及葡萄糖转运体2（GLUT2）mRNA表达水平;用Western印迹检测Kir62、CaV12及GLUT2蛋白表达水平。结果：5和10 μmol/L的辛伐他汀能够明显减少MIN6细胞胰岛素的合成及分泌（P<005）;辛伐他汀处理组MIN6细胞内ATP水平较正常对照组明显降低（P<005）;辛伐他汀各处理组MIN6细胞Kir62 mRNA表达水平较正常对照组明显上调（均P<001）,5和10 μmol/L辛伐他汀组CaV12 mRNA水平明显下调（均P<001）,GLUT2 mRNA表达水平明显下调（P<005）;5和10 μmol/L辛伐他汀处理组Kir62蛋白表达较正常对照组明显升高（均P<001）,10 μmol/L辛伐他汀处理组CaV12及GLUT2蛋白表达水平明显下降（均P<001）,5 μmol/L辛伐他汀组CaV12蛋白表达水平较正常对照组亦有明显下降（P<001）。结论：辛伐他汀对小鼠胰腺β细胞株MIN6胰岛素的合成和分泌具有一定的抑制作用。辛伐他汀可能通过抑制MIN6细胞内ATP的生成以及上调MIN6细胞Kir62、下调CaV12和GLUT2的表达从而影响其胰岛素的合成和分泌。     

硫化氢抑制大鼠急性心肌缺血引起的细胞炎症反应

 目的：探讨硫化氢（H2S）能否抑制大鼠急性心肌缺血引起的细胞炎症反应。方法：结扎大鼠左冠状动脉前降支4 h,引起心肌缺血损伤。健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham）、缺血组（ischemia）以及硫氢化钠(NaHS) 5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L组。NaHS组分别于心肌急性缺血2 h时更换为5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L NaHS灌流液。缺血后4 h记录心功能变化。实时荧光定量PCR检测离体心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和ICAM-1 mRNA表达;Western blotting检测离体心肌组织中NF-κB的表达。结果：Ischemia组离体心肌功能下降（与sham组相比P<0.01）,NaHS组离体心肌功能比ischemia组明显改善（P<0.05或P<0.01）。Ischemia组离体心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和ICAM-1 mRNA表达显著增强,IL-10 mRNA表达显著降低（与sham组相比P<0.01）;NaHS组离体心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和ICAM-1 mRNA表达比ischemia组明显降低,NaHS 10 μmol/L,20 μmol/L组离体心肌组织中IL-10 mRNA表达比ischemia组明显升高（P<0.05或P<0.01）。与sham组相比,ischemia组NF-κB表达显著增加（P<0.01）,而NaHS 10 μmol/L和20 μmol/L组NF-κB的表达明显低于ischemia组（P<0.05或P<0.01）。结论：H2S可通过阻断NF-κB相关信号通路的转导,抑制炎症反应,明显改善大鼠急性心肌缺血损伤。     

白藜芦醇对视网膜色素上皮细胞增殖的影响

 目的:探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）对视网膜色素上皮细胞增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法:用0、50、100、150、200和300 μmol/L Res作用于ARPE-19细胞24、48 和72 h后,CCK-8法检测Res对ARPE-19细胞增殖的影响,0、100、150和200 μmol/L Res作用ARPE-19细胞48 h,PI单染流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光化学法检测PCNA蛋白表达,实时荧光定量PCR（real-time PCR）法检测PCNA、P21和P27的mRNA表达水平。结果:CCK-8 结果显示,Res抑制ARPE-19细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;流式细胞术显示,Res使S期细胞百分比显著上升且各组凋亡率没有区别;免疫荧光显示, Res抑制PCNA蛋白表达,荧光减弱;real-time PCR显示, Res浓度依赖性地抑制PCNA的mRNA表达,而诱导表达P21和P27的mRNA。结论: Res能抑制ARPE-19细胞的增殖,使细胞阻滞在S期,其机制可能与白藜芦醇诱导P21与P27的mRNA表达、抑制PCNA的mRNA表达有关。     

辛伐他汀对高糖高脂诱导人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景：研究表明,他汀类药物能够促进骨髓间充质干细胞的增殖与黏附能力,抑制高糖高脂培养下骨髓间充质干细胞的凋亡。 目的：观察辛伐他汀对高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞凋亡的影响。 方法：将0.001,0.01,0.1,1.0 μmol/L辛伐他汀分别与高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞培养48 h,以正常培养骨髓间充质干细胞及高糖高脂诱导条件下培养的骨髓间充质干细胞为对照。倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法比较不同浓度辛伐他汀对高糖高脂环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡,加入PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002后辛伐他汀对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。 结果与结论：与高糖高脂诱导组比较,辛伐他汀0.01,0.1,1.0 µmol/L组骨髓间充质干细胞存活率均升高(P < 0.01),其中辛伐他汀浓度在0.1 μmol/L时骨髓间充质干细胞存活率升高最显著(P < 0.01);同时流式细胞仪检测结果显示,辛伐他汀0.01,0.1,1.0 µmol/L组细胞凋亡率下降(P< 0.01),其中0.1 µmol/L组凋亡率下降最显著(P < 0.01)。0.1 µmol/L辛伐他汀对骨髓间充质干细胞的影响可被LY294002阻断。说明辛伐他汀能抑制高糖高脂诱导条件下骨髓间充质干细胞的凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号途径有关。     

芍药苷促椎间盘纤维环细胞增殖的作用

背景：芍药在颈椎病治疗中使用频率超过30%,其主要单体之一芍药苷具有抗炎、抗凋亡等作用,芍药苷对椎间盘纤维环细胞是否有保护作用,国内外未见报道。 目的：探讨芍药苷对椎间盘纤维环细胞的增殖和保护作用。 方法：采用酶消化法体外培养椎间盘纤维环细胞。取第3代纤维环细胞,培养过程中加入20 μg/L Fas配体诱导建立纤维环细胞凋亡模型,通过MTT法测定芍药苷干预纤维环细胞的最适宜浓度,Annexin V/FITC-PI法观察芍药苷对椎间盘纤维环细胞的保护作用。 结果与结论：芍药苷浓度20.8和2.08 μmol/L对椎间盘纤维环细胞具有明显的促增殖作用。20 μg/L Fas配体能诱导细胞凋亡,20.8 μmol/L芍药苷对Fas配体诱导椎间盘纤维环细胞有保护作用。     

辛二酰苯胺异羟肟酸通过内质网应激凋亡通路诱导HepG2细胞凋亡

目的:探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对人肝癌细胞株HepG2增殖与凋亡的影响及其可能的机制。方法:分别给予不同浓度的SAHA处理HepG2细胞48 h,采用实时无标记细胞分析法检测细胞增殖情况;Western blot法检测组蛋白H3K9和H3K27的乙酰化水平,以及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和p-PERK蛋白水平的变化;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与对照组相比,0.1和1μmol/L SAHA处理48 h对HepG2细胞增殖无明显抑制作用,6和12μmol/L SAHA组HepG2细胞增殖率明显下降(P0.05);Western blot检测发现,与对照组比较,不同浓度的SAHA处理细胞48 h后,ac H3K9和ac H3K27表达水平明显升高,GRP78蛋白表达显著上调,PERK蛋白表达显著下调,而p-PERK的蛋白水平显著增加(P0.05);流式细胞术检测发现,随着SAHA浓度的增高,HepG2细胞的凋亡逐渐增加。结论:SAHA可上调HepG2细胞中组蛋白H3K9和H3K27的乙酰化修饰水平,并通过激活内质网应激相关凋亡通路来诱导HepG2细胞发生凋亡。     

抑制白血病K562细胞FoxM1表达可增强细胞对高三尖杉酯碱的敏感性

目的:探讨抑制白血病K562细胞叉头框蛋白M1(Fox M1)是否增强细胞对高三尖杉酯碱(HHT)的敏感性。方法:HHT以不同浓度(0、0.015、0.030和0.045μmol/L)和最低起效浓度不同时间(0.015μmol/L,0、24、48和72 h)作用于K562细胞,real-time PCR和Western blot检测Fox M1 mRNA和蛋白表达;以0.015μmol/L HHT作用K562细胞后转染Fox M1 siRNA,观察沉默K562细胞Fox M1后细胞对HHT的敏感性、细胞增殖和凋亡效应以及Fox M1相关靶分子c-Myc和Sp1表达状况。结果:随着HHT浓度增加和时间延长Fox M1表达逐渐降低,说明HHT抑制K562细胞Fox M1表达;HHT处理K562细胞后转染Fox M1 siRNA,细胞生长和克隆形成显著下降,细胞凋亡增加,因此抑制Fox M1可增加K562细胞对HHT的敏感性;Fox M1 siRNA组c-Myc和Sp1表达显著降低,表明Fox M1可正性调控c-Myc和Sp1表达。结论:HHT可以抑制白血病K562细胞Fox M1表达,干扰Fox M1可增强细胞对HHT的敏感性。     

尾加压素Ⅱ通过ERK1/2途径诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和上调Egr-1表达

 目的:研究不同浓度尾加压素Ⅱ（UⅡ）及其受体拮抗剂urantide对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的影响,探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）途径及早期生长反应因子1（Egr-1）在UⅡ诱导大鼠PASMCs增殖中的作用。 方法: 以组织贴块法原代培养大鼠PASMCs：(1) 采用BrdU掺入实验测定不同浓度（1 μmol/L、0.1 μmol/L和0.01 μmol/L）UⅡ及其受体拮抗剂对大鼠PASMCs 增殖的影响;(2) 采用real-time PCR检测UⅡ及其受体拮抗剂对细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、应激活化蛋白激酶（SAPK）、p38 MAPK及Egr-1 mRNA 表达的影响;(3) 采用Western blotting检测UⅡ、urantide及ERK1/2抑制剂PD98059对PASMCs磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）、p-SAPK、p-p38 MAPK和Egr-1蛋白表达的影响。 结果: （1）UⅡ在一定浓度范围（1 μmol/L、0.1 μmol/L和0.01　μmol /L）呈浓度依赖性地促进肺动脉平滑肌细胞增殖(P＜0.01或P＜0.05),这种增殖作用可被urantide拮抗(P＜0.05);（2）UⅡ上调ERK1/2、SAPK及Egr-1 mRNA表达(P＜0.01或 P＜0.05),PD98059和(或)urantide可拮抗UⅡ诱导的ERK1/2、SAPK和Egr-1 mRNA的表达(P＜0.01或 P＜0.05),但对p-p38 MAPK无影响;（3）UⅡ可增加PASMCs p-ERK1/2、p-SAPK及Egr-1蛋白表达(P＜0.01或 P＜0.05),urantide及PD98059可拮抗UⅡ诱导的p-ERK1/2、p-SAPK和Egr-1蛋白表达(P＜0.01, P＜0.05)。 结论: UⅡ可能通过ERK1/2途径诱导PASMCs增殖和上调Egr-1表达,Egr-1可能通过激活ERK1/2途径参与了PASMCs的增殖。     

姜黄素对猪骨髓间充质干细胞增殖和成脂分化的影响

目的 探讨姜黄素(curcumin)对猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成脂分化的影响及机制。方法 用含不同浓度姜黄素的细胞培养液和诱导分化液,培养和诱导分化猪BMSCs,用MTT比色法检测对BMSCs增殖的影响,用形态学和油红O染色提取法检测对成脂分化的影响,用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测对成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ2）和脂蛋白脂肪酶（LPL） mRNA表达的影响。 结果 当姜黄素用于猪BMSCs的培养,1μmol/L浓度在培养第3天、第5天和10μmol/L浓度在培养第5天开始能够显著促进细胞增殖（P＜0.05）,但高于15μmol/L则具有显著的抑制作用（P＜0.05）;当姜黄素用于猪BMSCs的成脂诱导分化,所用不同浓度的姜黄素都能显著抑制成脂分化（P＜0.05）,用0.5μmol/L获得28.3%的抑制率,而用20μmol/L获得71.24%的高抑制率;当用20μmol/L姜黄素处理和分别诱导分化5、10和15d,PPARγ2 mRNA表达的抑制率分别达到19.11%、49.52%和76.76%,LPL mRNA表达的抑制率分别达到37.58%、49.32%和74.70%。 结论 适当浓度姜黄素具有促进猪BMSCs增殖和抑制猪BMSCs向脂肪细胞分化的作用,对脂肪细胞的分化发挥了重要调控作用。     

迷迭香酸通过调控PI3K 通路诱导急性T 细胞白血病Jurkat细胞自噬和细胞凋亡

目的:探究迷迭香酸(RA)对急性T 细胞白血病Jurkat 细胞存活的作用及机制。方法:将细胞随机分为Jurkat 组、RA (5 μmol/ L) 组、RA (10 μmol/ L) 组和RA (20 μmol/ L) 组,分别用0、5、10 和20 μmol/ L 的RA 处理细胞,CCK8 检测培养不同时间的细胞增殖倍数,克隆形成实验检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,免疫印迹检测Beclin1、P62、LC3、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt 和mTOR 的表达,免疫荧光检测LC3 的表达。结果:RA 处理细胞4 d 后,RA (5、10、20 μmol/ L) 组细胞增殖倍数与Jurkat 组比较明显降低,存活细胞数明显减少,细胞凋亡率明显升高;同时与Jurkat 组比较,RA (5、10、20 μmol/ L) 组细胞Beclin1 表达水平和LC3Ⅰ/ LCⅡ的比值明显降低,P62 表达水平明显升高,LC3 阳性表达与Jurkat 组比较也明显减少;此外,RA (5、10、20 μmol/ L) 还能显著降低p-PI3K/ PI3K、p-Akt/ Akt 的比值和mTOR 的表达水平。结论:RA 可诱导急性T 淋巴白血病Jurkat 细胞自噬和细胞凋亡,作用机制可能与抑制PI3K/ Akt 通路激活有关。     

阿托伐他汀对TNF-α和IL-1β诱导的大鼠主动脉内皮细胞PAPP-A表达的影响

目的: 研究阿托伐他汀对炎症因子肿瘤坏死因子 α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)诱导大鼠主动脉内皮细胞表达妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)的影响。方法: 原代培养大鼠主动脉内皮细胞,选择生长良好的第3-4代细胞用于实验。实验分组:(1)空白对照组 :不加干预措施原培养液继续培养;(2)阿托伐他汀浓度组:加入浓度分别为 0.1、1、10 μmol/L的阿托伐他汀作用24 h;(3)阿托伐他汀时间组:加入浓度为10 μmol/L的阿托伐他汀分别作用6、12、24 h;(4)阿托伐他汀干预组:加入TNF-α(60 μg/L)或者IL-1β(20 μg/L)作用1 h后,再加入不同浓度的阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)进行培养,分别于作用6、12、24 h终止实验。MTT法观察药物对细胞增殖的影响, RT-PCR技术测定细胞中PAPP-A mRNA的表达, ELISA方法检测上清液中PAPP-A蛋白水平。结果: (1) 外源性加入阿托伐他汀及TNF-α或者IL-1β后,分别作用3、6、12、24、48 h,同对照组相比,细胞增殖能力无明显变化(P<0.05),说明干预药物本身对细胞没有毒性作用。(2)单独加入阿托伐他汀,细胞PAPP-A表达水平与空白对照组比较没有明显差异(P<0.05)。(3)炎症因子作用一段时间后再加入阿托伐他汀,PAPP-A mRNA和蛋白表达水平随着阿托伐他汀浓度和作用时间的增加而逐渐降低,有一定的浓度-时间依赖关系,与 TNF-α组和IL-1β组比较明显下降(P<0.05)。结论: 阿托伐他汀本身对细胞表达PAPP-A没有影响,但在一定程度上抑制TNF-α和IL-1β诱导的内皮细胞PAPP-A的表达,并有浓度-时间依赖关系。     

吡格列酮促进大鼠骨髓内皮祖细胞的增殖

背景：内皮祖细胞具有增殖、迁移和分化为内皮细胞的特征,对冠状动脉硬化性心脏病及糖尿病心血管并发症的发生、发展可能起着重要作用。 目的：探讨选择性过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂吡格列酮对大鼠骨髓内皮祖细胞增殖的影响及相关机制。 方法：①采用密度梯度离心法和差速贴壁法培养大鼠骨髓内皮祖细胞,置于含0,1,10,50,100,200 μmol/L吡格列酮的培养基中培养,观察吡格列酮促进内皮祖细胞增殖的最佳浓度。②将培养7 d的内皮祖细胞随机分5组：对照组加含二甲基亚砜的培养液;吡格列酮组加入50 μmol/L吡格列酮;PPAR-γ拮抗剂组加入50 μmol/L吡格列酮及10 μmol/L过氧化物酶体增殖物激活受体γ拮抗剂GW9662;PI3K/Akt阻滞剂组加入50 μmol/L吡格列酮及50 μmol/L磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通道阻滞剂Wortmannin;ERK阻滞剂组加入50 μmol/L吡格列酮及20 μmol/L细胞外调节蛋白激酶通道阻滞剂PD98059,观察不同组内皮祖细胞的增殖情况。 结果与结论：倒置显微镜下见培养前4 d细胞增殖不明显,第5-10天迅速增殖,并可见细胞集落及线状结构形成,第10天可达80%融合。培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1的功能。10-200 μmol/L的吡格列酮均可明显促进内皮祖细胞的增殖(P < 0.01),以50 μmol/L吡格列酮的作用最明显。进一步阻断相关信号通路发现,Wortmannin和GW9662可明显拮抗吡格列酮的促细胞增殖作用,而PD98059对吡格列酮的作用无影响。说明吡格列酮促进大鼠骨髓内皮祖细胞增殖的作用是通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路介导的。     

人参皂苷Rb1对体外培养人脂肪干细胞增殖与成骨分化的影响

背景：脂肪干细胞成骨分化受多种因素的影响,中药成骨诱导活性因子在脂肪干细胞研究中有重要意义。 目的：观察人参皂苷Rb1在体外培养条件下对人脂肪干细胞增殖和成骨分化的影响。 方法：体外分离培养人脂肪干细胞,传至第3代后,按2×10³/孔接种至96孔板,分别加入0.5,1.0,2.0,4.0,6.0 μmol/L人参皂苷Rb1培养基200 μL进行培养;设立对照组,仅加入等量普通DMEM培养基。采用XTT比色法测定大鼠脂肪干细胞的生长增殖曲线。通过碱性磷酸酶试剂盒测定细胞碱性磷酸酶活性,放射免疫法检测骨钙素含量,茜素红染色观察钙化结节形成能力。 结果与结论：0.5 μmol/L人参皂苷Rb1可明显促进人脂肪干细胞增殖;随着人参皂苷Rb1浓度的增加,促细胞增殖活性降低,6.0 μmol/L人参皂苷Rb1表现为明显的抑制细胞增殖作用。人参皂苷Rb1呈剂量依赖性促进人脂肪干细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素表达。4.0,6.0 μmol/L人参皂苷Rb1诱导钙化结节形成能力优于0.5,1.0和2.0 μmol/L人参皂苷Rb1,对照组人脂肪干细胞未见钙化结节形成。提示人参皂苷Rb1在一定浓度范围内对体外培养条件下的人脂肪干细胞具有促生长增殖作用,但在高浓度时,人参皂苷Rb1对人脂肪干细胞的成骨分化具有促进作用,因此可作为一种良好的成骨诱导活性因子。