兔心肌缺血再灌注损伤的超微结构变化及凋亡检测

目的　探讨实验性心肌缺血再灌注损伤时心肌超微结构变化及心肌细胞凋亡的发生。方法　选家兔 6只 ,阻断左冠状动脉的左室支建立心肌缺血模型 ,达到预定的缺血时间后 ,使血管再通 ,建立心肌的缺血再灌注模型。采用透射电镜、原位末端探针标记 (TUNEL)对不同损伤区心肌细胞的损伤情况进行研究。结果　电镜观察显示缺血再灌注损伤中心区呈现明显的心肌细胞凋亡征象 ,在缺血再灌注损伤交界区可见心肌细胞凋亡的早期征象 ,TUNEL检测结果显示缺血再灌注损伤中心区出现较多的凋亡阳性细胞 ,而损伤交界区出现较少的凋亡阳性细胞。结论　心肌细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤的重要特征 ,这与心肌的缺血性损伤存在不同     

不同时段的心肌缺血后再灌注损伤与心肌细胞凋亡的实验研究

目的　探讨实验性不同时段的心肌缺血后再灌注损伤是否致心肌细胞凋亡、凋亡率的大小及不同的缺血时间与凋亡率的关系。方法　阻断左冠状动脉的左室支建立心肌缺血模型 ,达到预定的缺血时间后 ,使血管再通 ,建立心肌的缺血再灌注模型。采用透射电镜、原位末端探针标记、图像分析和统计处理对缺血灌注损伤区心肌细胞的损伤情况进行研究。结果　电镜观察和原位未端标记 (TUNEL)检测发现在经历了不同的缺血时间后 ,再灌注均可致心肌细胞凋亡 ,但不同的缺血时间后再灌注致心肌细胞的凋亡率不同 ,实验Ⅰ～Ⅲ组平均凋亡率分别为 3 2 7%、18 4 3%和 2 0 2 8%。缺血时间越长凋亡率越高。结论　心肌缺血再灌注损伤的发生与凋亡机制有关 ,且凋亡率的大小在一定的时间段内可能与心肌的缺血时间呈正相关     

银杏酮酯预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

探讨银杏酮酯预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法以36只雄性Wistar大鼠为研究对象,将实验动物随机分为3组:假手术组、心肌缺血再灌注模型组与银杏酮酯组。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。假手术组穿线后不结扎,模型组于缺血前30 min腹腔注射生理盐水,银杏酮酯组大鼠于缺血前30 min腹腔注射银杏酮酯(100mg/kg)。造模24h后处死大鼠,TUNEL法检测心肌细胞凋亡, Western blot方法检测心肌组织Bax和caspase-3蛋白表达,实时PCR方法检测心肌组织Bax mRNA和caspase-3 mRNA的表达。结果银杏酮酯预处理可明显降低心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡率,降低心肌缺血再灌注大鼠心肌组织Bax和caspase-3蛋白与mRNA表达水平。结论银杏酮酯预处理降低缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡率可能与抑制Bax和caspase-3表达相关。     

兔心肌缺血性损伤的超微结构变化及凋亡检测

目的　探讨实验性急性心肌梗塞时不同损伤区域心肌超微结构的变化及心肌细胞是否凋亡。方法　结扎左冠状动脉的左室支建立心肌缺血模型 ,采用透射电镜、原位末端探针标记 ,对不同损伤区心肌细胞的损伤情况进行研究。结果　电镜观察显示中心缺血区心肌组织呈现缺血坏死征象 ,而梗塞交界区呈现明显的心肌细胞凋亡征象。TUNEL检测结果显示中心缺血区未见心肌凋亡细胞发生 ,而梗塞交界区有心肌凋亡细胞检出。结论　急性心梗时 ,中心缺血区和梗塞交界区损伤存在不同的发生机制     

兔心肌缺血性损伤致心肌细胞凋亡的定位及定量研究

目的探讨实验性急性心肌梗塞时心肌细胞凋亡的部位及凋亡率。方法结扎左冠状动脉的左室支建立心肌缺血模型,采用原位末端探针标记、透射电镜、自动图像分析仪和统计处理,对不同损伤区心肌细胞的损伤情况进行研究。结果中心缺血区心肌组织呈现缺血坏死征象,未见心肌凋亡细胞;在梗塞交界区存在心肌细胞凋亡现象,平均凋亡率为25.51％。结论急性心梗时,中心缺血区心肌损伤以坏死为主,心肌细胞凋亡参与梗塞交界区心肌的损害。这为进一步研究心肌梗塞的治疗提供一个新的参考依据。     

大鼠实验性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡的动态变化及意义

探讨大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡的动态变化及其与心肌缺血再灌注损伤的相互关系。结果显示假手术组与心肌缺血１５ｈ未见心肌细胞凋亡,但缺血３５ｈ或缺血３０ｍｉｎ再灌注ｌｈ已见有细胞凋亡,细胞凋亡出现明显早于细胞坏死。细胞凋亡指数（ＡＩ）随缺血或再灌注时间延长呈渐增趋势,分别以缺血４８．５ｈ（４９８％士１７．２７％）和缺血３０ｍｉｎ再灌注４８ｈ（３８．１５％±１３．２６％）最高。与心肌缺血组比较,心肌缺血再灌注组相同处理时间的大鼠的ＡＩ较低（Ｐ＜０．０５）。凋亡细胞主要位于心肌纤维收缩带区域及心肌梗死区周围。电镜示再灌注;０肌组织中有典型细胞凋亡形态改变。研究提示心肌细胞凋亡是持续性心肌缺血中早期心肌细胞死亡的主要形式,再灌注过程虽减少凋亡细胞数量,但却促进了不可逆损伤的心肌细胞的凋亡过程。     

白藜芦醇通过抑制TNF-α的释放缓解大鼠缺血再灌注心脏损伤

目的在大鼠心肌缺血再灌注模型中,研究白藜芦醇通过抑制TNF-α的释放改善心肌缺血再灌注的梗死以及心肌细胞损伤的效应。方法对大鼠左前降支冠状动脉进行缺血再灌注(myocardial ischemia/reperfusion,MIR)构造心肌缺血再灌注模型,用Evans blue染料和TTC染色检测梗死区面积变化。用Western blot技术检测缺血心肌在第1天和第2天TNF-α的表达水平变化,缺血再灌注模型尾静脉注射白藜芦醇后用Western blot技术检测TNF-α的蛋白水平的变化。离体实验中,对白藜芦醇预处理的H9C2细胞用TNF-α处理,观察心肌细胞凋亡的水平变化。结果大鼠心肌缺血再灌注模型中,缺血区面积在第1、2天显著增大,TNF-α表达水平显著上升(P0.05);白藜芦醇处理后,缺血区的TNF-α蛋白水平显著下降(P0.05)。对H9C2细胞用白藜芦醇预处理再用TNF-α刺激,细胞凋亡水平显著下降(P0.05)。结论在大鼠心肌缺血再灌注模型中,白藜芦醇可能通过抑制TNF-α等细胞因子发挥对心肌细胞损伤的保护作用。     

Caspase抑制剂对大鼠心肌缺血／再灌注损伤Fas／FasL表达的影响

目的探讨大鼠心肌缺血／再灌注时caspase抑制剂对心肌细胞凋亡及Fas／FasL基因mRNA表达的影响及其机制。方法以穿线结扎或松扎左冠状动脉制备大鼠心肌缺血／再灌注模型。42只大鼠随机分为假手术组、Z-VAD-fmk治疗组和缺血／再灌注对照组,并分设缺血4-5min后再灌注3,6,12h3个时相点。以缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡的变化,逆转录聚合酶链反应法检测Fas／FasL基因mRNA的表达改变,并分析心肌组织病理学损伤程度。结果心肌缺血／再灌注后心肌细胞凋亡指数及Fas/FasL基因mRNA表达均增高,caspase抑制剂预处理下调Fas／FasL表达水平,减少心肌细胞凋亡。结论心肌细胞凋亡与Fas／FasL系统参与了心肌缺血／再灌注损伤过程,caspase抑制剂Z-VAD-fmk通过抑制凋亡和下调Fas／FasL表达,减低再灌注损伤。     

Caspase-3与心肌缺血/再灌注损伤

Caspase-3是一种与细胞凋亡密切相关的蛋白酶。心肌缺血/再灌注过程可通过诱导氧化应激状态和促进死亡受体及配体的表达激活Caspase-3，引起心肌细胞凋亡，加重心肌损伤。某些药物能抑制缺血/再灌注诱导的心肌细胞凋亡，减轻心肌损伤，其心肌保护作用也涉及Caspase-3活性的抑制。     

大鼠急性心肌缺血再灌注的心肌细胞凋亡研究

目的　为证实急性心肌缺血再灌注过程中存在着不同程度的心肌细胞凋亡现象 ,初步研究心肌细胞凋亡与Bcl 2 /Bax蛋白表达的关系。　方法　透射电镜观察心肌细胞的超微结构变化 ,抽提心肌组织DNA琼脂糖凝胶电泳 ,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞 ,免疫组织化学技术和图像分析技术检测心肌细胞内Bcl 2 /Bax蛋白表达。　结果　缺血及再灌注组电镜观察心肌细胞出现典型凋亡超微结构特征 ,TUNEL染色可见不同程度的心肌细胞凋亡阳性反应 ,DNA电泳显示在缺血再灌注 2h出现明显的DNA条纹图像 ,再灌注组较缺血组心肌细胞中Bcl 2表达明显降低 (P <0 0 5 ) ,而Bax表达显著增高 (P <0 0 1)。　结论　急性心肌缺血及再灌注能诱导不同程度的心肌细胞凋亡 ,Bcl 2 /Bax基因对心肌细胞凋亡的发生有着重要的调控作用     

牛磺酸对大鼠脑缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响

目的：研究牛磺酸对脑缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响。方法：建立大鼠全脑缺血再灌注模型，使用ＤＮＡ片段原位末端标记和流式细胞仪观察了Ｔａｕ治疗后细胞凋亡的变化。结论：Ｔａｕ对脑缺血再灌汪损伤中神经细胞的保护作用可能部分由于降低细胞凋亡的发生。     

Inhibition of apoptosis by the intrinsic but not the extrinsic apoptotic pathway in myocardial ischemia-reperfusion

SummaryThe detailed molecular mechanisms following activation of apoptosis in ischemia-reperfusion injury are unknown. This study using different transgenic mouse models provided first evidence that apoptosis in myocardial ischemia-reperfusion injury is rather linked to the mitochondrial pathway than to death receptor pathway.IntroductionThere is a wealth of evidence for activation of apoptosis in ischemia-reperfusion injury. However, the understanding of detailed molecular mechanism is lacking.MethodsThe extent of myocardial infarction after ligation of the left anterior descending artery in mice carrying different transgenes for inhibition of either the intrinsic or the extrinsic or a combination of both apoptotic cascades was evaluated. The extent of myocardial damage was assessed by echocardiographic determination of left ventricular (LV) ejection fraction, LV hemodynamics, troponin T, and histology. The rate of apoptosis was analyzed by terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) and caspase-3 staining.ResultsHighest perioperative rate of death was observed in the dominant-negative form of a truncated Fas-associated death domain (FADD-DN) group. Infarction size by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining was smaller in the Bcl-2, but not in the other groups as compared to wild-type mice. This was accompanied by lower troponin T values in Bcl-2 transgenic mice as compared to the all other groups. Troponin T correlated well with macroscopic extent of myocardial infarction by TTC staining. A lower decline of LV ejection fraction was seen in the Bcl-2 as compared to wild-type or FADD-DN mice. A smaller number of TUNEL- and caspase-3-positive myocyte nuclei were observed in the Bcl-2 and FADD-DN group as compared to wild-type mice.ConclusionsWe provide first evidence for protective effects on the myocardium in a transgenic mouse model of myocardial ischemia-reperfusion due to inhibition of the Bcl-2, but not the FADD pathway despite that reduced apoptotic cells were observed in both groups as compared to wild-type mice.     

生黄合剂对缺血再灌注模型大鼠心肌细胞凋亡及相关基因bax、bcl-2 mRNA的影响

BACKGROUND:Sheng-Huang mixture including Chinese medicine Shengmai Decoction and total flavonoids of stems and leaves of radix has been shown to resist inflammation, regulate immune function, and protect ischemic myocardial tissues. However, its effect on the apoptosis of cardiac muscle cells after ischemia/reperfusion injury remains unclear. OBJECTIVE:To investigate the effects of Sheng-Huang mixture on cardiocyte apoptosis and bax and bcl-2 mRNA expression in rats with ischemia-reperfusion injury.  METHODS:Thirty-six Sprague-Dawley rats were divided randomly into six groups: low-dose, moderate-dose and high-dose Sheng-Huang mixture, positive control, blank and model groups (n=6). After 7 days of administration, models of myocardial ischemia-reperfusion injury were established. TUNEL was used to detect myocardial apoptosis. RT-PCR was utilized to measure bax and bcl-2 mRNA expression in the ischemic and reperfusion region.  RESULTS AND CONCLUSION: (1) The bcl-2 mRNA expression was significantly higher in the Sheng-Huang mixture group than in the model group (P < 0.05), but bax mRNA expression was significantly lower (P < 0.05). Thus, bcl-2/bax ratio increased. In addition, apoptosis index was more significantly decreased in the Sheng-Huang mixture group (P < 0.05). (2) Results demonstrated that Sheng-Huang mixture can protect rat myocardium against ischemia/reperfusion injury, and effectively increase the bcl-2/bax ratio and inhibit the apoptosis of cardiomyocytes, and the underlying mechanism is mediated by up-regulating bcl-2 mRNA expression and down-regulating bax mRNA expression.     

米诺环素后处理通过抑制PARP过度活化减轻心肌缺血/再灌注损伤

目的:探讨米诺环素后处理能否通过抑制多腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)过度活化减轻大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤。方法:结扎大鼠冠状动脉左前降支45 min,再灌注2 h,建立心肌I/R模型。将90只雄性Wistar大鼠随机分为假手术(sham)组,I/R组,低、高剂量米诺环素组及PARP抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)组。氯化三苯基四氮唑(TTC)和伊文思蓝双染法检测心肌梗死范围,HE染色观察心肌组织形态学改变,TUNEL法评估心肌细胞凋亡程度,酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)含量,Western blot法检测再灌注心肌及外周血白细胞内PARP-1活化产物多腺苷二磷酸核糖(PAR)的表达。结果:与sham组比较,心肌、外周血白细胞内PAR表达及血清TNF-α、IL-1β含量明显升高。与I/R组比较,米诺环素低、高剂量及3-AB后处理组均能显著减少梗死范围及心肌细胞凋亡程度,同时明显降低心肌、外周血白细胞内PAR表达及血清TNF-α、IL-1β含量。米诺环素高剂量组与3-AB组比较无显著差异。结论:米诺环素后处理可能通过抑制心肌及外周血白细胞PARP过度活化减轻大鼠心肌I/R损伤。     

缺血后处理通过抑制线粒体途径减轻缺血/再灌注诱导的肠黏膜细胞凋亡

目的：探讨缺血后处理减轻缺血/再灌注损伤肠黏膜细胞凋亡的机制。方法:SD大鼠随机分为4组（n=8）：假手术（sham）组、缺血/再灌注（I/R）组、缺血预处理（IPreC）组、缺血后处理（IPostC）组;应用透射电子显微镜和激光共聚焦扫描显微镜分别观测各组大鼠肠黏膜细胞线粒体形态结构改变和线粒体跨膜电位的变化。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法和免疫组织化学方法分别检测各组大鼠肠黏膜细胞凋亡发生情况以及肠黏膜细胞bcl-2、bax mRNA及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果:与I/R组相比,IPostC组和IPreC组大鼠肠黏膜细胞线粒体形态结构改变明显减轻,线粒体跨膜电位显著升高（均P<0.05）,肠黏膜细胞凋亡率明显降低（均P<0.05）,肠黏膜细胞bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白表达水平显著上升,bax mRNA和Bax蛋白表达水平明显下降（均P<0.05）,IPostC组和IPreC组相比各项指标差异无显著差异（均P>0.05）。结论:缺血后处理可能通过抑制线粒体途径减轻缺血/再灌注诱导肠黏膜细胞的凋亡。