大鼠心肌钙敏感受体蛋白的表达及其与心肌细胞凋亡的关系

目的观察大鼠心肌组织和心肌细胞钙敏感受体（CaSR）蛋白表达与心肌细胞凋亡及相关信号传导途径的关系。方法Western blot检测心肌CaSR蛋白和ERK1／2、BCl2及Caspase3的表达。免疫荧光和流式细胞仪观察细胞凋亡。结果心肌组织和心肌细胞表面可检测到CaSR蛋白的表达。CaSR激动剂氯化钆（GdCl3）能促进心肌细胞凋亡,并使ERK1／2的磷酸化增加、BCl2表达及Caspase3活化。加入酪氨酸蛋白激酶阻断剂PD98059后,心肌细胞凋亡率增加,ERK1／2磷酸化降低,BCl2表达消失,Caspase3活化增强。结论CaSR蛋白在心肌细胞膜表面表达,其激活通过Caspase3活化,促进心肌细胞凋亡。同时亦可激活酪氨酸蛋白激酶途径。     

钙敏感受体在动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞中的表达

目的探讨钙敏感受体在动脉粥样硬化大鼠胸主动脉血管内皮细胞中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法 Wistar大鼠144只,随机分为对照组和动脉粥样硬化组,每组72只。动脉粥样硬化早期模型复制首先每千克体重注射维生素D360万单位,然后喂养高脂饲料6周。自动生化仪检测血清甘油三酯、总胆固醇;光镜观察胸主动脉形态学变化;TUNEL染色观察胸主动脉内皮细胞凋亡情况;采用RT-PCR和免疫印迹法分别检测胸主动脉血管内皮细胞中钙敏感受体、Bax、Bcl-2及Caspase-3的mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,动脉粥样硬化组细胞凋亡指数以及钙敏感受体、Bax和Caspase-3的表达升高,Bcl-2的表达降低;光镜下可见胸主动脉部分内皮脱落,表面不光滑,中膜平滑肌细胞数目明显增多,排列紊乱。结论钙敏感受体可能参与了主动脉血管内皮细胞的凋亡,进而启动动脉粥样硬化的形成。     

肝细胞生长因子的抗鼠心肌细胞凋亡作用与抑制钙敏感受体有关

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)在缺血再灌注损伤中的抗细胞凋亡作用与钙敏感性受体(CaSR)mRNA表达下调的关系.方法 分离的新生鼠心肌细胞,随机分为对照组、模拟心肌缺血再灌注组(I/R组)、特异性CaSR激活剂GdCl3组(GdCl3组)、GdCl3+Na+/Ca2+交换抑制剂NiCl2+L-型钙通道阻滞剂CdCl2组(GdCl3+NiCl2+CdCl2组)、GdCl3+选择性PI3K阻断剂LY294002组(GdCl3+LY294002组)、GdCl3+肝细胞生长因子HGF组(GdCl3+HGF组)、GdCl3+HGF+LY294002组.新生鼠心肌细胞经缺氧处理后在缺血缓冲液中培养2 h,然后在标准培养液中培养24 h,建立模拟心肌缺血再灌注(I/R)模型.TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡情况.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组CaSR mRNA表达.Western blot测定促凋亡蛋白Caspase-3,抗凋亡蛋白Bcl-2和磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K).结果 模拟的I/R增强了CaSR mRNA的表达(I/R组:2.62±0.41,对照组:1.00±0.31,P＜0.01)及心肌细胞的凋亡[I/R组:(15.32±2.54)%,对照组:(2.90±1.45)%,P＜0.01].GdCl3进一步增强了CaSR mRNA的表达(GdCl3组:4.46±0.62,I/R组:2.62±0.41,P＜0.01)及心肌细胞的凋亡[GdCl3组:(25.36±2.60)%,L/R组:(15.32±2.54)%,P＜0.01],同时上调了Caspase-3(GdCl3组:1.93±0.28,I/R组:1.50±0.21,P＜0.01),下调了Bcl2的表达(GdCl3组:0.82±0.18,I/R组:1.71±0.30,P＜0.01),抑制了PI3K的磷酸化(I/R组:0.87±0.08,GdCl3组:0.61±0.07,P＜0.01).GdCl3+LY294002组心肌细胞凋亡率显著高于GdCl3组[(32.60±3.42)%比(25.36±2.60)%,P＜0.01],但两组间CaSR mRNA的表达差异无统计学意义.HGF通过抑制Caspase-3(GdCl3+HGF组:1.12±0.23,GdCl3组:1.93±0.28,P＜0.05;GdCl3+HGF+LY294002组:1.87±0.31,GdCl3+LY294002组:3.86±0.47,P＜0.05)和促进Bcl-2的表达(GdCl3+HGF组:2.56±0.54,GdCl3组:0.82±0.18,P＜0.05;GdCl3+HGF+LY294002组:1.68±0.28,GdCl3+LY294002组:0.68±0.13,P＜0.05)减少了I/R和GdCl3诱导的心肌细胞凋亡[GdCl3+HGF组:(11.8±1.89)%,GdCl3组:(25.36±2.60)%,P＜0.05],同时促进了PI3K的磷酸化(GdCl3+HGF组:2.87±0.21,GdCl3组:0.61±0.07,P＜0.05;GdCl3+HGF+LY294002组:2.01±0.14,GdCl3+LY294002组:0.44±0.10,P＜0.05)、下调了CaSR mRNA的表达(GdCl3+HGF组:1.46±0.37,GdCl3组:4.46±0.62,P＜0.01).结论 HGF对心肌细胞的保护作用在I/R诱导的新生鼠心肌细胞凋亡中至少部分与抑制CaSR mRNA表达、促进PI3K的磷酸化途径活化从而下调Caspase-3和上调Bcl-2有关.     

钙敏感受体与缺血/再灌注损伤诱发心肌细胞凋亡的线粒体途径的关系

目的探讨钙敏感受体（CaR）参与心肌缺血／再灌注损伤诱发细胞凋亡的机制。方法Langendorff离体灌流的方法复制心脏缺血／再灌注模型。观察缺血／再灌注和加入CaR激动剂时CaR的表达情况。TUNEL染色观察不同组别细胞凋亡,应用激光扫描共聚焦显微镜观察大鼠心肌细胞的线粒体膜电位的变化。Western blot检测心肌组织线粒体中细胞色素C及Bcl-2的表达。结果心肌缺血／再灌注和加入CaR激动剂时CaR的表达明显高于对照组（P均〈0．01）。TUNEL染色发现缺血／再灌注组和激动剂组细胞凋亡率明显增加（P均〈0．05）,同时此两组的线粒体膜电位下降明显（P均〈0．05）,线粒体细胞色素C与Bcl-2的表达也明显下降（P均〈0．05）。结论CaR激活在缺血／再灌注时通过诱发线粒体损伤,促进细胞凋亡。     

钙敏感受体对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌细胞肥大的作用

目的 观察钙敏感受体(CaSR)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导心肌细胞肥大中的作用和可能机制.方法 用Ang Ⅱ处理原代新生大鼠心室肌细胞复制心肌肥大细胞模型;用CaSR激动剂氯化钆(GdCl3),GdCl3+蛋白激酶C(PKC)通路阻断剂(Ro318220)处理AngⅡ诱导的肥大心肌细胞分别作为GdCl3、Ro318220组.通过苏木素-伊红染色(HE)法测定细胞直径,考马斯亮蓝蛋白试剂盒测定蛋白含量来评价细胞肥大的情况;利用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i;Western blot法检测CaSR和PKC通路的蛋白表达.结果 ①与对照组(0.1263±0.0443)比较,Ang Ⅱ组(0.1963±0.0375)和GdCl3组(0.2778±0.0564)CaSR蛋白表达明显增加(P均＜ 0.05),且GdCl3组明显高于AngⅡ组(P＜0.05).②与对照组(222.70±22.09)比较,Ang Ⅱ组(392.16±36.85)和GdCl3组(502.60±44.21)心肌细胞内[Ca2+]i显著增加(P均＜0.05);与Ang Ⅱ组比较,GdCl3组[Ca2+]i显著增加(P＜0.05).③与对照组比较,Ang Ⅱ可诱导心肌细胞肥大,GdCl3可促进Ang Ⅱ的诱导作用,而Ro318220可抑制GdCl3的作用;④与对照组(0.27±0.07、0.69±0.06、0.87±0.04)比较,Ang Ⅱ组PKCα、PKCε和PKCδ蛋白表达明显增加(0.60±0.16、1.02±0.13、1.20±0.18,P均＜0.05),GdCl3组PKCα、PKCε蛋白表达明显增加(0.82±0.16、1.34±0.12,P均＜0.05);与Ang Ⅱ组比较,GdCl3组PKCα、PKCε蛋白表达明显增加(P均＜ 0.05);与GdCl3组比较,Ro318220组PKCα、PKCε蛋白表达(0.41±0.10、0.85±0.14)明显减少(P均＜ 0.05).结论 PKC通路参与CaSR激活促进心肌细胞肥大的信号转导.     

细胞外钙敏感受体及其在胰腺上的表达

细胞外Ca2 +通过钙敏感受体 (CaR)发挥着类似激素的功能 ,CaR在多种器官中广泛表达并参与各种生命活动的调节。在胰腺内、外分泌部多种细胞上都存在CaR ,参与调节胰液和胰酶分泌、调节胰岛素分泌和胰腺血管和神经分布、参与胰腺肿瘤细胞增殖等多种生理或病理过程。     

蛋白激酶C与钙敏感受体在心肌缺血预适应中的保护作用

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)与钙敏感受体(CaR),在心肌缺血预适应(IPC)中的保护作用.方法 采用细胞培养方法 ,体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,模拟缺血预适应模型,实验分为7组:①正常对照组(C),②缺血再灌注组(1/R),③IPC组,④IPC+PKC抑制剂组(IPC+PKCI),⑤IPC+PKCI+CaR激动剂组(IPC+PKCI+CARS),⑥IPC+CaRS组,⑦IPC+CaR抑制剂组(IPC+CaRI).分别用TUNEL,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑比色法(MTT)观察细胞存活率,Western Blot法检测胞浆内caspase-12,CaR,钙蛋白酶(calpain)表达.结果 光镜下,I/R组细胞核缩小,呈强蓝色荧光,染色质浓缩,出现凋亡小体,其他各实验组有不同程度的荧光增强,尤以IPC+PKCI+CaRS组多见强蓝色荧光细胞核.心肌细胞存活率和凋亡率,I/R组[(62.99±0.65)%,(19.13±0.87)%],IPC组[(78.67±0.37)%,(14.21±0.74)%],IPC+PKCI组[(71.09±0.52)%.(20.46±0.81)%],IPC+PKCI+CaRS组[(66.10±0.75)%,(24.89±1.43)%],IPC+CaRS组[(69.56±0.44)%,(21.64±0.77)%],IPC+CaRI组[(85.81±0.60)%,(13.12±0.69)%]明显低于或高于对照组[(100.00)%,(6.02±0.31)%],除IPC+CaRI组心肌细胞存活率外,其他各组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05或＜0.01).Western Blot测定,胞浆白CaR蛋白在IPC+PKCI,IPC+CaRS,IPC+PKCI+CaRS组表达较IPC组高,IPC+CaRI组较IPC组低,caspase-12蛋白在I/R,IPC+CaRS,IPC+PKCI+CaRS 组,相对分子质量(胁)为60×103的活性片段表达均较高,calpain在I/R,IPC,IPC+PKCI,IPC+PKCI+CaRS,IPC+CaRS组表达均高于对照组和IPC+CaRI组,其中I/R组最高,对照组最低,IPC+CaRI组次之.结论 PKC与CaR受体之间的相互作用在IPC中可以通过减少肌浆网钙释放而起到对心肌的保护作用.Protective mechanism of the interaction between protein kinase C and calcium sensing receptor in jschemiapreconditioning DU Li-juan,WANG Yah-li,SUN Zhi-rui,ZHAO Ya-jun,LI Quan-feng,WANG Li-na,ZHANG Wei-hua Departmem of Pothophysioloty,Harbin Medical University,Harbin 150081,China     

钙敏感受体参与心肌缺血再灌注损伤诱发细胞凋亡的机制

目的 探讨钙敏感受体（CaSR）参与心肌缺血再灌注损伤诱发细胞凋亡的机制。方法 采用离体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。实验分5组：对照组灌注2h；缺血组单纯缺血40min；缺血再灌注组缺血40min再灌注2h；激动剂组同缺血再灌注组，在再灌注液中加入氯化钆（GdCl3）；阻断剂组同缺血再灌注组，在再灌注液中加入氯化镍（NiCl2）和氯化镉（CdCl2）。利用光镜观察各组心肌细胞凋亡情况；检测各组乳酸脱氢酶（LDH）活力和丙二醛（MDA）水平变化；Western Blot分析各组心肌组织中CaSR、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果 缺血再灌注和激动剂组细胞凋亡指数、LDH活力和MDA水平明显高于对照组；同时CaSR、细胞浆中的Caspase-3表达也明显高于对照组．反之，Bcl-2表达低于对照组。结论 CaSR参与缺血再灌注损伤所诱发的细胞凋亡。     

钙敏感受体在心血管生理和疾病中的作用

钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaSR)是G蛋白偶联受体(GPCRs)C家族成员之一,能被Ca2+、Mg2+、氨基酸、多胺等激活,它是公认的具有广泛表达功能的受体,在甲状旁腺、肾脏、肠道、骨骼系统高度表达,也在心血管系统的不同组织中表达,发挥不同作用,从而参与心血管系统的生理病理过程。本综述是概述CaSR对心血管系统的重要性。     

细胞外钙敏感受体及其在胰腺上的表达

细胞外Ca^2 通过钙敏感受体(CaR)发挥着类似激素的功能，CaR在多种器官中广泛表达并参与各种生命活动的调节。在胰腺内、外分泌部多种细胞上都存在CaR，参与调节胰液和胰酶分泌、调节胰岛素分泌和胰腺血管和神经分布、参与胰腺肿瘤细胞增殖等多种生理或病理过程。     

原发性甲状旁腺功能亢进症患者钙敏感受体基因多态性的分布及其与血钙水平的相关性

目的 研究原发性甲状旁腺功能亢进症患者中钙敏感受体（CASR）基因多态性的分布，及其与临床特征的相关性。方法 分别采用突变分离PCR（MS—PCR）和错配PCR—RFLP方法检测北京地区202名无亲缘关系的汉族健康妇女及45例原发性甲状旁腺功能亢进症（PHPT）患者CASR基因A986S、G990R基因型，测定血钙、游离钙、磷、甲状旁腺素（PTH）水平。结果 （1）北京地区年轻正常汉族妇女中存在CASR基因A986S、G990R多态性，A986S等位基因A和S的频率分别为0．975和0．025，G990R等位基因R和G的频率分别为0．468和0．532，符合Hardy—Weinberg平衡。（2）PHPr患者：①A986S等位基因A和S的频率分别为0．944和0．056，G990R等位基因R和G的频率分别为0．667和0．333[与健康妇女组比较G990R基因型分布和等位基因频率差异有统计学意义（P〈0．01）]。②AA、AS基因型组的血钙分别为（3．03±0．50）、（2．84±0．12）mmoL／L（P〈0．05），血游离钙分别为（1．56±0．32）、（1．42±0．07）mmol/L（P〈0．05），血磷分别为（0．71±0．18）、（0．69±0．07）mmo/L（P〉0．05），血PTH升高倍数分别为（13．13±11．26）、（9．25±7．78）倍（P〈0．05）。（3）PHPT患者GG＋GR与RR基因型组的血钙分别为（3．00±0．46）、（3．04±0．52）mmoL／L（P〈0．05），血游离钙分别为（1．50±0．21）、（1．58±0．39）mmoL／L（P〈0．05），血磷分别为（0．71±0．16）、（0．71±0．18）mmol/L（P〉0．05），血PTH升高倍数分别为（11．84±10．63）、（13．89±11．51）倍（P〉0．05）。结论 PHPT患者中CASR基因G990R多态性的分布频率与健康人群不同，R等位基因频率较高；A986S、G990R多态性与血钙、游离钙水平相关，含S或G等位基因的个体血钙及游离钙水平较低；A986S多态性与血PTH水平相关，含S等位基因的基因型的PTH水平较低。     

Significance of calcium-sensing receptor expression in gastric cancer

Objective. The calcium-sensing receptor (CaSR) is known to have differential expression in various carcinomas and normal tissues. It has been shown to be involved in carcinogenesis or tumor suppression. However, its role in gastric cancer remains unknown. This study was performed to determine the CaSR expression level in gastric cancer and non-tumor gastric tissues and to examine the related clinicopathological factors. Materials and methods. Thirty-one pairs of gastric cancer tissues and matched non-tumor gastric tissues were obtained from surgical tissues after gastrectomy. Using real-time polymerase chain reaction, we measured CaSR mRNA expression. We evaluated the association between CaSR mRNA expression and clinicopathological variables based on the downregulation or upregulation of CaSR mRNA expression in gastric cancer tissues compared to those of matched non-tumor gastric tissues. By immunohistochemistry, we confirmed CaSR expression levels in gastric cancer tissues. Results. Downregulation of CaSR mRNA was observed in 77.4% of gastric cancer tissues compared to their matched normal tissues. Downregulated CaSR was associated with a tendency for deeper invasion into the proper muscle (p = 0.028) and more advanced stage (II–IV; p = 0.012). Conclusion. We conclude that downregulation of CaSR may contribute to the prevention or suppression of tumor outgrowth.     

玉米苞叶降低动脉硬化家兔白细胞凋亡及CD44表达

目的　探讨玉米苞叶对动脉粥样硬化模型动物外周血白细胞凋亡和CD4 4表达的影响。方法　将家兔分为正常对照组、动脉硬化模型组、低剂量组 (造模 9w后给予低剂量玉米苞叶煎剂 )、高剂量组 (造模 9w后给予高剂量玉米苞叶煎剂 )。 1 7w后测血脂和血中白细胞凋亡率及CD4 4表达量 ,观察主动脉形态变化。结果　①模型组白细胞凋亡率 (6 58± 2 53) % ,CD4 4表达量 6 97± 1 41 ,均显著高于正常组 (P <0 0 1 ) ,②白细胞凋亡率和CD4 4表达量在低剂量组分别为 3 1 1± 1 50、4 76± 0 57;高剂量组为 3 74± 1 66、4 64± 0 42 ,均显著低于模型组 (P <0 0 1 )。结论　玉米苞叶煎剂可显著降低动脉硬化家兔白细胞凋亡率和CD4 4表达量 ,且这种作用不是通过降血脂实现的。     

钙敏感受体在淤胆型肝炎小鼠肝脏组织中的表达

[目的]探讨钙敏感受体（Calcium-sensingreceptor,CaR）在淤胆型肝炎小鼠肝组织中的表达。[方法]采用ANIT（80mg／kg,po）制备小鼠淤胆型肝炎模型,检测给予ANIT24h、48h后小鼠血清ALT、ALP及BA水平,HE染色观察肝脏病理组织学改变,免疫组化检测CaR在淤胆型肝炎小鼠肝组织中的表达。[结果]给予ANIT24h、48h后,小鼠血清ALT、ALP及BA水平逐渐升高,48h后明显上升;病理结果显示48h后,肝细胞坏死明显;免疫组化结果显示淤胆型肝炎小鼠肝组织中CaR的表达明显增强。[结论]CaR在淤胆型肝炎小鼠肝脏组织中存在高表达,且可能与淤胆的发生有关。     

一种大鼠动脉粥样硬化斑块模型的建立

目的试建立一种大鼠动脉粥样硬化斑块模型。方法给予大鼠一次维生素D33×105U/kg体重肌肉注射、球囊损伤主动脉内皮和饲以含2％胆固醇、0.5％胆酸钠、0.2％丙硫氧嘧啶、3％猪油和维生素D31.25×106U/kg的高脂饲料90 d。结果90 d后大鼠血脂明显增高,胸主动脉形成明显的动脉粥样硬化斑块,斑块内有大量的泡沫细胞、脂质、巨噬细胞及钙化,中膜平滑肌明显萎缩;而仅饲以高脂饲料的大鼠胸主动脉结构未见改变。结论血管钙超载、内皮损伤和高脂可使大鼠主动脉形成较典型的动脉粥样硬化斑块。     

钙敏感受体及其配体在血管系统中的作用和机制的研究进展

近年来多项研究发现，钙敏感受体（CaSR）在血管系统中表达并发挥重要作用。本文就CaSR的结构、功能、配体的分类及其在血管系统中作用作一简要综述。