阿司匹林对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨阿司匹林对卵巢癌细胞凋亡的影响以及对凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的作用。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法分析阿司匹林对卵巢癌细胞株SKOV3生长的抑制作用,用流式细胞术分析方法定量检测细胞凋亡及细胞周期的变化。用RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的表达。结果:阿司匹林对SK-OV3细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈量效和时效的关系;1、5、10mmol/L3个浓度的阿司匹林处理细胞48h后,细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,而且G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高,细胞被阻滞在G2/M期,细胞周期也发生明显改变;阿司匹林可抑制卵巢癌细胞的bcl-2mRNA表达,而上调bax mRNA的表达。结论:阿司匹林能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡。此作用可能与阿司匹林抑制细胞bcl-2mRNA的表达和上调bax mRNA表达有关。     

Bax、Bcl-2ASODN联合转染增强宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的实验研究

目的:研究凋亡抑制基因bcl-2反义寡核苷酸(ASODN)和促凋亡基因bax联合转染对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,进而探求其放射增敏作用。方法:用逆转录病毒颗粒感染HeLa细胞,获得HeLa-bax细胞后,将bcl-2ASODN转染HeLa及HeLa-bax细胞,36h后放射治疗,通过MTT法、细胞形态学及流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡,半定量RT-PCR测bcl-2及bax基因的表达。结果:(1)HeLa细胞经bcl-2ASODN及bax联合转染并放疗后,光镜观察有明显凋亡趋势;(2)MTT法及流式细胞仪检测其凋亡率明显高于单基因转染+放疗组(P<0.05);(3)RT-PCR结果显示,bax基因表达显著增强,而bcl-2基因表达较各对照组明显减弱。结论:凋亡抑制基因bcl-2ASODN和促凋亡基因bax联合转染诱导HeLa细胞凋亡效果明显优于单基因转染,可有效提高HeLa细胞的放射敏感性。     

卵泡发育中相关基因的调控

卵泡发育是一个受内分泌、旁分泌及基因调节的复杂的生理过程。基因通过表达产物反馈调节卵泡发育,但它们各自对卵泡发育的调节作用有所不同。FOXL2基因能促进卵泡的生长、发育及抗凋亡,AMH基因、GDF-9基因、INH基因与卵泡早期的生长和发育有关。原癌基因c-myc促进卵泡发育和黄体形成,c-mos基因在卵母细胞减数分裂中呈现特异作用,而bcl-2和bax分别参与了卵巢颗粒细胞的增殖和凋亡的调节。由于各基因调控的相互协调,才使卵泡得以正常生长、发育和成熟。     

整合素及纤粘连蛋白在调控卵巢癌细胞失巢凋亡过程中的作用

目的研究整合素及纤粘连蛋白(fibronectin,FN)在卵巢癌细胞逃避失巢凋亡过程中的作用及其机制。方法2005年1月至2006年5月于山东省立医院采用间接免疫荧光染色检测人卵巢癌SKOV3细胞高转移亚克隆SKOV3-S1细胞中整合素蛋白αv、β1、α5β1的表达;建立细胞悬浮分离培养导致凋亡的模型,流式细胞仪检测细胞凋亡;抗体封闭法检测不同整合素蛋白在凋亡过程中的作用;逆转录PCR检测p53、bcl-2、bax基因表达的变化;比色法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性改变。结果(1)S1细胞表面普遍表达整合素αv、β1、α5β1。(2)FN使细胞凋亡率由63.7%降至29.0%,αv及β1抗体使凋亡率上升,α5β1抗体对凋亡没有影响。(3)FN使S1细胞中bcl-2基因表达上升,bax表达下降。αv封闭抗体能抑制FN的基因表达调节作用。(4)在悬浮生长状态下,caspase-3被激活;FN使caspase-3活性减弱;加入αv及β1封闭抗体后,酶活性增强。结论SKOV3-S1细胞表面整合素受体蛋白αv通过与FN结合,提高了细胞凋亡调节基因bcl-2/bax的比率,使caspase-3活性减弱,这是SKOV3-S1细胞避免失巢凋亡的重要原因之一。     

颗粒细胞与卵母细胞自噬对卵泡发育和闭锁的调控

卵巢早衰(POF)、多囊卵巢综合征(PCOS)等卵巢生殖疾病发病率日益增高,已经成为严重危害女性身心健康的疾病。目前研究表明卵巢生殖疾病中各时期卵泡的闭锁由颗粒细胞(GCs)和卵母细胞凋亡引起,随着对卵泡发育中分子机制研究的深入,揭示了GCs和卵母细胞的凋亡并不是导致卵泡闭锁的唯一因素,自噬的诱导同时参与了卵泡的生长、闭锁和分化,介导了颗粒细胞和卵母细胞的程序性死亡。本文就当前GCs与卵母细胞自噬的诱导进行系统回顾,总结卵巢卵泡发育和闭锁过程中细胞自噬机制,旨在为后续研究提供参考。     

bcl-2表达下调参与PCOS患者颗粒细胞的凋亡增加

目的比较PCOS患者和正常妇女颗粒细胞的凋亡差异,并初步探讨其发生的可能机制。方法采用病例对照的方式,选择体外受精-胚胎移植（IVF-ET）中PCOS患者23例以及对照组31例,收集其颗粒细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用Hochest 33342荧光染色观察凋亡细胞核形态。用免疫组化和WesternBlot法分析两组原代培养颗粒细胞间bcl-2蛋白的表达差异。结果PCOS组和对照组颗粒细胞凋亡率分别是（0.26±0.18）和（0.16±0.10）,PCOS颗粒细胞的凋亡率明显增高（P〈0.05）,Hochest 33342荧光染色在PCOS组颗粒细胞中可见更多的凋亡细胞核形态。免疫组化显示bcl-2主要表达在颗粒细胞胞浆中表达,形态计量学积分显示PCOS组和对照组的H-Score分别是（7.45±3.85）和（10.73±4.17）,在PCOS组颗粒细胞中bcl-2蛋白表达明显下调（P〈0.05）。结论PCOS患者颗粒细胞凋亡增多;bcl-2表达下调可能是导致PCOS患者颗粒细胞凋亡增多的关键因素。     

细胞核增殖相关抗原ki67和bcl-2、bax与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理及预后的关系

目的研究细胞核增殖相关抗原ki67和凋亡抑制基因bcl-2 、促凋亡基因bax与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理及预后的关系.方法采用免疫组化SP法检测85例卵巢上皮性肿瘤中ki67、bcl-2、bax表达情况.结果①ki67指数在恶性卵巢上皮性肿瘤中显著高于良性及交界性肿瘤;与恶性卵巢上皮性肿瘤组织学分级呈正相关,与预后呈负相关.②bax表达水平在卵巢恶性肿瘤组中高于良性组,与恶性卵巢上皮性肿瘤组织学分级呈负相关,与预后呈正相关;bcl-2表达水平在恶性组中高于良性组及交界组;高分化组中bcl-2∶bax≤1的患者所占比例高于中、低分化组,bcl-2∶bax≤1患者预后较好.③恶性卵巢上皮性肿瘤中ki67指数与bax表达负相关,与bcl-2表达及bcl-2∶bax比值正相关;低增殖高凋亡易感组预后好于高增殖低凋亡易感组.④临床分期和bax表达水平是影响恶性卵巢上皮性肿瘤患者预后的主要因素.结论ki67可作为评价卵巢肿瘤生物学行为及预后的指标,bcl-2、bax相互作用,对恶性卵巢上皮性肿瘤的发生、发展及预后中起一定作用,高增殖低凋亡易感性促使肿瘤恶性发展,bax为恶性卵巢上皮性肿瘤患者的保护因素.     

凋亡调节基因在Ⅲ、Ⅳ期子宫内膜异位症中的表达

目的 :检测凋亡调节基因 bcl- 2、bax和 c- myc在 、 子宫内膜异位症异位内膜中的表达 ,以探讨凋亡调节基因在子宫内膜异位症发病中的作用。方法 :2 0例子宫内膜异位症患者 ,按 r AFS分期 : 期 8例 , 期 12例。用免疫组化法检测上述患者异位内膜中 bcl- 2、bax和 c- m yc的表达。结果 :bcl- 2、bax和 c- myc主要定位于子宫内膜异位症的腺上皮中 ,其中 bcl- 2的总体阳性率为 5 5 % ,bax的阳性率为 75 % ,c- myc阳性率为 5 5 % ,且 bcl- 2的表达与 c- myc表达正相关(P<0 .0 1) ,而与 bax的表达负相关 (P<0 .0 5 ) ,相关性有统计学意义。按疾病分期比较三者的表达情况 ,bcl- 2在 期中表达高于 期者 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;按月经周期比较三者表达情况 ,则差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :子宫内膜异位症患者异位内膜存在一定程度凋亡 , 期较 期细胞更易凋亡 ,而与月经周期无关 ,bcl- 2和 bax起主要调节作用 ,c- myc可能与 bcl- 2协同作用     

抗细胞凋零基因bcl-2和bax与卵巢上皮性肿瘤的关系

目的:研究抗凋零基因bcl-2和bax与卵巢上皮性肿瘤发生及预后的关系。方法:通过免疫组化方法,用抗bcl-2及抗bax抗体检测卵巢上皮肿瘤76份(良性27份、交界性24份、恶性25份)中bcl-2和bax的表达产物,并以正常卵巢12份做对照。结果:正常卵巢组织12份中bcl-2和bax阳性检出率为0,在良性、交界性及恶性肿瘤组织中bcl-2和bax的阳性检出率分别为7.4%(2/27)、16.7%(4/24)、36.0%(9/25),22.2%(6/27)、45.8%(11/24)、56.0%(14/25),良性与恶性肿瘤之间差异有显著性(P<0.05),而且bax的表达率比bcl-2高(P<0.05),bax在恶性肿瘤组Ⅰ级与Ⅲ级间差异有显著性(P<0.05)。结论:抗细胞凋零基因bcl-2和bax过度表达可能与卵巢上皮性肿瘤发生有关,推测bax不仅参与细胞凋零的调控,而且可能与肿瘤分化及预后有关。     

黄体功能不全患者月经期子宫内膜细胞凋亡的研究

目的：探讨黄体功能不全（luteal phase defect LPD)患者月经期子宫内膜细胞的凋亡及意义。方法：应用免疫组织化学S－P方法,测定35例黄体功能不全患者和19例对照组月经期子宫内膜bcl-2和bax蛋白的表达,同时应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）测定二组月经期子宫内膜的细胞凋亡。结果：LPD组患者子宫内膜bcl-2表达较对照组高（P＜0．01）,而bax表达较对照组（P＜0．05）,凋亡指数（apoptotic index AI）对照组高于LPD组（P＜0．01）,且随着bcl-2的表达强度增加而减少（Ｐ＜０．０１）,而随着bax的表达强度增加而增加（P＜0．01）,结论：LPD组患者月经期子宫内膜 bcl-2表达增高bax表达降低,从而抑制LPD患者子宫内膜细胞凋亡,对其子宫内膜的异常变改变起一定作用。