硼替佐米增加耐药白血病细胞株K562/DNR对化疗药物的敏感性

目的:观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米是否可以增加耐药白血病细胞株K562/DNR对化疗药物的敏感性.方法:MTT法计算硼替佐米逆转耐药倍数,流式细胞术(FCM)检测细胞调亡比及细胞内药物浓度.结果:表柔比星单独及联合硼替佐米作用于K562/DNR细胞株的IC50分别为417.0μg/ml和210.4 μg/ml,逆转倍数为1.98倍;柔红霉素单独及联合硼替佐米作用于K 562/DNR细胞株的IC50分别为457.7μg/ml和324.9 μg/ml,逆转倍数为1.4倍.单独应用表柔比星组细胞调亡比为(28.74±4.6)％,联合硼替佐米组细胞调亡比为(39.14±9.6)％.硼替佐米能使K562/DNR细胞内柔红霉素含量增加,而对K562/S细胞无类似影响.结论:蛋白酶体抑制剂硼替佐米能增加耐药白血病细胞株K562/ DNR的化疗药物的敏感性,逆转耐药性.     

硼替佐米对白血病细胞株HEL抑制作用的初步探讨

 目的　探讨硼替佐米单独或联合化疗药物对急性白血病细胞株HEL生长的影响及其机制。方法　MTT法检测药物对HEL的生长抑制效应,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡,Western blotting检测凋亡及细胞周期相关蛋白表达。结果　硼替佐米对HEL细胞的生长抑制作用呈浓度依赖关系,其半数抑制浓度（IC50）为7.15 nmol／L;硼替佐米联合化疗药物明显增强抑制HEL细胞生长;流式细胞术检测可见时间依赖性的G2／M周期阻滞;Western blotting检测显示bcl-2表达下降,bax、p27表达增高,联合用药时具有相加效应,但不管是单独或联合用药,p53蛋白的表达均无明显改变。结论　硼替佐米可能是一种有效治疗急性白血病的药物,与柔红霉素联合应用有更强的抑制肿瘤细胞生长和诱导其凋亡的作用,其机制可能与bcl-2,bax及p27蛋白的调节有关,是非p53依赖性的。     

硼替佐米联合甲基强的松龙治疗Waldenstrom巨球蛋白血症1例

注射用硼替佐米（Bortezomib,商品名：万珂）,是目前批准上市的唯一治疗恶性肿瘤的蛋白酶体抑制剂,它能特异性抑制哺乳动物细胞内26S蛋白酶体的类胰凝乳蛋白酶（Chymotrypsin—like）活性,对一系列细胞信号转导通路产生影响,诱导肿瘤细胞死亡。国外多中心的Ⅱ期临床研究报道万珂单药治疗巨球蛋白血症,总有效率在26％～85％。基于临床前研究和Ⅰ、Ⅱ期临床研究,我们应用万珂联合甲基强的松龙治疗了1例复发难治的巨球蛋白血症,并取得了一定疗效,现报告如下。     

硼替佐米联合化疗治疗浆细胞白血病的疗效观察

目的评估硼替佐米联合化疗治疗浆细胞白血病(plasma cell leukemia,PCL)的疗效和不良反应。方法 11例浆细胞白血病经骨髓穿刺确诊,给予含硼替佐米方案化疗。硼替佐米给药方案为1.3 mg/m~2,d1,d4,d8,d11;联合的化疗方案包括地塞米松(BD),吡柔比星加地塞米松(PAD),马法兰加泼尼松(VMP)等。按照国际骨髓瘤工作组制定的疗效标准评估疗效,按照NCI标准评估不良反应。结果 11例患者共完成37个治疗周期,平均每例3.4个周期。11例患者中,2例获得CR,6例获得VGPR,1例获得PR,总反应率达81.8%。中位生存期17.2个月,与历史数据相比有明显区别(17.2个月vs 5.6个月).不良反应主要是骨髓抑制和感染。结论硼替佐米联合化疗治疗浆细胞白血病的疗效确切,不良反应可耐受。     

硼替佐米治疗难治性浆细胞疾病导致的肺损伤

目的　观察硼替佐米治疗难治性浆细胞疾病引发肺损伤情况。方法　回顾分析３例难治性浆细胞疾病患者应用硼替佐米后出现肺损伤临床资料。结果　３例难治性浆细胞疾病患者均在应用硼替佐米４～１２小时后出现严重低氧血症,呼吸功能衰竭,细菌培养阴性,经验性抗细菌治疗无效,大剂量激素治疗可挽救部分患者。结论　疾病晚期、高肿瘤负荷可能是难治性浆细胞疾病患者应用硼替佐米后引发肺损伤的部分原因。     

硼替佐米治疗多发性骨髓瘤的初步临床研究

  目的 初步观察硼替佐米（商品名：万珂）联合化疗对多发性骨髓瘤（MM）的疗效和毒副作用。方法 5例MM患者采用万珂联合地塞米松或DVD方案治疗4个疗程,评价疗效和毒副作用。结果 3例完全缓解（CR）,1例部分缓解（PR）,1例达到微小反应（MR）;总缓解（CR+PR）率为80 %;最常见的毒副反应为指趾麻木感、轻度白细胞和血小板减少以及肝功能异常改变。结论 万珂联合化疗治疗MM疗效好,毒副作用轻微,患者易于耐受。     

硼替佐米对多发性骨髓瘤CLC-3表达的影响

目的:研究接受硼替佐米化疗的多发性骨髓瘤（MM）患者在化疗前后CLC-3蛋白表达的变化,探讨硼替佐米对MM患者CLC-3的影响及疗效的变化。方法:流式细胞技术分离12例初发、及复发难治的多发性骨髓瘤患者的浆（瘤）细胞,检测其CLC-3蛋白表达情况。然后所有观察病例均予以硼替佐米为主的化疗方案治疗至少4（4-6）个疗程,检测其CLC-3蛋白表达的水平,了解该指标与临床疗效的关系。结果:12例MM患者治疗前的CLC-3均存在高表达。经硼替佐米为主的化疗方案治疗后,其表达水平呈下降趋势。6例完全缓解（CR）及4例非常好的部分缓解（VGPR）的患者,CLC-3表达水平恢复接近正常。结论:硼替佐米可以对多发性骨髓瘤患者的CLC-3的表达情况产生影响,CLC-3表达水平与硼替佐米疗效呈负相关性。硼替佐米直接能否下调CLC-3水平,以及氯通道可否作为治疗该病的新靶点值得进一步研究。     

硼替佐米联合毛喉素诱导硼替佐米耐药骨髓瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：硼替佐米作为蛋白酶体抑制剂已成为新诊断和复发多发性骨髓瘤患者临床治疗的主要药物,但仍有部分患者对硼替佐米产生耐药而影响其长期生存。近年来研究发现,提高细胞内环腺苷酸浓度可以诱导骨髓瘤细胞凋亡并延缓其生长,成为骨髓瘤治疗新途径。该研究通过观察硼替佐米联合腺苷酸环化酶激动剂毛喉素(forskolin)对硼替佐米耐药骨髓瘤细胞的作用,探究克服骨髓瘤耐药的可能途径及其机制。方法：以硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株H929-R和原代细胞为模型,通过观察细胞生长、形态、凋亡相关基因的改变来研究硼替佐米、毛喉素单独或联合处理对硼替佐米耐药细胞增殖及凋亡的影响;并应用Rh123/PI双染法检测药物处理前后细胞内线粒体跨膜电位的变化;同时采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测线粒体凋亡相关基因转录水平及抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的蛋白水平的改变。结果：硼替佐米(20 nmol/L)与毛喉素(50 nmol/L)能够协同诱导硼替佐米耐药细胞凋亡。进一步研究发现,毛喉素可协同硼替佐米促使耐药细胞内线粒体跨膜电位下降并下调其Bcl-2和Mcl-1蛋白的表达。结论：毛喉素联合硼替佐米能够诱导硼替佐米耐药骨髓瘤细胞凋亡。     

硼替佐米对骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖和凋亡影响的研究

目的 探讨硼替佐米对骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖和凋亡的影响.方法 采用20、40、60、80和100 nmol/L的硼替佐米处理骨髓瘤细胞株RPMI8226(处理组),以不含硼替佐米的细胞作为对照(对照组).采用MTT法检测硼替佐米对RPMI8226细胞的增殖抑制作用,采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,采用RT-PCR和Western Blot技术检测细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、c-myc及PI3K/AKT信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达水平.结果 不同浓度的硼替佐米均可抑制RPMI8226细胞的增殖,且呈剂量效应;20、40、60、80和100 nmol/L硼替佐米处理组的RPMI8226细胞凋亡率分别为(11.80±0.56)%、(19.45±1.25)%、(36.82±2.26)%、(43.56±3.50)%和(56.62±5.02)%,均高于对照组的(8.02±0.45)%,差异均有统计学意义(P﹤0.05).处理组c-myc、β-catenin及Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均低于对照组,且随硼替佐米浓度的增加而下降;而Bax的mRNA和蛋白表达水平均高于对照组,且随硼替佐米浓度的增加而升高.结论 硼替佐米可抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡,作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路和PI3K/AKT信号通路有关.     

硼替佐米所致周围神经病变的研究进展

蛋白酶体抑制剂硼替佐米已被用于多种肿瘤的治疗,其最大的毒副作用为周围神经病变,限制了其临床应用.文章简述了硼替佐米所致周围神经病变（BIPN）的病因、危险因素、病理机制、临床表现和分级、检测及评估方法,并介绍了BIPN的防治方法.     

K562及其耐药细胞株K562／A02对rmhTRAIL的敏感性及NF-κB表达

[目的]探讨K562及其耐药细胞株K562／A02对rmhTRAIL敏感性及NF-κB（RelA／p65）的表达。[方法]观察rmhTRAIL作用后K562、K562／A02细胞形态变化，采用碘化丙啶染色法流式细胞术定量检测细胞凋亡比例，MTT法测定rmhTRAIL抑制细胞增殖率，半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测K562、K562／A02细胞的NF-κB（RelA/p65）mRNA表达水平。[结果]rmhTRAIL可诱导K562、K562／A02细胞凋亡，有典型的细胞形态改变；流式细胞术检测显示K562／A02的sub—G1百分比大于K562（P〈0．05）；rmhTRAIL对K562／A02的增殖抑制作用优于K562（P〈0．05）；K562和K562／A02均高表达NF-κB（RelA/p65）mRNA，两者无统计学意义（p〉0．05）。[结论]rmhTRAIL可以诱导K562、K562／A02细胞凋亡；rmhTRAIL对K562／A02促凋亡和抑制增殖作用优于K562；NF-κB（RelA／p65）未显示出其在K562及其耐药细胞株K562／A02对rmhTRAIL敏感性差异中的作用。     

光敏剂photofrinⅡ预激活联合化疗药物对K562细胞杀伤作用的研究

目的:通过体外研究探讨光敏剂photofrinⅡ预激活后对人白血病K562细胞株的杀伤作用及其与化疗药物配伍能否产生协同或拮抗效应.方法:以K562细胞株为研究对象,采用MTT法检测photofrinⅡ预激活后对K562细胞株的抑制作用,同时检测photofrinⅡ预激活后分别与顺铂(DDP)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)联合应用对K562细胞的杀伤作用,Burgi法分析联合用药效果.结果:photofrinⅡ预激活后能明显抑制K562细胞株的增殖,并且这种作用呈剂量依赖性,但其抑瘤作用较后激活组降低.photofrinⅡ预激活后分别与DDP、5-FU、ADM联合,增加了化疗药物的抑瘤作用.结论:photofrinⅡ预激活后能够抑制K562细胞株的增殖,与DDP、5-FU、ADM联合使用具有相加作用.     

人干扰素对HL60,K562细胞生长及细胞周期的影响

用人干扰素(α和γ)与HL60、K562细胞共同培养后,对细胞生长有不同程度抑制作用。IFN_r对细胞生长抑制作用强于IFN_r,IFN_r和IFN_r联合应用有协同作用,在K562细胞,细胞在细胞周期中的分布也发生改变,G_0/G_1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,在HL60细胞则无明显的细胞周期再分布情况。提示细胞在S期的堆积是细胞生长受抑的原因之一。     

二烯丙基二硫对K562细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨二烯丙基二硫( DADS)对人白血病K562细胞增殖和细胞周期的影响.方法 采用台盼蓝计数法、形态学观察、MTT分析法、流式细胞术、免疫组化法探讨DADS对K562细胞的作用及机制.结果 DADS能抑制K562细胞增殖;DADS处理后的K562细胞主要停滞在G2/M期;DADS处理后的K562细胞P21表达增加.结论 DADS有抑制K562细胞增殖作用,并使K562细胞生长阻滞在G2/M期.其作用机制可能与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21参与其中有关.     

联合应用bcr-abl融合基因反义寡核苷酸与c-myb基因反义寡核苷酸对K562细胞作用的研究

目的：研究联合应用ｂｃｒ－ａｂｌ融合基因硫代磷酸反义寡核苷酸（Ａｓｐｏ）及ｃ－ｍｙｂ基因Ａｓｐｏ对Ｋ５２细胞作用效果。方法：Ａｓｐｏ与Ｋ５６２细胞共培养后,台盼蓝拒染法计死活细胞数;甲基纤维素半固体培养法培养ＣＦＵ－Ｋ５６２;流式细胞仪测定细胞Ｐ２１０蛋白表达及细胞凋亡率;ＲＴ－ＰＣＲ半定量检测细胞ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ;电镜观察凋亡细胞形态学改变。结果：例置显微镜下观察到联合应用两种Ａｓｐｏ时,浓度各为５ｕｍｏｌ／Ｌ组Ｋ５６２细胞仍呈克隆状态生长,作用２４ｈ细胞Ｐ２１０蛋白表达明显受抑制,表达率〈２％;作用１２０ｈ细胞生长抑制率为６１．７％,Ｐ２１０恢复为２５．７％,凋亡率为２２．５％。两种浓度各为１０ｕｍｏｌ／Ｌ组Ｋ５６２细胞生长疏散,作用１２０ｈ细胞生长抑制率达９２．２％,Ｐ２１０仍未恢复,凋亡率为２２．     

苦参碱诱导K562细胞分化方向的研究

[目的]体外研究苦参碱诱导白血病细胞株K562的分化方向.[方法] 0.2mg/ml浓度苦参碱诱导K562细胞7天,观察苦参碱作用前后K562细胞形态学、细胞化学及细胞谱系特征性标记变化.[结果]K562细胞出现分化的形态特征,联苯胺染色及过碘酸-希夫反应(PAS)阳性细胞数分别由5%上升至31%,3%上升至35%,α-醋酸萘酚酯酶(α-NSE)、中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)阳性细胞数分别由36%下降至3%,22%下降至0,CD34、CD41表达阳性细胞数分别由1.1%上调至6.4%,23.8%上调至69.2%,CD68表达阳性细胞数由8.6%下调至1.1%,CD3、CD45RO、CD56及CD20表达阳性细胞数无明显变化.[结论]苦参碱是白血病细胞K562良好诱导分化剂,可诱导K562细胞向髓系非单核巨噬细胞方向分化.     

环孢霉素A、他莫昔酚对耐药细胞系K562／DOX多药耐药逆转作用的研究

目的 寻找有效的多药耐药联合逆转剂。方法 以他莫酚与环孢霉素A作为耐药逆转剂,采用MTT法进行体外药物敏感试验,观察他莫昔酚与环孢霉素A对多药耐药白血病细胞株K562／DOX的药物敏感性的影响。结果 他莫昔酚与环孢霉素A均可增强阿霉素（DOX）对K562／DOX的细胞毒作用,两者有联合协同作用,逆转倍数为单用药的9倍,超过单用2倍剂量的逆转效果。结论 他莫昔酚与环孢霉素A都是有效的多药耐药逆转剂,两者联合的协同作用更为显著。     

Characterization of an Etoposide-resistant Human K562 Cell Line, K/eto

An etoposide-resistant K562 cell line (K/eto) was obtained by stepwise exposure, in culture, to increasing concentrations of etoposide, without the use of mutagens. This cell line was resistant to etoposide, and slightly resistant to adriamycin, but sensitive to anti-cancer drugs such as camptothecin, vincristine, actinomycin D and so on. P-GIycoprotein, the mdr 1 gene product, was not detected in this cell line, as assessed by immunocytochemistry, itnmunoprecipitation and flow cytometry. Overexpression of mdr 1 mRNA was also not found. Interestingly, expression of 85 kD protein recognized by MRK 20 monoclonal antibody was noted. The level of DNA topoisomerase II protein, detected by antibody staining, decreased concomitantly with a general decrease in DNA topoisomerase II unknotting activity, while DNA topoisomerase I activity was not affected. Cellular accumulation of [³H]etoposide was reduced by 75% in the resistant line compared with parental K562. Karyotype analysis showed that the number of chromosomes in K/eto was 55 and neither a homogeneous staining region nor double-minute chromosomes were detected. These results indicate that this resistance is not due to an altered interaction between the drug and cellular transport machinery, i.e. MDR1, associated with the "classic" multiple drug resistance phenotype, but rather is due to the existence of other mechanism(s) of resistance, decreased transport of the drug and decreased target enzyme, DNA topoisomerase II.     

羟基磷灰石纳米粒子对人白血病细胞K562毒性作用的研究

目的:探讨羟基磷灰石(HAP)纳米粒子体外抑制人白血病细胞K562的生长增殖作用.方法:采用MTT法检测HAP和联合应用化疗药物对K562细胞的增殖抑制及化疗增敏作用.结果:(1)HAP和抗癌药物对K562细胞增殖均有抑制作用;(2)K562细胞生长抑制率与HAP的浓度和作用时间呈明显正相关性;(3)HAP与化疗药物合用具有更良好的抑癌效果.结论:HAP纳米粒子明显抑制K562细胞生长,具有体外抗白血病作用和化疗增敏作用.     

羟基磷灰石纳米粒子对人白血病细胞K562毒性作用的研究

目的:探讨羟基磷灰石(HAP)纳米粒子体外抑制人白血病细胞K562的生长增殖作用。方法:采用MTT法检测HAP和联合应用化疗药物对K562细胞的增殖抑制及化疗增敏作用。结果:(1)HAP和抗癌药物对K562细胞增殖均有抑制作用;(2)K562细胞生长抑制率与HAP的浓度和作用时间呈明显正相关性;(3)HAP与化疗药物合用具有更良好的抑癌效果。结论:HAP纳米粒子明显抑制K562细胞生长,具有体外抗白血病作用和化疗增敏作用。