基于MAPK/ERK信号通路探讨温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证原发性痛经的机制

目的 通过研究温经化瘀止痛法（香延止痛方）对原发性痛经（PD）大鼠丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路的影响,探讨PD的发病机制及温经化瘀止痛法治疗PD的作用机制。方法 将48只SPF级雌性Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,阳性药组,香延止痛方低、中、高剂量组,每组各8只。除正常组外,其余各组大鼠均采用寒冷刺激联合苯甲酸雌二醇和缩宫素建立寒凝血瘀证PD模型,正常组及模型组给予蒸馏水,阳性药组给予布洛芬（0.06 g·kg^-1）,香延止痛方组分别给予低剂量香延止痛方（6.55 g·kg^-1）,中剂量香延止痛方（13.09 g·kg^-1）,高剂量香延止痛方（26.18 g·kg^-1）,连续灌胃6 d。记录寒凝血瘀证大鼠症状和体征量化评分并观察大鼠注射缩宫素后的扭体潜伏时间和30 min内扭体次数。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠子宫组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（B-Raf）,细胞外调节激酶1/2（MEK1/2）,ERK1/2,p-MEK1/2,磷酸化（p）-ERK1/2,c-Jun,环氧化酶-2（COX-2）蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Rea-time PCR）法检测大鼠子宫组织B-Raf,MEK1,MEK2,ERK1,ERK2,c-Jun,COX-2 mRNA表达。结果 与模型组比较,各治疗组大鼠扭体潜伏时间均有所延长,但差异无统计学意义,扭体次数显著减少（P<0.01）;造模第6天,各治疗组症状和体征量化评分无明显差异,造模第12天,与模型组比较,布洛芬组及香延止痛方低剂量组差异无明显统计学意义,香延止痛方中、高剂量组显著降低（P<0.01）;与正常组比较,模型组大鼠p-MEK1/2,p-ERK1/2,B-Raf,c-Jun,COX-2蛋白表达及相应mRNA转录水平均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,布洛芬组及香延止痛方中、高剂量组p-MEK1/2,p-ERK1/2,B-Raf,c-Jun,COX-2蛋白表达及相应mRNA均降低（P<0.05,P<0.01）。结论 温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证PD的作用机制可能与其下调MAPK/ERK信号通路有关。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨疏肝健脾解毒方含药血清对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 通过体外细胞实验研究疏肝健脾解毒方对三阴乳腺癌治疗的有效性和可能机制。方法 实验设置正常血清组、吡柔比星组和低、中、高剂量疏肝健脾解毒方含药血清组。将20只SD大鼠随机分成4组,按照体表面积换算分别予以16.8,8.2,4.05 g·kg^-1的疏肝健脾解毒方药液和等体积的生理盐水灌胃制备血清。取血清配置各组药液后,分别处理MDA-MB-231细胞。利用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）,细胞划痕法和细胞侵袭实验（transwell）法检测其增殖、迁移和侵袭能力,通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测MDA-MB-231细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,蛋白激酶B（Akt）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）蛋白表达水平。结果 与正常血清组比较,3种不同剂量的含药血清组和吡柔比星组均能抑制细胞的增殖（P<0.01）,且中、高剂量含药血清组与吡柔比星组间差异无统计学意义。与正常血清组比较,3种不同剂量的含药血清组和吡柔比星组均能显著减缓划痕的愈合（P<0.01）,但含药血清组较吡柔比星组弱（P<0.05,P<0.01）。与正常血清组比较,3种不同剂量的含药血清组和吡柔比星组均能减少侵入transwell小室下室的细胞数（P<0.01）,且中、高剂量含药血清组与吡柔比星组间差异无统计学意义。Western blot结果显示,与正常血清组比较,经3种不同剂量的含药血清组和吡柔比星组处理48 h后,细胞中的PI3K,Akt和mTOR蛋白表达均降低（P<0.01）。结论 疏肝健脾解毒汤含药血清能抑制三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与下调PI3K/Akt/mTOR信号通路中的蛋白表达有关。     

芹菜素通过PI3K/Akt和MAPK信号通路诱导人大肠癌CL187细胞凋亡

目的 观察芹菜素对人大肠癌CL187细胞增殖和凋亡的作用及相关机制。方法 选择人大肠癌CL187细胞，利用芹菜素（0、30、45、60 mg·L^-1）进行干预后，采用噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成实验检测芹菜素对CL187细胞的增殖作用；Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测芹菜素对CL187细胞胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）观察芹菜素对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中Akt、磷酸化（p）-Akt及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达的影响。结果 与空白组比较，芹菜素组细胞存活率显著降低，细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01）；与空白组比较，芹菜素组细胞克隆数和克隆形成率显著降低，克隆形成抑制率显著升高（P<0.01）；不同浓度芹菜素干预CL187细胞48 h，与空白组比较，在荧光显微镜下可观察到细胞核固缩，染色质凝聚，细胞荧光反应增强等典型的细胞凋亡特征；与空白组比较，芹菜素组（45、60 mg·L^-1）抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平显著降低（P<0.01），芹菜素组促凋亡基因Bax和Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，芹菜素组促凋亡蛋白Caspase-3蛋白表达水平明显上调（P<0.05，P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）促凋亡蛋白Bax蛋白表达显著上调（P<0.01），芹菜素组抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显下调（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，芹菜素组（60 mg·L^-1）Akt蛋白表达显著下调（P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达显著下调（P<0.01），芹菜素组JNK、p-JNK蛋白表达明显上调（P<0.05，P<0.01），芹菜素组（60 mg·L^-1） p38 MAPK蛋白表达明显上调（P<0.05），芹菜素组p-p38 MAPK蛋白表达显著上调（P<0.01），芹菜素组p-Akt/Akt明显降低（P<0.05，P<0.01），芹菜素组p-ERK1/2/ERK1/2显著降低（P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-JNK/JNK明显升高（P<0.05，P<0.01），芹菜素组p-p38 MAPK/p38 MAPK显著升高（P<0.05，P<0.01）。结论 芹菜素可抑制大肠癌CL187细胞增殖并促进细胞凋亡，其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和调控MAPK信号通路相关蛋白的表达有关。     

基于AMPK/Sirt1信号通路探讨身痛逐瘀汤含药血清对膝骨性关节炎大鼠软骨细胞的保护作用

目的 研究身痛逐瘀汤含药血清对膝骨关节炎（KOA）大鼠软骨细胞氧化应激及凋亡的保护作用。方法 50只雄性大鼠分别灌胃给予生理盐水、身痛逐瘀汤低、中、高剂量（1.73、3.46、6.92 g·kg^-1）和硫酸氨基葡萄糖（0.3 g·kg^-1）,连续给药2周后收集血清。构建KOA模型,分离软骨细胞,随机分为正常组、模型组、身痛逐瘀汤含药血清低、中、高剂量组及硫酸氨基葡萄糖组。软骨细胞培养过程中添加磷酸腺苷（AMP）依赖的蛋白激酶（AMPK）抑制剂Compound C（10 μmol·L^-1）,分为正常组、模型组、身痛逐瘀汤含药血清组、Compound C+身痛逐瘀汤含药血清组。5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EdU）染色检测细胞增殖;原位末端标记法（TUNEL）测定凋亡;DCFH-DA探针检测活性氧（ROS）水平;比色法测定谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、MMP-13、胶原酶Ⅱ型（Col Ⅱ）和聚集蛋白聚糖（Aggrecan）mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Weatern blot）检测磷酸化（p）-AMPK及沉默信息调节因子1（Sirt1）蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组软骨细胞增殖率、GSH活性、Col Ⅱ与Aggrecan mRNA表达、p-AMPK和Sirt1蛋白水平显著降低（P<0.01）,而ROS水平、MDA含量、TUNEL阳性细胞率、MMP-3与MMP-13 mRNA表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,身痛逐瘀汤含药血清能提高KOA大鼠软骨细胞中EdU阳性细胞数、GSH活性、Col Ⅱ和Aggrecan mRNA表达水平、p-AMPK和Sirt1蛋白水平（P<0.05,P<0.01）,而TUNEL阳性细胞率、ROS水平、MDA含量、MMP-3和MMP-13 mRNA表达水平则明显降低（P<0.05,P<0.01）。与身痛逐瘀汤含药血清组比较,Compound C+身痛逐瘀汤含药血清组细胞p-AMPK和Sirt1蛋白表达、GSH活性、Col Ⅱ和Aggrecan mRNA水平明显降低（P<0.01）,TUNEL阳性细胞率、ROS水平、MDA含量、MMP-3和MMP-13 mRNA水平显著升高（P<0.01）。结论 身痛逐瘀汤含药血清能减弱KOA大鼠软骨细胞氧化损伤,降低细胞凋亡,其保护作用可能与激活AMPK/Sirt1信号通路有关。     

当归芍药散含药血清调控UPP途径对Aβ1-40损伤PC12细胞的保护作用及机制

目的 探讨当归芍药散（DSS）含药血清对β淀粉样蛋白（Aβ）_1-40损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞的保护作用及对泛素-蛋白酶体途径（UPP）的调控作用机制。方法 采用Aβ_1-40干预PC12细胞制备损伤模型。实验分为空白组、模型组、DSS含药血清高、中、低剂量组（10%、5%、2.5%）。细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞Aβ和磷酸化（p）-Tau蛋白含量,免疫荧光细胞化学（ICC）标记UPP重要靶点泛素（Ub）、泛素连接酶E3（E3）、26S蛋白酶体、泛素羧基端水解酶1（UCHL1）和UCHL3蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Ub、E3、26S、UCHL1、UCHL3 mRNA和蛋白的表达。结果 根据CCK-8实验结果,筛选5 μmol·L^-1、48 h为PC12细胞损伤最佳造模条件。与空白组比较,模型组细胞存活率降低（P<0.05）、凋亡率升高（P<0.05）,Aβ及p-Tau表达升高（P<0.05）,Ub蛋白及mRNA表达升高,26S、E3、UCHL1+3蛋白及mRNA表达降低（P<0.05）。与模型组比较,DSS中剂量组细胞存活率升高（P<0.05）;DSS各剂量组细胞凋亡率下降（P<0.05）;DSS各剂量组Aβ含量降低（P<0.05）,DSS高、中剂量组p-Tau 含量降低（P<0.05）;DSS各剂量组Ub mRNA表达降低（P<0.05）,DSS各剂量组26S mRNA表达升高（P<0.05）,DSS中剂量组UCHL1 mRNA表达升高（P<0.05）,DSS高、中剂量组E3和UCHL 3mRNA表达升高（P<0.05）;DSS各剂量组Ub蛋白表达降低,DSS高、中剂量组26S、E3、UCHL1+3蛋白表达升高,以DSS中剂量效果最佳。结论 DSS含药血清可提高细胞存活率、降低细胞凋亡率、清除Aβ和p-Tau蛋白沉积,对Aβ_1-40损伤PC12细胞有保护作用,其作用可能是通过调控UPP降低Ub表达及升高26S、E3、UCHL1及UCHL3表达来发挥。     

基于NLRP3/Caspase-1信号通路探讨黄连温胆汤改善HepG2细胞胰岛素抵抗的作用机制

目的 探究黄连温胆汤含药血清对胰岛素抵抗体外模型细胞焦亡的作用及机制。方法 设置黄连温胆汤含药血清组和空白血清组，将SD大鼠随机分为2组，按照体表面积换算分别予7.8 g·kg^-1·d^-1的黄连温胆汤药液和同体积的生理盐水灌胃，提取并配制空白血清及不同浓度的含药血清；采用棕榈酸钠处理HepG2细胞构建胰岛素抵抗模型，随机分为空白组、模型组、盐酸二甲双胍组、空白血清组、黄连温胆汤含药血清高剂量组、黄连温胆汤含药血清中剂量组、黄连温胆汤含药血清低剂量组，培养24 h后应用1×10^-7 mol·L^-1胰岛素处理各组细胞15 min，收集细胞上清，采用葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法测定各组细胞葡萄糖的含量，并计算葡萄糖消耗量及抑制率，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，筛选黄连温胆汤含药血清最佳剂量。将HepG2细胞随机分为空白组、模型组、黄连温胆汤含药血清组，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）的含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组NOD样受体蛋白3（NLRP3） mRNA和蛋白的表达情况。机制部分将HepG2细胞随机分为空白组、空载体组、NLRP3过表达组、空载体+IR组、空载体+IR+黄连温胆汤含药血清组、NLRP3过表达+IR组、NLRP3过表达+IR+黄连温胆汤含药血清组，GOD-POD法测定各组细胞葡萄糖的含量，并计算葡萄糖消耗量。ELISA检测各组细胞IL-1β、IL-18释放水平；Real-time PCR、Western blot技术检测各组细胞胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、消皮素D（GSDMD）及NLRP3 mRNA及蛋白的表达；免疫荧光技术检测NLRP3、GSDMD和Caspase-1的表达。结果 与空白组比较，模型组葡萄糖消耗量显著下降（P<0.01）；与模型组比较，黄连温胆汤含药血清高剂量组葡萄糖消耗量升高最为显著（P<0.01）。与空白组比较，IR-HepG2细胞IL-1β、IL-18释放水平和NLRP3 mRNA与蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，黄连温胆汤含药血清可明显降低IR-HepG2细胞上清IL-1β、IL-18、NLRP3 mRNA与蛋白的表达（P<0.05，P<0.01）。与空白组、空载体组比较，NLRP3过表达可显著降低细胞葡萄糖消耗量（P<0.01）；与空载体+IR组比较，NLRP3过表达可明显上调IL-1β、IL-18水平和NLRP3、Caspase-1、GSDMD的mRNA及蛋白水平（P<0.05，P<0.01）；与NLRP3+IR组比较，黄连温胆汤含药血清可明显逆转上述指标（P<0.05，P<0.01）。结论 高脂诱导IR-HepG2细胞的胰岛素敏感性与炎症及NLRP3表达密切相关。黄连温胆汤含药血清通过靶向抑制NLRP3/Caspase-1信号通路改善IR-HepG2细胞焦亡，为胰岛素抵抗及2型糖尿病的预防与治疗提供新靶点。     

紫草素通过调节ERK信号通路对子宫肌瘤大鼠的影响

目的 探讨紫草素对子宫肌瘤大鼠的作用及其分子机制。方法 SPF级别SD大鼠60只,雌性,体质量200~250 g,随机分为空白组、模型组、紫草素低、中、高剂量组（5,10,20 mg·kg^-1）和米非司酮组;建立子宫肌瘤大鼠模型,连续给药4周后检测子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度的变化;采用苏木素-伊红（HE）染色观察子宫组织的病理染色变化;采用酶联免疫吸附测定试验（ELISA）检测血清和子宫中雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测子宫组织中ER,PR,磷酸化细胞外调节激酶（p-ERK）和ERK的蛋白水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠的子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度显著升高（P<0.01）;子宫发生畸变,平滑肌细胞局灶性坏死和增生,且伴有中性粒细胞浸润等病理变化;血清ER和PR含量显著升高（P<0.01）;子宫组织ER,PR和p-ERK的蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较,紫草素中剂量组、高剂量组和米非司酮组大鼠的子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度显著降低（P<0.01）;子宫病理变化缓解,且血清ER和PR含量降低,子宫组织ER,PR和p-ERK的蛋白表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。紫草素低剂量组较模型组大鼠子宫湿重、平滑肌层厚度、血清中ER水平,子宫组织PR和p-ERK蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 紫草素可能通过抑制ERK信号活化,从而产生抗子宫肌瘤活性。     

温经通络汤对膝骨关节炎模型小鼠VEGF/VEGFR2/ERK1/2信号通路的影响

目的 探讨温经通络汤改善膝骨关节炎关节（KOA）软骨缺损,延缓关节退变的可能作用机制。方法 采用前交叉韧带切除术（ACLT法）建立KOA模型,实验分为假手术组、模型组、温经通络汤组（高、低剂量）和阳性药组。造模4周后中药组分别予以高、低剂量（80,20 g·kg^-1）的温经通络汤灌胃;阳性药组予以硫酸氨基葡萄糖胶囊（0.29 g·kg^-1）;假手术组与模型组均予等体积生理盐水灌胃。连续干预4周后苏木素-伊红（HE）染色观察软骨组织形态学变化并进行Mankin''s评分;蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测血管内皮生长因子A（VEGFA）,血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）,细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）和血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4（ADAMTS4）蛋白和mRNA的表达。结果 HE染色结果显示与假手术组比较,模型组小鼠Mankin''s评分显著升高（P<0.01）;与模型组比较,药物组均能明显改善造模引起的关节软骨面缺损,Mankin''s评分均有显著降低（P<0.01）,但各给药组间差异无有统计学意义。与假手术组比较,模型组VEGFA,VEGFR2,ERK1/2和ADAMTS4蛋白和mRNA的表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,各给药组可以显著抑制VEGFA和ERK1/2的蛋白表达（P<0.01）,硫酸氨基葡萄糖胶囊组效果要优于温经通络汤低剂量组（P<0.05）,但弱于温经通络汤高剂量组（P<0.01）;硫酸氨基葡萄糖胶囊组可以抑制VEGFR2和ADAMTS4的蛋白表达,作用与温经通络汤低剂量组相当,作用均弱于温经通络汤高剂量组（P<0.05）。结论 温经通络汤可以改善KOA小鼠关节软骨损伤,其作用机制可能与VEGF/VEGFR2/ERK1/2信号通路有关。     

附子理中丸通过调节MAPK信号通路改善顺铂诱导CIPN模型小鼠损伤的作用机制

目的 基于丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路，探讨附子理中丸改善顺铂诱导化疗所致周围神经病变（CIPN）模型小鼠损伤的作用机制。方法 KM雌性小鼠40只，随机分为正常组，模型组，附子理中丸组（3.5 g·kg^-1），阿司匹林组（0.026 g·kg^-1）。每日腹腔注射顺铂（3 mg·kg^-1），连续5 d，制备CIPN模型；造模同时灌胃给予相应药物，连续12 d。观察其一般情况和行为学表现；末次给药后取材，苏木素-伊红（HE）染色观察足掌部皮肤组织病理变化。采用生化学检测血清中超氧化物歧化酶（SOD），过氧化氢（H₂O₂），丙二醛（MDA），一氧化氮（NO）的水平；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肾脏组织中白细胞介素-6（IL-6），白细胞介素-1β（IL-1β），肿瘤坏死因子-α（TNF-α），谷胱甘肽过氧化物酶-3（GPX-3）的含量。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾脏组织中细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）及其磷酸化（p-ERK1/2），p38 MAPK及其磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）的表达水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠足掌部皮肤病理损伤明显，表皮角化过度呈网篮状结构，棘层萎缩，细胞数量减少，细胞内水肿；与模型组比较，附子理中丸组足掌部皮肤组织的病理损伤明显降低。与正常组比较，模型组小鼠体质量、机械痛阈值、热痛阈值显著下降（P<0.01），SOD活性明显降低（P<0.05），H₂O₂，MDA，NO含量显著升高（P<0.01），IL-6，IL-1β，TNF-α表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，附子理中丸组小鼠体质量、机械痛阈值、热痛阈值显著升高（P<0.01），SOD活性明显升高，H₂O₂，MDA和NO含量明显降低（P<0.05），IL-6，IL-1β，TNF-α表达显著降低（P<0.01）；与正常组比较，模型组ERK1/2，p-ERK1/2，p38 MAPK，p-p38 MAPK蛋白表达显著上升（P<0.01）；与模型组比较，附子理中丸组ERK1/2，p-ERK1/2，p38 MAPK，p-p38 MAPK蛋白表达显著下降（P<0.01）。结论 附子理中丸能够改善顺铂诱导CIPN模型小鼠的神经功能损伤，提高小鼠的疼痛阈值，其作用机制可能与调节MAPK信号通路，抑制炎性反应及机体氧化应激水平相关。     

苓桂术甘汤含药血清通过PI3K/Akt信号通路保护H2O2诱导的H9c2细胞损伤

目的 研究苓桂术甘汤含药血清对H₂O₂诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路的关系。方法 采用血清药理学方法，制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清。体外培养H9c2细胞，分为空白组、H₂O₂组、20%空白血清组、20%苓桂术甘汤含药血清组，给予相应药物处理12 h，再加入100 μmol·L^-1 H₂O₂继续培养6 h后进行检测。采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测20%苓桂术甘汤含药血清对H₂O₂诱导的H9c2细胞增殖活性的影响，荧光探针法检测线粒体活性氧（ROS）水平，比色法检测氧化应激标志物丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt mRNA水平，流式细胞术检测细胞凋亡率。加入PI3K抑制剂LY294002后对线粒体ROS、LDH、GSH-Px水平，PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达及细胞凋亡率进行检测。结果 与空白组比较，H₂O₂诱导后细胞活力显著降低（P<0.01），线粒体ROS、MDA及LDH水平显著增加（P<0.01），CAT、GSH-Px水平则显著下降（P<0.01），PI3K、Akt蛋白的磷酸化及mRNA水平明显降低（P<0.05，P<0.01），细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。与H₂O₂组比较，苓桂术甘汤含药血清能够提高H9c2细胞活力，显著降低线粒体ROS、MDA及LDH水平（P<0.01），并显著提高CAT、GSH-Px水平（P<0.01），促进PI3K、Akt的磷酸化及mRNA的表达（P<0.05，P<0.01），显著减少细胞凋亡率（P<0.01）。苓桂术甘汤含药血清与抑制剂LY294002联用后，逆转了苓桂术甘汤含药血清对H9c2细胞的上述作用（P<0.05，P<0.01）。结论 苓桂术甘汤含药血清保护H₂O₂诱导的H9c2细胞损伤可能与调控PI3K/Akt信号通路减轻氧化应激及细胞凋亡有关。     

浅议影响小儿头皮静脉穿刺的因素

头皮静脉穿刺是儿科护士必备的技术，其成功率的高低直接危机患儿的痛苦乃至生命，掌握这门过硬的技术，尽量做到一针见血，是儿科护士的天职，也是衡量合格护士的标准之一。本人从事儿科护理工作已多年，现将这方面的体会做一报告。     

对《伤寒论》与《温疫论》的再思考

通过分析伤寒与温疫的证治特点、《伤寒论》与《温疫论》的篇章结构、张仲景与吴又可所处的时代背景,以及现代医学对出血热与鼠疫的认识,梳理热病证治的发展历史与脉络。     

基于《伤寒论》引发古代伤寒学派思考

《伤寒论》这一中医经典著作,指导临床,疗效显著,活人无数,尤其是对外感热病的发展影响颇深.伤寒学派是以研究或阐述张仲景《伤寒论》辨证论治及理法方药为中心的医学学术群体,该学派学术璀璨,连绵千年.现就以古代此派的形成、发展、争鸣3个阶段进行初步探析,认为其形成于晋唐,发展于宋元,争鸣于明清.     

基于效应的针刺穴位组学研究思考

根据“穴位组学概念”的提出,针对针刺机理进行深入研究。目的在于揭示针刺的生物学基础,阐明针刺的科学性,并对相关针刺处方进行优化,围绕临床针刺治疗手段中的关键技术进行标准化与规范化研究,实现针刺科学机理转化为实际应用,从而更好的服务于临床。     

中药蛇床子的研究进展

概述近年来有关蛇床子的化学成分、药理作用和临床应用和研究进展。     

百年以来《伤寒论》理论研究述评(之二)

从中华人民共和国建立到文化大革命爆发的近20年间,是新时期仲景学说研究队伍的形成———发展期。在这一时期,对《伤寒论》原著的注释和校正工作,揭开了新中国教材编写的序幕;对《伤寒论》中一些有代表性问题或关键性字词的考订,是一个特点;对《伤寒杂病论》方法论的研究,也是这一时期出现的新特点。此外,这一时期,对六经的研究逐渐深入;对方证的研究仍是热门话题;对伤寒方中用药规律的研究出现热潮;对张仲景治疗方法原理的研究开始活跃;比较性研究热度不减;专题性研究渐成趋势。     

百年以来《伤寒论》理论研究述评(之一)

近百年来,公开发表的研究《伤寒论》的学术论文约3万篇,内容涉及张仲景生平事迹、《伤寒论》版本传承、《伤寒论》学术思想和临床应用研究等多个方面。民国时期是近代仲景学术研究的萌芽——发动期,这一时期的文章具有以下时代特点:①期刊和作者群有明显的地域和社团性;②体现了中西医结合的研究方向;③研究空间不断扩大;④学术争鸣空前活跃。     

艾灸足三里对胃黏膜病变的作用机制研究

艾灸足三里在脾胃病的临床疗效肯定,其机制研究也随着现代医学的发展不断完善。大量研究证明,艾灸足三里促进胃黏膜修复的信号传导是通过神经实现的,其作用机制是系统而复杂的,既可以直接调节胃肠内分泌激素的水平,也可以作用于胃黏膜损伤的信号传导途径上。因此,艾灸足三里对于各种原因引起的胃黏膜病变及病变的各个阶段都有一定作用,且作用机制不尽相同。据现有研究,对未来艾灸足三里的机制研究进行展望。     

"软系"疗法的中医探讨

从中医角度探讨“软系”疗法的科学性,探求“软系”疗法疗效显著的原因。     

探讨肝郁的影响

社会各方面压力的增加会引起人们的情志变化，本文利用中医的基本观点和肝的特性，探讨肝气郁结所导致的多种脏器疾病发生的机理，详细探讨肝郁的各种影响提出治疗要兼顾情志。