VEGF受体KDR胞外Ⅴ～Ⅶ区的克隆、单抗制备及KDR在不同来源肿瘤组织中的表达

目的利用制备的血管内皮细胞增殖因子（ＶＥＧＦ）受体ＫＤＲ抗体,通过免疫组化,检测ＫＤＲ在不同来源肿瘤组织中的表达,为探讨ＶＥＧＦ及其受体对肿瘤生长及转移的作用提供可能。方法采用ＲＴＰＣＲ方法,从人胎儿脐静脉内皮细胞克隆ＫＤＲ胞外Ⅴ～Ⅶ区基因片段,在大肠杆菌中表达,并用传统的杂交瘤融合技术制备小鼠ＫＤＲ单克隆抗体。通过组化及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定ＫＤＲ单抗的特异性,最后采用ＳＰ免疫组化法,分别对不同来源的１１５例肿瘤组织及相应正常组织进行了ＫＤＲ表达分析。结果不同来源的肿瘤组织中,ＫＤＲ受体的表达率及强度存在差异,移行上皮来源的膀胱癌１００％表达ＫＤＲ,表达强度最高;乳腺癌及肠道腺癌细胞表达ＫＤＲ次之;肺鳞癌表达最弱。此外,肿瘤组织中不仅血管内皮细胞表达ＫＤＲ受体,且肿瘤细胞、血管平滑肌细胞及某些间质细胞也有ＫＤＲ表达,而相应正常组织中ＫＤＲ表达相对较弱。结论ＶＥＧＦ受体ＫＤＲ不仅表达于肿瘤血管内皮细胞,而且表达于肿瘤细胞,肿瘤细胞表达ＫＤＲ的强度与组织来源有关     

血管内皮生长因子及其受体在大肠癌中的表达

研究血管内皮生长因子及其受体大肠癌中的表达及其临床意义。「方法」应用免疫组化ＳＰ法检测１５５例大肠癌标本ＶＥＧＦ及ＫＤＲ蛋白的表达。分析ＶＥＧＦ和ＫＤＲ与临床病理因素,微血管计数及预后的关系。「结果」ＶＥＧＦ和ＫＤＲ的表达与大肠癌浸润深度、淋巴结转移、血管侵犯、脏脏转移、Ｄｕｋｅｓ’分期密相关,而与组织学分型和肿瘤大小无关。ＶＥＧＦ和ＫＤＲ的表达密切相关。ＶＥＧＦ和ＫＤＲ表达阳性者ＭＶＣ显著高于阴     

胃腺癌的血管内皮细胞生长因子和KDR受体的表达及其临床意义

目的：研究胃腺癌的血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ, ＶＥＧＦ）及其受体 ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ）的表达,并探讨其临床意义。方法：应用免疫组织化学染色法检测ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ的表达,并分析其与６１例胃腺癌临床病理特征之间的关系。结果：胃腺癌组织ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ的阳性表达率分别为５５．９％和３９．３％;其中粘液腺癌和管状腺癌表达率较高（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）,ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ表达率分别为７１．４Ｔ／４２．８％和６１．９％／５２．４％;ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ的阳性表达与ＴＮＭ分期有显著差异（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）,阳性率为Ⅵ＞Ⅲ＞Ⅱ＞Ⅰ期,Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ期的表达率分别为 ８０．０％／５０．０％,６８．２％／４５．５％,４０．０％／３０．０％和３６．８％／３１． ６％;胃腺癌并转移患者,ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ的阳性表达分别为７６．２％和４７．６％,远高于无转移的４５．０％和３５．０％（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）;术后生存期小于１年的ＶＥＧＦ的表达率为６６．７％,明显高于术后生存期１年以上的５２．２％。结论：ＶＥＧＦ是胃腺癌血管生成的正向调     

血管内皮生长因子（VEGF）在恶性肿瘤中的表达及其临床意义

ＶＥＧＦ于１９８３年由Ｓｅｎｇｅｒ等发现 ,分子量３４ ４２ＫＤ ,以二巯键连接的糖蛋白二聚体形式存在 ,是一种对热酸稳定的外分泌蛋白 ,可在健康人体多数组织中检出 ,但表达量甚微。人ＶＥＧＦ是一种多功能细胞生长因子 ,可以形成４种不同长度的多肽 ,称为ＶＥＧＦ２０６、１８９、１６５和１２１。ＶＥＧＦ有三种受体 ,即Ｆｌｔ １、ＫＤＲ和ＦＬＫ ４ ,均有酪氨酸激酶活性。近年来许多研究表明 ,ＶＥＧＦ是内皮细胞的有丝分裂原 ,诱导内皮细胞的生长 ,并且是有效的血管形成促进因子 ,诱导增加血管的通透性 ,与肿瘤生长、浸润、转移的…     

喉粘膜癌前病变和癌变中VEGF、bFGF和KGF的表达分析

目的　探讨血管生成因子在喉癌发生发展中的作用。方法　本文用免疫组织化学和原位杂交方法,观察ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ和ＫＧＦ在喉粘膜不典型增生（ＤＹＳ）及鳞癌（ＳＣＣ）中的表达和分布情况。结果　ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦｍ ＲＮＡ、ＫＧＦ ｍ ＲＮＡ 在ＳＣＣ 中的表达较ＤＹＳ有所增强,其中ＶＥＧＦ不仅在上皮细胞中表达,间质中部分血管内皮细胞及炎性细胞亦表达ＶＥＧＦ;而ｂＦＧＦ、ＫＧＦ的转录仅在ＤＹＳ和ＳＣＣ的间质中出现,上皮细胞未见阳性表达,ｂＦＧＦ、ＫＧＦ阳性反应主要位于血管内皮细胞和成纤维细胞。结论　在喉癌中ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＫＧＦ可能分别通过自分泌或旁分泌方式促进间质中新生血管和间质的形成,直接或间接地影响肿瘤细胞的生长。     

血管内皮生长因子及其受体在结直肠癌中的表达及其意义

目的：探讨血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）及其受体（ＦＬＴ、ＦＬＫ－１）在结直肠癌组织中的表达及其对肿瘤新生血管生成及转移的影响。方法应用免疫组化技术,检测５０例人结直肠癌组织ＶＥＧＦ、ＦＬＴ、ＦＬＫ－１的表达和微血管密度（ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌｓ ｄｅｎｓｉｔｙ,ＭＶＤ）,并分析其与病理分型、分级、浸润深度、淋巴结、淋巴管和血管转移的相关。结果ＶＥＧＦ、ＦＬＴ、ＦＬＫ－１主要表达于癌浸润边缘和坏死组     

携带DT_(390)-VEGF_(165)或DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因的真核表达载体的构建及表达

抑制血管再生可能是治疗实体瘤的有效途径。肿瘤血管生成的主要调控者是血管内皮细胞生长因子(ＶＥＧＦ)。ＶＥＧＦ的 5种异构体中ＶＥＧＦ165是表达丰度最高的异构体 ,ＫＤＲ和Ｆｌｔ 1为ＶＥＧＦ的高亲和受体。1996年Ｓｏｋｅｒ等在各种肿瘤细胞系上发现了仅与ＶＥＧＦ165外显子 7编码的结构域结合的受体 ,即ＶＥＧＦ165Ｒ[1] 。目前将细菌毒素的跨膜结构域和酶性结构域与细胞因子或抗体构成的融合蛋白靶向杀伤各型细胞的研究已有大量报道 ,但这些融合毒素仅对某些类型的肿瘤有效。为扩大癌症治疗范围 ,我们选择ＶＥＧＦ165和ＶＥＧＦｅｘ…     

VEGF的单抗制备及胃癌细胞MGC803表达VEGF的鉴定

目的 从胃癌细胞ＭＧＣ８０３克隆并在体外表达血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）,利用ＶＥＧＦ１２１单克隆抗体对其产物进行鉴定,为进一步明确肿瘤组织中ＶＥＧＦ来源,并以ＶＥＧＦ为靶点治疗奠定基础。方法 用杂交瘤技术制备ＶＥＧＦ１２１单克隆抗体,通过ＥＬＩＳＡ、＾３－ＴｄＲ掺入检测其活性;用ＲＴ－ＰＣＲ从ＭＧＣ８０３细胞克隆ＶＥＧＦ基因,与原核表达载体ＰＧＥＸ２Ｔ重组,大肠杆菌中进行表达,以Ｗｅｓｔｅｒ     

鼻咽癌血管生成与复发转移的关系初探

探讨鼻咽癌血管生成与复发转移的关系。方法采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法对７３例ＮＰＣ石蜡标本组织中的微血管密度及血管内皮细胞生长因子表达进行检测,随访３年,ＮＰＣ复发转移１９例,无复发转移。结果复发转移组的ＭＶＤ及ＶＥＧＦ表达显著高于无复发转移组,ＭＶＤ与ＶＥＧＦ的表达相关。结论ＮＰＣ的ＭＶＤ及ＶＥＧＦ与复发转移密切相关,有可能作为判断肿瘤生物学行为,转移潜能及预后的指标。     

血管内皮生长因子及其受体与骨肉瘤关系的研究进展

血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）是一种序列高度保守、高度特异性的促血管内皮细胞生长因子,广泛分布于人和动物体内的大脑、肾脏、肝脏、脾脏、胰腺和骨骼等组织中,对内皮细胞具有强烈的促有丝分裂作用,刺激血管内皮细胞增殖和血管通透性增加,促进新生血管形成。ＶＥＧＦ通过与血管内皮细胞表面受体（ＶＥＧＦＲ）特异性结合发挥生物学效应。抑制ＶＥＧＦ及ＶＥＧＦＲ的活性可以减缓或阻滞骨肉瘤侵袭和转移。研究表明,ＶＥＧＦ及ＶＥＧＦＲ对肿瘤血管及淋巴管的生成及肿瘤侵袭和转移起重要作用。本文对ＶＥＧＦ及ＶＥＧＦＲ与骨肉瘤血管与淋巴管生成及其侵袭与转移的关系作一综述。     

EXPRESSION OF VEGF RECEPTOR KDR IN DIFFERENT ORIGINATED CARCINOMAS

Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｓｔｈｅｐｒｅｒｅｑｕｉｓｉｔｅｏｆｓｏｌｉｄｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈ．１Ｄｕｒｉｎｇｔｈｅｐｒｏｃｅｓｏｆｔｕｍｏｒｐｒｏｇｒｅｓｉｏｎ，ｔｕｍｏｒｃｅｌｓｃａｎｓｅｃｒｅｔｅｖａｒｉｏｕｓａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｆａｃｔｏｒｓ...     

大肠癌中C-Met VEGF及其受体KDR 的表达与预后的相关性*

目的:探讨C-Met 、VEGF及其受体KDR在大肠癌组织中的表达与预后的关系,为判断大肠癌患者预后提供参考。方法:应用免疫组织化学法检测60例大肠癌标本中C-Met 、VEGF及其受体KDR的表达情况。随访统计5 年生存率。结果:C-Met 、VEGF及其受体KDR在大肠癌组织中的表达阳性率分别为43.3% 、61.7% 及68.3% ;三者在大肠癌组织中的表达与患者的年龄及性别无明显相关（P>0.05）,与肿瘤侵袭深度、是否淋巴结转移及Dukes分期密切相关（P 均<0.05）。 C-Met 、VEGF及KDR阳性者5年生存率分别为42.3% 、43.2% 及51.2% ,阴性者5 年生存率分别为73.5% 、87.0% 及78.9% ,两组差异有统计学意义（P<0.05）。 Cox回归生存分析显示:对于大肠癌患者,VEGF、KDR及C-Met 均是独立危险因素;联合检测VEGF、KDR及C-Met ,是预测大肠癌预后很好的指标。结论:C-Met 、VEGF及其受体KDR在大肠癌患者组织中的表达与大肠癌的发生、发展有关,三者均阳性表达提示患者预后差,可作为评价预后的指标。      

抗KDR胞外Ⅲ区单抗抑制血管内皮细胞增殖的研究

目的研制能够封闭血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR的单克隆抗体,探讨其体外抑制VEGF165诱导的生物学活性。方法以原核表达的KDR胞外Ⅲ区融合蛋白免疫Balb／c小鼠,采用传统杂交瘤技术制备抗KDR胞外Ⅲ区单克隆抗体,采用ELISA和FACS方法鉴定其抗原结合特异性,采用免疫沉淀和[^3H]-TdR掺入的方法分析该单克隆抗体阻断VEGF165刺激内皮细胞表面KDR酪氨酸激酶受体磷酸化,抑制VEGF165岱诱导内皮细胞增殖的活性。结果抗KDR胞外Ⅲ区单抗Ycom1D3不仅能与可溶性KDR结合,亦可与细胞表面表达的KDR结合,并可竞争性抑制VEGF165与可溶性KDR的相互作用,阻断VEGF165刺激内皮细胞表面KDR酪氨酸激酶受体磷酸化,显著抑制由VEGF165诱导脐静脉内皮细胞的增殖。结论抗KDR胞外Ⅲ区单抗Ycom1D3可通过封闭KDR而抑制VEGF活性,在肿瘤及其他血管新生疾病治疗中具有潜在的应用前景。     

KDR activation in astrocytic neoplasms.

BACKGROUND: The development of new capillary networks appears to be necessary for the growth of solid tumors. Tumor angiogenesis is believed to be mediated by soluble factors released from tumor cells that then act on endothelial cells in a paracrine manner. Vascular endothelial growth factor (VEGF) is a prime regulator of normal and tumor angiogenesis as well as vasculogenesis. VEGF is expressed in glioma cells and its receptors (Flt-1 and KDR) are expressed in the same gliomas. The two receptors are tyrosine kinases and have an extracellular domain containing seven immunoglobulin-like loops and a split tyrosine-kinase domain. KDR is a receptor for the various VEGF isoforms and for VEGF-C; Flt-1 is a receptor for the various isoforms. Studies suggest that the VEGF receptors are induced in endothelial cells during tumor angiogenesis. Stimulation of aortic endothelial cells results in receptor tyrosine phosphorylation (receptor activation). In this study the activation state of the KDR receptors was determined in low grade, anaplastic, and high grade gliomas. METHODS: A synthetic tyrosine phosphopeptide was used to raise an antibody that recognizes the phosphorylation state of tyrosine 1054/1059 in the KDR receptor. Western blot analysis was performed on 37 astrocytic neoplasms (7 low grade astrocytomas, 13 anaplastic astrocytomas, and 17 cases of glioblastoma multiforme). RESULTS: Immunoblotting with this antibody found that tyrosines 1054/1059 were phosphorylated constitutively within multiple fresh surgical specimens of glioblastomas (71%) and anaplastic gliomas (15%), but not in low grade gliomas. CONCLUSIONS: The findings of the current study strongly support the hypothesis that the onset of angiogenesis is an important event during the disease progression of gliomas.     

VEGF及其受体KDR在非小细胞肺癌中的表达及与肿瘤血管形成关系

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(KDR)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)血管形成的关系。方法:分别应用免疫组织化学S-P法和原位分子杂交法检测62例NSCLC组织和16例肺的良性瘤样病变组织中的VEGF和KDRmRNA的表达,并对血管进行染色、计数。结果:62例肺癌组织中46例有VEGF的表达(占74·29%),阳性表达位于肿瘤细胞胞膜及胞质;KDR mRNA在49例中有阳性表达(占79·03%),阳性表达位于肿瘤血管内皮细胞、肿瘤细胞胞膜及胞质。VEGF和KDR mRNA的表达与有无淋巴结转移和临床病理分期密切相关;VEGF和KDR mRNA阳性表达组微血管密度明显高于阴性表达组,P<0·01。结论:VEGF和KDR的表达与NSCLC的发生、发展和转移可能密切相关,可作为评估NSCLC患者预后的一项指标。     

VEGF及其受体KDR在垂体腺瘤中的表达与肿瘤血管形成的关系

 目的　探讨血管内皮生长因子(VEGF) 及其受体( KDR) 的表达与垂体腺瘤血管生成的关系。方法　应用免疫组织化学S2P 法检测58 例人垂体腺瘤中的V E GF 及KD R 的表达,并对血管进行染色、计数。结果　其中54 例有VEGF 的表达(占93. 1 %) ,阳性表达主要位于肿瘤细胞胞膜及胞浆; KD R 在47 例中有阳性表达(占81. 0 %) ,阳性表达位于肿瘤血管内皮细胞、肿瘤细胞胞膜及胞浆。VEGF 和KD R 表达与垂体腺瘤的侵袭性密切相关;V E GF 和KD R 高表达组微血管密度明显高于低表达组( P <0. 01) 。结论　VEGF 以旁分泌、自分泌形式协同KDR 促进垂体腺瘤血管的生成,并与垂体腺瘤的侵袭密切相关。     

Molecular mediators of tumor angiogenesis: enhanced expression and activation of vascular endothelial growth factor receptor KDR in primary breast cancer.

The progression of breast cancer growth and its ability to metastasize are associated with the process of angiogenesis. In this study, we examined the protein expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its specific and functional receptor KDR in human breast tissue. We investigated a total of 13 mammary carcinomas, 3 fibroadenomas, 5 specimens with fibrocystic breast disease as well as normal (adjacent to malignant) breast tissue using immunohistochemistry and Western blot analysis. In all carcinomas examined, functional KDR protein was present independent of tumor type, tumor stage and histological grade as demonstrated by tyrosine phosphorylation analysis of KDR. When malignant tissues were compared with their neighboring non-neoplastic regions, activated KDR was found to be expressed to a much higher extent within the malignant tissue samples. In fibroadenomas, KDR was barely detectable, whereas in fibrocystic breast disease KDR expression was variable. Immunostaining of KDR was localized to endothelium and epithelium of mammary ducts in malignant and benign breast tissue, while VEGF immunoreactivity was primarily found in the endothelium and also in tumor cells and macrophages. Our data demonstrate that KDR activation is enhanced in breast cancer in vivo and emphasize the functional role of VEGF and KDR in the development of malignant breast disease.     

血管内皮生长因子及其受体与上皮性卵巢癌发展

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体 (KDR)与上皮性卵巢癌发展的关系。方法　用免疫组化方法检测 4 5例人上皮性卵巢癌中VEGF及KDR的表达 ,分析VEGF及KDR表达与卵巢癌FIGO分期、淋巴结转移及预后的关系。结果　 4 5例上皮性卵巢癌中 ,VEGF、KDR表达阳性率分别为 73.3% (33/ 4 5 )、5 7.8% (2 6 / 4 5 )。Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌VEGF表达阳性率 (94 .4 % ,17/ 18)高于Ⅰ～Ⅱ期卵巢癌 (5 9.3% ,16 / 2 7)。淋巴结转移阳性组中VEGF表达阳性率 (10 0 % ,12 / 12 )高于淋巴结转移阴性组 (16 / 2 6 ,6 1.5 % ) ,(P <0 .0 5 )。VEGF表达阴性者生存率高于VEGF表达阳性者 (P =0 .0 4 7)。不同组织学类型上皮性卵巢癌中VEGF表达无明显差异。KDR表达与卵巢癌分期、淋巴转移及预后无关。结论　VEGF与上皮性卵巢癌发展有关。     

VEGF及其受体Flt-1、KDR在鼻咽癌组织中的表达及意义

背景与目的:VEGF及其受体Flt-1、KDR在肿瘤血管生成及肿瘤进展中发挥关键作用。本研究探讨鼻咽癌组织中VEGF、Flt-1和KDR表达与鼻咽癌患者临床特征及预后的关系。方法:用免疫组织化学的方法检测127例鼻咽癌标本中VEGF、Flt-1和KDR的表达情况,用SPSS10.0软件分析这三种蛋白表达的相关性、与临床特征的关系以及对患者总生存的影响。结果:VEGF、Flt-1和KDR分别表达于66.9%(85/127)、90.6%(115/127)和88.2%(112/127)的鼻咽癌组织。鼻咽癌组织中VEGF表达与Flt-1和KDR表达呈正相关(r=0.292,P<0.01;r=0.287,P<0.01),Flt-1表达与KDR表达呈正相关(r=0.723,P<0.01)。VEGF蛋白的表达与原发肿瘤的侵犯范围、淋巴结转移、临床分期有关(P=0.04,P<0.01,P=0.02),KDR蛋白表达也与原发肿瘤的侵犯范围有关(P=0.03);三种蛋白表达均与肿瘤局部复发和/或远处转移(P<0.01,P<0.01,P<0.01)、总生存不佳有关(P<0.01,P<0.01,P<0.03)。Cox多因素相关分析显示,年龄>50岁和VEGF阳性为不良预后因素(P<0.01,P<0.01)。结论:VEGF及其受体Flt-1、KDR在鼻咽癌中广泛表达,与鼻咽癌患者的临床特征和预后关系密切。