福建省鼠间肾综合征出血热流行病学调查

目的掌握福建省鼠间肾综合征出血热(HFRS)流行情况和疫源地分布,为控制HFRS的流行提供参考。方法根据福建省啮齿动物地理区划以及肾综合征出血热病例分布状况,选择18个县、市作为调查地区,用笼夜法捕鼠采集血清标本,用双抗原夹心ELISA法检测血清中抗汉坦病毒(Hantan virus,HV)抗体,分析鼠间HFRS流行情况。结果各个地区HV宿主动物种类分布不均衡,但以褐家鼠为主要宿主动物,其次为黄胸鼠,野外鼠密度较低。褐家鼠抗体阳性率最高,达到9.89%。各个地理区划中II区即闽东山地抗体阳性率最高,为9.32%,而III区即闽中、闽西南山地抗体阳性率最低,为2.74%。调查点中泰宁、周宁、福鼎、厦门、福清、莆田、平潭等地鼠血清HV抗体阳性率均超过10%。而上杭、漳平、漳浦、安溪等地鼠血清均未检出HV抗体。结论福建省HFRS的疫源地以家鼠型疫区为主,降低家鼠尤其是褐家鼠密度,可控制本病在福建的扩大流行。     

天津某医院严重急性呼吸综合征暴发期间血清流行病学调查

目的 研究本院严重SARS暴发流行后，疫源地不同人群血清SARS冠状病毒（SARS-CoV）抗体水平及其产生和变化规律；探讨人群SARS-CoV隐性感染和IgG抗体的保护作用。方法 采用血清流行病学法，联合运用ELISA和免疫荧光试验（IFA），调查疫情暴发流行期间及流行后，疫源地内非SARS人群血清抗体水平变化；定性研究SARS患者病后6周内IgM、IgG抗体产生和变化规律；动态观察SARS患者康复期82周内IgG抗体水平变化规律。结果 各100例疫源地一般人群和非疫源地对照人群血清SARS-CoV IgG抗体ELISA抽样检测均为阴性；487例SARS高危人群血清SARS-CoV IgG抗体ELISA检测阳性率为0．41％，经IFA复核后均为阴性；疫源地内非SARS人群IgG抗体A值水平在疫情流行后高于流行期间，差异有统计学意义（P〈0．05）；SARS患者病后1～6周血清抗体IgM和IgG的阳性检出率分别为7．7％、40．0％、57．8％、88．2％、76．6％、57．1％和0、23．1％、48．4％、65．4％、77．8％、100．0％；SARS患者康复期血清IgG抗体A值逐渐增高，病后第22周达到高峰，此后缓慢下降，第82周时仍维持较高水平，下降趋势减缓。结论 SARS可能不存在隐性感染者；绝大多数SARS患者在急性期或恢复早期的血清中存在IgM抗体，其出现较早，消失也较快，抗体IgG出现稍晚，但在血清中存在时间较长，达到高峰后消退缓慢，提示该抗体可能具有保护作用。     

汉坦病毒M、S基因分型及种系进化分析

摘要：目的 探讨湖南省肾综合征出血热（HFRS）患者及宿主动物黑线姬鼠携带汉坦病毒的基因型别及序列特征。方法 应用免疫荧光试验（IFA）对鼠肺标本进行粗筛,提取IFA阳性鼠肺组织及HFRS患者血清总RNA,设计汉坦病毒M、S基因特异性引物,应用RT-PCR技术进行扩增,回收阳性扩增产物并克隆到pMD-18 T载体进行序列测定,将所测序列与国内外HTNV及SEOV病毒株序列进行核苷酸同源性分析,应用MEGA5.0.4软件构建M、S基因种系进化树。结果 IFA阳性鼠肺标本荧光显微镜下可见散在的黄绿色针尖大小样颗粒; RT-PCR法扩增汉坦病毒M、S基因,HTNV通用引物可见490bp与593bp的阳性条带;阳性产物进一步应用HTNV分型引物进行M、S基因检测,分别扩增出一约242bp与276bp大小的条带;SEO 型特异性M、S基因片段内侧引物扩增反应均为阴性;编号为Hunan01、Hunan02、Hunan03的M、S基因序列与HTNV型84FLi株、SN7株的同源性最高,与SEOV型Gou3株的同源性最低;种系进化分析表明,Hunan01、Hunan02、Hunan03为汉坦病毒H5亚型。结论 湖南省存在HTNV型感染病例与宿主动物,基因分型技术能进一步对病毒亚型进行鉴定。     

2007年云南省汉坦病毒宿主动物及其基因分型研究

目的掌握云南省肾综合征出血热（HFRS）流行病学特点、汉坦病毒（HV）宿主动物及基因型分布,为防治提供科学依据。方法收集2007年全省HFRS疫情资料;居民区采用笼夜法捕鼠,野外采用夹夜法捕鼠;鼠肺组织标本用直接免疫荧光法检测HV抗原,用RT-PCR法检测HV核酸及分型。结果2007年全省共报告HFRS病例14例,死亡1例,年发病率为0.02/10万,病死率为7.14%。主要发病地区为大理和楚雄州。2007年在泸西、五华、祥云、玉龙、古城、河口、麻栗坡、泸水和隆阳区（县）捕获鼠类21种1 390只,其中居民区以黄胸鼠和褐家鼠为优势鼠种,野外以大绒鼠、中华姬鼠为优势鼠种。鼠间HV总带病毒率为4.17%,阳性鼠种为大林姬鼠、褐家鼠、大绒鼠、高山姬鼠、黄胸鼠、中华姬鼠和卡氏小鼠,带病毒率依次为9.09%（1/11）,7.52%（10/133）,7.35%（23/313）,5.71%（2/35）,2.57%（13/505）,2.38%（2/84）,2.22%（2/9）;用RT-PCR法检测HV抗原阳性鼠肺标本58份,阳性29份,其中汉城型阳性16份,汉滩型阳性13份;汉城型主要带毒鼠种为褐家鼠和黄胸鼠,汉滩型带毒鼠种主要为大绒鼠、高山姬鼠和中华姬鼠。结论调查地区广泛存在以褐家鼠为主要传染源的家鼠型HFRS疫源地,也存在以大绒鼠为主要传染源的野鼠型HFRS疫源地;存在汉城型和汉滩型病毒的流行,汉滩型病毒具有多种宿主动物的特点,在国内具有特殊性。     

河北省肾综合征出血热疫区鼠携带汉坦病毒基因特征分析北大核心CSCD

目的了解河北省肾综合征出血热(HFRS)疫区鼠携带汉坦病毒(HV)的基因特征。方法收集2019年河北省各地市捕获的鼠类标本,无菌下解剖取肺组织,应用Real-time PCR对阳性鼠标本进行HV G2片段扩增并测序,运用DNASTAR 7.1软件包对核苷酸序列进行同源性比较,采用MEGA 5.22软件构建系统发生树分析。结果共收集951份鼠肺标本,经Real-time PCR检测HV阳性标本共24份,均为汉城型(SEO)。对12份标本进行序列测定,鼠肺标本病毒间变异不大,同源性达97.3%~100.0%。新测序株与以往测序株比较同源性为97.3%~99.7%。系统发生树分析显示12份标本均为S3亚型HV。结论河北省HFRS疫区HV基因型以SEO型为主,亚型为S3亚型,同亚型病毒基因高度同源,无明显变异,遗传物质具有区域稳定性特征。     

河北省肾综合征出血热疫区鼠携带汉坦病毒基因特征分析

目的了解河北省肾综合征出血热(HFRS)疫区鼠携带汉坦病毒(HV)的基因特征。方法收集2019年河北省各地市捕获的鼠类标本,无菌下解剖取肺组织,应用Real-time PCR对阳性鼠标本进行HV G2片段扩增并测序,运用DNASTAR 7.1软件包对核苷酸序列进行同源性比较,采用MEGA 5.22软件构建系统发生树分析。结果共收集951份鼠肺标本,经Real-time PCR检测HV阳性标本共24份,均为汉城型(SEO)。对12份标本进行序列测定,鼠肺标本病毒间变异不大,同源性达97.3%～100.0%。新测序株与以往测序株比较同源性为97.3%～99.7%。系统发生树分析显示12份标本均为S3亚型HV。结论河北省HFRS疫区HV基因型以SEO型为主,亚型为S3亚型,同亚型病毒基因高度同源,无明显变异,遗传物质具有区域稳定性特征。     

汉坦病毒重组核蛋白抗体用于鼠肺组织病毒抗原的检测

目的纯化汉坦病毒(HV)SEO型L99株重组核蛋白(rNP),制备抗体用于鼠肺组织HV抗原的检测。方法重组菌株E.coliBL21(DE3)/pET32a-L99S经IPTG诱导表达rNP,采用Ni亲和层析方法纯化,纯化蛋白免疫日本大耳白兔,获取抗血清用于间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺组织的HV抗原;并与病人混合血清作为一抗的IFA结果进行比较,部分标本进一步用RT-PCR法进行验证。结果rNP表达量占菌体总蛋白的52.2%,纯化蛋白的总回收率为22.9%;纯化蛋白Western blot分析为单带,纯度达95%以上,用其制备多克隆抗体滴度达1∶512000。IFA检测59份鼠肺标本,用兔rNP抗体和病人混合血清作为一抗其阳性率分别为23.7%和16.9%;两者结果不一致的6份鼠肺经RT-PCR检测HV核酸,均与兔rNP抗体的IFA结果相一致。结论采用rNP抗体进行IFA检测,可显著地提高鼠类HV感染监测的准确性,值得推广使用。     

2013年云南省肾综合征出血热监测分析

目的监测2013年云南省肾综合征出血热(HFRS)人间疫情和宿主动物,分析流行病学特点,为制定防治策略提供科学依据。方法居民区用鼠笼法、野外用鼠夹法,进行鼠密度监测,采集人血清以及宿主动物肺脏组织,用免疫荧光法进行汉坦病毒(HV)抗原或抗体检查,采用Spss 17.0软件分析数据。结果 2013年云南省共报告HFRS病例95例,其中实验室诊断81例,临床诊断14例,发病率0.20/10万;发病季节以5月和12月为主,发病人群以中老年男性农民为主;泸西县、祥云县和大姚县3个监测点秋季人群HV阳性率分别为14.15%、16.00%和3.00%,差异有统计学意义(χ2=8.37,P0.05);3个监测点共捕获12种424只小兽,其中居民区褐家鼠为优势鼠种,野外大绒鼠和高山姬鼠为优势鼠种,宿主动物HV阳性率为13.21%(56/424),阳性宿主动物为褐家鼠、黄胸鼠、大绒鼠、高山姬鼠、中华姬鼠、锡金小鼠、短尾鼩和灰麝鼩。结论滇西地区为HFRS主要发病地区,秋季居民区HFRS的防控更为重要,监测点广泛存在以褐家鼠为主要传染源的家鼠型HFRS疫源地,还存在以高山姬鼠和中华姬鼠为主要传染源的野鼠型HFRS疫源地,食虫动物短尾鼩和灰麝鼩也发现HV感染。     

山东省沂源县无形体病实验室调查分析

目的通过山东省沂源县人粒细胞无形体及其他立克次体病疫源地小样本试点调查,为全面深入开展立克次体病调查提供数据支持.方法对2004、2005、2006年该地区调查收集的26例可疑患者标本进行血清IgG抗体及PCR回顾性检测分析.2007年7月进一步现场流行病学调查,采集当地48名正常人、10只山羊及8只家狗的血标本以及170只蜱标本进行血清学及分子生物学检测分析.结果 26例发热患者中,8例明确诊断为人粒细胞无形体感染,6例为可疑病例.当地正常人群人粒细胞无形体IgG抗体阳性率为26.7%,人单核细胞埃立克体IgG抗体阳性率为1.8%.检测的10份家养黑山羊血清标本9份阳性.8份家狗标本中,人粒细胞无形体抗体7份阳性,而人单核细胞埃立克体血清抗体全部阳性.来自发热患者、山羊及媒介蜱标本PCR扩增16S rRNA及部分序列分析结果显示高度同源性(100%).结论沂源县农业人群普遍存在人粒细胞无形体、人单核细胞埃立克体及其他立克次体隐性感染状况.当地主要优势蜱种为长角血蜱及嗜群血蜱,两者可能是人粒细胞无形体的重要传播媒介.黑山羊可能是人粒细胞无形体的重要动物宿主,而家狗可能是人粒细胞无形体及人单核细胞埃立克体两者兼顾的重要动物宿主.     

白城市洮北区首例肾综合征出血热流行病学调查

目的：核实诊断肾综合征出血热(HFRS)临床病例、疫情，确认疫源地，查找疫源动物。方法：运用了流行病学横断面调查方法。结果：在疫点内调查30人，其中5人HFRS IgG抗体阳性，隐性感染率为16．67％。捕到褐家鼠19只，其中2只HFRS病毒抗原阳性，带毒率为10．53％。结论证实白城市HRFS 临床病例及疫情存在，可以确认家鼠型HFRS疫源地。     

肾综合征出血热患者血清中汉坦病毒的检测及其序列分析

目的　为了进一步探讨RT -PCR用于HFRS临床标本中病毒基因检测的可行性及陕西西安地区近年主要流行汉坦病毒 (HV)毒株的分子流行病学特点。方法　本研究设计并合成了两套分别互补于HVM基因片段和S基因片段的引物 ,建立了检测HFRS患者临床血清标本中HV基因的RT -nestedPCR方法 ,并对扩增的部分HV靶基因进行了测序分析和比较。结果　 119份HFRS病人血清 (经临床和IFA确诊 )经用S基因片段引物的RT -nestedPCR检测 ,阳性率分别为 :6 0 .5 % (<1w) ,34.1% (1～ 2w) ,4% (2～ 3w) ,0 % (>3w) ,31份HFRS急性期病人血清用M基因片段引物的RT -nestedPCR检测 ,仅 12份阳性 ,阳性率 40 %。结论　表明S基因片段引物的扩增效果优于M基因片段引物。 6份S基因片段引物扩增产物的测序结果显示 ,陕西西安地区HFRS感染的主要毒株为汉滩型 ,将PCR扩增的 6个靶基因序列与 76 - 118株S基因片段相应的核苷酸序列进行分析比较 ,同源性为 87.2 %～ 96 .0 % ;其推导的氨基酸序列与 76 - 118株核衣壳蛋白相应的氨基酸序列比较 ,同源性为 89.0 %～ 96 .0 %。     

云南省恙虫病与肾综合征出血热混合感染的诊断及分析

目的 调查云南省不明原因发热患者中是否存在恙虫病与肾综合征出血热混合感染病例.方法 采用间接免疫荧光法和胶体金法检测不明原因发热患者血清中的恙虫病东方体(OT)抗体及肾综合征出血热(HFRS)病毒抗体,用巢式PCR扩增患者血液中的OT 基因sta56片断与汉坦病毒(HV)基因L片断.结果 79例患者中,实验室确诊HFRS 5例,恙虫病3例,HFRS与恙虫病混合感染4例;巢式PCR检测到HV L片断核酸2例(DLR2和DLR6), 序列分析两者间的同源性100%,DLR2与老挝汉城病毒L0199株核苷酸序列同源性最高为94.6%, 与中国汉城病毒L99株的同源性80.5%, 与云南汉坦病毒YN06-256的同源性69.8%.结论 首次证实云南省存在恙虫病与肾综合征出血热混合感染病例,其HFRS病原体遗传进化关系与老挝汉城病毒L0199株密切相关.     

北京昌平鼠间汉坦病毒感染时间动态变化的调查

目的 了解鼠类自然感染汉坦病毒（HV）时间动态变化。方法 选取北京昌平南口镇某部驻地，从2002年8月至2004年5月采用夹夜法捕获鼠形动物。针对汉坦病毒M基因部分片段设计SEOV和HTNV型特异性引物，应用RT-PCR法检测宿主肺组织中携带HV-RNA及其型别情况；应用ELISA法和IFAT接IFAT检测IgG抗体。利用SPSS软件分析宿主动物HV感染的时间动态特征。结果 共捕获啮齿动物296只，平均感染率11％。整个调查周期总体宿主种群密度波动不大，局部小生境（养殖场）种群波动明显。优势宿主褐家鼠平均种群密度与其感染率变化之间具相关性（r=0．594，P=0．023），养殖场褐家鼠密度与HV感染率之间相关性极显著（r=0．746。P=0．008）。褐家鼠性比和阳性率变化之间不具统计学意义相关性（r=0．541，P=0．086）。成幼比和阳性率变化之间则具显著相关性（r=0．697,P=0．046）。结论 北京昌平鼠间汉坦病毒感染长期持续存在，其感染率与种群密度随时问呈现动态变化，两者之间具有相关性，并因生境而异。优势宿主种群结构特征及其动态变化与HV感染也存在较为复杂的关系。     

2007年浙江丽水地区汉坦病毒的分离与型别鉴定

目的对2007年从浙江省丽水地区肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)疫区鼠肺分离的汉坦病毒进行型别鉴定和分子生物学特性研究。方法将汉坦病毒抗原阳性的鼠肺标本接种Vero-E6细胞,分离汉坦病毒。提取病毒总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒S基因全片段,克隆入质粒载体,进行核苷酸序列测定及分析,应用DNA STAR软件分析比较,确定病毒型别。结果从疫区7份阳性鼠肺中分离到2株汉坦病毒,经汉坦病毒单克隆直接荧光血清检查和基因序列测定,结果为汉滩型(HTN)病毒,2株病毒与国际标准株76-118(HTN型)和80-39(SEO型)S片段核苷酸的同源性分别为84.7%、84.6%和64.2%、64.0%。结论浙江省丽水地区可能存在以HTN型病毒为主的肾综合征出血热自然疫源地。     

原位分子杂交检测厩真厉螨经叮刺传播姬鼠型和家鼠型HFRSV的研究

目的用分子生物学方法进一步证明革螨在传播两型HFRS中的作用。方法将叮刺感染姬鼠型（76—118株）HFRSV乳鼠后第10天厩真厉螨270只和家鼠型（UR株）HFRSV后第10天厩真后螨200余只,分别制成组织悬液接种正常乳鼠,用Dig标记HFRSVCDNA探针原位分子杂交检测接种后第9天鼠肺;将叮刺感染乳鼠后螨在适宜条件下饲养至100天以上,分别叮刺4～5日龄正常乳鼠,于第3天取鼠肺冰冻切片,经Dig标记HFRSVCDNA探针原位分子杂交检测。结果叮刺76一118株病毒感染乳鼠螨悬液接种4只乳鼠,3只阳性,UR株接种6只,全部阳性;76—118株组饲养至132天,UR株组102天的螨叮刺正常乳鼠后,也从鼠肺中检出病毒RNA。结论首次用分子生物学方法证明该螨可通过叮刺获得姬鼠型和家鼠型HFRSV,螨群体不但维持76—118株病毒132天以上、UR株102天以上,而且均能经叮刘传播,说明此螨能作为姬鼠型和家鼠型HFRSV的适宜传播媒介和贮存宿主,这一发现为我国的HFRS疫区保存和演变提供了一定的实验依据,有流行病学意义;原位分子杂交可缩短用敏感动物分离革螨体内HFRSV的时间,可用于革螨等媒介昆虫传HFRSV的实验研究和流行病学调查。     

Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1血清型特异性单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备并鉴定Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1(DV2-NS1)的血清型特异性单克隆抗体。方法以具有良好抗原性的重组DV2-NS1蛋白与灭活的Ⅱ型登革病毒(DV2)混合免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞经间接ELISA法、IFA法筛选,ELISA、IFA及WesternBlot对mAbs的类型及亚类、交叉实验及特异性等进行鉴定。结果免疫的Balb/c小鼠经多次融合筛选,共获得14株血清型特异性抗DV2-NS1蛋白的mAbs,其亚类测定两株为IgG2b,余均为IgG1。ELISA和免疫印迹显示这些mAbs与重组DV2-NS1蛋白和DV2抗原均特异性结合,IFA结果显示这14株单抗特异结合Ⅱ型登革病毒,与其它3型登革病毒无交叉。结论成功获得了特异性针对DV2-NS1蛋白的mAb,为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及研制早期诊断试剂奠定基础。     

新疆和田地区人群血清抗HEV水平调查

目的 调查新疆维吾尔族自治区(新疆)和田地区在1986-1989年戊型肝炎流行后,目前人群中血清抗戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)特异性抗体水平及当地HEV感染的状态.方法 应用酶联免疫方法检测抗HEV IgG和抗HEVIgM,检测新疆和田地区1～90岁健康人血清3070例,对抗HEV IgM...     

Comment on Jameson et al.: Prevalence of Antibodies against Hantaviruses in Serum and Saliva of Adults Living or Working on Farms in Yorkshire,United Kingdom

This British hantavirus IgG prevalence study, aimed at 119 asymptomatic farmers in England, and using indirect immunofluorescence assay (IFA) as screening technique, concluded that rat-transmitted Seoul virus (SEOV) might be the main suspect as hantaviral pathogen in the UK. Exactly the same conclusion, using the same IFA screening technique, resulted from a 1994 serosurvey in the same country, and in 627 clinical cases plus 100 healthy controls. SEOV-positive study subjects were also mainly farmers with heavy rat-exposure, but residing in Northern-Ireland, a region where all other known rodent reservoirs for pathogenic hantaviruses are known to be absent, except the wild rat. A rodent capture action in and around the farms of eight seropositives confirmed SEOV seropositivity in 21.6% of 51 rats. All SEOV seropositives were patients, hospitalized with an acute feverish condition, a majority of which having the clinical picture of hantavirus-induced nephropathy, known as hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS). Leptospirosis, often mimicking perfectly HFRS, was serologically excluded. Thus, SEOV was established as a human hantaviral pathogen in the UK and in Europe 20 years ago.