miR-204-5p对卵巢早衰大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的调控机制

【摘要】目的 探讨微小RNA（miR）-204-5p对卵巢早衰（POF）大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及调控机制。方法 体外分离大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,将含有miR-204-5p基因反义寡核苷酸序列的重组慢病毒载体转入BMSCs,获得稳定转染LV-rno-ASO-miR-204-5p的BMSCs细胞。选取动情周期正常的75只SPF级雌性Wistar大鼠,随机分为对照组、POF组、BMSCs组、shRNA组、shRNA-BMSCs组,每组各15只。除对照组外,均采用腹腔注射顺铂法制备POF模型。shRNA组、BMSCs组及shRNA-BMSCs组分别双侧卵巢注射慢病毒载体、BMSCs细胞及稳定转染慢病毒载体的BMSCs细胞,对照组和POF组注射生理盐水。观察各组动情周期恢复情况,比较各组干预前、干预28 d后血清促卵泡生成素（FSH）、雌二醇（E2）水平,观察卵巢组织形态、卵泡颗粒细胞凋亡率,检测卵巢组织miR-204-5p mRNA及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA和蛋白表达。结果 干预后,POF组大鼠动情周期未恢复;BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组动情周期均有所恢复,其中shRNA-BMSCs组动情周期恢复率均高于BMSCs组及shRNA组（P＜0.05）。病理染色显示,BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量均多于POF组,但仍少于对照组（P＜0.05）;shRNA-BMSCs组上述各级卵泡数量多于BMSCs组和shRNA组（P＜0.05）。BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组血清FSH水平、卵巢颗粒细胞凋亡率、卵巢组织中miR-204-5p mRNA及MAPK、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量均低于POF组,且shRNA-BMSCs组低于BMSCs组和shRNA组,但仍高于对照组（P＜0.05）;BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组血清E2水平及卵巢组织Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量均高于POF组,且shRNA-BMSCs组高于BMSCs组和shRNA组,但仍低于对照组（P＜0.05）。shRNA组与BMSCs组比较,卵巢组织miR-204-5p mRNA相对表达量较低（P＜0.05）,各级卵泡数量、血清FSH、E2水平、卵巢颗粒细胞凋亡率及卵巢组织MAPK、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 下调miR-204-5p表达可增强BMSCs对POF大鼠卵巢结构和功能的改善作用,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,可能与下调MAPK、Bcl-2、Bax、Caspase-3基因和蛋白表达有关。     

Foxo3a转录因子参与卵母细胞的凋亡

目的 进一步探讨新生大鼠卵巢中Foxo3a（forkhead box group O）转录因子参与卵母细胞凋亡的调节机制。方法 取出生后1、2、3和4d龄大鼠的卵巢,用免疫组化方法观察Foxo3a、Bim和FasL在卵巢组织中的表达水平以及细胞定位,并且应用TdT介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）技术检测卵巢内卵母细胞的凋亡变化。结果 免疫组化显示Bim和FasL都在新生大鼠部分卵母细胞巢和原始卵泡的卵母细胞核内和胞浆高表达,且阳性率曲线都在2d达到高峰,随后逐渐降低,与TUNEL和Foxo3a的阳性率变化曲线一致。然而Bim和FasL的阳性率都低于Foxo3a的阳性率。结论 Foxo3a可能同时诱导Bim和FasL的表达从而调节卵母细胞的凋亡。     

邻苯二甲酸二乙基己酯体外对大鼠卵巢颗粒细胞Bax和Bcl-2基因表达的影响

【目的】通过对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯（di-2-ethylhexylphthalate,DEHP）染毒,探讨DEHP体外对大鼠卵巢颗粒细胞Bax和Bcl-2基因表达及细胞凋亡的影响。【方法】体外分离和原代培养未成熟大鼠卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP（10、50、nnmol／L）染毒24h。荧光定量PCR法检测Bax和Bcl-2基因mRNA表达水平,Weas[ernblot检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】与对照组比较,大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2基因mRNA和蛋白表达下降（P〈0．05）,Bax基因mRNA和蛋F1表达增加（P〈0．05）,同时细胞凋亡率增加（P〈0．05）,呈浓度依赖关系。【结论】DEHP可通过下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能。     

全脑缺血再灌注损伤中JNK及Bim蛋白的表达

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌注氨基末端激酶或应激活化激酶（p—JNK）及与Bcl-2相互作用的细胞死亡调解子（Bim）蛋白表达的变化。方法 构建大鼠全脑缺血再灌注模型，采用TUNEL法原位检测凋亡锥体细胞，免疫印迹检测不同实验组中Bim及p—JNK蛋白表达。结果 缺血再灌注各组神经元细胞的凋亡率明显高于假手术组（P〈0．05）。缺血再灌注组p—JNK及Bim蛋白表达积分光密度值与假手术组相比差异有显著性（P〈0．05）。结论 在脑缺血及在灌注损伤中存在有JNK途径的过度激活，p-JNK蛋白与Bim蛋白表达为正相关。JNK途径的激活导致Bim蛋白表达增加，进而导致神经元细胞的凋亡明显增加。     

慢病毒介导的Bcl-2基因对磷酰胺氮芥诱导人原代卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用

目的探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对磷酰胺氮芥诱导体外培养的原代人卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用。方法利用分子生物学技术,成功构建携带Bcl-2基因慢病毒载体,包装成高滴度慢病毒,将重组慢病毒体外感染人卵巢原代颗粒细胞,再加入浓度30μmol/L的磷酰胺氮芥诱导细胞凋亡。分为4组进行实验:(a)实验组:pGC-FU-Bcl-2+磷酰胺氮芥(PM);(b)空载对照组:pGC-FU-EGFP+PM;(c)实验对照组:只加PM;(d)空白对照组:不加PM及病毒。采用流式细胞仪、Hoechst 33258染色检测卵巢颗粒细胞凋亡情况;利用Western blot检测Bcl-2蛋白的表达情况。结果空白对照组(GCs),凋亡峰不明显,颗粒细胞凋亡率为(1.93±0.28)%,实验组(GCs+PM+pGC-FU-Bcl-2)出现微弱的凋亡峰,颗粒细胞凋亡率为(6.99±0.55)%,比实验对照组(GCs+PM)及空载对照组(GCs+PM+pGC-FU-EGFP)显著低,但显著高于空白对照组(P<0.05)。实验组Bcl-2蛋白的表达明显增高,显著高于其余各对照组(P<0.05)。结论携带Bcl-2基因的慢病毒感染靶细胞后可以过度分泌Bcl-2蛋白,显著抑制卵巢颗粒细胞的凋亡,保护PM对颗粒细胞的理化损伤。     

热休克预处理大鼠骨髓间充质干细胞预防顺铂诱导的卵巢颗粒细胞凋亡

目的 探讨热休克预处理大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）预防顺铂诱导的卵巢颗粒细胞（GC）凋亡的效果。方法 分离培养大鼠骨髓MSC,设置不同热休克预处理时间,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,确定最佳热休克预处理条件。以顺铂模拟化学治疗的卵巢局部微环境,将MSC分为对照组、热休克预处理组、顺铂组及热休克预处理+顺铂组,检测各组MSC凋亡情况。分离、培养大鼠GC,采用顺铂诱导卵巢GC损伤的体外模型,将GC分为对照组、顺铂组、MSC预防+顺铂组、热休克预处理MSC（HS-MSC）预防+顺铂组,检测各组GC的凋亡情况。结果 热休克预处理能够减轻MSC凋亡,最佳热休克预处理条件为42℃热休克处理1 h。在顺铂模拟化学治疗的卵巢局部微环境中,热休克预处理+顺铂组MSC凋亡率为（11.94±0.63）%,低于顺铂组的（14.30±0.80）%,差异有统计学意义（P<0.05）。在顺铂诱导卵巢GC损伤的体外模型中,顺铂组GC的凋亡率为（53.81±1.89）%,HS-MSC预防+顺铂组GC的凋亡率为（39.88±1.65）%,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 热休克预处理能够提高化学治疗环境下MSC的抗凋亡能力。热休克预处理的MSC能够抑制顺铂诱导的卵巢GC凋亡,有预防性保护作用。     

miR-34a调节人卵巢颗粒细胞凋亡

目的: 探讨miR-34a对人卵巢颗粒细胞的作用及其机制。方法: 体外培养人卵泡颗粒细胞,分为模拟物转染组、抑制物转染组、模拟物阴性对照转染组、抑制物阴性对照转染组,分别转染miR-34a模拟物、miR-34a抑制物、模拟物阴性对照和抑制物阴性对照,另设空白对照组不做任何处理;实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-34a、Bcl-2、Bax、生存素、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax、生存素、Caspase-3、剪切体Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果： miR-34a模拟物转染明显下调Bcl-2 mRNA表达水平,降低Bcl-2、生存素蛋白表达,并增加Bax、Caspase-3蛋白表达,促进人颗粒细胞凋亡;miR-34a抑制物转染作用则与之相反;然而,miR-34a模拟物和抑制物转染对Bax、生存素、Caspase-3 的mRNA水平均无明显影响。结论： miR-34a可通过调控凋亡相关的蛋白与基因的表达,促进人颗粒细胞凋亡。     

Wnt/β-catenin通路相关分子在多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞中的表达

目的阐明Wnt/β-catenin通路对Foxo3a及其下游分子的调控在多囊卵巢综合(PCOS)征患者颗粒细胞中的作用机制。方法选取在接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或者卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)助孕治疗的PCOS患者及单纯输卵管因素患者为研究对象。分离、纯化患者取卵日卵泡液中的卵巢颗粒细胞,采用实时定量PCR方法检测颗粒细胞中β-catenin、Foxo3a、P27、Cyclin D1、Caspase3、Caspase8的表达水平。结果与对照组相比,PCOS患者卵巢颗粒细胞中β-catenin、Foxo3a、P27、Caspase3、Caspase8表达水平升高,P<0.05或<0.01,而两组患者卵巢颗粒细胞中的Cyclin D1表达水平的差异无统计学意义。结论 PCOS患者卵巢颗粒细胞的凋亡增加,增殖能力下降。Wnt/β-catenin通路对Foxo3a及其下游信号分子的调控参与了PCOS患者卵巢颗粒细胞异常的机制。     

慢病毒介导大鼠卵巢基因转染的实验研究 *

目的 研究活体大鼠卵巢中慢病毒载体介导的基因转染及表达情况。方法 慢病毒载体(携带GFP的Bcl-2-HIV-I)注射大鼠卵巢实质,分别于注射后1、3、7、14、28天处死大鼠（每个时间点实验组n=2,对照组n=2,空白对照组n=2）,通过 Western-blot 电泳检测报告基因的表达。结果 实验组大鼠可见Bcl-2基因的表达,明显高于对照组和空白对照组Bcl-2基因的表达。 结论 慢病毒能有效的将外源基因导入活体大鼠卵巢而无明显毒副作用。     

PD98059联合顺铂对卵巢癌细胞增殖的影响

目的   观察MEK1/2特异性抑制剂PD98059联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。 方法   按不同处理因素对卵巢癌SKOV3细胞分组：空白对照组、单纯PD98059组、单纯顺铂组、联合用药组。CCK-8法检测各组细胞的增殖抑制率。实时定量PCR检测各组细胞含有WW结构域的氧化还原酶(WWOX)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)在基因水平的表达。Western-blot检测各组细胞磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白的表达。光镜下观察各组细胞的生长状态及形态学改变。流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果   联合用药组细胞增殖抑制率明显高于其他各组（P＜0.05）;单纯顺铂组及联合用药组WWOX mRNA表达量较空白对照组明显增加（P＜0.05）,单纯PD98059组WWOX表达量无明显改变（P＞0.05）;ERK mRNA在各组间的表达无明显变化（P＞0.05）;与空白对照组相比,p-ERK1/2表达量在单纯PD98059组及联合用药组中明显降低(P＜0.05),在单纯顺铂组的表达无明显变化。光镜下可观察到空白对照组及单纯PD98059组细胞生长状态好,细胞密集,无明显形态学改变;单纯顺铂组及联合用药组贴壁细胞少,细胞稀疏,联合用药组部分细胞出现胞浆溶解样改变。结论   PD98059联合顺铂可能通过调控WWOX基因表达及ERK通路,对卵巢癌细胞增殖产生较强的抑制作用。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子1α对人卵巢癌细胞的凋亡作用

目的研究过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子1α（PGC-1α）对人卵巢上皮癌细胞凋亡的调控作用。方法选用人卵巢癌细胞株H08910进行体外培养,实验组设3组的对照组加入绿色荧光蛋白（GFP）基因的腺病毒载体,Ad-GFP组（绿色荧光感染）,Ad-PCG-1α组（PCG-1α绿色荧光感染）采用Hoeches染色法检测细胞凋亡,并用流式细胞仪测定凋亡率。定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞内凋亡相关基因Bax和Bcl-2mRNA的表达。选用中国仓鼠正常卵巢细胞（CHO）作为对照,同样方法过表达PGC-1仪检测凋亡。结果在人卵巢癌细胞H08910中过表达PGC-1α能明显诱导细胞凋亡,光学显微镜观察到细胞凋亡,流式细胞仪测定凋亡率达58．9％。过表达PGC-1α使H08910细胞内的Bax表达上调1．5倍,而Bcl-2表达下降了69％。而在正常仓鼠卵巢细胞中过表达PGC-1α,细胞未见明显的凋亡发生。结论PGC-1α能显著诱导人卵巢癌细胞发生凋亡,促凋亡基因Bax表达上调和抗凋亡基因Bcl-2表达下降可能是诱发细胞凋亡的机理之一。PGC-1α具有特异性促肿瘤细胞凋亡的作用。     

过氧化氢诱导人卵巢颗粒细胞氧化应激模型的建立

目的 探讨构建过氧化氢(H2O2)诱导人卵巢颗粒细胞氧化应激模型的方法.方法 不同浓度H2O2处理人卵巢颗粒细胞COV434,采用Western blot检测Caspase-3表达,流式细胞仪和DAPI/TUNEL双染色法检测细胞凋亡情况,H2DCF-DA检测细胞内活性氧族(ROS)水平,通过量效关系和时效关系来确定H2O2的最佳作用条件.结果 1 ～ 1.5 mmol/L浓度H2 O2处理COV434细胞2～4h后Caspase-3表达量升高最明显.随着H2 O2浓度增加及作用时间的延长细胞凋亡率不断升高.细胞内ROS水平随着H2 O2浓度的增加而增加.1.5mmol/L浓度H2 O2处理1h后细胞内ROS水平上升最明显.结论 H2 O2诱导人卵巢颗粒细胞氧化应激模型的最适宜浓度为1 ～ 1.5 mmol/L,采用细胞凋亡情况评价作用时间是2～4h,采用ROS评价作用时间为1h.     

Resveratrol Induces Apoptosis and Autophagy in T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia Cells by Inhibiting Akt/mTOR and Activating p38-MAPK

Objective To explore the effects of resveratrol-induced apoptosis and autophagy in T-cell acute lymphoblastic leukemia （T-ALL） cells and potential molecular mechanisms. Methods The anti-proliferation effect of resveratrol-induced, apoptosis and autophagy on T-ALL cells were detected by using MTI- test, immunofluorescence, electronic microscope, and flow cytometry, respectively. Western blotting was performed for detecting changes of apoptosis-associated proteins, cell cycle regulatory proteins and state of activation of Akt, mTOR, p70S6K, 4E-BP1, and p38-MAPK. Results Resveratrol inhibited the proliferation and dose and time-dependent manner. It also induced cyclin-dependent kinase （CDK） inhibitors p21 and induced apoptosis and autophagy in T-ALL cells in a cell cycle arrest at G0/G1 phase via up regulating p27 and down regulating cyclin A and cyclin D1. Western blotting revealed that resveratrol significantly decreased the expression of antiapoptotic proteins （Mcl-1 and Bcl-2） and increased the expression of proapoptotic proteins （Bax, Bim, and Bad）, and induced cleaved-caspase-3 in a time-dependent manner. Significant increase in ratio of LC3-11/LC3-1 and Beclin 1 was also detected. Furthermore, resveratrol induced significant dephosphorylation of Akt, mTOR, p70S6K, and 4E-BP1, but enhanced specific phosphorylation of p38-MAPK which could be blocked by SB203580. When autophagy was suppressed by 3-MA, apoptosis in T-ALL cells induced by resveratrol was enhanced. Conclusion Our findings have suggested that resveratrol induces cell cycle arrest, apoptosis, and autophagy in T-ALL cells through inhibiting Akt/mTOR/p7OS6K/4E-BP1 and activating p38-MAPK signaling pathways. Autophagy might play a role as a self-defense mechanism in T-ALL cells treated by resveratrol. Therefore, the reasonable inhibition of autophagy in T-ALL cells may serve as a promising strategy for resveratrol induced apoptosis and can be used as adjuvant chemotherapy for T-ALL.     

苦参碱诱导HepG2细胞凋亡与cyclin D1和p27kip1关系的实验观察

目的研究苦参碱抗肿瘤机制，初步探讨其与细胞周期调控蛋白cyclin D1和p27^kip1是否有关。方法苦参碱诱导后运用电镜、流式细胞仪方法检测HepG2细胞形态及细胞周期分布，并用免疫细胞化学法检测细胞内cyclin D1和p27^kip1蛋白表达变化。结果发现苦参碱诱导HepG2细胞凋亡，使细胞周期停滞于G1期。随着干预的苦参碱浓度增加cyclin D1下调，而p27^kip1蛋白上调，有统计学意义（P〈0．05）。结论苦参碱抗肿瘤机制可能是诱导肿瘤细胞凋亡，与细胞周期调控蛋白cyclin D1和p27^kip1有关。     

The Experimental and Clinical Study on the Effect of Curcumin on Cell cycle Proteins and Regulating kProteins of Apoptosis in Acute Myelogenous Leukemia

Because anti- cancer drugs can induce apopto-sis of both carcinoma cells and normal cells,peoplewant to find a new high effect and low cytotoxinone.Curcumin( C12 H3 6O5,Fw364.5 ) derives fromcurcumin longa linn and contains a main activity ofcurcuma.It has excellent effect of anti- cancer andpreventing cancer.FDA in USA has recommendedit into a new candidated drug which is used in the2 1 th century[1] .The anti- cancer role of curcuminmay be two aspectes:( 1 ) It controls developmentproces…     

Aiolos基因过表达对白血病细胞生物学特性及化疗敏感性的影响

目的 研究Aiolos基因过表达对白血病细胞周期、凋亡及化疗敏感性的影响并探讨其机制。方法 将Jurkat细胞分为Aiolos过表达组、转染GFP组和未转染组,构建Aiolos基因慢病毒载体,感染Jurkat细胞并检测3组细胞的细胞周期、凋亡、相关基因表达及对依托泊苷敏感性。结果 Aiolos转染Jurkat细胞4d后,Aiolos过表达组和转染GFP组的GFP表达量达80%以上,且Aiolos过表达组的Aiolos蛋白表达较转染GFP组和未转染组明显上升(P<0.05)。Aiolos过表达组细胞凋亡比例较转染GFP组和未转染组明显增加(P<0.05),细胞周期由G0/G1进入S期比例明显减少(P<0.05)。周期相关基因Cyclin D3和Skp2表达下调(P<0.05),细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P21和P27表达上调(P<0.05);凋亡相关基因Bax表达无明显变化,Bcl-2表达下调(P<0.05),Bax/Bcl-2比例增加(P<0.05)。Aiolos过表达组细胞在依托泊苷浓度40μg/mL作用36、48h后,细胞存活百分率较转染GFP组和未转染组均明显降低(P<0.05)。结论 在Jurkat细胞系中介导Aiolos基因过表达能够促进细胞凋亡、抑制细胞周期并提高细胞对化疗药物的敏感性。     

环孢素A对体外人系膜细胞cyclin E,cyclin D1,p27kip1蛋白表达的影响

目的探讨环孢素A(CsA)对人系膜细胞增殖的抑制作用及细胞周期蛋白D1、E、p27kip1表达影响。方法人系膜细胞常规体外培养,分为实验组和对照组,实验组加入不同浓度的CsA(0.1,1,5μmol/L)干预。药物作用24,48,72 h后MTT比色法测定细胞增殖情况。药物作用48 h后采用流式细胞仪检测细胞周期。药物作用48 h后Western blot法检测细胞中cyc-lin D1、cyclin E、p27kip1蛋白质表达情况。结果 CsA对人系膜细胞具有时间、浓度依赖性抑制作用;且浓度依赖性阻滞细胞周期,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05)。CsA浓度依赖性下调cyclin D1、cyclin E蛋白,上调p27kip1蛋白的表达(P<0.05)。结论 CsA通过下调cyclin D1、cyclin E蛋白,上调p27kip1蛋白的表达,调节细胞周期调控通路,阻滞细胞于G0/G1期,有效抑制人系膜细胞的增殖。     

Genistein sensitizes ovarian carcinoma cells to chemotherapy by switching the cell cycle progression in vitro

Objective： To address how genistein sensitizes the chemotherapy-resistant ovarian carcinoma cells and promotes apoptosis in the respect of cell cycle and the regulation of survivin expression in the process. Methods： Ovarian SKOV-3 carcinoma cell line was treated with genistein or cisplatin either alone or in combination. Cell viability was showed by MTT method. Cell cycle and apoptosis were detected by flow cytometry. Survivin mRNA and protein were revealed by RT-PCR and immunocytochemistry, respectively. Results： Genistein could reduce the cell viability in a dose-dependent manner, while cisplatin did so at a much higher level. In contrast, if the two agents were treated in combination, half growth inhibition （IC50） value for cisplatin was reduced remarkably and the effect was synergistic as analyzed by isobologram. In particular, the reduced cell viability was exhibited by a switch in cell cycle progression, as the cells were arrested in G2/M phase and the G0/G1 phase- fraction was significantly decreased. The reduced cell viability appeared to involve apoptosis, based on our results from flow cytometry and Hoechst 33258 staining. In the meanwhile, genistein performed the inhibitory effect on cisplatin-induced survivin expression. Conclusion： Genistein can sensitize ovarian carcinoma cells to cisplatin therapy with the inhibition of survivin expression as the potential mechanism.     

miR-483-5p通过靶向FKBP4加重顺铂诱导的小鼠卵巢损伤

目的 探讨FKBP4蛋白在顺铂诱导的早发性卵巢功能不全（POI）中的作用及其机制研究。方法 采用ITRAQ技术测定4对顺铂诱导的小鼠POI模型组及生理盐水对照组卵巢组织的差异蛋白。使用TargetScan软件进行靶点预测,利用qRT-PCR和Western blot方法确定顺铂诱导组及生理盐水对照组miR-483-5p及FKBP4的表达水平。收集POI患者及正常患者血清各 6 例,并利用 qRT-PCR 检测 miR-483-5p 表达水平。利用细胞转染及双荧光素酶实验验证 miR-483-5p 和 FKBP4 的关系。利用转染和/或顺铂分别处理原代颗粒细胞及KGN细胞系（人颗粒细胞系）,将细胞分为对照（NC）组、miR-483-5p组、miR-483-5p+顺铂处理组和miR-483-5p+FKBP4+顺铂处理组。以此验证miR-483-5p、FKBP4在顺铂处理的颗粒细胞中的作用;利用 Cre-loxp 系统构建卵母细胞特异性过表达 miR-483-5p 及同窝未过表达的转基因小鼠,用免疫荧光、原位杂交及ELISA检测卵巢功能。结果 与生理盐水组相比,顺铂诱导的POI小鼠的卵巢中FKBP4表达下降（P<0.05）。靶点预测软件发现miR-483-5p的潜在靶点是FKBP4,并且较生理盐水对照组,它在顺铂诱导的POI小鼠的卵巢、血清以及POI患者的血清中均高水平表达（P<0.01）。体外实验进一步证实FKBP4是miR-483-5p的作用靶点。人颗粒细胞系及小鼠原代颗粒细胞过表达FKBP4缓解了顺铂联合miR-483-5p过表达引起的细胞凋亡（n=5,P<0.05）。与同窝未过表达的小鼠比较,卵母细胞过表达miR-483-5p的小鼠顺铂诱导造成的卵巢损伤更严重。结论 miR-483-5p/FKBP4在顺铂诱导的POI中发挥作用。顺铂诱导的卵巢损伤过程可能与上调的miR-483-5p靶向作用FKBP4,导致的FKBP4表达下降有关。miR-483-5p上调可能增加卵巢对顺铂药物的敏感性,使卵巢功能降低。检测血清miR-483-5p可以用来预测POI的发生和发展。