肺结核患者外周血白细胞中结核分支杆菌DNA检测及临床意义

聚合酶链反应（PCR）技术用于病源微生物诊断为临床提供了特异、敏感、快速的实验室诊断方法。为此，我们对肺结核患者外周血白细胞进行结核菌DNA扩增，旨在探索一新的结核菌检测方法及其临床应用价值。资料和方法一、资料所有的病例均为本院的住院病人，26例肺结核患者系临床表现、X线胸片，痰涂片抗酸染色、结核菌培养及临床诊断性治疗确诊的病人。其中有低热、盗汗等结核中毒症状者50例，痰中带血16例，咳嗽63例，胸痛17例。42例非结核病组包括肺癌。慢支、支气管哮喘、支气管内膜炎及胸膜间皮瘤等无临床证据支持的患者。试剂来源：结核分支杆菌PCR试剂由厦门长城生物工程有限公司提供。二、方法1．标本采集和预处理：取患者治疗前构橼酸钠或肝素抗凝外周血2ml，待红细胞自然沉降后取出含有白细胞的血浆0．5ml，离心5分钟，弃血浆，加注射用水0．5ml，溶解红细胞后再离心5分钟，弃上清、下层白细胞沉淀，－20C保存备用。2．扩增与检测：在含沉淀的备用管中加入50yi样品处理液混悬，gOC加热IO分钟，离心5分钟。取上清8VI加入盛有扩增反应体系的扩增管中混匀，离心10秒钟置PE96OO基因扩增仪内扩增。扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳，紫外检...     

肺结核病人痰病原学检查方法的比较

我科自1995年以来，对入院时诊断为肺结核患者的痰标本进行痰涂片、培养以及PCR三种病原学检查。现将资料完整的181例结果报告如下。材料和方法181例患者均为住院病人，其中初治病人118例，复治病人63例。男125例，女56例，年龄在17～SO岁之间。收集痰液送痰涂片（痰浓缩漂浮后涂片），培养用改良罗氏培养基，PCR所用方法为DNA扩增。扩增仪由南京科技情报所研制（NK－3OI型）。结核杆菌PCR试剂盒由上海中亚生物工程公司生产。扩增产物为42OBP。结果初治病人中有2例最后确诊为肺癌，其余179例确诊为肺结核。其中徐片阳性7O例，培养…     

阿莫西林—乙基纤维素微型胶囊的研制及缓释性的研究

阿莫西林（羟氨苄青霉素Amokicillin）为常用广谱抗菌药，毒副作用低，但半衰期短；体内仅为1．2h[2]。为延缓释药速度，我们以乙基纤维素为爱材，用液中干燥法[3]将其制成微囊，体外溶出度试验表明【‘1，该微囊和口服国产胶囊相比，具有明显的缓释作用。l材料与仪器阿莫西林原料药（重庆制药六厂）；乙基纤维素40Cpe（江苏昆山年沙助剂厂）；阿莫西林胶囊（重庆制药六厂，批号970207，规格D．259／粒）；JJ－1型定时电动搅拌器（江苏中大仪器厂）；ru－650紫外分光光度仪（美国贝克曼公司）。2方法与结果21微爱的制备：将乙某纤维素‘．…     

主动脉粥样硬化病灶与肺炎衣原体感染关系研究

为探讨动脉粥样硬化症（AS）与肺炎衣原体（CP）在中国人中感染状况及关系,取尸检主动脉粥样斑块、脂纹及病灶旁动脉组织,非动脉硬化者主动脉组织,应用套式PCR－DNA扩增技术检测这些组织中的肺炎衣原体特异性DNA扩增产物。106例尸检者,80例动脉硬化者的动脉组织中27例检出肺炎衣原体特异性DNA扩增产物,阳性率33．75％,对照组26例中1例检出,阳性率3．8％。表明动脉硬化症患者组织肺炎在原体感染至少达1／3,说明肺炎衣原体感染与动脉粥样硬化症有明显相关性。     

MSCs分离培养及定向分化为血管内皮细胞的研究

目的建立分离和培养大鼠骨髓源间充质干细胞（MSCs）的方法及定向分化为血管内皮细胞诱导条件的优化。方法淋巴细胞分离液（比重1．077g／m1）密度梯度离心法分离单个核细胞（MNC），在含10％胎牛血清L—DMEM培养基中培养，并传代扩增MSCs；选取状态较稳定的第4代细胞，分别用含10％胎牛血清和2％胎牛血清的诱导液（终浓度为10ng／mlVEGF、2ng／mlbFGF的DMEM培养液）继续培养，于第7、14天用流式细胞术分析CD34的表达情况，免疫组化法观察FVⅢ的表达情况。结果密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化MSCs，细胞呈均一的成纤维细胞样，流式细胞术分析MSCs结果显示，CD34阳性率为1．01％、CD29阳性率为97．32％；诱导14d后免疫组织化学法检测FVⅢ的表达，10％和2％胎牛血清诱导体系细胞的阳性率分别为12．21％和91．43％。结论密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化MSCs；就诱导效果而言，2％胎牛血清诱导体系明显好于10％胎牛血清诱导体系，说明低浓度的胎牛血清更有利于MSCs向血管内皮细胞分化。     

磺胺嘧啶银霜的制备介绍

我院应用自制的磺胺嘧啶银（SD－Ag）霜治疗烧烫伤，经临床应用，效果满意，现将其配制方法介绍如下，供临床参考。1．处方：磺胺嘧啶银20g，硬脂酸280g，氢氧化钾10g，甘油360g，蒸馏水1440g，尼泊金乙酯1．5g。2．制备：取氢氧化钾溶于蒸馏水中，加甘油和尼泊金乙脂加热至70C（第一液），取硬脂酸置水浴加热海解至70℃（第二液），将第二液缓缓加入第一液，边加边用搅拌器向同一个方向不停搅拌，温度降低至‘sC左右，再加入SD－Ag（以等量递加法）搅拌均匀即得。成品洁白细腻，室温下放置2年未见霜剂分层，破裂霉变等现象。3．用法：…     

人胚胎活细胞提取物对T淋巴细胞活性E花环比率的影响

人胚胎活细胞提取物（人体激活素-2Hu－manCytoactivty－2HCA－2）是从人胚胎活体细胞中提取的一种免疫增强剂，有提高人体细胞免疫功能的作用。本室进行了T淋巴细胞活性E玖瑰花（Ea－RFC）形成实验。兹将结果报告如下。材料与方法一、受检对象本院收治未经任何治疗的食道癌、贫门癌患者共22例。其中食道癌19例，男13例，女6例；责门癌3例，均男性。年龄60±11．82岁。二、标本制备1．取肝素抗凝血Zml，用生理盐水Zml将全血稀释至4ml，用淋巴细胞分离液3ml分离淋巴细胞，离心2000Prm／min30分钟，用生理盐水洗涤2次，离心1500Prm／min…     

红花总RNA的快速提取方法

目的：建立从红花组织中快速分离总RNA的方法，为进行反转录PCR（RT—PCR）、快速扩增cDNA末端（RACE）、蛋白质印迹法及其他分子生物学实验奠定基础。方法：采用改良Trizol法提取红花苞叶总RNA时，加入DNaseⅠ消化残留DNA，并加入RNase抑制剂，利用琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法进行纯度和浓度检测。RT—PCR后，进行cDNA-序列相关扩增多态性（SRAP）分析。结果：抽提的RNA经电泳检测，可见28S、18S、5S RNA三条带，带的亮度强，且28S的宽度是18S的2倍左右。紫外吸光度D260／D280为1．8～2．0，D260／D230为2．0～2．3。总RNA产物进行cDNA-SRAP扩增，出现清晰的条带。结论：改良Trizol法所提取的RNA纯度高，质量好，完整性好，可成功进行cDNA-SRAP扩增。     

红花随机扩增多态性DNA反应体系的建立与优化

目的：考察不同因素对红花随机扩增多态性DNA反应体系的影响，建立并优化反应体系。方法：提取红花基因组DNA，分别设计Taq酶浓度（三水平：0．02、0．04、0．06U／μL）、dNTP浓度（三水平：0．10、0．20、0．30mmol／L）和引物（primer）浓度（三水平；0．16、0．32、0．48pmol／L）的三因素实验，进行PCR扩增。根据PCR产物的琼脂糖凝胶电泳图确定最优的Taq酶浓度、dNTP浓度和引物浓度。进一步没计Mg^2＋浓度（三水平：1．0、1．5、2．0mmol／L）和模板浓度（四水平：1．00、1．25、1．50、1．75mg／L）的两因素实验，进行PCR扩增，确定最佳Mg^2＋浓度和模板浓度。结果：三因素实验中，第17条组合泳道和两因素实验中第6条组合泳道扩增主带稳定、均匀、清晰，条带数日多。结论：确定红花随机扩增多态性DNA反应25μL反应体系中最佳组合为：Taq酶0．04 U／μL、dNTP0．30mmol／L、引物0．32pmol／L、Mg^2＋ 1．5mmol／L、模板浓度1．00mg／L。     

医院物品与工作人员手HBsAg及HBV-DNA污染检测

梨树县妇幼保健院于2005-2008年对医院门诊与工作人员手进行了HbsAg与HBV—DNA检测。检测时以浸有磷酸盐缓冲液的无菌棉拭，对物品表面与人员手往返涂抹采样。随后将棉拭头剪入2ml磷酸盐缓冲液中。在旋涡混匀器中充分震荡后离心（4000r/min）5min。取离心液，用EHSA法检测HbsAg抗原性。以样液OD值（S）与阴性对照OD值（N）的比值（S／N）大于2．1为阳性。     

53例散发性戊肝临床特征与肝脏超微结构的研究

为了解南京地区散发性成型病毒性肝炎临床特征与肝脏超微结构的改变，对53例戊型肝炎患者进行了流行病学、临床特征、肝脏超微结构改变的研究。现将结果报告如下。材料与方法一、研究对象1995年～1996年间收治住院的散发性病毒性肝炎279例，将其中抗HEV－IgM阳性急性肝炎样发病伴有明显消化道症状，发热、乏力、黄疽、肝功能异常者诊断为戊型肝炎共53例。男37例，女16例，年龄4～62岁，其中20～40岁40例（75．4％）。二、研究方法1．每周检测一次肝功能生化指标，每两周检测一次抗HEV－IgM。2．其他血清免疫学检测入院初及出院前各检测一次，包括：抗HAV－IgM、抗HCV－IgG、HBSAg、抗HBC－IgM。3．肝炎病毒核酸检测HCV－RNA（PCR法）、HBV－DNA（PCR法），均由南京中桑生物技术开发公司提供试剂盒；HBV－DNA（狄高辛标记生物素法），上海医科大学预防医学研究所提供试剂盒。415例肝穿活检标本用4％戊二醛前固定，0．11％俄酸后固定，常规铅销染色，半薄切片定位超薄切片，JEM－1200型电镜观察。结果一、流行病学特点1．53例戊型肝炎全年均有发病，高峰期为冬春季，与南京地区甲型肝炎发...     

苯并[a]芘损害神经元DNA的细胞学研究

目的研究苯并[a]芘（BaP）染毒对体外培养大鼠小脑粒细胞胞核DNA的损伤。方法取8日龄SD大鼠小脑粒细胞进行培养，并分（1）空白对照组；（2）溶剂对照组（等量DMSO平行处理）；（3）低浓度BaP染毒组（BaP 5μmol／L＋S9-mix）；（4）中浓度BaP染毒组（BaP 15 μtmol／L＋S9-mix）；（5）高浓度BaP染毒组（BaP 45 μmol／L＋S9-mix）。染毒90min，胰酶消化法收集标本。苔盼蓝染色法检测细胞存活率；SCGE法检测大鼠小脑粒细胞胞核DNA的损伤程度；TUNEL法检测大鼠小脑粒细胞胞核DNA的损伤率，并对细胞存活率与DNA损伤率进行相关分析。结果（1）染毒组与对照组以及各染毒组之间大鼠小脑粒细胞存活率差异均有显著性（P〈0．05～P〈0．0001）；（2）染毒组与对照组以及各染毒组之间大鼠小脑粒细胞胞核DNA损伤率差异均有非常显著性（P〈0．05～P〈0．0001）；（3）细胞存活率与DNA损伤率负相关（r=-0．9402，P〈0．01）；（4）高剂量染毒组与对照组之间大鼠小脑粒细胞胞核DNA损伤程度差异有显著性（P〈0．05）。结论BaP染毒可引起大鼠小脑粒细胞胞核DNA损伤，损伤程度随染毒剂量增加而加强。胞核DNA损伤是BaP引起体外神经元死亡的原因之一。     

抗焦虑药非诺班在大鼠体内、外的代谢

非诺班［fenobam，N－（3一氯苯基）N’－（4，5一二氢一1一甲基一个氧合一IH一咪吐基一2）一脉是一种在大鼠体内具有抗焦虑活性的新药。其作用方式与苯井二氮章类药物不同，在动物模型和临床试验中表现出选择性的抗焦虑活性。有研究表明非诺班在大鼠、狗和人体内存在着迅速而广泛的代谢，本实验目的是确定非诺班在大鼠体内、外的代谢，阐明其生物转化途径。实验选用雄性CRWistar大鼠，体重为200～250g。体外试验：大鼠处死，取肝脏置3倍体积O．05mol·［，－‘Tris／HCI冷缓冲液（pH75，含1．15％KCI）中匀浆，于ZC离心。所得上清…     

临床分离铜绿假单胞菌喹诺酮耐药株gyrA基因突变及其对β-内酰胺类药物敏感性研究

利用PCR、限制性片段多态性分析（RFLP）、DNA单链构像多态性分析（SSCP）和DNA测序等方法，对10株成都地区临床分离耐喹诺酮类药物铜绿假单孢菌gyrA基因进行研究。结果表明，成都地区耐喹诺酮类药物铜绿假单胞菌gyrA的喹诺酮耐药决定区编码等83位氨基酸密码子表现出高频单点突变（10株中有8株），其突变方式为ACC→ATC。gyrA的PCR扩增产物SacII酶切片段与测序结果一致。SSCP的带谱与测序结果比较，除1株（PSA2）的SSCP带谱与标准株相同，但测序结果有点突变外，其余菌株与测序结果一致。因此，利用PCR－SSCP－RFLP系统，可快速、准确的检测耐喹诺酮类药物的铜绿假单胞菌gyrA中至少一个碱基的差异。用二倍稀释法测定喹诺酮和β－内酰胺类药物对耐药突变株体外抗菌活性，结果表明，铜绿假单胞菌gyrA基因突变株对诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、亚胺培南和哌拉西林表现出不同的敏感性。试验所用8株突变株对诺氟沙星和环丙沙星表现出高水平抗性；3株对左氧氟沙星敏感；3株对头孢他啶和哌拉西林表现出耐药，2株对亚胺培南耐药。     

循环HBV—DNA和HBV血清学标志间的相关性研究

用PCR法检测HBV－DNA，研究HBV－DNA与HBV－M之间的关系。结果在190例HBV－M阳性者血清中有32．6％HBV－DNA阳性。后者的阳性年在①HBSAg（＋）／HBeAg（＋）／抗HBc（＋）组为734％（47／64例）；②HBBAg（＋）／HBeAg（＋）组为100％（10／10例）；③HBsAg（＋）／抗HBc（＋）组为185％（5／27例）；其它组HBV－DNA均阴性。①②组间HBV－DNA阳性率无明显差异（P＞0．05），①②组与③组的HBV－DNA阳性率有明显差异（P＜0．01）。HBV－DNA是HBV感染的直接指标。资料显示HBV．DNA与HBeAg有密切关系。     

鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中人类乳头状瘤病毒和EB病毒DNA表达的研究

目的：探讨鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤（IP）与人类乳头状瘤病毒（HPV）和EB病毒（EVB）的关系。方法：对28例鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤的病理组织标本，用多聚酶链反应（PCR）进行HPV和EBV和DNA检测。结果：28例IP标本中10例HPV－DNA阳性（35．7％），4例EBV－DNA阳性（14．3％）。6例伴不典型增生的IP标本中HPV－DNA阳性4例（66．75），其中1例同伴伴EBV－DNA阳性；22例不伴不典型增生的IP标本中HPV－DNA阳性6例（27．3％），3例EBV－DNA阳性（13．6％）。IP伴不典型增生组和IP不伴不典型增生组的HPV－DNA检出的阳性率无显著性差异。结论：HPV感染在IP的发生过程中可能发挥一定的作用，EBV与IP的发生无明显关系。IP伴不典型增生与HPV感染无关。     

放线菌16S rDNA 片段扩增方法的优化

目的：通过对放线菌PCR扩增方法的综合改进,找到某些用常规手段难扩增的放线菌16S rDNA的最佳PCR扩增条件。方法（1）提取放线菌基因组DNA并对其进行PCR扩增以找到最适退火温度;（2）改变PCR反应体系中模板DNA和Mg2＋的浓度;（3）在反应体系中加入适量的二甲基亚砜。结果在25μL的PCR反应体系中,模板DNA浓度为10×、加入0．5μL的Mg2＋和5％的二甲基亚枫、退火温度为59℃时对放线菌16S rDNA扩增效果最为理想。结论本实验研究出一种扩增放线菌16S rDNA的优化条件,为今后大批量的放线菌的分子生物学研究提供了更加高效、方便、快捷、经济的实验方法。     

咪唑缓冲液对蛋白质测定的影响

咪唑-HCl缓冲液是现代生物化学研究中最广泛使用的缓冲液之一。本文研究了咪哩缓冲液的主要成分对Lowry法测定蛋白质的影响和对鸡胚胎脑匀浆液中蛋白质测定的影响。工作溶液牛血清白蛋白液（BSA）1mg·mL－1用逆渗透水稀释为400，200μg·mL－1。咪叹一HCl缓冲液（pH6．8，50mmol·L-1）含2mmol·L-1MgCl2和40，150，240mmol·L-1KCl；咪哩缓冲液只含40mmol·L-1KCl，不含Mg24。无咪喳缓冲液的标准曲线按传统Lowry法步骤，在IOmL试管中分别加BSAI作液（含蛋白质IO～6Opg）和加水至O．5ml。，然后加3mL新制备的碱性铜试剂（IO…     

142例肾移植患者痰培养结果分析

我院1994年6月～1997年5月对142例肾移植患者术后痰液培养，细菌和真菌检出情况报告如下。材料与方法一、痰液标本采集清晨首先让患者用无菌生理盐水或温开水反复漱口，轻咳弃去第一口痰，再深咳1～2口，痰液直接吐入消毒大口试管内，立即送检。二、细菌和真菌的分离与鉴定1．细菌分离培养的方法将患者清洁痰液，接种于血琼脂平板及巧克力琼脂平板，置于35CCOZ温箱培养。2．真菌分离培养的方法取患者清洁痰液，接种干沙保弱氏斜面培养基上，置25℃真菌培养箱培养。3．细菌和真菌的鉴定按《全国临床检验操作规程》及有关资料鉴定。结果142例患者痰液细菌和真菌培养，分离出病原菌66例（按每例患者同一种病原菌重复分离出2次以上计算），阳性率46．5％。55例细菌感染（包括单纯细菌感染41例、细菌和真菌双重感染14例）的菌种分布，其中铜绿假单胞菌为455％（25／55）、不动杆菌164％（9／55）、克雷伯氏菌12．7％（7／55）、肠杆菌7．2％（4／55）、流感嗜血杆菌72％（4／55）、产碱杆菌3．6％（2／55）、嗜麦芽假单胞菌1．8％（1／55）、粘质沙雷氏菌1．8％（1／55）、金黄色葡萄球菌1．8％（l／55）、溶血性...     

烟碱含漱液的制备及临床应用

1材料与方法1．1材料：烟草为市售未经炮制的并无其它添加剂的干燥烟叶；聚乙烯酸（PVA）1750土50，北京化工厂；盐酸丁卡因，北京制药厂；紫外分光光度计W－250，日本岛津，751，上海分析仪器厂。l·2方法：1．2．l烟钱提取液的制备：取烟草切丝称重，加水浸泡煎煮15min，放置浸清24h，压榨取液，让其自然沉淀．滤除杂质取上清液加无水乙酸使含醇量达60～70％，置4～10C冰箱中添置过夜，用纱布棉花滤除杂质。重复沉淀一次，滤波用减压法回收乙醇，得浓缩烟巴提取液。用紫外分光光度法测定含量厂对。1．2．2烟碱含漱液的制备：拟方每1000l…