PPAR γ-ACAT1途径在肺炎衣原体诱导巨噬细胞泡沫化中的作用

目的： 观察过氧化物酶体增殖活化受体γ （PPAR γ）和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1（ACAT1）在肺炎衣原体（C.pn）诱导巨噬细胞泡沫化中的作用。方法：给予C.pn （1×105-1×106IFU）感染 和/或PPAR γ的配体罗格列酮（1-20 μmol/L）孵育 THP-1源性巨噬细胞48h。运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化。分别运用RT-PCR和Western blotting检测ACAT1、PPAR γ mRNA和蛋白表达。结果：高浓度的C.pn（5×105和1×106 IFU）感染使THP-1源性巨噬细胞内脂滴明显增多,胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加（>50%）。C.pn感染呈浓度依赖性上调ACAT1 mRNA和蛋白表达,并且浓度依赖性地下调PPAR γ mRNA和蛋白表达（P<0.05）。高浓度的罗格列酮（10、20 μmol/L）明显抑制C.pn诱导的细胞内脂质滴的增多和胆固醇酯含量的增加, 同时罗格列酮呈浓度依赖性抑制C.pn诱导的ACAT1 mRNA和蛋白表达的上调（P<0.05）。结论：C.pn 经PPAR γ途径上调ACAT1表达,进而诱导巨噬细胞泡沫化,这为进一步阐明C.pn感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据。     

肺炎衣原体通过下调ABCA1和ABCG1诱导THP-1源性泡沫细胞形成

目的:观察ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和ABCG1在肺炎衣原体(C.pn)诱导THP-1源性泡沫细胞形成中的作用,以初步探讨C.pn诱导泡沫细胞形成的分子机制.方法:C.pn在Hep-2细胞内增殖,将不同浓度的C.pn(1×105 ～1×106 IFU)分别感染THP-1单核细胞源性巨噬细胞0～72小时,运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,用酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化,分别运用RT-PCR和Western blot检测ABCA1、ABCG1 mRNA和蛋白表达.结果:高浓度的C.pn(5×105和1×106 IFU)感染THP-1单核细胞源性巨噬细胞48小时后,细胞浆内的脂滴明显增多,胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加(＞50%).C.pn感染呈浓度和时间依赖性地下调ABCA1、ABCG1 mRNA和蛋白表达(P＜0.05).结论:ABCA1和ABCG1表达下调是C.pn诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制之一,这可能为C.pn感染致动脉粥样硬化发病机制的研究提供一个新的理论依据.     

内脂素通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ信号转导通路下调ATP结合盒转运蛋白A1的表达

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路在内脂素(visfatin)调控人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达中的作用,探讨visfatin诱导泡沫细胞形成的机制和途径。方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度的visfatin和PPARγ激动剂罗格列酮进行干预,分别运用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞ABCA1及PPARγmR-NA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果:与对照组比较,visfatin干预组油红O染色显示细胞内脂滴形成增加,PPARγ及ABCA1 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05),细胞内FC含量升高(P<0.05);相关分析显示,visfatin呈浓度依赖性下调PPARγ及ABCA1 mRNA和蛋白的表达。与visfatin干预组比较,罗格列酮组ABCA1 mRNA和蛋白表达水平升高(均P<0.05),细胞内FC含量降低(P<0.05);相关分析显示,罗格列酮呈浓度依赖性上调ABCA1 mRNA和蛋白的表达。结论:visfatin通过PPARγ信号转导通路下调ABCA1表达,减少细胞内FC流出,从而诱导泡沫细胞形成。这可能为visfatin致动脉粥样硬化发病机制的研究提供了一个新的理论依据。     

肺炎衣原体下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1、ABCG1表达的机制研究

目的:观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)对肺炎衣原体(Cpn)诱导的THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调控作用,探讨Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1表达的信号转导机制。方法:将THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞后,观察Cpn感染对细胞内ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。并用不同浓度的JNK特异性抑制剂SP600125对细胞进行预处理,观察SP600125对Cpn诱导的ABCA1/ABCG1、PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。分别用RT-PCR和Western blotting检测各组ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达。结果:Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1及其上游调控基因PPARγ mRNA和蛋白表达。而SP600125能呈浓度依赖性地抑制Cpn感染所带来的上述影响。结论:Cpn可能通过JNK-PPARγ信号转导通路下调AB-CA1/ABCG1表达,减少巨噬细胞内胆固醇流出,促进动脉粥样硬化发生发展。     

可溶性Klotho蛋白抑制THP-1源性泡沫细胞形成

目的:探讨可溶性Klotho(KL)蛋白对THP-1源性泡沫细胞形成的影响。方法:THP-1单核细胞与160 nmol/L佛波酯孵育48 h后,诱导分化为THP-1源性巨噬细胞,给予THP-1源性巨噬细胞不同浓度(25、50、100和200μg/L)的可溶性KL蛋白预处理后,再由氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导其转变为泡沫细胞。油红O染色观察细胞内脂滴形成情况,通过液体闪烁计数法测定THP-1源性泡沫细胞内胆固醇流出情况,酶荧光法检测细胞内游离胆固醇及胆固醇酯的含量,并分别用Western blot法及RT-qPCR法检测酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)和ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的蛋白及mRNA表达。结果:可溶性KL蛋白能增加THP-1源性巨噬细胞内胆固醇流出,抑制THP-1源性泡沫细胞形成,且可溶性KL蛋白呈一定浓度依赖性地抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞形成过程中ACAT1表达的上调和ABCA1表达的下调(P<0.05)。结论:可溶性KL蛋白能够抑制THP-1源性泡沫细胞形成,其机制可能与靶向调控细胞内ACAT1和ABCA1的表达有关。     

PPARs配体对巨噬细胞、泡沫细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达的影响

目的：观察PPAR α、γ配体对巨噬细胞、泡沫细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)表达的影响。方法：体外诱导THP-1单核细胞转化为巨噬细胞、泡沫细胞，分别加入PPAR α配体氯贝特（clofibrate）、PPARγ配体吡格列酮(pioglitazone)共同培养，应用Real-time RT-PCR和Western blotting测定巨噬细胞、泡沫细胞中EMMPRIN基因和蛋白表达，ELISA测定细胞培养上清液MMP-9浓度，Zymgraphy法测定MMP-9活性。结果：氯贝特和吡格列酮均能显著抑制巨噬细胞和泡沫细胞EMMPRIN的表达，此抑制作用与PPAR α、γ配体抑制MMP-9分泌及活性的趋势一致。结论：PPAR α、γ配体均可抑制巨噬细胞、泡沫细胞EMMPRIN的表达，下调EMMPRIN可能是PPARs配体抑制粥样斑块局部MMPs产生的机制之一。     

内脂素对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响

目的：观察内脂素（visfatin）对人单核细胞株THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）表达的影响,探讨visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制。方法：THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,予不同浓度和时间的visfatin进行干预,分别运用油红O染色观察细胞浆脂滴变化,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测各组细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇（TC）和游离胆固醇（FC）含量,TC与FC之差为胆固醇酯（CE）含量。结果：与对照组比较,visfatin干预组细胞浆脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加（均P<0.05）。Visfatin呈浓度和时间依赖性地下调ABCA1 mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结论：Visfatin下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1的表达,使细胞内FC流出减少,CE合成增加,从而诱导泡沫细胞的形成。     

黄芪多糖对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的：以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，观察不同浓度黄芪多糖对胆固醇流出和ABCA1基因表达的影响。方法：将THP-1细胞诱导分化成泡沫细胞，用不同浓度黄芪多糖对其干预24 h，γ计数仪检测胆固醇流出，RT-PCR及流式细胞仪检测ABCA1的表达。结果：黄芪多糖呈剂量依赖性（10-100 mg/L）促进胆固醇流出；增加ABCA1的表达。结论：黄芪多糖可能通过增加ABCA1的表达而促进胆固醇流出。     

核因子κB活化与THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的关系

目的：探讨核因子κB活化对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1（ABCA1）基因表达的影响。方法：体外培养THP-1细胞并构建泡沫细胞模型，使用肿瘤坏死因子α（TNF-α）和NF-κB活化抑制剂对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸甲基甲酮（N-α-tosyl-L-phenylalanine chloromethy ketone，TPCK）孵育细胞，以RT-PCR法和Western blot法测定THP-1源性泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达情况，借助Sandwich ELISA法观察核因子κB活化／核易位情况。结果：TNF-α可即刻激活NF-κB，并导致干预24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调；若预先用TPCK孵育，则TPCK可抑制TNF-α对NF-κB的激活，且24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调幅度减小；TPCK延迟孵育则对TNF-α的效应抑制不显著。结论：炎症因子TNF-α可即刻激活NF-κB信号途径，早期活化的NF-κB可阻遏THP-1源泡沫细胞ABCA1基因和蛋白的表达，影响泡沫细胞内胆固醇的流出。     

NF-κB在AngⅡ介导THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出及ABCA1表达调控过程中的作用研究

目的：探讨核因子NF-κB活化对AngⅡ诱导的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1基因表达、胆固醇含量的影响。方法：体外培养THP-1细胞以构建泡沫细胞模型，以AngⅡ和NF-κB活化抑制剂TPCK孵育细胞；以RT-PCR法、Western blot法测定THP-1源泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达状态；采用酶法，通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量，应用液体闪烁技术仪检测胆固醇流出的变化；借助Sandwich ELISA法测定核因子NF-κB活化／核易位情况。结果：AngⅡ可即刻激活NF-κB表达活性，并导致干预24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调；若预先用TPCK孵育，则TPCK可抑制AngⅡ对NF-κB的激活，且24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调幅度减小。结论：AngⅡ能引起THP-1源性泡沫细胞胆固醇含量显著增高（P〈0．05）、ABCA1表达显著减少（P〈0．05）。机制可能与AngⅡ即刻激活NF-κB信号途径，早期活化的NF-κB可阻遏THP-1源泡沫细胞ABCA1基因和蛋白的表达，继而影响泡沫细胞内胆固醇的流出有关。     

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用

目的:以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象, 探讨ABCA1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法:用液体闪烁计数器检测胆固醇流出。RT-PCR方法检测ABCA1mRNA的表达。结果:氧化型低密度脂蛋白可增加THP-1巨噬细胞胆固醇流出, 22(R)-羟基胆固醇剂量依赖性增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出, 而DIDS剂量依赖性减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出;逆转录聚合酶链反应显示, 22(R)-羟基胆固醇可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达, DIDS可抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达。结论:ABCA1在巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中起着重要的作用, 并为开发和寻找对ABCA1表达有特异性调控作用的药物提供了新的思路。     

ciglitazone对巨噬细胞CD36表达及胆固醇流入的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)的激动剂ciglitazone对THP-1巨噬细胞CD36表达及细胞胆固醇流入的影响。方法:以THP-1巨噬细胞为研究对象,用50 mg/L氧化低密度指蛋白(oxLDL)分别与不同浓度的PPARγ激动剂ciglitazone(0、5、10、15μmol/L)共同孵育THP-1巨噬细胞24 h后,采用液体闪烁计数法检测[3H]胆固醇流入,采用逆转录-聚合酶链式反应和Western blot分别检测CD36的表达。结果:oxLDL及不同浓度的ciglitazone与THP-1巨噬细胞共孵育后,与对照组比较(20.3%),加ciglitazone的处理组胆固醇流入随着浓度的增加而依次增加,分别为28.6%、37.2%、44.3%、48.7%,细胞CD36的表达上调。结论:ciglitazone可上调THP-1巨噬细胞CD36的表达,并增加细胞胆固醇流入。     

ATP结合盒转运子A1对巨噬细胞载脂蛋白E分泌的调节作用

目的: 研究ABC转运子(ABC)A1对巨噬细胞载脂蛋白E(apo E)的分泌是否具有调节作用。方法: 利用佛波酯刺激人单核细胞系THP-1细胞分化;分别将ABCA1表达的激动剂8-Br-cAMP、抑制剂格列苯脲和针对ABCA1 mRNA的特异性反义寡核苷酸与分化后的THP-1巨噬细胞或巨噬细胞泡沫细胞一起孵育,通过酶联免疫吸附试验和Northern blot检测其对细胞apo E的产生、分泌以及apo E基因表达的影响。结果: 在孵育8 h时,8-Br-cAMP可使THP-1巨噬细胞apo E分泌增加(P＜0.05),而格列苯脲和针对ABCA1 mRNA的反义寡核苷酸则明显减少THP-1巨噬细胞和巨噬细胞泡沫细胞的apo E分泌(P＜0.01)。同时这些调节剂均不改变THP1巨噬细胞内apo E含量和apo E mRNA表达水平。结论: ABCA1促进巨噬细胞和巨噬细胞泡沫细胞apo E的分泌,该作用发生在翻译后水平上。     

腺病毒介导的mPPARγ1基因转染抑制IFN-γ诱导ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达

目的：观察腺病毒介导的mPPARγ1转染抑制IFN-γ诱导ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达。方法：构建表达小鼠PPARγ1基因的复制缺陷型腺病毒表达载体；将融合80%的ECV304细胞给予不同刺激量（1×104 U/L、5×104 U/L、1×105 U/L和2×105 U/L）的IFN-γ干预；将IFN-γ（1×105 U/L）预刺激并孵育 24 h 的ECV304细胞分成对照组（C）、PPARγ基因过度表达组(P)、PPARγ活化剂曲格列酮干预组(T)以及PPARγ基因过度表达和曲格列酮共刺激组(PT)进行干预，观察不同剂量IFN-γ对ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达的作用，以及PPARγ基因过度表达和/或活化对上述作用的影响。结果：正常ECV304细胞galectin-9基因表达弱。IFNγ孵育24 h后， ECV304细胞galectin-9基因和蛋白表达增加，且galectin-9表达与IFN-γ具有量效关系。PPARγ1基因转染抑制IFN-γ诱导galectin-9基因/蛋白表达，曲格列酮对上述作用无影响；PPARγ1基因转染和曲格列酮共刺激抑制IFN-γ诱导galectin-9基因/蛋白表达与单一PPARγ1基因转染效应相似。正常ECV304细胞PPARγ表达量低，而PPARγ基因过表达和活化不影响内源性PPARγ基因表达。结论：PPARγ1基因转染抑制IFN-γ诱导ECV304细胞galectin-9基因/蛋白表达可能是PPARγ基因发挥免疫调控作用的一个重要机制。     

Rab18通过PPARγ下调PLIN2以减少巨噬细胞脂质蓄积

目的:探讨Rab18是否通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)下调脂滴包被蛋白2(PLIN2以减少巨噬细胞脂质蓄积。方法:用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理THP-1巨噬细胞,通过Western blot法检测ox-LDL作用不同时间(0 h、6 h、12 h和24 h)后细胞内Rab18、PPARγ及PLIN2的表达情况,并使用油红O染色法观察细胞内脂质蓄积的变化。制备表达野生型、高活型和低活型Rab18的巨噬细胞,分别加入ox-LDL处理,用Western blot及细胞免疫荧光染色法检测细胞内PPARγ和PLIN2的表达量,并采用油红O染色法观察细胞内脂质蓄积情况。分别用PPARγ激动剂GW1929和抑制剂T0070907预处理表达高活型Rab18的巨噬细胞,再用ox-LDL孵育该细胞,Western blot及免疫荧光染色法分别检测巨噬细胞内PPARγ和PLIN2的表达量及PPARγ的核转位情况,同时采用油红O染色法观察细胞内脂质蓄积情况。结果:ox-LDL处理24 h后,THP-1巨噬细胞Rab18、PPARγ和PLIN2的表达水平显著增加,脂质蓄积增加(P0.05)。ox-LDL处理后,表达野生型和高活型Rab18的巨噬细胞中PPARγ及PLIN2表达下调,脂质蓄积减少(P0.05),而表达低活型Rab18的巨噬细胞上述指标则无明显变化。Rab18能抑制PPARγ的激活,并抑制其核转位。表达高活型Rab18的巨噬细胞中PLIN2表达下调能被PPARγ激动剂GW1929逆转,并使脂质蓄积增多。PPARγ抑制剂处理后,表达高活型Rab18的巨噬细胞中PLIN2表达及脂质蓄积进一步减少。结论:Rab18通过抑制PPARγ的激活下调PLIN2表达进而抑制巨噬细胞脂质蓄积。     

二甲双胍抑制脂多糖诱导的THP-1细胞源性泡沫细胞形成

目的探讨二甲双胍(Met)对脂多糖(LPS)诱导的THP-1来源泡沫细胞的形成、脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达的影响。方法采用100 ng/m L佛波酯(PMA)处理THP-1细胞48 h后,诱导其分化成为巨噬细胞;再利用50μg/m L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)和1μg/m L LPS促进THP-1细胞来源的巨噬细胞形成泡沫细胞,在此过程中用(0、100、200)μmol/L Met进行处理,采用油红O染色分析Met对泡沫细胞形成的影响;采用BODIPY493/503染色,荧光显微镜观察泡沫细胞内脂滴的形态和数量;抽提细胞内脂类,通过定量试剂盒测定细胞甘油三酯(TG)的含量;采用Western blot分析脂滴表面蛋白中脂肪分化相关蛋白(ADRP)、47 k Da的尾连蛋白(TIP47)的表达水平。结果与ox-LDL和LPS组相比,采用100μmol/L、200μmol/L Met处理后能够降低泡沫细胞内的脂滴大小和数量,定量分析显示细胞内TG含量明显降低,并存在剂量依赖关系,其中200μmol/L Met能够降低泡沫细胞中约25%的TG储积。Western blot结果显示,Met能够降低泡沫细胞中ADRP的表达水平,但对TIP47的表达水平无影响。结论 Met能够抑制LPS诱导的THP-1细胞源性泡沫细胞形成,并抑制脂质蓄积,同时下调细胞内ADRP的表达水平。     

甘氨酸对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响

目的：探讨甘氨酸对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及其机制。方法:诱导分化3T3-L1脂肪前体细胞为成熟的脂肪细胞，肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导建立脂肪细胞的胰岛素抵抗模型，以罗格列酮为阳性对照，观察甘氨酸干预后胰岛素受体底物-1（IRS-1）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）基因的表达。结果:正常对照组脂肪细胞IRS-1mRNA和PPARγ mRNA的表达最强；TNF-α组IRS-1mRNA和PPARγ mRNA表达显著低于正常对照组；TNF-α加罗格列酮组与TNF-α加甘氨酸组相似，IRS-1mRNA和PPARγ mRNA表达显著高于TNF-α组。结论:甘氨酸对TNF-α诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗具有抑制作用，其机制与其增强IRS-1、PPARγ基因的表达有关。     

罗格列酮上调成人隐匿性自身免疫糖尿病患者CD4+T细胞Foxp3 mRNA的表达

目的 观察罗格列酮对成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)患者CD4+调节性T细胞的影响,旨在探讨罗格列酮的免疫调节机制.方法 采用磁珠分离LADA患者CD4+T细胞,1、10和100 μmol/L罗格列酮干预CIM+T细胞.MTT法检测细胞活性,3H-TdR掺人法检测增殖抑制率.流式细胞术检测CD4+CD25+T细胞比值.RT-PCR检测过氧化物酶体增殖激活受体-γ(PPARγ)mRNA、TGF-β1 mRNA表达,实时荧光定量PCR检测Foxp3 mRNA表达.结果 CD4+T细胞表达PPARγmRNA.罗格列酮抑制植物凝集素(PHA)刺激的CD4+T细胞增殖.1μmol/L和10μmol/L组罗格列酮作用的CD4+CD25+T细胞比例无明显变化,100 μmol/L组CD4+CD25+T细胞比例降低.10μmol/L罗格列酮上调CD4+T细胞的Foxp3 mRNA表达,但TGF-β1 mRNA表达无显著变化.小剂量IL-2参与下,1μmol/L罗格列酮(药理浓度范围内)升高CD4+T细胞Foxp3mRNA表达.结论 罗格列酮上调LADA患者CD4+T细胞Foxp3 mRNA表达,改善自身免疫耐受缺陷.     

miR-155调控Tim-3的表达影响泡沫细胞形成的机制研究

目的 miR-155可以通过干扰巨噬细胞向泡沫细胞的转化来抑制动脉粥样硬化的形成,但具体机制不是十分清楚.本研究主要观察miR-155对巨噬细胞中Tim-3表达的影响,同时探讨了Tim-3在miR-155调控巨噬细胞向泡沫细胞转化过程中的作用.方法 培养人THP-1巨噬细胞,将miR-155 mimics、Ad-Tim-3转染到THP-1巨噬细胞中,实时荧光定量PCR和Western印迹检测相关基因的表达;液体闪烁计数测定THP-1巨噬细胞内胆固醇流出情况,HPLC检测胞内脂质含量;油红O染色显示胞内脂滴情况.结果 转染miR-155 mimics的THP-1巨噬细胞中Tim-3的表达水平被明显抑制,并呈时间依赖性;miR-155 mimics组细胞内胆固醇流出增加,胞内总胆固醇TC、胆固醇酯CE及游离胆固醇FC的含量明显减少,而转染Ad-Tim-3组和miR-155 mimics + Ad-Tim-3组则刚好出现相反的结果;结论 miR-155可以通过抑制巨噬细胞内Tim-3信号通路的活性来阻止巨噬细胞向泡沫细胞的转化.     

丹参酮ⅡA上调ABCA1表达促进泡沫细胞胆固醇流出

目的:探讨丹参酮ⅡA对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的鼠源巨噬细胞性泡沫细胞形成的影响及其机制。方法:体外培养的鼠源性巨噬细胞株,用ox-LDL(50μg/mL)孵育细胞以诱导泡沫细胞,同时用不同质量浓度的丹参酮ⅡA(10-5,10-4和10-3mol/L)处理。用油红O染色观察细胞荷脂情况,高效液相色谱法测定细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离胆固醇(free cholesterol,FC)和胆固醇酯(cholesteryl ester,CE)的水平。采用[3H]标记的胆固醇测定胆固醇流出率。实时定量PCR和Western印迹法分别检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)的mRNA和蛋白的表达。结果:Ox-LDL处理48 h后,与正常巨噬细胞相比,油红O染色阳性细胞数显著性增加,细胞体积明显增大,细胞内可见大量的脂滴,形态多呈不规则形。与泡沫细胞模型相比,10-4或10-3mol/L丹参酮ⅡA处理组油红O染色阳性细胞数显著减少,细胞内脂滴明显减少,细胞体积明显缩小。与泡沫细胞模型组相比,10-4或10-3mol/L丹参酮ⅡA显著性降低了细胞内TC,FC,CE水平和CE/TC比值,显著性增加了细胞胆固醇流出率和ABCA1mRNA和蛋白的表达。结论:丹参酮ⅡA可抑制ox-LDL诱导的鼠源巨噬细胞性泡沫细胞形成,其机制可能与丹参酮ⅡA增加泡沫细胞中ABCA1的表达,促进胆固醇流出有关。