细胞因子基因修饰人口腔鳞癌细胞株的建立及鉴定

用ＰＡ３１７包装的携带人ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α或ＩＬ－２ｃＤＮＡ３种逆转录病毒载体用来转染人口腔鳞癌细胞株Ｔｃａ－８１１３。经新霉素衍生物Ｇ４１８筛选出抗性克隆并扩增产生子代株。ＰＣＲ和细胞因子生物活性测定证实细胞因子基因整合入基因修饰细胞并通过细胞分泌相应活性蛋白产物。本研究显示对口腔鳞癌细胞的逆转录病毒介导细胞因子的基因转移方法切实、可靠。基因修饰细胞株的建立为研究其生物学行为提供了实验对象。     

人硫氧还蛋白及其变异体对TF—1和NFS60细胞的凋亡抑制和？…

目的：比较ｒｈＴＲＸ与ｒｈＴＲＸδ３对细胞因子依赖株ＴＦ－１细胞、ＮＦＳ６０细胞撤除细胞因子所诱导调亡的抑制及促细胞增殖作用。方法：在大肠杆菌中克隆并表达重组ｈＴＲＸ和ｈＴＲＸδ３，纯化ｒｈＴＲＸ和ｒｈＴＲＸδ３蛋白，ＦＡＣＳ检测凋亡细胞，ＭＴＴ法检测细胞增殖。结果：在依赖ＩＬ－３、ＧＭ－ＣＳＦ生长的ＴＦ－１细胞（人红白血病细胞）和依赖Ｇ－ＣＳＦ生长的ＮＦＳ６０细胞（小鼠白血病细胞）撤除细胞因子后     

抗人粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的研制

应用杂交瘤技术，用重组人Ｇ－ＣＳＦ（ｒｈＧ－ＣＳＦ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，然后将其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合，成功地获得了多种能够分泌抗ｒｈＧ－ＣＳＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交癌细胞。对其中的２株杂交瘤细胞２Ａ６和２Ｃ２分泌ＭｃＡｂ的研究表明，它们能够特异性地和ｒｈＧ－ＣＳＦ结合，而与重组的人ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－２α和ＴＮＦ细胞因子无交叉反应，为抗Ｇ－ＣＳＦ特异性ＭｃＡｂ。这些杂交瘤细胞经反复冻存和复苏后，仍能稳定地分泌ＭｃＡｂ。     

不同细胞因子对培养人外周血树突状细胞的影响

建立从人外周血分离，纯化，培养，扩增树突状细胞前体的方法，研究细胞因子对ＤＣ体外增殖，分化成熟的影响。方法 人外周血经血细胞分离仪及Ｆｉｃｏｌｌ，ｅｒｃｏｌｌ等不连续密度梯度离心获得的含ＤＣ前体细胞组分用重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子培养或用ＧＭ－ＣＳＦ及白细胞介素－４联合培养；光镜及电镜观察及ＡＢＣ法免疫增减细胞化学染色。     

不同细胞因子对培养人外周血树突状细胞的影响

目的建立从人外周血分离、纯化、培养、扩增树突状细胞（ＤＣ）前体的方法，研究细胞因子对ＤＣ体外增殖、分化成熟的影响。方法人外周血经血细胞分离仪及Ｆｉｃｏｌ、Ｐｅｒｃｏｌ等不连续密度梯度离心获得的含ＤＣ前体细胞组分用重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ｈｒＧＭ－ＣＳＦ）培养或用ＧＭ－ＣＳＦ及白细胞介素－４（ＩＬ－４）联合培养；光镜及电镜观察及ＡＢＣ法免疫细胞化学染色。结果分离的ＤＣ前体经１周左右时间培养，细胞数量可扩增２０～３０倍，纯度达９０％以上，ＧＭ－ＣＳＦ与ＩＬ－４联合培养所得到的ＤＣ数量约为用ＧＭ－ＣＳＦ培养的１．５倍。ＤＣ具有典型的树枝状或裙褶状突起，并表达高水平的ＨＬＡ－ＤＲ，其ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３的表达均为阴性。结论用ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－４联合作用更能促进ＤＣ的体外扩增及分化。     

IFN—α及其联合GM—CSF对CML患者骨髓细胞凋亡相关基因？…

目的：探讨ＩＦＮ－α及ＩＦＮ－α联合ＧＭ－ＣＳＦ调节慢性期慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ－ＣＰ）患者骨髓单个核细胞（ＭＮＣｓ）ｂｃｒ－ａｂｌ,ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。方法：淋巴细胞分离液离心富集１４例ＣＭＬ－ＣＰ患者骨髓ＭＮＣｓ,经干扰素－α（ＩＦＮ－α）及ＩＦＮ－α联合粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）培养２４ｈ后,采用相对定量逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及扩增片段光密     

阳离子脂质体介导细胞因子基因对小鼠肝癌抑制的作用

目的观察阳离子脂质体介导细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２基因对小鼠肝癌的抑制作用。方法构建含细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２的质粒载体,用阳离子脂质体ＬｉｐｏｆeｃｔＡＭＩＮＥ或ＤＯＳＰＥＲ介导的含细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２的质粒ＤＮＡ分别体外转染小鼠肝癌细胞株ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ,并在荷瘤小鼠体内分别直接注射上述阳离子脂质体－ＤＮＡ复合物,观察瘤体大小及小鼠生存期。结果两种阳离子脂质体介导的细胞因子转染后都具有生物学活性,转染效率为１０％左右,瘤内注射后均能延长荷瘤小鼠的生存期。ＤＯＳＰＥＲ介导细胞因子的治疗效果较佳。结论ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ或ＤＯＳＰＥＲ介导细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２基因均具有抑制小鼠肝癌生长、延长荷瘤小鼠生存期的作用,ＤＯＳＰＥＲ的效果较好。     

CIK细胞及LAK细胞对小鼠克洛氏肉瘤作用的实验研究

通过向ＰＢＭＣ中加入ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－α及抗ＣＤ３单克隆抗体,诱导出高效免疫活性细胞因子激活的杀伤细胞（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｕｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ,ＣＩＫ）,并建立了小鼠克洛氏肉瘤（Ｓ１８０）荷瘤动物模型,证实ＣＩＫ过继免疫疗法具有显著的抗肿瘤作用,其抑瘤率可达７８％;并同时以ＬＡＫ细胞作为对照,ＬＡＫ组的抑瘤率为３３．７０％,明显低于ＣＩＫ组１３．３０％（Ｐ〈０．０５）     

5Gy^60Coγ线照射与不同剂量CTX对小鼠骨髓造血系统损伤…

观察５Ｇｙ＾６０Ｃｏγ线急性照射和不同剂量的ＣＴＸ对小鼠红系祖细胞（ｃＦｕ－Ｅ）的损伤特点，发现５Ｇｙ照射后ｃＦｕ－Ｅ的损伤程度轻于ｃＦｕ－ＧＭ，恢复时间也较早，Ｈｂ和ＲＢＣ的变化趋势亦与其一致。实验所用药物剂量范围内，ＣＴＸ组的ｃＦｕ－Ｅ的损伤程度轻于照射组，但损伤持续时间长，恢复较慢，未见到剂量与ｃＦｕ－Ｅ效应的负相关；而ｃＦｕ－ＧＭ恢复却早于照射组。提示放射与ＣＴＸ对骨髓粒、红系造血的损伤…     

细胞因子对人绒毛瘤细胞JARβHCG分泌的影响

人绒毛膜促性激素（ＨＣＧ）的分泌调节机制至今仍不详。本文以经绒毛瘤细胞ＪＡＲ作为人滋养层细胞的模型，研究了ＩＦＮα、ＴＮＦ－α、Ｍ－ＣＳＲＦ、ＴＧＦ－β、ＵＫ和ＮＧＦ等细胞因子对β－ＨＣＧ分泌的影响。结果显示，ＩＦＮα和ＴＮＦ－α能显著地促进βＨＣＧ的分泌的并具有剂量依赖性，ＵＫ则能显著地抑制β－ＨＣＧ的分泌，而Ｍ－ＣＳＦ、ＴＧＦ－β和ＮＧＦ则无明显作用。细胞活性实验表明，高浓度的ＩＦＮα、ＴＮＦ     

应用清除支原体后的TF－1细胞检测人IL－3，IL－5，GM－CSF及EPO的生物学活性

作者将从国内有关实验室引进的一株受支原体污染的人红白血病细胞系ＴＦ－１，通过清除支原体和有限稀释法进行克隆化，获得一株对人ＩＬ－３，ＩＬ－５，ＧＭ－ＣＳＦ和ＥＰＯ均高度敏感的ＴＦ－１细胞亚克隆，并建立了稳定而敏感的人ＩＬ－３，ＩＬ－５，ＧＭ－ＣＳＦ及ＥＰＯ生物学活性检测方法．本方法的建立不仅可用于研究这四种细胞因子的表达调控和生物工程生产中这些细胞因子活性定量，而且还可用于这些细胞因子与其受体的相互作用以及受体的结构与功能关系的研究。     

Th1和Th2细胞因子对人T细胞趋化作用的调节

目的 研究ＩＬ－２,ＩＦＮ－γ,ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３等Ｔｈ细胞因子在体外对人体细胞趋化作用的调节。方法 采用４８微孔趋化板法观察不同预处理的Ｔ细胞趋化作用及Ｔｈ细胞因子对Ｔ细胞趋化作用及Ｔｈ细胞因子对Ｔ细胞趋化作用的调节效应。结果 ＩＬ－１能诱导过液培养Ｔ儿抗ＣＤ３单克隆抗体活化的Ｔ细胞的趋化作用,并且其趋化作用可被ｔｙｐｈｏｓｉｎ２３所抑制,ＩＬ－８则选择性吸引新鲜分离Ｔ细胞并可被ｓ     

TNF—α和IFN—α对淋巴细胞迁移至小鼠皮肢区的影响

目的 体内观察ＴＮＦ－α和ＩＦＮ－α两种细胞因子对淋巴细胞迁移至小鼠皮肤区的影响。方法 以近交系ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠为实验动物,皮内注射细胞因子,尾静脉输注标记的淋巴细胞,然后切除注射区皮块,制样后行乳化计数测量。测量值计算后转化成细胞浓度因子（ＣＣＦ）,用ＣＣＦ值反应淋巴细胞迁移的水平。结果 ＴＮＦ－α和ＩＦＮ－α注射区ＣＣＦ值均高于对照（Ｐ〈０．０１）;且ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－α联合应用的ＣＣＦ值是     

VP—16诱导PC—3细胞凋亡和bcl—2及kc—myc基因表达的研究

目的 研究ＶＰ－１６诱导ＰＣ－３细胞凋亡和癌基因ｂｌｃ－２及Ｃ－ｍｙｃ表达的关系。方法 用末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和流式细胞术（ＦＣＭ）研究ＰＣ－３细胞凋亡,以免疫组化方法研究ｂｃｌ－２及Ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。结果 ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ检测表明,ＰＣ－３细胞的凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用时间延长而升高;免疫组化结果显示：ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ基因表达的阳性百分率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用     

重组人肿瘤坏死因子诱导HL－60白血病细胞分化及调控原癌基因表达的作用

采用２０～２００Ｕ／ｍｌ的重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－α）处理体外液相培养的人早幼粒白血病细胞珠ＨＬ－６０，观察到５０～２００Ｕ／ｍｌ的小剂量ＴＮＦ具有诱导其向单核－巨噬细胞途径分化及抑制其增殖的效应。采用细胞总ＲＮＡ打点杂交技术检测１～１００Ｕ／ｍｌＴＮＦ诱导ＨＬ－６０细胞早期（１２小时内）对其ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达的影响，发现ＴＮＦ可抑制ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ水平及ｃ－ｆｏｓ短暂性表达增高。结果表明此小剂量ｒｈＴＮＦ－α具有诱导白血病细胞分化的效应及调控多癌基因表达的作用。     

卵巢癌抗独特型单链抗体6B11scFv／hGM—CSF融合蛋白质 …

目的：为提高卵巢癌抗独特型抗体的免疫原性，构建表达６Ｂ１１ｓｃＦｖ／ｈＧＭ－ＣＳＦ融合蛋白质，并对其活性进行测定。方法：用ＤＮＡ重组技术，将以前构建的６Ｂ１１ｓｃＦｖ－Ｌｉｎｋｅｒ－ｈＧＭ－ＣＳＦ融合基因克隆至ｐＥＴ１６（ａ＋）表达载体，表达可溶蛋白质，用ＥＬＩＳＡ分析技术和细胞增殖试验测定融合蛋白质的抗体和细胞因子活性，结果：融合蛋白质可实溶表达，能与ＣＯＣ１６６－９单抗和小鼠抗人ＧＭ－ＣＳＦ单     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。     

在单个细胞水平上对非小细胞肺癌胸水淋巴细胞细胞因子的表达

目的 分析非小细胞肺癌关口性胸水细胞中影响免疫状态的７种细胞因子的表达。初步探讨肿瘤局部免疫微环境对抗肿瘤免疫应答的影响。揭示肿瘤逃逸机制。方法 应用原位杂交技术检测非小细胞肺癌癌性胸水和结核性胸膜炎炎性胸水细胞中ＩＬ－２、ＩＮＦ－γ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ表达，比较其差异并进行半定量分析。结果 非小细胞肺癌癌性胸水细胞中ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β１、ＩＬ－４表达者显著高于ＩＬ－２、ＩＮＦ－γ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８，且显著高于对照组。结核患者表达的各细胞因子水平均较低，且各因子的表达细胞数量相互间无显著性差异。结论 非小细胞肺癌患者癌性胸水细胞中Ⅱ型细胞因子表达者占主导地位，ＩＬ－１０和ＴＧＦ－β１共同高表达，提示二者可能共同作用，参与形成非小细胞肺癌患者免疫抑制状态。     

hEGF cDNA导入培养的人角朊细胞及其表达

目的 观察外源性人表皮细胞生长因子（ｈＥＧＦ）基因导入正常导入正常角朊细胞后,能否表达及分泌ｈＥＧＦ;为深入探讨ｈＥＧＦ的作用机制及临床应用奠定物质基础。方法 脂质体包埋ｈＥＧＦ－ｃＤＮＡ的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈＥＧＦ转染人角朊细胞,经Ｇ４１８筛选,克隆,扩大及传代培养转基因的角朊细胞,特异性ｎｃｏ探针原位杂交显示转基因细胞内的质粒载体,ｈＥＧＦ抗体免疫细胞化学法观察转基因细胞内ｈＥＧＦ的表     

人卵巢上皮癌细胞中Th1和Th2类细胞因子表达及其意义

（１）目的 探讨人卵巢上皮癌细胞中Ｔｈ１和Ｔｈ２类细胞因子表达及其意义。（２）方法 采用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测５种卵巢癌细胞系和１０份卵巢癌新鲜组织中ＩＬ－２,ＩＦＮ－γ,ＩＬ－４,ＩＬ－６及ＩＬ－１０ｍＲＮＡ表达。（３）结果 ５种卵巢癌细胞系中４０％细胞株表达ＩＬ－４,６０％细胞株表达ＩＬ－６,８０％细胞株表达ＩＬ－１０,无１株表达ＩＬ－２和ＩＦＮ－γ,１０份卵巢癌组织中ＩＬ