非霍奇金淋巴瘤中EB病毒BNLF_1片段及其表达产物的检测及意义

为研究ＥＢ病毒与非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）的关系，采用ＰＣＲ、原位杂交、ＬＳＡＢ（ｌａｂｅｌｉｎｇｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｖｉｎｂｉｏｔｉｎ）免疫组化技术，检测３２例ＮＨＬ和３３例反应性增生淋巴结中的ＥＢＶＢＮＬＦ１基因片段及其表达产物潜伏膜蛋白（ＬＭＰ１）。ＮＨＬ中ＥＢＶＢＮＬＦ１ＰＣＲ扩增阳性率为５３％，明显高于反应性增生淋巴结组２７％（Ｐ＜０．０５），其中５例Ｔ细胞淋巴瘤全部阳性。１７例ＰＣＲ阳性的ＮＨＬ中５例原位杂交阳性。ＬＭＰ１检测仅２例阳性。结果表明本组病例半数以上ＮＨＬ中有ＥＢＶ感染，可能与肿瘤的发生发展有一定关系。     

应用PCR技术检测淋巴结病理切片中的IgCDR—Ⅲ基因重排

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测Ｂ细胞－非何杰金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）的单克隆性ＩｇＣＤＲ－Ⅲ基因重排，ＰＣＲ扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后为１００￣１２０ｂｐ的特异性ＤＮＡ区带。检测石蜡病理切片标本中非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ）１７／２３例、反应性增生２／５例发现单克隆性ＩｇＣＤＲ－Ⅲ基因重排；反应性增生３／５例及淋巴结转移癌４例未见单克隆性ＩｇＣＤＲ－Ⅲ基因重排。     

应用PCR技术检测淋巴结病理切片中的IgCDR－Ⅲ基因重排

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测Ｂ细胞－非何杰金淋马巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）的单克隆性ＩｇＣＤＲ－Ⅲ基因重排，ＰＣＲ扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后为１００～１２０ｂｐ的特异性ＤＮＡ区带。检测石蜡病理切片标本中非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ）１７／２３例、反应性增生２／５例发现单克隆性ＩｇＣＤＲ－Ⅲ基因重排；反应性增生３／５例及淋巴结转移癌４例未见单克隆性ＩｇＤＲ－Ⅲ基因重排。     

淋巴结外T细胞性淋巴瘤EB病毒感染和CD56表达关系的研究

目的：研究淋巴结外 Ｔ 细胞性淋巴瘤（ Ｔ－ ｃｅｌｌ Ｌｙｍ ｐｈｏｍ ａ, Ｔ Ｃ Ｌ）中 Ｅｐｓｔｅｉｎ－ Ｂａｒｒ 病毒（ Ｅ Ｂ病毒）感染情况及其同 Ｃ Ｄ５６ 表达关系。方法：对１５ 例淋巴结反应性增生和３３ 例淋巴结外 Ｔ 细胞性淋巴瘤应用原位杂交法检测 Ｅ Ｂ Ｅ Ｒｓ 和免疫组织化学法检测表面抗原 Ｃ Ｄ５６ 的表达。结果：淋巴结外 Ｔ细胞性淋巴瘤中 Ｅ Ｂ Ｅ Ｒｓ和 Ｃ Ｄ５６ 表达率分别为 ６３．６％ （２１／３３）和２４．２％ （８／３３）,淋巴结反应性增生中 Ｅ Ｂ Ｅ Ｒｓ 和 Ｃ Ｄ５６ 阳性表达率分别为 ０％ （０／１５）和２６．７％ （４／１５）。 Ｅ Ｂ Ｅ Ｒｓ 和 Ｃ Ｄ５６ 表达无相关性（ Ｐ＞ ０．０５）。结论：表明 Ｅ Ｂ病毒高度感染淋巴结外 Ｔ细胞性淋巴瘤,可能是其发生的一个重要因素,但 Ｅ Ｂ病毒感染同 Ｃ Ｄ５６ 表达无关。     

48例非霍奇金淋巴瘤的P53基因突变

采用ＡＢＣ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法在４８例ＮＨＬ中研究Ｐ５３基因外显子５－８中发生突变的类型、频率与突变型Ｐ５３蛋白的表达以及它们与病理分型、恶性程度的相关性。结果：突变型Ｐ５３蛋白在ＮＨＬＫ 的阳性率为４１．７％，其中在弥漫型大细胞性淋巴瘤（ＤＬＣＬ）为７５％，在非ＤＬＣＬ为３５％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５）；在Ｐ５３蛋白表达阳性的ＮＨＬＫ ＰＣＲ－ＳＳＣＰ阳性主要见于ＤＬＣＬ，检出率为１５％，在     

48例非霍奇金淋巴瘤中的p53基因突变

采用ＡＢＣ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法在４８例ＮＨＬ中研究ｐ５３基因外显子５～８中发生突变的类型、频率与突变型ｐ５３蛋白的表达以及它们与病理分型、恶性程度的相关性。结果：突变型ｐ５３蛋白在ＮＨＬ中的阳性率为４１．７％，其中在弥漫型大细胞性淋巴瘤（ＤＬＣＬ）为７５％，在非ＤＬＣＬ为３５％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５）；在ｐ５３蛋白表达阳性的ＮＨＬ中ＰＣＲＳＳＣＰ阳性主要见于ＤＬＣＬ，检出率为１５％，在非ＤＬＣＬ中ＰＣＲ－ＳＳＣＰ均为阴性（Ｐ＜０．０５）。表明国人ＮＨＬ，尤其在恶性程度很高的ＤＬＣＬ中存在ｐ５３基因突变，各型ＮＨＬ都有不同程度的突变型ｐ５３蛋白表达     

EBER1／2及LMP—1在不同类型非霍奇金淋巴瘤中的表达

目的 探讨ＥＢＥＲ１／２及ＬＭＰ－１在不同类型ＮＨＬ中的表达及意义。方法 用ＬＭＰ－１免疫组化与ＥＢＥＲ１／２原位杂交检测５４例ＴＣＬ,６３例ＢＣＬ及２６例ＮＫ／Ｔ淋巴瘤。结果 ＥＢＥＲ１／２阳性率在ＢＣＬ、ＴＣＬ、ＮＫ／Ｔ淋巴瘤中分别是９．５％、３７．０％、４６．２％,ＢＣＬ组和ＮＫ／Ｔ组比较,均有显著差异（Ｐ〈０．０１）,其中阳性病例大多数位于上呼吸道。ＬＭＰ－１阳性率在ＥＢＥＲ１／２阳性的Ｂ     

102例乳腺癌中的EB病毒感染

目的探讨国人乳腺癌中ＥＢ病毒ＤＮＡ（ＥＢＶ－ＤＮＡ）的检出率及ＥＢ病毒（ＥＢＶ）基因编码蛋白的表达情况。方法（１）在１０２例乳腺癌中用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增ＥＢＶ内部重复序列ＢａｍＨＩＷ区域，并以３４例乳腺纤维腺瘤，３例管内乳头状瘤和１０例乳腺导管上皮增生作为对照组；（２）用ＡＢＣ免疫组织化学技术检测其中７３例乳腺癌中的ＥＢＶ潜在膜蛋白（ＬＭＰ）和ＥＢＶ核抗原２（ＥＢＮＡ２）。结果（１）ＰＣＲ检测显示２９例（２８．４％）乳腺癌有ＥＢＶ－ＤＮＡ，而对照组中仅２例（４．３％）纤维腺瘤有ＥＢＶ－ＤＮＡ，两组的差异在统计学上有显著意义（Ｐ＜０．００１）；（２）免疫组化技术显示ＬＭＰ和ＥＢＮＡ２阳性率分别为１３．７％和１７．８％，且阳性物质定位于肿瘤细胞，而非肿瘤中浸润的淋巴细胞。结论ＥＢＶ感染与乳腺癌的发病可能有一定关系，明确ＥＢＶ感染在乳腺癌发病机制中的作用将有十分积极的意义。     

用PCR检测人淋巴组织中弓形虫

将淋巴结病理组织提取ＤＮＡ后，用Ｔｇ－ＤＮＡＰＣＲ药盒体外扩增弓形虫ＤＮＡ。结果显示，１２０例淋巴结病理标本中，７例可检出２１０ｂｐ的扩增产物，其中３例ＨＤ（３／３２），２例ＮＨＬ（２／４１），２例ＣＬ（２／４７）。取ＰＣＲ扩增产物进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ杂交试验（ＰＣＲ－ＳＢＨ），发现除原有７例阳性外，ＣＬ患者中另１例阳性；总检出率为６．６７％（８／１２０）。ＨＤ，ＮＨＬ及ＣＬ的阳性率分别为９．３８％，４．８８％和６．３８％。     

应用PCR检测恶性淋巴瘤骨髓浸润及其临床意义

目的：检测恶性淋巴瘤（ＭＬ）的骨髓浸润（ＩＢＭ）并探讨其与临床分期、疗效和预后的关系。方法：以克隆性ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排分别作为Ｂ和Ｔ细胞淋巴瘤克隆基因标志，应用ＰＣＲ基因扩增技术检测ＭＬ患者ＩＢＭ。结果：（１）３４份ＭＬ患者骨髓标本ＩＢＭ检出率为７０．６％（２４／３４），明显高于形态学检测方法（３８．６％，Ｐ＜０．０５）。（２）１９例形态学检测正常的非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）骨髓标本，ＩＢＭ阳性率５７．９％（１１／１９），其中８例Ｂ－ＮＨＬ（８／１４）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排；５例同时还检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，２例Ｔ－ＮＨＬ（２／３）检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，无克隆性ＩｇＨ基因重排；２例免疫分型不明确ＮＨＬ患老中１例（１／２）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排，无克隆性ＴＣＲ，基因重排。２例霍奇金病（ＨＤ）和１０例非淋巴系肿瘤骨髓ＩＢＭ均阴性。（３）Ⅲ，Ⅳ期ＮＨＬ患者ＩＢＭ检出率显著高于ＩＩ期（ｐ＜０．０１），初诊未治及复发患者也显著高于部分或完全缓解患者（Ｐ＜０．０１）。（４）ＩＢＭ阳性组ＮＨＬ２年死亡率５４．５％（６／１１），明显高于ＩＢＭ阴性（ｐ＜０．０５）。结论：ＰＣＲ方法检测ＩＢＭ有助于估     

B细胞性非霍奇金淋巴瘤的CD_(44)V_6表达及其临床意义

目的：研究Ｂ细胞性非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）组织中ＣＤ４４变异体ＣＤ４４Ｖ６的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化方法，检测４９例Ｂ淋巴细胞性ＮＨＬ，６例淋巴结反应性增生的ＣＤ４４Ｖ６表达情况。结果：Ｂ细胞性ＮＨＬＣＤ４４Ｖ６基因蛋白表达阳性率明显高于淋巴结反应性增生，ＣＤ４４Ｖ６阳性表达与病理分期、恶性度有一定关系。结论：ＣＤ４４Ｖ６与Ｂ细胞性ＮＨＬ的发生、发展相关，可作为判断肿瘤预后的指标。     

非霍奇金淋巴瘤细胞增殖活性和组织学恶性程度及预后的关系

１３１例非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）按国际工作分类分低、中、高度恶性（ＬＧ、ＭＧ、ＨＧ）３组。对ＮＨＬ和１４例反应性增生淋巴组织（ＲＬＨ）作核分裂计数（ＭＦ），银染核仁组成区（ＡｇＮＯＲｓ）计数，并用ＭＢＣ法检测部分病例的增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和Ｋｉ＿６７抗原。ＭＦ、ＡｇＮＯＲｓ、ＰＣＮＡ及Ｋｉ＿６７检测结果有较好相关性（ｒ值０．６１２，Ｐ＜０．０１），均和ＮＨＬ恶性度呈正相关，ＬＧ、ＭＧ、ＨＧ及ＲＬＨ组间有显著性差异（Ｐ＜０．０１，但ＬＧ和ＲＬＨ组Ｐ＞０．０５），表明细胞增殖活性的检测有助于了解ＮＨＬ恶性度，但不能区分ＬＧ和ＲＬＨ。ＭＧ中弥漫小裂细胞型（ＤＳＣ）细胞增殖活性低于同组其它类型（Ｐ＜０．０５），但与ＬＧ无显著性差异（Ｐ＞０．０５），预后相对较好，拟属ＬＧ。ＭＦ、ＡｇＮＯＲｓ和ＰＣＮＡ值越高，生存期越短，表明细胞增殖活性有助于预测ＮＨＬ预后。ＭＦ和ＡｇＮＯＲｓ经济易行；Ｋｉ６７全面反映增殖细胞的数量，仅用于冰冻切片；ＰＣＮＡ可用于石蜡切片，便于回顾性研究。     

PCR法检测EB病毒基因及其与鼻咽癌发病的关系

目的　研究患者颈部转移性淋巴结中是否存在ＥＢ病毒。方法　①采用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 技术检测５０ 例患者的颈部淋巴结穿刺液;②采用ＰＣＲ法检测１５ 例石蜡包埋鼻咽癌（ＮＰＣ） 组织;③对１２例ＥＢ病毒ＶＣＡＩｇＡ 抗体阳性患者血清进行ＥＢ 病毒基因检测。结果　①３０ 例ＮＰＣ 患者中,２７ 例ＥＢＶＤＮＡ 阳性（ 阳性率９０ ％ ） ;７ 例头颈部其他肿瘤患者中１ 例阳性（１４－３ ％ ） ;８ 例其他部位肿瘤患者中１ 例阳性（１２－５ ％ ） ;５ 例鼻咽部炎症患者ＥＢＶＤＮＡ 检测均为阴性。经χ２ 检验,ＮＰＣ 组与其他肿瘤及鼻咽部炎症组相比,阳性率差异有非常显著意义（ Ｐ＜ ０－００５） 。②１５ 例石蜡包埋ＮＰＣ 组织,ＥＢＶ基因阳性者有１２ 例（ 阳性率８０ ％ ） ;１ 例鼻咽部慢性粘膜炎石蜡包埋组织末检测到ＥＢＶＤＮＡ。③３ 例临床诊断为ＮＰＣ 的血清中均检测到ＥＢＶＤＮＡ（２５ ％ ） 。结论　对于隐性鼻咽癌和原发灶不明的颈部转移癌中确认是否为鼻咽癌,ＥＢ 病毒基因检测是有价值的,ＰＣＲ 技术可以为ＮＰＣ 的诊断和鉴别诊断提供参考依据。     

非鼻咽部T细胞淋巴瘤与EB病毒的相关性

探讨ＥＢ病毒感染与非鼻咽部Ｔ细胞淋巴瘤的关系。用单克隆抗体ＵＣＨＬ－１，Ｌ２６及ＥＢ病毒编码的潜在膜蛋白－１，免疫组化染色确定肿瘤的免疫表型及ＥＢ病毒转化蛋白的表达。采用原位杂交方法检测ＥＢＶ编码的ＥＢＥＲＳ。结果；２１例非鼻咽部Ｔ细胞淋巴瘤ＥＢＥＲＳ５例阳性，其中结内淋巴瘤３例，肺和胃肠淋巴瘤各１例。阳性细胞约占肿瘤细胞的１０％－７０％。５例ＥＢＥＲｓ阳性病例中仅１例表达ＬＭＰ－１，为结内淋巴瘤     

一步及半巢式PCR检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH重排的比较

目的：建立一种简便有效的方法,来检测Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。方法：以ＩｇＨ的第三互补决定簇区（ＩｇＨ－ＣＤＲ３）为标志,用消化煮沸法和酚－氯仿法提取３６例Ｂ－ＮＨＬ及１０例扁桃体炎的石蜡包埋组织的基因组ＤＮＡ,比较两进行一步及半巢式聚合酶链反应（ＳｎＰＣＲ）,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后检测克隆性ＩｇＨ重排的结果。结果：Ｂ－ＮＨＬ组,３４例经酚－氯仿法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ－ＣＤＲ３重排的阳性率分别为２６．５％和７６．５％（Ｐ〈０．０５）;２７例经消化煮沸法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７．４％和６６．７％（Ｐ〈０．０５）;２５例同时用上述２种方法提取ＤＮＡ,ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７６％和６８％（Ｐ〉０．０５）。对     

鼻咽癌体外传代细胞株SUNE中EBV-LMP_1全基因的扩增

用长片段高保真度ＰＣＲ扩增系统（ｅｘｐａｎｄＴＭｈｉｇｈｆｉｄｅｌｉｔｙＰＣＲｓｙｓｔｅｍ）从鼻咽癌（ＮＰＣ）体外传代细胞株ＳＵＮＥ中扩增出ＥＢ病毒（ＥＢＶ）潜伏膜蛋白（ＬＭＰ１）全基因，经凝胶电泳分析和ＤＮＡ斑点杂交进行鉴定。扩增片段长度为３．４３ｋｂ，相当于Ｂ９５－８细胞ＥＢＶ基因序列位置为１７００３３～１６６６０８ｎｔ，包括ＬＭＰ１基因的上游启动子／增强子序列、ＬＭＰ１编码序列的３个外显子、两个内含子及下游ｐｏｌｙＡ信号序列。ＬＭＰ１全基因的扩增对于深入研究ＬＭＰ１基因的结构与功能以及ＬＭＰ１在ＮＰＣ发生发展中的作用机制具有十分重要的价值。     

淋巴组织增生性疾病组织中检测细小病毒B19的意义

目的;探讨人细小病毒Ｂ１９（ＨＰＶＢ１９）与增生性淋巴组织疾病的相关性。方法：慢性淋巴结炎伴反应性增生４２例,恶性淋疾病的相关性,方法：慢性淋巴结炎伴反应性增４２例,恶性淋巴瘤２９例,结核性淋巴结炎１５例,采用巢式ＰＣＲ技术扩增８６例石包埋活检淋巴结组织Ｂ１９－ＤＮＡ。结果：检出Ｂ１９ＤＮＡ１８例,阳性率为２０．９％,其中慢性淋为检出１５例,阳性率３５．７％;恶性淋巴瘤检出３例,阳民生率为１０．３     

EB病毒与淋巴增生性病变关系的研究

用ＥＢ病毒单克隆抗体通过三步放大间接免疫过氧化物酶方法检测５例淋巴增生性病变。包括Ｔ细胞淋巴瘤。Ｘ连锁淋巴增生性疾病（ＸＬＰ）患者的淋巴结及淋巴结反应性增生。３例标本对ＥＢ病毒单克隆抗体ＥＢＮＡ、ＥＢＮＡ２及ＥＡ表现较强阳性反应，对ＶＣＡ及ＥＡ－Ｒ呈不同程度阳性反应。用ＥＢ病毒抗原单克隆抗体检测标本中ＥＢ病毒基因编码的蛋白质表现是研究ＥＢ病毒相关疾病的特异性高、敏感、而且简便、迅速的方法。     

应用PC检测恶性淋巴瘤骨髓浸润及其临床意义

目的；检测恶性淋巴瘤（ＭＬ）的骨髓浸润（ＩＢＭ）并探讨其与临床分期、疗效和预后的关系。方法；以克隆性ＩｇＨ和ＴＣＴＲ．基因重排分别作为Ｂ和Ｔ细胞淋巴瘤克隆基因标志，应用ＰＣＲ基因扩增技术检测ＭＬ患者ＩＢＭ。结果；（１）３４份ＭＬ患垧骨髓标本ＩＢＭ出率为７０．６％（２４／３４），明显高于形态学检测方法（３８．６％，Ｐ〈０．０５）。（２）１９例形态学检测正常的非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）骨髓标本，ＩＢＭ阳     

何杰金病单克隆抗体免疫组化研究

应用标记Ｒ－Ｓ细胞、Ｂ淋巴细胞和Ｔ淋巴细胞的５种单克隆抗体ＬｅｕＭ_１、ＢｅｒＨ_２、ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１对４３例何杰金病（ＨＤ）的石蜡标本进行了免疫组织化学染色，以Ｔ、Ｂ细胞淋巴瘤各１５例作对照研究。结果：非淋巴细胞为主型何杰金病（ｎｏｎＬＰＨＤ）的Ｒ－Ｓ细胞对ＬｅｕＭ_１的阳性率为６４．３％，对ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１呈阴性反应；而非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ），ＬｅｕＭ_１仅偶在Ｔ细胞淋巴瘤中呈阳性（６．７％），ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１标记ＮＨＬ、Ｂ－ＮＨＬ和Ｔ－ＮＨＬ阳性率分别是８３．３％、７３．３％和６６．７％。因此，在石蜡切片上联合应用ＬｅｕＭ１、ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１对鉴别ＨＤ与ＮＨＬ有重要的参考价值。淋巴细胞为主型何杰金病（ＬＰＨＤ）的Ｒ－Ｓ细胞对ＬＣＡ和Ｌ_（２６）的阳性率为５３．３％和６０％，ｎｏｎＬＰＨＤ中Ｒ－Ｓ细胞对ＢｅｒＨ_２的阳性率为２１．４％。提示ＬＰＨＤ的Ｒ－Ｓ细胞来源于Ｂ淋巴细胞，ｎｏｎＬＰＨＤ的Ｒ－Ｓ细胞可能与活化的淋巴细胞有关。