血管内皮生长因子siRNA联合丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究

血管内皮生长因子(VEGF)是目前发现最强效的促血管生长因子,也是目前肿瘤治疗的理想靶点[1,2].本研究旨在观察利用小干扰RNA技术下调VEGF表达与丝裂霉素(MMC)联合应用对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响.     

小干扰RNA抑制肝癌HepG2细胞VEGF表达的研究

目的 观察小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)对肝癌HepG2细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制作用.方法 将VEGF siRNA经LipofectamineTM 2000脂质体转染肝癌HepG2细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot方法分别检测VEGF mRNA和蛋白的表达,ELISA检测细胞培养上清液中VEGF蛋白浓度. 结果细胞培养6 h后siRNA的转染效率为(90.4±2.9)%,转染后肝癌HepG2细胞中VEGF mRNA和蛋白的表达明显减少,细胞培养上清液中VEGF蛋白表达下降. 结论运用RNA干扰技术,可以有效地干扰肝癌HepG2细胞VEGF的表达并能降低VEGF的生成.     

VEGF siRNA抑制人胰腺癌PANC-1细胞体外生长的研究

目的 了解载体携带的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人胰腺癌细胞株PANC-1血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的抑制作用以及对肿瘤细胞生长的影响.方法 设计并合成2对针对VEGF的siRNA真核表达载体(PU-...     

RNA干扰技术在以VEGF/VEGFR为靶点的膀胱癌治疗研究中的应用前景

RNA干扰（RNAi）是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象，它是指当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA（dsRNA），该mRNA发生降解而导致基因沉默的现象。利用RNAi技术干涉VEGF表达，达到抑制肿瘤发展和转移的研究已较为广泛。膀胱癌生长、转移不仅有VEGF表达增多，同时发现VEGFR表达亦增高，成为RNAi的新靶点。现主要综述以VEGF/VEGFR为靶点的RNAi技术在膀胱癌治疗研究中的优势、发展前景以及存在问题与对策。     

腺病毒介导RNA干扰对人结肠癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的抑制作用

RNA干扰已成为当前肿瘤基因治疗的新策略[1].我们构建通过血管内皮生长因子(VEGF)-C靶向的小干扰RNA(siRNA),插入腺病毒载体,干预人结肠癌裸鼠移植瘤模型,探讨其对肿瘤生长及淋巴管生成的影响.     

膀胱癌患者尿液中血管内皮生长因子的检测

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)与膀胱移行细胞癌发生及浸润的关系。　方法　应用ELISA法对 36例膀胱移行细胞癌患者、7例BPH患者新鲜尿液中VEGF水平进行检测分析。　结果　膀胱癌患者尿液VEGF浓度 (2 10 .97± 15 4 .6 8)pg/ml,BPH患者尿液VEGF浓度 (3.73±2 .6 3) pg/ml,P <0 .0 0 5 ,差别有显著性意义 ,VEGF浓度随肿瘤病理分级增高而升高 ,浸润性膀胱癌组VEGF浓度 (341.34± 196 .84 ) pg/ml,高于浅表性癌组 (44 .88± 16 .85 ) pg/ml,P <0 .0 0 5 ;复发组VEGF浓度 (2 92 .5 9± 186 .6 7) pg/ml,初发组 (88.4 9± 16 .5 8) pg/ml,差别均有显著性意义 (P <0 .0 0 5 )。　结论　VEGF对膀胱癌生物学行为有重要影响 ,可作为膀胱癌生物学行为的指标之一     

RNA干扰沉默血管内皮生长因子对人膀胱癌细胞株T24增殖和凋亡的影响

目的 观察RNA干扰沉默血管内皮生长因子(VEGF)对膀胱癌细胞株T24增殖和凋亡的影响.方法 构建了4个针对VEGF的小干扰RNA(siRNA)表达质粒pGC-siVEGF1-4,脂质体法稳定转染T24细胞.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(EUSA)检测转染细胞VEGF mRNA和蛋白表达,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡情况.结果 4个VEGF siRNA表达质粒均能明显抑制转染细胞的VEGF mRNA和蛋白表达,使细胞增殖减慢,其中以pGC-siVEGF3最为明显,细胞增殖受抑达38.9%(t=18.49,P《0.01).且该组出现了最大程度G0/G1细胞阻滞(59.8±1.4),明显大于空质粒组(48.5 ±1.5),差异有统计学意义(P《0.01),该组的细胞凋亡率也最高(17.4%).结论 VEGF siRNA表达质粒可下调T24细胞VEGF表达,抑制膀胱癌细胞生长并促进其凋亡.     

尿液血管内皮生长因子含量检测在诊断膀胱癌中的作用

目的　探讨尿液中血管内皮生长因子 (VEGF)含量测定诊断膀胱癌的价值。　方法　采用ELISA法测定 33例膀胱癌、10例泌尿系良性疾病患者和 10例健康志愿者尿液中VEGF含量。结果　 33例膀胱癌患者尿VEGF平均含量 (30 9.8± 86 .6 )ng/gCr ,2 0例非肿瘤对照组为 (10 7.6± 35 .4 )ng/gCr,两者差别有显著性意义 (P <0 .0 5 )。T2 、T3 患者尿VEGF平均含量显著高于T1(P <0 .0 5 ) ;G3组尿VEGF平均含量显著高于G1和G2 组 (P <0 .0 5 )。尿VEGF含量与肿瘤体积相关。以对照组尿液VEGF水平上限 (14 3ng/gCr)为阳性界值时 ,诊断膀胱癌的灵敏度为 90 .9% (30 / 33) ,特异性为 80 .0 % (16 / 2 0 )。　结论　尿VEGF含量检测方法简便 ,无创 ,具有较高的敏感性和特异性 ,可作为膀胱癌的诊断指标之一。     

VEGF特异2'-O-甲基化修饰siRNA抑制膀胱癌VEGF表达的实验研究

目的 研究VEGF特异性化学修饰RNA干扰对膀胱癌细胞增殖的影响.方法 针对VEGF构建siRNA表达载体PsilencerTM-VEGF-siRNA,为增加siRNA的稳定性,对VEGFsiRNA进行2'-O-甲基化化学修饰.通过Lipofectamine 2000将质粒转染到膀胱癌细胞,荧光显微镜观察siRNA转染效率,确定最佳时间点;分别采用Western Blot、RT-PCR检测VEGF蛋白含量及mRNA水平变化;MTT法检测细胞增殖率.结果 ①2'-O-甲基化化学修饰PsilencerTM-VEGF-siRNA表达载体构建成功;②脂质体与DNA最佳转染效率比例为:2μl∶1μg,48 h细胞存活状态最好;③48h转染效率在50％ ～ 60％,与对照组相比,转染PsilencerTM-VEGF-siRNA后蛋白及mRNA水平均下降;④MTT法检测显示:siRNA阳性对照组、VEGFsiRNA组与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 化学修饰的siRNA能够有效抑制膀胱癌中VEGF的表达,其稳定性增加,从而有效抑制膀胱癌细胞的生长.     

膀胱癌组织及血、尿中血管生成因子和抑制因子表达的意义

目的 探讨膀胱癌患者血清、尿液及癌组织中血管生成因子和抑制因子的表达水平与膀胱癌分级、分期的相关性,为运用内源性血管生成抑制因子抗膀胱癌治疗提供依据.方法 采用ELISA法检测20例不同分级、分期膀胱癌患者血清、尿液中血管内皮生长因子(VEGF))、血管抑素(AS)、内皮抑素(ES)和Kringle 5(K5)水平,免疫组织化学法检测膀胱癌组织标本中VEGF、AS、ES和K5表达情况.结果 高分级、高分期组膀胱癌患者血清、尿液中VEGF、AS、ES和K5水平均高于低分级、低分期组(均P＜0.05);在膀胱癌组织中,VEGF、AS、ES和K5主要着色部位为癌细胞胞质和癌细胞周围微血管内皮细胞,除K5外,VEGF、AS和ES在高分级、高分期膀胱癌组织中的表达均较低分级、低分期膀胱癌组织中的表达要高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 膀胱癌组织及血清、尿液中VEGF、AS和ES表达水平与肿瘤分级、分期呈正相关.     

RNA干扰技术抑制人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子-165蛋白的表达

目的 观察RNA干扰技术能否有效抑制人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子(VEGF)-165蛋白的表达.方法 体外合成3条VEGF-165序列特异性双链小RNA(shRNA)及1条阴性对照RNA,应用RNAiFectTMTransfection试剂盒转染细胞.Western blot法检测VEGF-165蛋白的表达,MTT及细胞计数法检测siRNA转染对细胞活性的影响.结果 随时间延长,目的siRNA对VEGF165蛋白表达有不同程度的影响,干扰时间越长,效果越明显.自干扰后24 h起,各组VEGF165蛋白的表达差异有统计学意义(对照组相对灰度为0.96±0.27;干扰组24 h相对灰度为0.81±0.10;48 h:0.52±0.12;72 h:0.36±0.10,P<0.05).噻唑蓝(MTT)比色法检测表明不同浓度siRNA及RNAiFect Reagent对细胞生长均无明显的抑制作用,与对照组之间差异无统计学意义(对照组:0.329±0.013;干扰组为0.329±0.017～0.357±0.042,P>0.05).细胞计数法检测表明不同浓度siRNA及RNAiFect Reagent对细胞生长增殖无明显影响.细胞与对照组之间差异无统计学意义(24 h:对照组1.56±0.11;干扰组1.47±0.12.72 h:对照组4.38±0.38;干扰组4.61±0.41,P>0.05).结论 siRNA可以有效抑制人肺腺癌细胞系A549 VEGF165蛋白的表达.     

血管内皮生长因子-C短发夹RNA对肝癌细胞的抑制作用

我们通过构建靶向血管内皮生长因子(VEGF)-C的短发夹RNA(shRNA)质粒载体,观察其对肝癌细胞增殖及侵袭转移能力的抑制效应,探讨靶向VEGF-C的RNA干扰(RNAi)应用于肝癌基因治疗的可行性[1].     

肿瘤组织VEGF表达和MVD与膀胱癌预后的关系

目的:探讨肿瘤组织中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达和微血管密度(Microvessel density,MVD)与膀胱癌预后的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测62例膀胱癌手术标本中VEGF和MVD。结果:VEGF阳性表达率为63%,VEGF阳性表达的肿瘤组织中的MVD明显高于阴性者(P<0.01);VEGF表达和MVD与肿瘤的浸润生长、血行转移、淋巴结转移具有明显相关关系(P<0.05,P<0.01);VEGF阳性表达者的预后较阴性者差;多因素分析表明,VEGF和MVD可能成为判断膀胱癌预后的新因素。结论:VEGF表达和MVD与膀胱癌的恶性进程和不良预后有关,测定VEGF和MVD可能是判断膀胱癌预后有价值的指标。     

VEGF与膀胱尿路上皮癌微血管密度及预后的相关性研究

级分期明显相关(P<0.05),提示VEGF阳性表达者的预后较阴性者差. 结论 VEGF的异常表达是膀胱癌微血管形成能力增高的重要因素.VEGF表达与膀胱癌MVD增加及恶性进程和不良预后有关,是判断膀胱癌预后有价值的指标.     

碱性成纤维细胞生长因子小干扰RNA对胰腺癌细胞血管内皮细胞生长因子表达的调节作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)小干扰RNA(siRNA)对胰腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响.方法 利用siRNA技术抑制VEGF及bFGF表达,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰腺癌细胞株VEGF表达变化.结果 Panc-1及PCT-3细胞VEGF mRNA表达受到显著抑制,Panc-1为0.20 ±0.05,PCT-3为0.23±0.02.sw1990及PCT-3分泌VEGF受到显著抑制,sw1990为(1940.67 ±93.84) ng/L,对照组为(2560.67±181.79) ng/L;PCT-3为(174.00±98.73) ng/L,对照组为(779.33 ±317.52) ng/L.结论 bFGFsiRNA能够抑制胰腺癌细胞VEGF核酸及蛋白水平表达.     

吡柔比星灌注化疗对膀胱癌患者血液中血管生长内皮因子的影响

目的：探讨吡柔比星(THP)对膀胱癌患者血液中血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法：采用双抗体夹心ELISA法对21例膀胱癌患者及10例正常人血液中VEGF的检测，研究膀胱癌患者在THP化疗前、后和术后血液中VEGF的变化，以及不同分级和不同浸润程度的患者在化疗前、后血液中VEGF的表达。结果：THP的灌注化疗，能明显降低膀胱癌患者血液中的VEGF的水平。结论：THP能有效地杀死膀胱癌细胞，降低患者血液中VEGF的水平。     

RNA干扰对转染Livin基因的膀胱癌细胞凋亡诱导的影响

我们采用RNA干扰(RNAi)技术阻抑Livin基因表达[1],观察其对丝裂霉素(MMC)诱导细胞凋亡的影响. 材料与方法选用人膀胱癌T24细胞株;siRNA由上海吉玛公司合成,正义链:5′-GGGACCACGUGGAUGGGC-AdTdT-3′,反义链:5′-UGCCCAUCCACGUGGUCCCdAdG-3′.     

RNA干扰Survivin基因对裸鼠原位膀胱癌的治疗作用

我们利用原位膀胱癌动物模型评价通过RNA干扰下调Survivin表达对膀胱癌的治疗作用,并探讨其作用机制. 一、材料与方法 1.材料:人膀胱癌细胞株T24购于中国科学院上海生物细胞研究所,培养于含有10%胎牛血清的IMDM培养基.     

慢病毒介导的Clusterin基因沉默抑制膀胱癌EJ细胞增殖及转移

目的探讨慢病毒介导的Clusterin(CLU)基因沉默的RNA干扰效果及其对膀胱癌EJ细胞增殖和转移的影响。方法构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,用Westernblot检测其对膀胱尿路上皮癌细胞株EJ的干扰效果,用MTT、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验等方法分别检测CLU沉默后膀胱癌EJ细胞在增殖、侵袭和转移等方面的细胞生物学改变。结果靶向CLU基因的慢病毒干扰载体感染膀胱癌EJ细胞后,CLU基因在蛋白水平的表达明显下降。EJ细胞的增殖、侵袭和转移能力均受到抑制。结论 CLU慢病毒干扰载体可有效沉默膀胱癌EJ细胞内源性CLU基因,抑制膀胱癌EJ细胞的增殖、侵袭和转移。     

非对称性小RNA干扰技术介导的USP22基因沉默的研究

目的 观察非对称小干扰RNA(aiRNA)对膀胱癌EJ细胞泛素特异肽酶22(USP22)基因的沉默效率及特异性的影响.方法 设计并合成USP22基因的小干扰RNA(siRNA)及aiRNA,利用脂质体Translipid转染EJ细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测转染前后EJ细胞USP22 mRNA的表达水平变化,比较USP22 siRNA与USP22 aiRNA对USP22基因沉默效率及特异性的差异.结果 浓度为50 nmol/L的15/21 USP22 aiRNA能明显抑制EJ细胞中USP22基因mRNA的表达,转染48 h后USP22 mRNA的表达水平下降到最低[(8.30±1.68)%,P＜0.05],且其沉默效率和特异性明显优于USP22 siRNA.结论 以非对称小RNA干扰技术为基础设计的USP22aiRNA能够有效沉默USP22基因,并且降低了非特异性的脱靶效应,减少了受RNA干扰中的"饱和机制"及"竞争机制"的影响,弥补了传统siRNA的一些不足.