c-myc反义寡核苷酸联合5-Fu对胃癌的体外及裸鼠体内抗肿瘤作用

目的:探讨c-myc反义寡核苷酸(ASODN)联合5-Fu对胃癌MKN-45细胞株的体内、外抗肿瘤作用.方法:采用脂质体介导c-myc反义寡核苷酸转染人胃癌细胞系,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价c-myc ASODN联合5-Fu对胃癌细胞增殖的影响;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和细胞周期;RT-PCR及免疫组化方法检测c-myc基因表达变化;建立荷瘤小鼠模型,通过皮下瘤体内注射药物观察肿瘤体积和抑瘤率的变化.结果:c-myc反义寡核苷酸联合5-Fu可显著抑制细胞增殖,细胞凋亡率(23.4±1.9)%,较单用c-myc反义寡核苷酸(10.6±1.1)%和5-Fu(12.5±1.0)%的抑制作用更为显著(P＜0.01);RT-PCR及免疫组化显示ASODN和5-Fu均使c-myc mRNA和蛋白表达下降;体内实验显示c-myc反义寡核苷酸联合5-Fu可明显减少肿瘤体积,抑制肿瘤生长,抑瘤率达46.7%;较单一治疗组明显(P＜0.05).结论:c-myc基因反义寡核苷酸联合5-Fu能明显抑制胃癌MKN-45细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平;且可有效抑制人胃癌裸鼠皮下肿瘤的生长.     

c-myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株增殖的影响

目的 观察c—myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株增殖的抑制作用。方法 用四甲基偶氮唑盐法评价脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对细胞增殖的影响,免疫细胞化学ABC方法检测转染后c—myc蛋白表达;荧光显微镜观察细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡。结果 c-myc基因反义寡核苷酸转染MKN-45细胞后,可以显著抑制细胞增殖,其抑制作用具有剂量依赖性;流式细胞仪分析结果显示,转染后能诱导胃癌细胞凋亡,Go／G1期细胞增多;免疫细胞化学显示c—myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为64．9％±5.68％。结论 c-myc基因反义寡核苷酸能明显抑制胃癌MKN-45细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。     

Survivin反义寡核苷酸对5-FU诱导人红白血病细胞系K562凋亡的影响

【目的】探讨survivin反义寡核苷酸(Antisense Oligodeoxy-nucleotid,ASODN)对5-FU(5-氟尿嘧啶)诱导人红白血病细胞系K562细胞凋亡的影响。【方法】体外培养K562细胞,合成survivin ASODN并经脂质体转染至K562细胞内,MTT法观察survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN的细胞毒作用,Hoechst33342/PI双荧光染色观察各组细胞核形态,镜下计算各组细胞凋亡率。【结果】400、600、800、1000nmol/L survivin ASODN处理K562细胞44 h后,IC50为800 nmol/L;与单独使用survivin ASODN或5-FU相比,5-FU联合800 nmol/L survivin ASODN后细胞生长明显受到抑制(P<0.01);Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN组均出现明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现。镜下细胞计数,survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN组细胞凋亡率分别为54.55%、53.85%、86.70%。【结论】Survivin ASODN可增强K562细胞对5-FU的敏感性。     

HIF-1α反义寡核苷酸治疗人胃癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)反义寡核苷酸对人胃癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用.方法 用人胃癌细胞株SCG-7901建立胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为反义寡核苷酸(ASOND)组、正义寡核苷酸(SOND)组和对照组,瘤体内分别注射阳离子脂质体包裹的HIF-1α ASOND、HIF-1α SOND和空白阳离子脂质体.观察各组动物的肿瘤生长曲线,测瘤重计算抑瘤率,光学显微镜下观察肿瘤细胞形态学变化,免疫组化方法 检测各组肿瘤组织HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的表达.结果 ASOND组裸鼠的肿瘤生长受到明显抑制,ASOND组瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);ASOND组、SOND组抑瘤率分别为47.94%、16.88%,差异有统计学意义(P＜0.01);ASOND组肿瘤组织中HIF-1α、VEGF和MVD的表达低于SOND组和对照组(P＜0.01).结论 肿瘤原位注射HIF-1α反义寡核苷酸治疗胃癌裸鼠皮下移植瘤能降低HIF-1α的表达,继而减少VEGF的生成和新生血管的形成,抑制肿瘤的生长.     

人端粒酶RNA反义寡核苷酸靶向治疗对裸鼠食管癌移植瘤的作用

目的:观察人端粒酶RNA(hTR)硫代修饰性反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠食管癌移植瘤的治疗作用.方法:10只裸鼠随机等分为ASODN组和对照组.2组裸鼠均给予EC9706细胞悬液皮下注射,当裸鼠食管癌移植瘤长至50 mm3时,ASODN组进行每24 h 1次、连续7 d的ASODN治疗,对照组给予PBS.分别于治疗后4 d、8 d测量2组肿瘤体积,第8 d取裸鼠肿瘤组织常规病理切片观察形态学改变,TUNEL染色观察癌细胞凋亡情况.结果:治疗后第4 d,ASODN组及对照组食管癌移植瘤体积(V/mm3)分别为55.8±12.0和98.5±18.2(P＜0.01),第8 d分别为64.8±21.6和173.0±21.2(P＜0.01).TUNEL染色显示,ASODN组肿瘤组织中可见大量呈片状分布的凋亡细胞,对照组仅见少量散在的凋亡细胞.对照组肿瘤细胞异型性较ASODN组明显.结论:hTR反义寡核苷酸可有效抑制裸鼠食管癌移植瘤的生长及恶性表型的产生.     

MMP-2反义寡核苷酸对膀胱癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的 探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)反义寡核苷酸对人膀胱癌裸鼠异体移植瘤生长的抑制作用.方法 制备膀胱癌裸鼠移植瘤模型18只,随机分为3组:MMP-2反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、MMP-2正义寡核苷酸(SODN)治疗组及对照组,每组6只.待瘤结节直径≥5mm后,分别在肿瘤细胞接种部位周围及中心皮下注射反义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物、正义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物和生理盐水.每周2次,连续4周,断颈处死裸鼠,计算肿瘤体积,称量瘤重.常规切片,HE染色,观察组织学形态并进行病理学评估.结果 与对照组瘤重(7.49±0.53)g比较,ASODN组瘤重(4.18±0.53)g明显降低( P<0.01);ASODN组、正义寡核苷酸(SODN)组抑瘤率分别为44.19%、8.41%( P<0.01); ASODN组瘤体病理学特征改善.结论 MMP-2反义寡核苷酸能抑制裸鼠体内移植瘤生长,通过反义寡核苷酸下调MMP-2的表达,有效逆转肿瘤的恶性表型,为膀胱癌的基因治疗提供了实验依据.     

survivin反义寡核苷酸对人胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤P53蛋白表达的影响

目的研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）能否抑制人胃癌细胞皮下移植瘤生长,及与P53蛋白的关系。方法将对数生长期SGC-7901胃痛细胞种植到2只裸鼠皮下,形成母瘤,再分别种植于其他裸鼠背部皮下。成瘤后随机分为4组（survivin-ASODN＋脂质体绢、survivin—ASODN组、脂质体组、对照组,每组n=8）。瘤体内隔日给药,停药后48h处死裸鼠,剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。Westernblot法检测survivin的表达,免疫组化法检测各组P53蛋白的表达。结果survivin—ASODN＋脂质体组的移植瘤生长速度明显减慢,其抑瘤率为33．19％。survivin—ASODN＋脂质体组的survivin蛋白、P53蛋白表达量明显低于对照组（P〈0．05）。结论survivin—ASODN对胃癌移植瘤生长有抑制作用,能够抑制survivin蛋白的表达,亦能抑制P53蛋白的表达,P53在survivin抑制凋亡的信号通路中亦起到一定作用。     

VEGF反义寡核苷酸对裸鼠膀胱癌移植瘤的抑制作用研究

目的:观察以脂质体为载体介导血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡核苷酸(Antisense oligonucteotides,ASODN)转染对裸鼠膀胱癌移植瘤的抑制作用.方法:建立人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型,以脂质体为载体介导VEGFASODN进行转染.观察裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化sP法测Ki67、CD34、VEGF的表达,计算微血管密度、细胞增殖指数,TUNEL法测细胞凋亡指数.结果:反义组与正义组的抑瘤率分别为71.08%和7.19%,反义组VEGF的表达、微血管密度、细胞增殖和凋亡指数与正义组及对照组相比均有明显差异,正义组与对照组之间各检测指标差异无显著性.结论:VEGF反义寡核苷酸能够抑制人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的生长和微血管的生成,可能成为El后膀胱癌基因治疗的重要方向.     

腺病毒介导p21WAF-1联合GM-CSF基因对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用的研究

目的探讨腺病毒介导p21^WAF-1联合GM-CSF基因对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法将32只裸鼠建立人胃癌MKN-45细胞移植瘤动物模型。成瘤后动物随机平均分为4组：对照组、p21^WAF-1基因治疗组、GM-CSF基因治疗组、p21^WAF-1＋GM-CSF联合基因治疗组;分别由皮下瘤体内注射重组体腺病毒0．1mL Ad-LacZ、Ad-p21、Ad,GM、Ad-p21＋GM,每周1次,共3次。3个月后观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和动物存活情况以及肿瘤组织病理切片。结果（1）联合基因治疗组动物的肿瘤生长受到明显抑制。与单独给予p21^WAF-1和GM-CSF基因治疗动物相比。抑制作用显著提高（P〈0．05）;（2）荷瘤小鼠生存期观察,与对照组相比,p21^WAF-1基因组和GM-CSF基因组有所延长,联合基因治疗组显著延长（P〈0．01）;（3）病理切片示各基因治疗组肿瘤组织均有出血、坏死和炎性细胞浸润,联合基因治疗组有片状坏死。结论p21^WAF-1和GM-CSF两种基因联合治疗胃癌,可以有效抑制肿瘤生长、延长生存期,为胃癌的治疗提供新的思路。     

VEGF反义核酸联合放射治疗对裸鼠移植瘤宫颈癌的作用

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸联合放射治疗对裸鼠移植瘤宫颈癌生长的抑制作用.方法 制备Balc/C裸鼠皮下宫颈癌模型20只,随机分为4组:VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、放射10Gy治疗组、VEGF反义寡核苷酸+放射10 Gy治疗组及对照组,每组5只.分别皮下注射ASODN,对照组注射生理盐水,每周2次,连续4周,放射剂量一次性给予.观察各组裸鼠肿瘤的生长情况、裸鼠的一般情况与生存期,测量肿瘤直径并计算瘤体积.断颈处死裸鼠,天平称量肿瘤的重量.免疫组化法测肿瘤VEGF.结果 VEGF反义寡核苷酸和放射对肿瘤生长均有抑制作用,二者联合作用抑制更显著.放射使VEGF表达升高,ASODN使VEGF表达降低;肿瘤发生明显的凋亡形态学改变.结论 反义寡核苷酸可以下调VEGF的表达,对放射治疗宫颈癌移植瘤有增敏作用,为宫颈癌的综合治疗提供了实验依据.     

Gene therapy with antisense c-myc adenovirus for human gastric carcino- ma cell line in vitro and for implanted carcinoma in nude mice

Sufficient infonnation has been accumulated to suggest that achvation and alnplilication of oncogenes and inachvation and fUnchonal failme of tUInor suPPressor genesare responsible for the inihation and deVelopment of human malignant disease lhrough a mulhstep PIDCess['].Gastric careinoma, one Of the most common inalig~t tUmors, can be successop ~ with sopry inthe early stage, but adVanced cases are usually refectoryto chemotherapy or ladiotherapy. COnSeopenily, genetherapy becomes an at…     

生存素反义寡核苷酸对人胃癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用。方法 设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸。胃癌细胞株SGC7901分为4组：空白对照组、单纯脂质体对照组、正义链转染对照组、ASODN转染组。作用48h后收获各组细胞。Westernblot法检测各组细胞生存素表达情况，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，MTT法检测各组细胞的生长抑制率。结果 脂质体介导生存素反义寡核苷酸转染后的胃癌细胞出现生存素蛋白表达明显下降；ASODN转染组细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）；ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）。结论 生存素反义寡核苷酸转染胃癌细胞能下凋生存素蛋白表达，诱导胃癌细胞凋亡，抑制细胞增殖，具有明显的抗癌作用。     

生长抑素对人胃癌裸鼠种植瘤生长的影响

目的 研究生长抑素对裸鼠人胃癌SGC-7901细胞种植瘤生长的影响.方法 构建裸鼠人胃癌SGC-7901细胞种植瘤模型.将24只模型鼠随机分为4组（n=6）,分别尾静脉给予生理盐水（对照组）、奥曲肽（奥曲肽组）、高剂量生长抑素（生长抑素高剂量组）和低剂量生长抑素（生长抑素低剂量组）干预3周后,处死动物并获取肿瘤组织.称取各组种植瘤重量,计算抑瘤率.TUNEL法比较各组瘤体内细胞凋亡情况.Western blot法检测各组种植瘤组织内caspase-3的表达.结果 奥曲肽组、生长抑素高剂量组、生长抑素低剂量组平均瘤体重量较对照组均显著减轻（P＜0.05）,其抑瘤率分别为43.66％、41.55％、28.17％,生长抑素高剂量组和奥曲肽组的抑瘤率明显高于生长抑素低剂量组（P＜0.05）.各用药组细胞凋亡率显著高于对照组（P＜0.05）,生长抑素高、低剂量组细胞凋亡率显著高于奥曲肽组（P＜0.05）,生长抑素高、低剂量组间凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）.生长抑素高、低剂量组caspase-3的表达量显著高于对照组和奥曲肽组（P＜0.05）,生长抑素高、低剂量组间caspase-3的表达量差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 生长抑素和奥曲肽均可显著抑制胃癌种植瘤生长、诱导胃癌细胞凋亡,且诱导能力以生长抑素尤为显著.caspase-3的表达上调可能是其诱导胃癌细胞凋亡的相关机制之一。     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及对白藜芦醇的增敏作用

目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌SGC7901细胞的增殖、凋亡及对白藜芦醇敏感性的影响. 方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染胃癌细胞株(SGC7901)后,用MTT法检测细胞毒作用;用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR、免疫组化技术检测survivin mRNA及蛋白的表达. 结果: ①survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞的增殖呈时间和剂量依赖性; ②survivin ASODN处理组SGC7901细胞24 h后凋亡率为(33.6±1.2)%,正义寡核苷酸(SODN)组为(10.7±0.8)%,两组相比,差异有显著性(P＜0.05);③survivin ASODN处理组SGC7901细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降. ④survivin ASODN和白藜芦醇联合处理组SGC7901细胞24,48,72 h生长抑制率,显著高于单用survivin ASODN组(P＜0.05)和单用白藜芦醇组(P＜0.05). 结论:survivin ASODN能够抑制胃癌SGC7901细胞的增殖、诱导凋亡,并能增加胃癌细胞株SGC7901对白藜芦醇的敏感性,推测可能通过下调survivin mRNA及蛋白表达而起作用.     

人端粒酶蛋白催化亚单位反义基因转染对胃癌细胞恶性表型的逆转作用

目的 探讨人端粒酶蛋白催化亚单位（hTRT）反义基因治疗对胃癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 采用基因重组技术,构建hTRT正比、反义真核表达载体,采用脂质体法导入SGC－790细胞、反义真核表达载体,并导入SGC－790胃癌细胞株中,获得稳定表达正、反义基因的细胞系7901－S、7901－AS1和7901－AS2。7901－AS1和7901－AS2出现显著生长抑制现象,端粒酶活性明显下降,细胞凋亡增加,异型性减小,G0／G1期细胞增加,S和G2M期细胞减少,增殖指数减小,软琼脂中克隆形成,裸鼠体内成瘤消失。结论 hTRT反义基因治疗可以明显抑制SGC－7901细胞的增殖,部分逆转肿瘤细胞的恶性表型,其机制可能主要是通过诱导细胞分化而非诱导细胞凋亡途径实现的,提示hTRT基因可以作为肿瘤治疗的靶基因。     

人NHE1反义基因转染对SGC-7901胃癌细胞形态学的影响

目的探讨反义NHE1基因转染对SGC-7901胃癌细胞形态学的影响及其在肿瘤基因治疗中的价值.方法构建人NHE1基因反义真核表达载体,采用脂质体法将其转染至SGC-7901胃癌细胞中, 从光镜、电镜水平比较观察转染与未转染细胞形态学的变化.结果与亲本细胞相比,光镜下反义NHE1基因转染的SGC-7901细胞胞体增大,胞浆丰富,核大小相对一致,核浆比减少,核分裂相减少,异型性减小.透射电镜下细胞线粒体数量增多、体积增大,并可见髓鞘样变,粗面内质网、Golgi较发达,内质网扩张,核偏向一侧,极性增强.结论反义NHE1基因转染能使SGC-7901细胞发生形态学及超微结构的变化,有促进SGC-7901细胞分化的作用.