Research on expression of IFN-γ in laryngeal tissues of mice via IFN-γ gene transfected BMSCs by using recombinant adenoviruses Ad5-IFN-γ-GFP

目的 探讨干扰素-γ(IFN-γ)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)对喉部疾病的治疗效果.方法 采用Ad5-IFN-γ-GFP重组腺病毒,将转染IFN-γ的BMSCs注射到小鼠喉旁组织,第1、3、7、14、28天取骨髓和喉旁组织用Western blot检测IFN-γ蛋白表达水平.结果 当MOI=100和转染时间72 h时,细胞上清液IFN-γ表达水平分别达到峰值.注射空白培养液和空白mBMSC的骨髓和喉旁组织IFN-γ基本不表达.注射病毒转染的mBMSC后,骨髓和喉旁组织中都开始大量表达IFN-γ,且表达量随注射时间延长而增加.结论 IFN-γ导入BMSCs并通过小鼠喉旁局部注射,可以在组织获得持久表达.为临床IFN-γ基因治疗喉部肿瘤提供了动物实验依据.     

非霍奇金淋巴瘤基因重排的检测及其临床意义

目的 探讨免疫球蛋白重链（IgH）及T细胞受体γ（TCRγ）基因重排在非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin＇s lymphoma,NHL）临床诊断中的应用.方法 用聚合酶链反应（PCR）技术对58例B细胞淋巴瘤（B-NHL）、15例T细胞淋巴瘤（T-NHL）、不能确诊为NHL的标本5例及10例良性淋巴组织增生标本进行IgH及TCRγ基因重排的检测.结果 58例B细胞淋巴瘤标本中有IgH基因重排为47例,有3例TCRγ基因重排.15例T细胞淋巴瘤中TCRγ基因重排为11例,未见有IgH基因重排.5例未确诊的疑难病例均为IgH基因重排.10例良性淋巴组织反应性增生病例中,IgH及TCRγ基因重排均为阴性.IgH及TCRγ基因重排检出率在淋巴瘤组与良性组之间,差异有显著意义（P＜0.05）.结论 用PCR方法检测IgH及TCRγ基因重排对NHL及其疑难病例有重要的诊断价值.     

新型γ-分泌酶调节剂SPI-1865的研发历程概述

阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)为进行性的神经退行性疾病,目前缺乏有效的治疗手段.β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)在脑神经细胞外过度沉积形成的寡聚体和淀粉样斑块与阿尔茨海默症的发生、发展密切相关.γ-分泌酶是β淀粉样蛋白代谢过程中的关键酶,为研发阿尔茨海默症治疗药物的关键靶点.针对此靶点研发的γ-分泌酶调节剂(γ-secretase modulators,GSM)因对Notch等蛋白影响较小,有广阔的应用前景.本文总结了源于黑升麻(Black cohosh,Cimicifuga racemosa)的环阿尔廷型三萜为先导物的结构优化历程,最终获得γ-分泌酶调节剂药物候选物SPI-1865,以期为γ-分泌酶调节剂的开发与改造提供有价值的参考.     

非中心F分布及其应用

<正> 一、非中心F分布 1.定义:设X服从自由度为γ_1,非心度为λ的非中心x~2分布,即X～x~2(γ_1,λ)Y服从自由度为γ_2的中心x~2分布,即Y～x~2(γ_2),λ≠0,且X与Y相互独立,则称 F=(X/γ_1)/(Y/γ_2)服从自由度为γ_1、γ_2,非心度为的非中心F分布,其概率密度函数为     

HBD-2和IFN-γ在寻常型银屑病皮损中的表达及其意义

目的 研究HBD-2、IFN-γ在寻常型银屑病皮损中的表达并探讨其意义.方法 采用实时荧光定量RT-PCR法检测45例寻常型银屑病患者皮损组织、非皮损组织和15例非银屑病患者正常皮肤组织中的HBD-2和IFN-γ的mRNA表达水平,按PASI评分标准将皮损组分为轻、中、重组,检测HBD-2和IFN-γmRNA在银屑病皮损不同组中的表达水平.结果 银屑病患者皮损区HBD-2、 IFN-γ的表达明显上调,非皮损区HBD-2、IFN-γ的表达也高于正常皮肤组织,差异均有统计学意义(P<0.05); HBD-2、IFN-γ在轻中重不同皮损中的表达表达依次增高,差异有统计学意义.IFN-γ与HBD-2存在正相关.结论 IFN-γ和HBD-2可能共同参与了寻常型银屑病的皮损形成.     

联合ANP、ADA及IFN-γ检测对良、恶性胸腔积液的诊断价值

目的 探讨心钠素(atrialnatriureticpolypeptide,ANP)、腺苷酸脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)及干扰素-γ(interferon γ,IFN-γ)联合检测在鉴别良、恶性胸腔积液中的价值.方法 选取116例胸腔积液患者,结核性49例,恶性67例,检测其胸腔积液中ANP、ADA及IFN-γ的含量.结果 单独检测ANP诊断恶性胸腔积液的敏感性及特异性为80.6%和87.76%;ADA诊断恶性胸腔积液的敏感性和特异性为76.12%和91.84%;IFN-γ诊断恶性胸腔积液的敏感性及特异性为9 1.04%和95.92%,联合三者诊断恶性胸腔积液的敏感性及特异性为97.01%和97.96%.结论 联合检测ANP、ADA及IFN-γ可提高对恶性胸腔积液诊断的敏感性及特异性.     

高LDL-C人群血清γ-GGT水平的变化及临床意义

目的 研究低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）升高人群血清γ-谷氨酰转移酶（γ-GGT）水平的变化及临床意义.方法 调查我保健中心788例体检者血清γ-GGT、LDL-C水平.对其中182例LDL-C升高者血清γ-GGT水平进行分析,探讨其变化及临床意义.结果 高LDL-C人群血清γ-GGT水平明显高于正常对照组（P＜0.01）,年龄＜40岁组γ-GGT水平高于≥40岁组（P＜0.05）,血清γ-GGT与LDL-C水平呈正相关关系（r=0.203,P＜0.01）.结论 血清γ-GGT与LDL-C水平关系密切,γ-GGT可望能作为冠心病风险的预测因子.     

罗库溴铵复合维库溴铵或阿曲库铵对骨骼肌成人型和胎儿型乙酰胆碱受体的作用

目的:应用全细胞膜片钳研究罗库溴铵复合维库溴铵或阿曲库铵对骨骼肌成人型(ε-nAChR)和胎儿型(γ-nAChR)乙酰胆碱受体的作用.方法:通过脂质体转染法在HEK293细胞表达ε-nAChR和γ-nAChR.分别研究罗库溴铵、维库溴铵和阿曲库铵各药对两种受体亚型的作用.再以各药等效浓度混合,观察罗库溴铵复合维库溴铵或阿曲库铵混和液对两种受体亚型的作用.结果:罗库溴铵、维库溴铵和阿曲库铵呈浓度依赖性抑制乙酰胆碱对ε-nAChR和γ-nAChR的激动作用.应用等效线图分析发现罗库溴铵复合维库溴铵对ε-nAChR呈现协同作用,对γ-nAChR呈现相加作用;罗库溴铵复合阿曲库铵对ε-nAChR和γ-nAChR均为协同作用.结论:不同化学结构肌松药对ε-nAChR和γ-nAChR的抑制程度不同,而ε-nAChR和γ-nAChR对一种肌松药的亲和力也有差异.不同化学结构的罗库溴铵复合阿曲库铵对ε-nAChR和γ-nAChR均为协同作用;相同化学结构的罗库溴铵复合维库溴铵对ε-nAChR呈现协同作用,对γ-nAChR呈现相加作用.     

用于舌下给药的γ-环糊精:睾丸素复合物

结晶型睾丸素:γ-环糊精(γ-CD)固体复合物的制备将1g睾丸素和57gγ-CD于500 ml水中,在25℃下搅拌7天,复合物沉淀析出微晶粉末,过滤后,室温干燥24h,用UV法分析粉末中睾丸素的含量,测得复合物的含量为10%,睾丸素:γ-CD复合物为1:2,分子量2882.溶解度试验是将片剂于一不锈钢筛网的吊篮中,吊篮放到搅拌的水浴中,然后进行测定.人血清中睾丸素的含量用放射免疫法测定.实验结果表明睾丸素和γ-CD在水中的相溶解度图是B_8型.当γ-CD浓度达到13mmol/L时,含两种成分的复合物从溶液中析     

干扰素-γ对慢性乙型肝炎患者血浆细胞因子和肝纤维化指标的影响

慢性乙型肝炎是肝硬化的主要病因,肝纤维化是慢性乙型肝炎向肝硬化发展的必经病理过程.研究显示转化生长因子β1（TGF-γ1）、白细胞介素-6（IL-6）等细胞因子在其中起重要作用.重组人干扰素-γ（rhIFN-γ）已被较多的研究证实为一种较好的抗肝纤维化药物.     

离子色谱法测定药用辅料β-环糊精的有关物质

目的 建立测定β-环糊精中有关物质α-环糊精和γ-环糊精的离子色谱方法,并用质谱进行验证.方法 采用离子色谱法,CarPac PA 200离子柱,柱温30 ℃,安培检测器,金电极为工作电极,Ag/AgCl为参比电极.高分辨质谱法采用电喷雾电离模式,离子阱扫描范围为300~1 400.结果 α-环糊精和γ-环糊精的检出限为0.2和0.5 mg·L-1,定量限分别为0.4和1.0 mg·L-1.采用离子肼质谱法确认了α-环糊精和γ-环糊精,结果与离子色谱相一致.所有样品均检出γ-环糊精,同时探讨了其限量标准,为该品种标准提高和风险监控提供了技术参数.结论 该方法快速、有效,可用于β-环糊精中有关物质的检测.     

FcγRs与免疫相关疾病发生发展及其治疗研究进展

Fcγ受体(Fcγreceptors,FcγRs)是白细胞免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)受体,对特异性IgG具有强大的效应功能,起着连接机体体液免疫和细胞免疫的桥梁作用.Fcγ受体可通过与免疫球蛋白G特定区域结合,引起相应的细胞特异性免疫反应.Fcγ受体的基因多态性,使其能引起多样的细胞内生物效应,而这又与多种免疫相关疾病的发生发展密切相关.研究表明,Fcγ受体影响单克隆抗体(Monoclonal Antibody,mAb)和静脉注射免疫球蛋白(Intravenous Immunoglobulins,IVIg)免疫治疗疗效.另有研究显示,Fcγ受体在微生物感染疾病中也发挥一定作用.本文通过综述Fcγ受体及其与多种疾病的相关性,深入探讨了其临床诊疗意义.     

His肽修饰小鼠IFNγ的制备

制备标记有6His的小鼠可溶性干扰素γ(Mouse interferon gamma,mIFNγ),为其功能研究提供更多实验基础.采用RT-PCR扩增编码mIFNγ的cDNA序列,克隆于pUC19质粒,测序鉴定正确后亚克隆到pQE80L表达质粒载体中,经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定;利用SDS-PAGE和Western blot检测表达的目的蛋白,Ni2 -NTA亲和层析纯化重组蛋白,ELISA进行检测.结果RT-PCR扩增得到编码mIFNγ cDNA片段,测序结果正确,SDS-PAGE和Western blot分析显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了较高水平表达,mIFNγ占菌体蛋白的30%.Ni2 -NTA亲和层析纯化得到的mIFNγ蛋白纯度达到96%以上;ELISA检测出目的蛋白.结果证实重组蛋白mIFNγ被成功制备.     

γ-GCS基因的RNA干扰逆转胰腺癌抗化疗的实验研究

目的 观察γ-GCS基因的RNA干扰对胰腺癌抗化疗的影响.方法 采用γ-GCS高表达的胰腺癌细胞株扩大培养,分为:实验组:转染γ-GCS dsRNA的胰腺癌细胞;对照组:转染γ-GCS基因反义RNA的胰腺癌细胞;空白组:未转染的胰腺癌细胞.利用RT-PCR、Westem Blot的方法,检测各组癌细胞的γ-GCS、mRNA的表达和谷胱甘肽的活性,应用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.结果 实验组γ-GCS和谷胱甘肽mRNA和蛋白水平的表达明显下降,细胞明显凋亡.结论 转染γ-GCS dsRNA的细胞可产生基因沉默效应.使细胞对化疗药物敏感性增强.     

肝胆疾病患者血清γ-谷氨酰转肽酶活性检测分析及临床价值

目的 研究肝胆疾病患者血清γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性及临床价值.方法 选择肝胆疾病患者作为观察组、健康体检者作为对照组,检测外周血中γ-GT含量以及免疫功能相关指标.结果 观察组外周血γ-GT升高例数均多于对照组,并且呈现出结石性胆囊炎＞原发性肝癌＞肝硬化＞慢性乙肝;γ-GT升高组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK,含量均明显低于γ-GT正常组;CD8+含量明显高于γ-GT正常组.结论 肝胆疾病患者的外周血中γ-GT水平明显升高,且γ-GT水平越高、机体免疫功能越差.     

γ-亚麻酸以柱色谱和甲酯化纯化的正交试验

富集月见草油中γ-亚麻酸(γ-linolenic acid,1)的方法主要有溶剂萃取法、银离子树脂色谱法、减压蒸馏法、低温结晶法、尿素包合法及超临界CO2萃取法等[1],国内主要采用尿素包合法[2].也可从月见草油中分离γ-亚麻酸甲酯[3].采用低温结晶法得到的1纯度仅30%～50%,减压蒸馏法可达50%～80%.国内合成前列腺E1是以二高γ-亚麻酸(dihomo-γ-linolenic acid,DGLA)为原料,而只有纯度大于90%的1才能合成得到较高纯度的二高γ-亚麻酸.采用银离子树脂色谱分离法可提高纯度,但也会引入银离子杂质,不利于药品质量控制.有报道用甲酯化工艺得到γ-亚麻酸甲酯的纯度为80%,收率50%[3].于世涛等[4]用酯交换法研究提高月见草油中1含量的工艺.但也未达到90%的纯度要求.为此本研究采用正交试验对纯度75%的1再次进行了柱色谱或甲酯化纯化.     

γ-GCS及TGF-β1在MRL/1pr雌性小鼠肾组织表达研究

目的:对狼疮小鼠肾组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达水平进行研究,发现γ-GCS的表达量改变在转化生长因子β1(TGF-β1)促纤维化中的作用.方法:以C57BL/6小鼠为对照,荧光定量PCR法检测MRL/1pr雌性小鼠肾组织γ-GCS和TGF-β1的mRNA表达.结果:狼疮小鼠组肾组织中γ-GCS的mRNA及蛋白表达减少,TGF-β1的mRNA表达水平升高,与C57BL/6小鼠组比较有显著差异(P＜0.05).结论:γ-GCS表达降低导致谷胱甘肽(GSH)合成减少,抗氧化能力减弱,促使肾间质纤维化.     

干扰素-γ对人肺癌A549细胞增殖和P21分子的影响

目的：探讨干扰素-γ（IFN-γ）对人肺癌A549细胞增殖和P21分子的影响.方法：培养人肺癌A549细胞,与IFN-γ共孵育,通过MTT比色法观察IFN-γ对人肺癌A549细胞增殖的影响,同时通过免疫细胞化学法,分析人肺癌A549细胞中P21蛋白表达的变化.结果：与对照组相比,IFN-γ组能够明显抑制细胞增殖且呈剂量依赖性,同时免疫组化结果显示,IFN-γ可以上调P21蛋白的表达.结论：IFN-γ可以增加P21蛋白的表达,抑制人肺癌A549细胞增殖,从而可能起到抗肿瘤的疗效.     

PPARγ对RAW264.7小鼠巨噬细胞异质性的影响

目的 探讨PPAR γ对缺氧复氧RAW264.7小鼠巨噬细胞异质性的影响.方法 体外培养小鼠巨噬细胞系(RAW264.7),制备缺氧复氧模型,用慢病毒包装进行PPARγ过表达和基因沉默,细胞分为对照组、模型组、过表达PPARγ组和PPARγ基因沉默组.用ELISA法、RT-PCR、Western印迹法和免疫荧光法检测各组细胞巨噬细胞亚型M1标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、M2标志物CD206及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达.结果 与对照组相比,ELISA法检测模型组TNF-α和IFN-γ水平明显升高(均P＜0.01),RT-PCR、Western印迹法和免疫荧光检测均显示TNF-α、IFN-γ、iNOS表达上调,CD206表达下调.与模型组相比,过表达PPARγ显著减轻了IRI导致的TNF-α、IFN-γ和iNOS表达的上调,上调了CD206表达;与此相反,PPARγ基因沉默加重IRI导致TNF-α、IFN-γ和iNOS表达上调,下调了CD206表达.结论 PPARγ在小鼠RAW264.7巨噬细胞缺氧复氧模型中参与调节巨噬细胞表型转换.     

血清γ-谷氨酰转移酶测定在诊治肝胆疾病中的应用

γ-谷氨酰转移酶(G-GT)又称γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT),该酶存在于许多组织中,以肾脏中含量高,胰、肝、脾、脑等次之;血清中的γ-GT主要来自肝脏.肝脏中γ-GT主要局限于毛细胆管和肝细胞的微粒体中,对占位性肝病、肝实质损伤(急慢性肝炎、肝硬化、酒精性肝损害等肝病)诊断有一定价值.主要功能是参与γ-谷氨酰循环,与氨基酸通过细胞膜的转运、调节谷胱甘肽的水平.现将各种肝脏疾病中的GGT检查结果报道如下.