载脂蛋白转基因小鼠的研究进展

转基因小鼠是当代生命科学尖端技术之一，也是研究基因结构与功能之间的关系等问题最有效的实验体系之一。本文综述了载脂蛋白转基因小鼠的制备方法，载脂蛋白转基因小鼠在脂质代谢异常和动脉粥样硬化病因和发病机理研究中的应用。     

FGF9转基因小鼠的功能及组织表达谱的研究

目的：研究突变昭朋转基因小鼠的功能变化，分析Fgf9及其受体Fgfr3的组织表达谱。方法：采用RT-PCR法克隆彤冈，在该基因296位引入点突变为（G→A）后插入pcDNA3．1（-）B载体，通过显微注射建立转基因小鼠；利用PCR法鉴定转基因小鼠基因型，RT-PCR及免疫组化鉴定转基因小鼠内源性Fgf9和Fgfr3的组织表达谱。结果：建立了12个系的转基因小鼠模型，虽未检测到转入基因的表达，但检测到内源性Vgf9和Fgfr3在心、脑、肾、肌肉和骨关节等组织中的表达情况。结论：获得rgf9和Fgfr3组织表达谱及在不同时期小鼠骨关节中的表达情况；推测转入基因未表达与FGF9转入后被沉默或抑制有关，为此正在建立特异点突变FGF9基因敲入小鼠模型。     

慢病毒载体用于转基因技术的研究进展

慢病毒载体作为目前研究最多的外源性转基因载体之一,已成为一种高效率的转基因和基因治疗工具。该载体最大的优势是能够感染分裂和静止状态下的细胞,并且能够高效、稳定地整合于宿主细胞内。目前研究该载体在多种动物转基因技术方面的应用,有助于我们利用除了大鼠和小鼠以外的多种实验动物来研究基因的功能,并实现通过调节基因表达治疗人类疾病的目的。     

牙齿修复相关转基因研究：显微注射法获得pTet-on-CX转基因工具小鼠G0代的实验观察

目的：为便于进行规模化的转基因研究，构建一种四环素调控性转基因体系中的工具小鼠系。方法：实验于2002—06／10在上海南方模式生物研究中心完成。以cβ—actin启动子取代pTet—on—NSE质粒中的NSE启动子，构建转基因载体pTet-on-CX；将XhoⅠ酶切线性化的载体DNA注射到小鼠受精卵的雄原核，移植到假孕母鼠的输卵管。仔鼠出生后，经PCR及Southern Blotting检测阳性小鼠。结果：注射的受精卵共存活603枚，移卵后产仔64只，阳性6只。阳性鼠分别传代开始建系。结论：通过显微注射的方法获得pTet—on—CX转基因工具小鼠的G0代，为规模化的转基因研究(包括与牙齿修复有关的基因，如牙本质涎磷蛋白基因)奠定了基础。     

APP/PSl双转基因阿尔海默病小鼠的繁殖及基因型鉴定

目的:繁殖和基因鉴定APP/PS1双转基因阿尔海默病(AD)小鼠。方法:将雄性纯合子APP/PS1双转基因AD小鼠与阴性纯合子(野生型)雌鼠进行交配。PCR鉴定APP/PS1双转基因AD传代小鼠的基因表型。结果:50只APP/PS1双转基因AD传代小鼠基因组DNA中31只小鼠基因组DNA扩增出300 bp的APP条带和600 b P的PS1条带。APP/PS1双转基因AD小鼠的饲养和繁殖获得成功,获得了较多的成功转入APP/PS1基因的纯合子小鼠。结论:正确饲养繁殖及利用PCR对AD模型鼠的繁殖小鼠进行基因鉴定,是有效获得APP/PS1双转基因纯合子小鼠的有效途径,为临床更好的研究认知障碍提供有效的AD动物模型。     

铁在阿尔茨海默病APPswe／PSl△E9双转基因小鼠模型脑组织内的沉积

目的：研究铁在阿尔茨海默病（AD）APPswe／PSl△E9转基因小鼠脑区中的沉积情况以及与老年斑的对应关系，并探讨铁在AD发病机制中的作用。方法：将PCR鉴定为阳性的APPswe／S1△AE双转基因4及8月龄小鼠为实验组，通过ThioflavineS，Perl’s—DAB，Aβ免疫组化染色，观察铁在脑组织中的沉积并与同月龄野生型小鼠（对照组）对照比较。结果：实验组小鼠基底神经节处均见到铁的沉积，在皮质及海马处呈棕褐色沉积，其分布与老年斑的分布相类似；而对照组小鼠的皮质及海马未见铁的沉积。结论：脑内过多铁的沉积可能是Aβ蛋白在脑内聚集，从而形成老年斑的原因之一，提示铁螯合剂疗法有可能成为治疗AD的一个新的靶点。     

人慢性淋巴细胞白血病转基因动物模型研究进展

为进一步揭示慢性淋巴细胞白血病(CLL)的发病机制和寻找新的治疗方法,建立合适的转基因动物模型至关重要。现有的人CLL转基因动物模型的建立方法主要是通过模拟CLL相关的遗传变异及基因调控异常来实现的,其中TCL-1转基因小鼠的应用最为广泛。此外,还有miRNA15a/16-1基因敲除小鼠等模型。现就目前人CLL转基因动物模型的最新研究进展作一综述,讨论的主要问题包括TCL-1转基因小鼠及其衍生模型,miR15a/16-1基因敲除小鼠与miR29转基因小鼠,BAFF和APRIL转基因小鼠,BCL-2:Traf2DN双转基因小鼠,IRF4~(-/-)Vh11转基因小鼠等。     

小鼠内毒素血症时肺内纤溶酶原激活物抑制剂-1长期过度表达可能抑制CD25^＋淋巴细胞聚集

法国学者对脂多糖（LPS）引起的炎症早期转基因小鼠肺内纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的作用进行了研究。结果显示，PAI-1过度表达的转基因（PAI-1Tg）小鼠与野生型（WTt）小鼠肺组织巨噬细胞和中性粒细胞浸润没有差别。但：PAI-1Tg小鼠肺组织表现为纤维蛋白沉积，而CD25^＋淋巴细胞浸润不明显。     

结蛋白相关心肌病转基因小鼠桥粒相关蛋白表达和分布的变化

目的 通过观察结蛋白相关心肌病(desmin-related cardiomyopathy，DRC)转基因小鼠桥粒相关蛋白表达和分布的变化。以探讨其发病机制。方法 应用Western印迹和免疫标记共聚焦显徽镜观察桥粒斑蛋白（desmoplakin，DP)和plakodobin(PG)在1个月小鼠心室肌组织中的表达和分布。结果 突变型结蛋白转基因小鼠(D7-des)较野生型结蛋白转基因小鼠(WT-des)和非转基因小鼠(NTG)DP总蛋白和细胞骨架蛋白部分(TIF)明显升高。免疫标记心肌组织DP分布在细胞的两端、侧面和胞质，且密度显著增加，而WT-des与NTG比较无明显变化；3组动物之间，PG没有变化；免疫标记显示D7-des结蛋白排列紊乱。失去正常的结构。结论 该研究首次发现突变结蛋白破坏了结蛋白和桥粒结构的完整性，影响了心肌细胞机械耦联，可能与DBC舒缩功能异常和心力衰竭的发生有关。     

异种移植构建小鼠人急性白血病模型的研究进展

构建小鼠人急性白血病模型的方法包括人白血病细胞异种移植、逆转录病毒转导／移植、小鼠转基因、化学诱变、插入诱变等。通过异种移植构建小鼠人急性白血病模型是当前研究急性白血病的重要手段之一。本文就免疫缺陷鼠、预处理及细胞因子、细胞接种、模型评估及模型应用方面,介绍异种移植构建小鼠人急性白血病模型的最新进展。     

特应性皮炎小鼠模型研究进展

特应性皮炎（Atopic Dermatitis，AD）是一种慢性复发性炎症性皮肤病。随着人们对于该病研究的不断深入．AD的实验动物模型渐渐成为研究其发病机制和探索新的治疗途径的不可缺少的工具。本文综述近年有关AD小鼠模型的研究，将其分为3类：能自发产生AD样表现的小鼠，包括NC/Nga小鼠、NOA小鼠、DS-Nh小鼠；转基因小鼠，包括IL-4、IL-18、IL-31转基因小鼠；半抗原诱导的AD样皮肤损害，包括不同蛋白质致敏来诱导出现AD样皮肤损害、食物超敏反应的AD鼠模型。作者分别从其发病机理、病理特点等方面进行阐述，认为三类动物模型各自有其最适应的方向。NC/Nga小鼠最适于研究AD的发病机制和生理特征；基因技术小鼠模型适于研究特定因子在AD发病中的作用，并研究新的治疗途径；由于NC/Nga小鼠模型和基因技术小鼠模型的应用目前尚不能推广，半抗原诱导的模型仍然在我们的研究中占主要地位。     

益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

背景:益气解毒中药复方在体外能通过下调端粒酶的活性抑制细胞生长和诱导细胞凋亡,还可能通过抑制细胞内重要的核转录因子、细胞分裂增殖、细胞周期、DNA修复和诱导细胞凋亡、促进坏死等信号通路,从而抑制细胞增殖和诱导细胞死亡。目的:实验拟观察益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖及凋亡相关基因bax、bcl-2、增殖细胞核抗原和p53mt基因表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-01/2007-12在湖南中医药大学中西医结合学院基础研究室和中医五官重点学科实验室完成。材料:G4代8月龄TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因阳性小鼠和阴性小鼠各24只,体质量(25.4±2.3)kg,用于制备鼻咽和鼻腔癌前病变模型;益气解毒颗粒方药液为自制。方法:48只小鼠随机分为4组,转基因阳性中药组和转基因阴性中药组小鼠灌胃益气解毒颗粒方药液,给药剂量为12.91g/(kg·d);转基因阳性生理盐水组和转基因阴性生理盐水组小鼠灌等体积生理盐水。主要观察指标:苏木精-伊红染色观察鼻腔和鼻咽黏膜病理组织学变化,免疫组织化学染色法检测其bax、bcl-2、增殖细胞核抗原和p53mt基因表达水平。结果:纳入转基因阳性小鼠和阴性小鼠各24只,转基因阳性生理盐水组和转基因阴性生理盐水组于实验结束前各死亡1只,转基因阴性中药组死亡1只,转基因阳性中药组死亡2只小鼠,共43只小鼠进入结果分析。①转基因阴性生理盐水组、转基因阴性中药组小鼠的鼻腔/鼻咽黏膜组织均无明显病变;转基因阳性中药组有1只小鼠表现中度非典型性增生,转基因阳性生理盐水组有10只小鼠鼻腔和/或鼻咽黏膜上皮细胞呈现中度或中度以上非典型增生或灶性鳞状化生。转基因阴性生理盐水组、转基因阴性中药组、转基因阳性中药组和转基因阳性生理盐水组小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮癌前病变率分别为0、0、10%和90.9%,差异具有显著性意义(P<0.01)。②与转基因阳性生理盐水组相比,其他各组小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞中p53mt、bcl-2和增殖细胞核抗原表达水平均下降(P<0.01),bax表达水平显著增高,bcl-2/bax比值降低(P<0.01)。结论:益气解毒方中药可有效抑制或逆转TgN(p53mt-LMP1)/HT阳性小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮的癌前病变表型,其作用机制之一可能通过下调p53mt基因和增殖细胞核抗原的表达,降低bcl-2/bax比值,使细胞增殖和凋亡速度达到平衡,进而促使鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞正常增长。     

N-3多不饱和脂肪酸促进小鼠骨再生的实验研究

目的 探讨n-3多不饱和脂肪酸对小鼠骨折愈合的影响。 方法 构建了Fat-1转基因小鼠与野生小鼠的长骨骨折模型并使用髓内针固定。分别在造模后的2、3、4周通过组织学、影像学评估分析各组小鼠骨折愈合情况。 结果 结果显示,在造模后的2、3、4周,Fat-1转基因小鼠的骨折愈合速度显著快于野生小鼠对照组。此外,X线及小动物CT扫描结果显示,Fat-1转基因小鼠造模后的骨痂生长、骨重构均早于野生对照组小鼠。 结论 内源性的n-3多不饱和脂肪酸可以加速小鼠的骨折愈合。n-3多不饱和脂肪酸极有可能是促进骨折愈合的营养因素之一。       

阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的行为学研究

目的:研究APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的感觉运动活性/移动探索活性、情感和物体识别能力。方法:采用旷场实验和新颖物体辨别实验分别对6月龄(雌、雄)和12月龄(雄)的APPswe/PS1dE9转基因小鼠进行行为学研究,以同窝同龄同性别野生型小鼠为对照。结果:在旷场实验中,与野生型小鼠相比,双转基因小鼠在12月龄时出现探索活性降低且可能更具有焦虑倾向(P<0.05);而在物体识别任务中,各研究组间差异无统计学意义。结论:APPswe/PS1dE9双转基因小鼠能较好地模拟AD患者的部分精神行为症状,为AD的发病机制和治疗研究提供了有价值的工具。     

骨髓增生异常综合征小鼠滤泡辅助T细胞及表面分子PD-1表达的研究

目的:观察骨髓增生异常综合征(MDS)小鼠血象和骨髓象变化、骨髓和脾脏滤泡辅助T细胞(Tfh)数量及表面分子程序化死亡分子-1(PD-1)的表达情况,探讨其在MDS发病机制中的作用。方法:分别选取10只雄性NUP98-HOXD13转基因小鼠及其同源的野生型C57BL/6J小鼠作为实验对象,行外周血细胞计数,瑞氏染色观察外周血细胞变化、骨髓细胞涂片检查细胞形态;流式细胞术检测骨髓单个核细胞(BMMNC)及脾脏来源的Tfh细胞数量及其表面分子PD-1表达;实时定量PCR法分析BMMNC及脾脏来源细胞PD-1 mRNA的表达。结果:上述转基因小鼠的红细胞、中性粒细胞和血小板数均低于野生型C57BL/6J小鼠;与野生型C57BL/6J小鼠比较,转基因小鼠外周血红细胞及血小板形态相对大小不均,骨髓中可见双核红细胞、环状核粒细胞和红系造血岛等;转基因小鼠骨髓及脾脏Tfh数量较野生型小鼠少,且表面分子PD-1表达率增高;还发现该小鼠BMMNC PD-1 mRNA表达量明显高于野生型小鼠。结论:NUP98-HOXD13转基因小鼠出现全血细胞减少和病态造血,Tfh数量减少,PD-1表达量升高,可能是导致机体免疫功能抑制,促进恶性克隆逃逸免疫监视的重要原因之一。     

Dysbindin转基因小鼠心肌肥厚模型中基因变化

目的 探讨Dysbindin转基因小鼠不同心肌肥厚模型心肌肥厚标志基因的表达。方法 构建cTNT-Dysbindin-IRES-EGFP-polyA质粒,受精卵原核显微注射C57BL/6小鼠,建立Dysbindin转基因小鼠。采用异丙肾上腺素（Isoproternol,ISO）和胸主动脉缩窄（Thoracic aorta constriction,TAC）诱导心肌肥厚。造模结束,称取小鼠体重、心脏重量,计算心脏重量指数（HW/BW）;采用qRT-PCR检测心肌肥厚标志基因表达。结果 应用PCR扩增产物和GFP阳性验证Dysbindin转基因小鼠特异性表达在心肌。ISO组和TAC组转基因小鼠和野生型小鼠的HW/BW和心肌肥厚标志基因升高,与野生型小鼠比较,转基因小鼠心房利钠肽（ANP）和-肌球蛋白重链（-MHC）基因表达水平降低。结论 Dysbindin转基因小鼠对于ISO和TAC诱导心肌肥厚有减轻作用,ANP和-MHC降低优于脑钠钛（BNP）。     

采用MLL-AF9转基因小鼠造血细胞移植的方法建立白血病小鼠模型

目的:采用混合谱系白血病(MLL)-AF9转基因小鼠造血细胞移植的方法建立白血病小鼠模型,为急性髓系白血病的机制研究和治疗药物筛选提供基础。方法:繁育和鉴定MLL-AF9转基因小鼠,当小鼠自然发病后,经外周血白细胞计数检测、流式细胞术和形态学方法鉴定。待外周血白细胞数100×109/L后,收集骨髓细胞和脾细胞冻存。将细胞复苏后经尾静脉注射入4.5 Gy照射的野生C57BL/6J小鼠体内,观察小鼠的成模情况,最后采用阳性药物在该模型上进行疗效评价。结果:本实验繁育的MLL-AF9转基因小鼠的自然发病时间为22-28周,发病后的转基因小鼠脾脏增大,骨髓呈髓系白血病细胞的幼稚形态,骨髓和脾细胞均高表达CD11b和Gr-1髓系标志。最低0.5×106骨髓细胞和2.5×106脾细胞移植就能使受体小鼠全部造模成功,小鼠的中位生存时间分别为20和36 d。在脾细胞移植的小鼠发病模型上进行实验治疗,发现传统化疗药物阿糖胞苷能延缓发病,并延长模型小鼠的生存时间。结论:成功建立基于MLL-AF9转基因小鼠造血细胞移植的小鼠白血病发病模型,有望用于MLL相关白血病的发病机制研究和疗效评价。     

NUP98-HOXA9融合基因转基因小鼠的建立及乙烷亚硝基脲诱变的研究

目的从整体动物水平阐明NUP98 HOXA9融合蛋白在白血病发病机制中的作用。方法采用分子克隆技术构建含有NUP98 HOXA9的转基因质粒 ,经显微注射建立含有该融合基因的转基因小鼠 ,并对其细胞表型进行分析 ;采用PCR、RT PCR等技术进行转基因整合和表达检测 ;对表型正常的转基因小鼠用乙烷亚硝基脲 (ENU)诱变 ,观察转基因小鼠的表型变化。结果 5个单系的转基因小鼠在骨髓细胞中检出NUP98 HOXA9融合基因的稳定表达 ,但血常规、骨髓象及肝、脾等未见异常改变。ENU诱变后部分转基因阳性小鼠出现类似人类慢性髓系白血病的表现。结论NUP98 HOXA9融合基因产物能在转基因小鼠中表达 ,但不足以诱发白血病 ;ENU诱变结果提示转基因小鼠对ENU造成的第二次打击可提高白血病的易感性     

绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞定向分化的能力

目的：研究绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchvmal stem celis，MSCs)体外扩增及其向内皮细胞定向分化能力，为血管组织工程在体研究提供实验依据。方法：实验于2003—10／2004—10在第三军医大学基础部解剖学教研室完成。无菌条件下采集绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓，用直接贴壁法获得小鼠MSCs，然后以血管内皮生长因子(vascular endothelial growth faclor，vEGF)进行诱导分化，最后对扩增的细胞特征进行八因子(Willbrand factor，vWF)免疫荧光鉴定观察。结果：MSCs每扩增一代，细胞数量增加4～8倍，7．0&;#215;10^3个原代MSCs体外扩增3代即获得1．4&;#215;10^8个细胞。在70％～80％融合时呈现“铺路石”样形态，说明绿色荧光蛋白转基因小鼠MSCs在体外的培养扩增条件与一般小鼠相同。添加VEGF诱导2周后，以免疫荧光法检测细胞的vWF的表达发现，诱导组的vWF呈阳性表达，对照组vWF表达呈阴性。结论：绿色荧光蛋白转基因小鼠MSCs在体外的培养扩增能力强，在vEGF作用下可以向内皮细胞转化。     

小鼠骨髓细胞对人剂量阿糖胞苷的耐受性

目的：探讨人胞苷脱氨基酶基因(CD)导入小鼠骨髓细胞中，观察小鼠骨髓细胞对大剂量阿糖胞苷的耐受性。方法：2003—07／2004—12在中国医科大学附属第一医院中心实验室，以反转录病毒为载体、将人胞苷脱氨基酶基因通过共培养转染入小鼠骨髓干细胞，观察共培养后的骨髓细胞及经药物处理耐Ara-CCFU—GM生成情况；转基因小鼠骨髓细胞提取的DNA，用PCR检测转基因小鼠骨髓细胞耐药基因的表达。结果：含有耐药基因的骨髓细胞耐药克隆的形成为52％，对照组为9％；转基因小鼠骨髓细胞经PCR检测．显示有CD基因条带：耐药基冈转染后小鼠骨髓对阿糖胞苷的耐受明显增加结论：CD基因可以进入小鼠骨髓细胞并且获得共表达．提高了造血细胞对阿糖胞苷的耐药性。