结核分枝杆菌的检测及分子生物学技术应用评价

文中分析了几种传统的结核杆菌检测方法及分子生物学技术在结核分枝杆菌检测中的应用。PCR技术具有快速、敏感和特异性高的优点，但结果的精确性在各实验室之间仍存在着差异，尽管如此，PCR技术对结核分枝杆菌早期感染和MDR结核病的直接检测，仍具有其独特的优势。同时，指出了影响PCR结果精确性的因素，以及对新暴露的人群，在PCR检测阳性、结核菌素试验和结核杆菌培养结果阴性的情况下，阴性预测值（NPV）的研究比较有实用价值。     

PCR法检测细针穿刺标本中的结核杆菌

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对６８例肺外肿块细针穿刺标本，进行结核病病原学诊断，结果２０例结核杆菌ＰＣＲ呈阳性，其中７例经手术活检，１３例经细胞学诊断，均证实为肺外结核病。４８例结核杆菌ＰＣＲ阴性者，均经细胞学诊断为非结核病。提示：用ＣＰＲ法检测肺外肿块细针穿刺标本中的结核杆菌，在鉴别诊断肺外结核病方面具有重要的意义。     

聚合酶链反应检测结核杆菌DNA假性结果分析

附图说明了临床实验室聚合酶链反应检测结核杆菌ＤＮＡ常见假阳性及假阴性结果，并分析了出现这些结果的主要原因，为了减少监实验室ＰＣＲ检测结核杆菌ＤＮＡ假性结果的出现，检测每批标本必须同时带阴性及阳性对照，并且注意正确的加样顺序。     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合，最后用酶底物与所标记酶进行显色反应，通过测定其吸光度来判断结果。结果所建立的ＰＣＲＥＬＩＳＡ检测法可提高检测的灵敏度和特异性。对５０份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，ＰＣＲＥＬＩＳＡ检出２２份阳性，比抗酸染色法（７／５０）、培养法（１３／５０）和ＰＣＲ电泳法（１８／５０）检出率高，而２０份证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌。     

PCR扩增IS6110用于检测痰液中结核分枝杆菌的评价

为评价ＰＣＲ扩增ＩＳ６１１０检测结核分枝杆菌的特异性，用Ｂａｃｔｅｃ培养法对４５例可疑肺结核病人痰样品进行分枝杆菌检测；用４对分别针对ＩＳ６１１０不同区域引物和一对分枝杆菌属特异的１６ＳｒＲＮＡ基因引物对这４５例痰样品及其培养物和２７株已知分枝杆菌属菌株进行ＰＣＲ扩增检测。结果所有分枝杆菌ＤＮＡ均扩增出了１６ＳｒＲＮＡ基因片段，结核分枝杆菌ＤＮＡ均扩增出了ＩＳ６１１０的４个不同区域片段，非典型分枝杆菌ＤＮＡ均未扩增出ＩＳ６１１０片段，但存在假阳性和假阴性     

银染单链构象多态性技术检测结核杆菌rpoB基因突变

目的探讨分子生物学方法在临床标本结核分枝杆菌利福平（ＲＦＰ）耐药性评估中的应用价值。方法设计针对ｒｐｏＢ基因１８３ｂｐ扩增引物,运用聚合酶链反应单链构象多态性分析（ＰＣＲＳＳＣＰ）银染色方法,检测了４５株结核杆菌临床分离株,并对其中部分菌株进一步做了ＤＮＡ序列分析。结果以药敏试验结果为对照,有１６株ＲＦＰ敏感株及２６株ＲＦＰ耐药株经ＳＣＰ方法得到检测,阳性占９３．３％,特异性１００％。对部分菌株１８３ｂｐ片断测序结果显示,ＲＦＰ敏感株无ｒｐｏＢ基因突变,耐药株均发生碱基突变,分别导致编码５３１及５２６位点的氨基酸改变。结论银染ＰＣＲＳＣＰ方法具有简便,快速,准确的特点,提高敏感性,可以对临床标本结核杆菌利福平耐药突变进行鉴定。序列分析证明结核分枝杆菌利福平耐药菌株有ｒｐｏＢ基因突变。     

二步温控法聚合酶链反应检测脑脊液结核杆菌DNA

应用二步温控法聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测脑脊液结核杆菌微量ＤＮＡ，并扩增出标准人型结核杆菌１５８ｂｐ。实验结果表明：ＰＣＲ用于结核性脑膜炎患者脑脊液结核杆菌ＤＮＡ的检测，与传统检验方法相比较，具有敏感、快速、特异、高效等优点，是基因水平上检测结核杆菌的一项新技术，用于结核性脑膜炎的早期诊断，具有很强的实用价值，值得临床推广应用。     

二步温控法聚合酶链反应检测脑脊液结核杆菌DNA

应用二步温控法聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测脑脊液结核杆菌微量ＤＮＡ，并扩增出标准人型结核杆菌１５８ｂｐ的基因片段。实验结果表明：ＰＣＲ用于结核性脑膜炎患者脑脊液结核杆菌ＤＮＡ的检测，与传统检验方法相比较，具有敏感、快速、特异、高效等优点，是基因水平上检测结核杆菌的一项新技术，用于结核性脑膜炎的早期诊断，具有很强的实用价值，值得临床推广应用。     

聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用

目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法参照Ｃａｍｐｂｅｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ及临床标本中的肺炎衣原体感染。结果经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣原体ＤＮＡ；１０份模拟标本均扩增出４３７ｂｐ区带；２２份小儿肺部感染的咽拭子标本中有５份为阳性，阳性率为２２．７％，而显微镜检查只有２例可见包涵体；１２份正常小儿咽拭子标本均为阴性。结论ＰＣＲ法检测肺炎衣原体，具有特异、敏感、快速、准确的特点，为肺炎衣原体感染的临床诊断提供了科学的依据     

聚合酶链反应检测胸腹水中结核杆菌的临床应用

聚合酶链反应检测胸腹水中结核杆菌的临床应用浙江省丽水市医院检验科（３２３０００）王伟，邱敏，管丽华，陈爱萍聚合酶链反应（ＰＣＲ）具有很高的特异性和敏感性，国内外不少学者将此法用于痰液中结核杆菌的检测已取得较满意结果［１－３］。但对胸腹水中结核杆菌的检...     

套式聚合酶链反应结合直接荧光法检测女性生殖道沙眼衣原体

目的建立一种敏感、特异、快速诊断女性生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）感染的方法。方法应用套式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）技术和直接荧光（ＤＦＡ）法检测女性生殖道沙眼衣原体。对两者结果不符的标本用细胞培养法验证。结果３００份受检标本，ＤＦＡ法阳性７１份，阴性２２９份，ＮＰＣＲ法阳性９０份，阴性２１０份；其中ＮＰＣＲ和ＤＦＡ均为阳性者６８份，另有２２份ＮＰＣＲ阳性，而ＤＦＡ为阴性，再经细胞培养证实系阳性。但另有３份ＤＦＡ阳性，ＮＰＣＲ却为阴性，再经细胞培养证实亦属阳性。综合ＮＰＣＲ与ＤＦＡ并对照细胞培养，结果显示ＮＰＣＲ的敏感性为９６７％（９０／９３），特异性为１００％（２０７／２０７），ＤＦＡ的敏感性为７６３％（７１／９３），特异性为１００％（２０７／２０７）。结论ＮＰＣＲ技术与ＤＦＡ法检测ＣＴ感染，均具有高度特异性、操作简便等优势；ＮＰＣＲ的敏感性优于ＤＦＡ法；ＤＦＡ法具有费用低、重复好的特点。两法结合起来检测ＣＴ，将获得理想的检测效果。     

改进聚合酶链反应检测方法提高结核分枝杆菌检出率

改进聚合酶链反应检测方法提高结核分枝杆菌检出率张捷，李小英，寇丽筠各种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测临床标本的结核分枝杆菌（ＭＴＢ）已被国内外公认是一个快速可靠的检测方法。我们应用ＰＣＲ方法和杂交技术期间发现尚有许多问题有待探讨。如应用该法对临床１８２份...     

PCR检测技术在结核病诊断中的价值

用ＰＣＲ技术对１７５例临床可疑结核病，但常规培养或抗酸染色阴性的病理标本中结核菌ＤＮＡ进行了检测。结果发现有２２．３％（３９／１７５）的样本结核菌ＤＮＡ阳性。结果提示，ＰＣＲ技术在检测结核菌ＤＮＡ中具有简便、快速和灵敏的特点，其阳性结果说明被测样品中有结核菌的存在，对结核病的确诊有重要辅助意义。     

聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用

目的 探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法 参照Ｃａｍｐｂｅｌｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ有临床标本中的肺炎衣原体感染。结果 经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣     

PCR扩增血液中结核杆菌DNA的研究

ＰＣＲ扩增血液中结核杆菌ＤＮＡ的研究东台市人民医院（２２４２００）尹洪波，刘国栋作者应用ＰＣＲ技术检测３８例血液中的结核杆菌，并进行临床分析。材料和方法一、研究对象均排除ＨＩＶ和肺外结核病３８例，其中１６例活动型肺结核分为Ａ组１２例，为痰涂片阳性未治...     

PCR室间质量控制研究状况

ＰＣＲ技术现已得到一定程度的普及，许多单位将其作为一种常规应用于多种病原微生物的临床检测和诊断。国外学者近年来相继报道对全球范围内许多研究室建立的乙肝病毒ＤＮＡ，丙肝病毒ＲＮＡ和结核杆菌ＤＮＡ的ＰＣＲ检测方法进行的室间质量控制研究，结果表明不同研究室所建立的ＰＣＲ的敏感性和特异性，差别较大，本文对此简要综述。     

结核分枝杆菌蛋白芯片检测结果判定和临床意义分析

目的 分析结核分枝杆菌(简称结核杆菌)蛋白芯片法检测结果的判定方法和临床意义.方法 以结核病患者及非结核病患者作为检测对象,评价结核杆菌蛋白芯片法对结核病的诊断性能.结果 不同指标的单独或组合检测具有不同的诊断性能.结论 结核杆菌蛋白芯片法诊断结核病具有较大的阴性预测意义,是临床辅助诊断结核病的参考方法.     

PCR在结核病研究中应用

本文综述了ＰＣＲ技术在结核病临床研究中的新进展，对如何选择引物、处理标本、减少假阳性和假阴性等进行了详细说明，对ＰＣＲ技术在结核菌菌种鉴定、流行病学研究和结核耐药基因检测等方面应用进行了阐述。     

PCR检测外周血细胞中结核分枝杆菌核酸

ＰＣＲ检测外周血细胞中结核分枝杆菌核酸杨朝国陈川①张明清②（四川省卫生管理干部学院，成都６１００４１）关键词结核分枝杆菌核酸外周血聚合酶链反应检测结核分枝杆菌核酸的几种ＰＣＲ方法特异性和灵敏度均不相同〔１～３〕，用痰样品制备ＤＮＡ较麻烦，且常常是ＰＣ...     

银染单链构象多态性技术检测结核杆菌rpoB基因突变

目的 探讨分子生物学方法在临床标本结核分枝杆菌利福平（ＲＦＰ）耐药性评估中的应用价值。方法 设计针对ｒｐｏＢ基因１８３ｂｐ扩增引物,运用聚合酶链反应－单链橡象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色方法,检测了４５株结核杆菌临床分离株,并对其中部分菌株进一步做了ＤＮＡ序列分析。结果 以药敏试验结果对照,有１６株ＲＦＰ敏感株为２６株ＲＦＰ耐药株经ＳＳＣＰ方法得到检测,阳性占９３．３％,特异性００％。对部