TNF-α对亚低温条件下大鼠肝细胞糖代谢的影响

目的 探讨TNF-α对亚低温条件下大鼠原代肝细胞糖代谢的影响及其机制.方法 培养SD大鼠原代肝细胞6天,分别在不同浓度TNF-α及不同温度下培养8 h,观测培养肝细胞中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性及细胞培养液中葡萄糖浓度的变化.结果 在较低浓度TNF-α时G-6-Pase的活性降低,在较高浓度TNF-α时G-6-Pase的活性升高.亚低温组与常温组两组间G-6-Pase的活性变化无明显差异.亚低温组与常温组间葡萄糖的浓度仅在较高浓度TNF-α时有差异.结论 TNF-α对培养原代肝细胞的糖代谢有影响,在TNF-α浓度较高时温度对培养原代肝细胞糖的代谢有影响.     

高糖和脂多糖对腹膜间皮细胞己糖激酶活性的调节作用

目的:研究高糖和脂多糖(LPS)对腹膜间皮细胞(PMC)己糖激酶(HK)活性的调节作用。方法:行PMC的原代培养及鉴定。首先将不同浓度的葡萄糖(0.10,1.50,2.50,4.25%)分别和不同剂量的LPS(0,0.1,1.0,10.0,50.0,100.0mg/L)加入培养基;其次用含4.25%葡萄糖和10.0mg/LLPS的培养基孵育细胞不同时间(0,1,3,6,12,24h);6-磷酸葡萄糖脱氢酶耦联比色法测定HK活性。最后用含10.0mg/LLPS的培养基孵育细胞不同时间(0,1,3,6,12,24h);测定HK活性和细胞葡萄糖的摄入量,分析HK活性与葡萄糖摄入量的相关性。结果:高糖和LPS对HK的活性具有交互作用(F=423.55,P<0.01)。高糖和LPS以剂量(P<0.01)和时间依赖的方式诱导HK活性(P<0.01);LPS以时间依赖的方式促进PMC葡萄糖净利用(P<0.01)。结论:高糖和LPS对PMC己糖激酶活性的调节作用在腹膜透析失超滤的过程中发挥了重要的作用。     

蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞Mg~(2+)-ATP酶、葡萄糖-6-磷酸酶活性的影响

目的 探讨醇溶性蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞Mg~(2+)-ATP酶(Mg~(2+)-ATPase)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性的影响.方法 用乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆,采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(EET),将其作用于H22荷瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率,应用酶化学染色法观察H22肝癌细胞酶活性的变化.结果 蟾蜍毒素组和氟尿嘧啶组的肿瘤抑制率分别是32.0%和34.4%,与正常对照组比较差异显著(P<0.05),Mg~(2+)-ATPase、G-6-Pase反应颗粒变小,数量减少,密度变低,提示酶活性明显下降.结论 蟾蜍毒素可降低H22荷瘤小鼠肝癌细胞质膜标志酶Mg~(2+)-ATPase及内质网标志酶G-6-Pase的活性,抑制肿瘤细胞的生长.     

大鼠心肌细胞葡萄糖—6—磷酸酶活性的超微结构定位

本实验对大鼠心房及心室的心肌细胞葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性进行了电镜观察,G-6-Pase反应产物见于肌浆网(SR)和核被膜内。我们发现心肌细胞内G-6-Pase活性呈现异质性分布,周围连接肌浆网(PJ-SR)和内部连接肌浆网(IJ-SR)内的G-6-pase反应产物较多,核被膜内含量较少,而网状肌浆网(N-SR)则含量稀少,或者缺乏。本文对心肌细胞内G-6-Pase的可能功能意义进行了讨论。     

二乙烯三胺五乙酸-2-脱氧葡萄糖影响己糖激酶磷酸化反应的研究

目的 探讨二乙烯三胺五乙酸2-脱氧葡萄糖(diethylenetriaminepentaacetic acid-2-de-oxy-D-glucose,DTPA-DG)与2-脱氧葡萄糖(2-deoxy-d-glucose,DG)对己糖激酶磷酸化代谢途径的作用及细胞摄取99m锝-二乙三胺五醋酸-氨基葡萄糖(99mTc-diethylenetriaminepentaacetic acid-2-deoxy-D-glu-cose,99mTc-DTPA-DG)的机制.方法 己糖激酶(hexokinase,HK)磷酸化实验分为4组,用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测0.5、1.0、2.0和2.5 h的三磷酸腺苷(adenosine triphos-phate,ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)含量;己糖激酶抑制实验分为3组,用6-磷酸葡萄糖脱氢酶偶联比色法检测红细胞中DTPA-DG与DG的HK活性.结果 4组己糖激酶磷酸化实验不同药物浓度、不同时间反应消耗的ATP和生成的ADP比较差异有显著性(P<0.05).而底物浓度为100ul、反应时间为2 h的反应进行最彻底.3组己糖激酶抑制实验不同药物浓度测得的HK活性差异有显著性(P<0.05),底物浓度为100uL时ILK活性最高.结论 DTPA-DG与DG能发生己糖激酶磷酸化,99mTc-DTPA-DG通过己糖激酶磷酸化途径进入细胞,可作为葡萄糖代谢类似显像剂.     

大鼠心肌葡萄糖-6-磷酸酶活性的电镜观察

作者报告电镜下大鼠心肌内葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的分布情况。结果表明,G-6-Pase定位在心肌细胞的肌质网膜、核内外膜、线粒体的内外膜和嵴、闰盘处的肌膜、肌间毛细血管内皮细胞的核膜和内质网膜以及红细胞膜上。在上述的不同部位中,该酶的活性是不同的。     

3-溴丙酮酸对肠癌HCT116细胞的增殖抑制作用及其机制

［摘 要］ 目的：研究3-溴丙酮酸（3-BP）对肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用并初步探讨其抑制作用的机制,为3-BP的临床应用提供依据。方法：将体外培养的HCT116细胞分为对照组和不同浓度3-BP组（3-BP的终浓度分别为25、50、75和100 mg/L）。采用Western blotting法检测己糖激酶Ⅱ(HKⅡ)蛋白表达水平;采用6-磷酸葡萄糖(G-6-P)检测试剂盒检测培养液中G-6-P的浓度;采用MTT比色法测定细胞增殖活性;采用流式细胞术检测细胞周期。结果：与对照组比较,25 mg/L 3-BP组 HKⅡ蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）,与对照组和25 mg/L 3-BP组比较,50、75和100 mg/L 3-BP组HKⅡ蛋白表达水平均显著下调（P<0.01）。与对照组比较,25 mg?L-1 3-BP组培养液中G-6-P浓度无明显变化（P>0.05）;与对照组和25 mg/L 3-BP组比较,50、75和100 mg/L 3-BP组培养液中G-6-P的浓度均显著下降（P<0.01）。MTT法,与对照组比较,25 mg/L 3-BP组细胞存活率无明显变化(P>0.05);与对照组和25 mg/L 3-BP组比较,50、75和100 mg/L 3-BP组细胞存活率明显降低(P<0.05)。流式细胞术,与对照组比较,25 mg/L 3-BP组G1和S期细胞所占比例无明显变化（P>0.05）;与对照组和25 mg/L3-BP组比较,50、75和100 mg/L 3-BP组S期细胞所占比例逐渐减少(P<0.05),G1期细胞则明显增加（P<0.01）,细胞滞留在G1期。结论：3-BP可显著抑制HCT116细胞增殖,其机制可能与3-BP抑制HKⅡ活性、减少细胞对葡萄糖的利用有关。     

悦肝胶囊对原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的:研究悦肝胶囊对四氯化碳(CCl4)损伤体外培养大鼠肝细胞的保护作用.方法:采用CCl4诱导大鼠肝细胞损伤模型,观察悦肝胶囊对肝细胞的琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACPase)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性和糖原含量的影响.结果:悦肝胶囊能显著提高SDH、G-6-Pase活性及糖原含量(P<0.001),显著抑制ACPase活性(P<0.001).结论:悦肝胶囊对CCl4损伤体外培养大鼠肝细胞具有保护作用.     

病毒性肝炎患者葡萄糖-6-磷酸脱氢酶检测的临床意义

目的探讨红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)检测对甲、乙型病毒性肝炎患者的临床意义。方法采用高铁血红蛋白还原试验定量检测259例甲型病毒性肝炎患者、303例乙型病毒性肝炎患者及593例对照者红细胞G-6-PD的活性。结果对照组中G-6-PD缺陷20例(3.37%),甲型病毒性肝炎组G-6-PD缺陷31例(11.97%),与对照组相比差异有统计学意义(2χ=23.67,P<0.01);乙型病毒性肝炎组G-6-PD缺陷20例(6.60%),与对照组相比差异有统计学意义(2χ=4.90,P<0.05);甲、乙型病毒性肝炎组的G-6-PD缺陷率差异也有统计学意义(2χ=4.88,P<0.05)。结论检测甲、乙型病毒性肝炎患者的红细胞G-6-PD水平,对防止在治疗过程中并发溶血性贫血有较重要的作用。     

比较硬膜外与静脉镇痛对开胸手术患者红细胞糖代谢限速酶和血浆葡萄糖及皮质醇的影响

目的:比较硬膜外与静脉镇痛对开胸手术患者红细胞磷酸果糖激酶(PFK)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6PD)和醛糖还原酶(AR)的活性,以及血浆葡萄糖和皮质醇水平的影响.方法:42例食道癌手术患者随机分为Ⅰ、Ⅱ两组,每组21例.两组患者术中均行静脉全麻复合硬膜外阻滞,Ⅰ组术后行静脉芬太尼镇痛(15ug/kg),Ⅱ组术后行硬膜外镇痛(0.125 0%罗哌卡因混合0.000 2%芬太尼).分别于麻醉前(T0)、手术60 min(T1)、术后60 min(T2)、术后1天晨(T3)和术后2天晨(T4)抽取肘静脉血,测定红细胞PFK、G-6PD和AR的活性及血浆葡萄糖和皮质醇的水平,采用视觉模拟评分(VAS)判定术后4、12、24、48 h镇痛效果,比较术后镇痛(PCA)泵内芬太尼用量和按压次数.结果:①与T0相比,T3时Ⅰ组患者PFK活性显著降低(P<0.01),G-6PD和AR活性显著升高(P<0.01),Ⅱ组患者三个酶的活性无明显变化(P>0.05);此时两组之间相比较有显著性差异(P<0.05).②两组患者血糖和皮质醇水平均自T1开始明显升高(P<0.05或P<0.01),至13时达峰值(均P<0.01),T4时点Ⅱ组患者的血糖值恢复至术前水平(P>0.05);T3、T4时Ⅰ组血糖和皮质醇值均明显高于Ⅱ组(P<0.05或P<0.01).③两组患者术后镇痛效果均良好,VAS镇痛评分<3分,但Ⅰ组患者术后12、24 h VAS评分明显高于Ⅱ组(P<0.05),PCA的芬太尼用量和按压次数也明显高于Ⅱ组(P<0.01).结论:食管癌手术患者采用硬膜外镇痛,可抑制血糖与皮质醇水平升高,减轻术后的应激反应,改善红细胞内糖代谢状况,其镇痛效果优于静脉镇痛.     

Changes in some liver enzymes in streptozotocin-induced diabetic rats fed sapogenin extract from bitter yam (Dioscorea polygonoides) or commercial diosgenin

The effects of steroidal sapogenin extract from bitter yam or commercial diosgenin on liver enzyme changes were investigated Diabetic male Wistar rats were fed diets supplemented with 1% steroidal sapogenin extract or commercial diosgenin for three weeks. Plasma glucose levels and the activities of hepatic glucose-6-phosphatase, pyruvate kinase and glucose-6-phosphate dehydrogenase were assessed Liver total cholesterol, HDL-cholesterol and total phospholipid were also measured. Plasma glucose decreased significantly (p < 0.05) in diabetic rats fed the three test diets compared to the diabetic control. The three test diets significantly decreased glucose-6-phosphatase activity compared to the diabetic control The activities of ATP-citrate lyase, pyruvate kinase and glucose-6-phosphate dehydrogenase were significantly reduced in the liver of diabetic rats compared to normal control. Supplementation of the diet with bitter yam steroidal sapogenin extract or commercial diosgenin did not significantly alter ATP citrate lyase and pyruvate kinase activities but significantly increased glucose-6-phosphate dehydrogenase activity in the liver compared to diabetic rats. This study shows that the feeding of the two test diets to diabetic rats results in alterations in the metabolism of glucose with subsequent reduction in plasma glucose concentration.     

南苜蓿总皂苷改善2型糖尿病大鼠糖代谢的作用机制

目的 探讨南苜蓿总皂苷(TSMP)对2型糖尿病(T2DM)大鼠糖代谢的作用及其可能的机制.方法 采用高脂加小剂量链脲佐菌素诱导T2DM大鼠模型,将大鼠分为对照组、模型组、二甲双胍组(0.2 g/kg)、TSMP高剂量组(1.4 g/kg)、TSMP低剂量组(0.7 g/kg),连续给药4周,末次给药后测定胰岛素抵抗指数(IRI)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、肝糖原、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、游离脂肪酸(FFA)、瘦素(Leptin)水平,以及丙酮酸激酶(PK)、已糖激酶(HK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)、果糖-1,6-二磷酸酶、葡萄糖激酶(GK)的活性;检测肝脏组织中G-6-Pase、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)蛋白的表达.结果 与模型组比较,给予高剂量(1.4 g/kg) TSMP能降低T2DM大鼠IRI、FBG、HbA1c、IL-1β、TNF-α、FFA、Leptin水平,升高肝糖原水平,提高PK、HK、GK的活性,降低G-6-Pase、果糖-1,6-二磷酸酶的活性,并下调肝脏组织中G-6-Pase、PEPCK蛋白表达水平,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TSMP可以改善T2DM大鼠的糖代谢紊乱,可能与其促进葡萄糖的利用,减轻炎性反应和改善胰岛素抵抗有关.     

氯化锂对大鼠肝细胞葡萄糖6磷酸酶基因表达的影响

目的:探讨利用糖原合成酶激酶3的抑制剂氯化锂对葡萄糖6磷酸酶基因表达的影响。方法:将原代培养的大鼠肝细胞在葡萄糖和不同浓度氯化锂的培养液中培养4h后提取RNA,以半定量RT-PCR方法检测细胞葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)和6磷酸葡萄糖转运亚基(G6PT)的mRNA水平。结果:氯化锂(10mM、20mM)与高糖培养液联合培养肝细胞4h后,肝细胞葡萄糖-6-磷酸酶的催化亚基和转运亚基的mRNA的丰度均下降(P<0.05)。结论:锂盐可能能够有效的抑制葡萄糖-6-磷酸酶的表达起到胰岛素增敏的作用。对葡萄糖-6-磷酸酶进行干预能够有效的改善糖尿患者的高血糖状态。     

乌拉坦对小白鼠胚胎及仔鼠肝脏酶影响的观察

为了解乌拉坦(氨基甲酸乙酯)通过胎盘对动物胚胎及仔鼠肝脏正常发育与功能变化的影响,我们分别给妊娠11d、13 d、15 d、17 d及19 d的Swiss种小白鼠皮下一次性注射乌拉坦1mg/g bw,用酶组化方法检查不同时期胚胎肝及新生仔鼠肝脏几种酶的变化。对葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)、三磷酸腺苷酶(ATPase)、5’-核苷酸酶(5’-Nase)、碱性磷酸酶(AKP)、琥珀酸脱氢酶(SDH)及糖原在不同实验条件下在肝内分布及质与量的变化进行了比较观察。结果发现在不同妊娠时期,这种化合物对胚胎及生后仔鼠肝脏酶活性均有明显影响。而且在给药后第3天这5种酶均有明显改变,尤以肝细胞酶形成期接受致癌剂后改变更明显。有意义的是G-6-Pase、ATPase、5′-Nase、ALP及糖原呈现规律性变化。可能反映了这类致癌(畸)性化合物在诱发动物产生形态学明显的肿瘤或畸形之前,肝细胞内某些酶的生成与正常调控已先有改变。     

乐肝复方合剂对体外培养大鼠肝细胞的保护作用

[目的]探讨乐肝复方合剂对四氯化碳损伤体外培养大鼠肝细胞的保护作用.[方法]体外培养大鼠肝细胞,用四氯化碳处理制作肝细胞损伤模型,观察乐肝复方合剂对损伤肝细胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACPase)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性及糖原含量的影响.[结果]乐肝复方合剂可显著提高损伤肝细胞内SDH,G-6-Pase活性,提高糖原含量,抑制ACPase活性.[结论]乐肝复方合剂对四氯化碳损伤体外培养大鼠肝细胞具有保护作用.     

转染SV40永生化基因正常成人肝细胞的形态观察

目的了解转染SV40基因对正常成人肝细胞形态结构及特殊染色的影响。方法采用本组构建的含SV40永生化基因的正常成人肝细胞（rSSR#69/HL-7702肝细胞）,以HE染色法、糖原染色法（PAS）和葡萄糖-6-磷酸酶染色（G-6-Pase）法,在光镜下观察该细胞的形态特征,以电镜法观察该细胞的超微结构。结果：光镜下比较转染前、后的正常成人肝细胞形态无明显差异;PAS染色均可见胞浆内有粉红色的糖原颗粒,G-6-Pase染色均可见胞质内有铁黑色颗粒;电镜下比较转染前、后的正常肝细胞的超微结构亦无统计学差异。结论：转染SV40永生化基因的正常成人肝细胞的形态结构与转染前无明显差异,仍具有糖原合成及葡萄糖代谢的能力。     

酒精对冬眠蟾蜍肝脏损害的实验研究

冬眠蟾蜍的肝脏对不同浓度酒精反应敏感性不同,组织化学观察表明,随着酒精浓度的增加、喂酒时间延长,糖原(PAS反应)、ATPase、G-6-Pase、SDH的活性和反应由减弱至消失;ACP、AKP活性则不断增高。动物在试验初期,早春初醒,活跃自如,不久即反应迟钝,死亡率随酒精浓度的增高、喂酒时间的延长而增高。冬眠蟾蜍的“生物时钟”可因外界因素的刺激而受干扰。     

宫内发育迟缓对大鼠肝糖异生关键酶的影响

目的：通过检测宫内发育迟缓(IUGR)仔鼠肝组织中糖异生关键酶磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄
糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的mRNA表达变化,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的机制。方法：通过孕期全程给予孕鼠10%
低蛋白饲料建立IUGR仔鼠模型,对照组给予孕鼠21%正常蛋白饲料建立正常出生体质量仔鼠模型。每组仔鼠出生1
周、3周、8周时测定其体质量、空腹血糖、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数,并采用反转录-聚合酶链反应(RTPCR)
法检测仔鼠肝组织中PEPCK和G-6-Pase的mRNA表达。结果：IUGR组仔鼠出生体质量明显低于对照组(P<0.001),
1周、3周、8周时亦低于对照组(P<0.05)。各时间点IUGR仔鼠空腹血糖、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数与对照组
无明显差异(P>0.05)。IUGR仔鼠各时间点肝组织PEPCK和G-6-Pase mRNA的表达水平均高于对照组(P<0.01)。结论：
IUGR仔鼠肝糖异生关键酶PEPCK和G-6-Pase的表达明显增高,可能增加肝糖异生,是IUGR个体发生胰岛素抵抗和糖
尿病的重要机制之一。