基因芯片分析显示昆明山海棠有机萃取液经NF- κB及线粒体信号传导途径诱导HL- 60细胞凋亡

目的 研究中草药昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum (THH）有机萃取液诱导人早幼粒白血病HL—60细胞凋亡过程的信号传导通道及分子机制。方法 应用流式细胞仪研究了THH有机萃取液诱导HL—60细胞的凋亡过程，并应用包含3000人类基因与EST的基因芯片进行基因表达差异分析。结果 基因芯片杂交结果显示有16个基因表达发生大于2倍的显著变化，这些基因同细胞生长，细胞周期调控，细胞分化，以及压力反应有关。部分基因在细胞凋亡过程中起关键作用，如Caspase 3和Caspase 8。结论 THH有机萃取液诱导HL—60细胞凋亡，该过程与NF—κB和线粒体信号传导途径有关。     

昆明山海棠诱导HL-60细胞凋亡的初步研究

目的 探讨中药昆明山海棠（THH）诱导急性白血病细胞凋亡的规律及发生机制。方法 应用染料排除法、活细胞荧光染色、DNA电泳、流式细胞仪、斑点杂交、原位杂交和荧光Ca^2 指示剂进行检测和观察。结果 HL-60细胞在THH作用下出现典型的细胞凋亡特征,包括细胞形态改变,DNA梯状带以及亚G1峰,并且存在明显的量效和时效关系。进一步研究表明,Bcl-2基因在凋亡过程中的表达持续下凋,细胞内游离Ca^2 浓度未发生明显变化。结论：THH有较强的诱导白血病HL-60细胞凋亡的能力,其作用机制与下凋Bcl-2基因表达有关。     

喜树碱衍生物SN-38对人白血病细胞系HL-60增殖及凋亡作用的实验研究

目的:观察喜树碱衍生物SN-38对人白血病细胞系HL-60细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其可能的作用机制。方法:采用CCK法检测SN-38对HL-60细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;特异性荧光底物检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性;观察不同种类Caspase抑制剂对SN-38诱导HL-60细胞的增殖和凋亡作用的影响。结果:CCK法显示SN-38明显抑制HL-60细胞增殖,流式细胞凋亡分析及Caspase抑制剂研究,显示SN-38通过内源性Caspase信号通路诱导HL-60细胞凋亡。结论:SN-38通过内源性Caspase信号通路抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡。     

昆明山海棠根部水提液诱导HL-60细胞凋亡及对c-Myc基因表达的调控

目的 研究昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum(Celastraceae)(THH)根部水提液对早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用及机制。方法 通过特征性的形态学观察，Annexin—V标记，以及流式细胞仪检测中次G1峰的形成确定THH的诱导细胞凋亡作用；应用Western Blotting研究THH对c—Myc蛋白表达的影响。结果 THH根部水提液可诱导早幼粒白血病HL-60细胞凋亡。在浓度高于18μg／mL时，THH对HL-60细胞的诱导凋亡作用呈现浓度与时间的相关性。在THH处理2～4h后，癌基因蛋白c—Myc表达降低99％以上。结论 THH抑制了c—Myc蛋白的翻译或后翻译过程，从而降低了c—Myc在细胞周期运转中的作用，导致大量细胞凋亡．     

补骨脂素加长波紫外线诱导HL-60细胞凋亡时Caspase8、Caspase3蛋白的变化

目的研究补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病HL-60细胞凋亡时Caspase8、Caspase3蛋白的变化。方法用不同浓度的中药补骨脂中提取的PSO和／或不同照射时间、波长为360nm的UVA作用于HL-60细胞，检测细胞凋亡率，在电镜下观察细胞超微结构改变及Caspase8、Caspase3蛋白的表达，用多因素方差分析法对定量资料进行统计分析。结果PSO、UVA照射及PUVA均可使细胞凋亡率增加，上调Caspase8、Caspase3蛋白的表达，PUVA的作用显著强于前两者；PUVA处理后的HL-60细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变。结论PUVA在诱导HL-60细胞凋亡的过程中激活了Caspase8、Caspase3。     

PUVA诱导HL-60细胞凋亡时对Caspase8、3蛋白的影响

目的观察Caspase8、3蛋白在补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病HL-60细胞凋亡时的变化情况。方法用不同浓度中药补骨脂中提取的PSO和／或不同照射时间、波长为360nm的UVA作用于HL-60细胞，检测细胞凋亡率、在电镜下细胞超微结构改变及Caspase8、3蛋白的表达，用多因素方差分析法对定量资料进行统计分析。结果PSO、UVA照射及PUVA均可使细胞凋亡率增加，上调Caspase8、3蛋白的表达，PUVA的作用显著强于前两者；PUVA处理后的HL-60细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变。结论PUVA可通过激活Caspase8、3基因诱导HL-60细胞凋亡。     

益肺方对人肺癌A549细胞肿瘤相关生物学通路基因表达的影响

目的:通过PCR基因芯片检测益肺方对人肺癌A549细胞在肿瘤相关生物学通路基因的差异表达,分析其诱发基因谱改变的特征生物学通路,探讨其抗肿瘤作用的分子机制。方法:分别于对照组及实验组A549细胞中提取RNA,反转录成cDNA,以此为模板,应用美国Super Array公司人癌通路发现者PCR基因芯片,进行实时定量PCR反应,检测2组基因表达水平的差异。结果:两组比较在检测的89个基因中发现有8条基因表达水平显著上调,22条基因表达水平显著下调。差异表达基因主要与血管生成、细胞凋亡和细胞衰老、侵袭转移、信号传导等有关。结论:益肺方通过调控血管生成、细胞凋亡和细胞衰老、侵袭转移、信号传导等肿瘤相关生物学通路的基因表达水平,从而抑制人肺癌细胞生长,可能是益肺方抗肺癌作用的主要分子机制。     

Bcl-x基因在紫杉醇诱导的HL-60细胞凋亡过程中的变化

目的　研究抗微管药紫杉醇诱导HL - 6 0细胞凋亡过程中Bcl -x基因表达的变化。方法　用RT -PCR法检测药物孵育前后Bcl-x基因的表达水平。结果　在紫杉醇诱导HL - 6 0细胞凋亡过程中 ,Bcl-x1基因表达水平下降 ,而Bcl-xs 基因表达水平升高。结论　Bcl-x基因参与了紫杉醇诱导的HL - 6 0细胞凋亡的调控。     

4’-甲醚-黄芩素诱导人绒毛膜癌细胞凋亡的信号转导机理研究

目的:探讨4’-甲醚-黄芩素(4’-methyl ether-scutellarein,4-MS)诱导人绒毛膜癌JAR细胞凋亡的信号传导机制。方法:光镜、电镜观察细胞形态、超微结构,RT-PCR技术检测Survivin、Caspase 9、Caspase 3、p38 MAPK基因的表达,Western blot检测Survivin、Caspase 9、Caspase 3、p38 MAPK、Bax和cytochrome C蛋白水平的表达差异。结果:光镜和电镜下可见凋亡细胞的形态学改变;RT-PCR结果显示,不同质量浓度(20、40μg/ml)的4-MS作用24h后,JAR细胞中Survivin mRNA表达显著下降,而Caspase 9、Caspase 3及p38 MAPK mRNA表达显著上升。Western blot证实,JAR细胞的Survivin蛋白表达量显著下降,Bax、cytochrome C蛋白表达量及p38磷酸化水平升高,Caspase 3与Caspase 9被明显激活。结论:4-MS通过上调Bax、cytochrome C、Caspase 9、Caspase 3表达,激活p38 MAPK信号通路及抑制Survivin表达,对JAR细胞内源性细胞凋亡信号转导通路进行正向调节而诱导细胞凋亡。     

直立白薇苷C诱导肺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的研究白薇诱导肺癌A549细胞凋亡的活性成分及其作用机制。方法以肺癌A549细胞为实验对象,通过硅胶柱层析等方法确定其活性成分,并利用比色法研究活性成分对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9的活性以及凋亡相关基因肿瘤坏死因子(TNF-α)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(BCL2)、Caspase-3和生存素(Survivin)的影响。结果分离获得1种能诱导肺癌A549细胞凋亡的活性成分,经鉴定为直立白薇苷C。它可显著抑制A549细胞增殖、诱导A549细胞凋亡。同时增强Caspase-3和Caspase-9的活性,上调TNF-α基因表达,下调BCL2、Caspase-3和Survivin等基因表达。结论直立白薇苷C可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其调节Caspase家族因子活性有关。     

全基因表达谱分析回神颗粒对app/ps1小鼠认知功能障碍的影响

目的:探讨回神颗粒对app/ps1双转基因小鼠脑组织全基因表达谱的影响。方法:对阿尔茨海默病模型小鼠应用回神颗粒,用小鼠全基因芯片分析脑组织基因表达谱,并进行通路分析。结果:全基因组芯片分析表明,共有300个基因同时在模型组和回神颗粒治疗组中发生变化。荧光信号比值大于2. 0的基因有25个,其中下表达基因5个,上表达基因20个。该变化与细胞内信号传导通路、脂代谢、调控细胞凋亡、调控炎症反应等相关。结论:回神颗粒可以通过调节代谢、凋亡相关基因而有效改善阿尔茨海默病模型小鼠的痴呆程度,发挥抗痴呆的作用。     

中药有效成分影响宫颈癌Hela细胞凋亡机制的研究进展

目的随着宫颈癌发病率的逐年上升,中药在治疗宫颈癌放化疗副反应及术后并发症中的作用逐渐被重视。大量研究发现诱导宫颈癌Hela细胞凋亡可以通过影响Bcl-2基因家族、Caspase蛋白酶家族、Fas/Fasl基因系统、某些相关基因的表达等方式来实现。文章从目前国内外研究比较热门的一些中药入手,综述这些中药的有效成分在宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用。例如文中提到中药温莪术有效成分β-榄香烯是通过下调Bcl-2基因表达来促进Hela凋亡;栝楼根的有效活性成分天花粉蛋白促凋亡过程与Caspase家族有关;薏苡仁酯诱导Fas表达上调、Fasl表达下调来促进宫颈癌Hela细胞凋亡。研究中药有效成分影响宫颈癌Hela细胞凋亡机制的目的是为临床应用中药治疗宫颈癌提供科学依据和筛选抗宫颈癌新药提供思路。     

补骨脂素加长波紫外线光化学疗法诱导HL-60、K562细胞凋亡及对Fas、FasL表达的影响

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(PUVA)光化学疗法(UVA)诱导人白血病细胞HL-60、K562凋亡及对Fas、FasL表达的影响。方法以HL-60、K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果PSO、UVA照射及PUVA均可诱导HL-60、K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。电镜下观察经PUVA处理后的HL-60、K562细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60、K562细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者。结论PUVA可诱导白血病细胞HL-60、K562发生凋亡,作用强于PSO及UVA照射。PUVA诱导HL-60、K562细胞凋亡的途径之一为上调细胞Fas基因表达水平,下调FasL基因表达水平。     

全蝎能诱导HL-60细胞凋亡

天津中医学院一附院血液科承担的课题“全蝎诱导HL-60细胞(即急性早幼粒细胞白血病细胞株)凋亡及对其相关基因的影响”通过成果鉴定。 全蝎用于临床治疗白血病有良好疗效。天津中医学院一附院血液科的研究人员采用细胞培养、流式细胞仪及分子生物学等实验方法,观察了全蝎对HL-60细胞增殖、周期分布、凋亡及其相关基因表达等方面的作用。他们发现,全蝎对HL-60细胞增殖有抑制作用,并可诱导其凋亡。其机理是全蝎提高了促凋亡基因P53和C-myc的表达,同时调低了抑制凋亡基因bcl-2的表达。为中医治疗白血病提供了新的思路。 全蝎能诱导HL-60细…     

通心络抑制缺氧诱导的血管内皮细胞凋亡及机制研究

目的 :研究通心络对缺氧诱导的血管内皮细胞凋亡及Caspase 3活性的影响。方法 :培养的牛主动脉内皮细胞分为三组 :正常对照组 ,缺氧组和缺氧加通心络组 ,2 4h后检测凋亡细胞数并计算凋亡百分比 ,以及Caspase 3蛋白的表达与活性。结果 :三组细胞凋亡百分比分别为 7± 0 12 % ,2 8 85± 2 4 6 %和 11 4 8± 1 4 % (P <0 0 5 ) ;通心络对缺氧后血管内皮细胞的Caspase 3蛋白表达无影响 ,但可抑制其活性增高 (41 2± 5 5U/mlvs 6 7 8± 7 2U/ml,P <0 0 5 )。结论 :通心络减少缺氧所致血管内皮细胞凋亡与抑制Caspase 3的活性有关。     

凉血化瘀方对肝衰竭大鼠细胞凋亡相关基因表达的调控作用

目的:应用功能分类基因芯片分析凉血化瘀方对急性肝衰竭大鼠细胞凋亡相关基因表达的影响,探讨其抗肝衰作用的分子机制。方法:腹腔注射GalN(500mg·kg^-1)+LPS(4.8μg·kg^-1),造成大鼠急性肝功能衰竭,应用美国SuperArray公司大鼠细胞凋亡Oligo基因芯片检测模型组和治疗组基因的差异表达。结果:模型组与正常组比较表达下调的基因有37条,表达上调的基因有10条;治疗组与模型组比较表达下调的基因有16条,其中诱导细胞凋亡基因有13条,表达上调的基因有12条,其中抗细胞凋亡基因7条。结论:凉血化瘀方能够调节细胞凋亡相关基因从而抑制肝细胞凋亡,主要是通过下调凋亡诱导相关基因的表达,同时也少量上调凋亡抑制基因的表达。     

川芎对血管内皮细胞Bcl-2、Caspase-3基因表达的影响

目的通过检测川芎对高糖诱导血管内皮细胞Bcl-2和Caspase-3基因表达的影响,探讨川芎抑制血管内皮细胞凋亡的分子机制。方法含川芎血清培养血管内皮细胞,对照组用正常血清和无血清培养基培养。收获细胞后,提取总RNA,设计特异性引物,通过实时荧光定量PCR的方法,检测川芎对血管内皮细胞Bcl-2和Caspase-3基因表达的影响。结果含川芎血清可以显著提高Bcl-2和Cas-pase-3基因的表达,与其他组相比存在显著性差异。结论川芎可能是通过调节Bcl-2和Caspase-3基因的表达,影响Caspase凋亡信号传导系统,抑制血管内皮细胞的凋亡,达到治疗的作用,这可能是川芎抑制血管内皮细胞凋亡的分子机制之一。     

补肾、活血类复方对老年大鼠T细胞凋亡相关基因表达调控模式的比较研究

目的：探讨两个补肾复方（右归饮和补肾益寿胶囊）及活血复方下调老年大鼠T细胞凋亡的基因调控模式。方法：用TUNEL标记的流式细胞检测和荧光实时定量RT－PCR技术，研究老年大鼠和年轻大鼠T淋巴细胞抗凋亡和促凋亡基因（Fas、FasL、Bcl-2、Bax、TNFR1、TNFR2)的表达以及凋亡级联反应中半胱氨酸蛋白酶（如Caspase8和Caspase3)活性的差异，及比较两个补肾方和活血复方对老年大鼠T细胞抗凋亡和促凋亡基因表达的调控以及对Caspase活性的影响。结果：两个补肾复方均能够有效地降低老年大鼠T细胞的过度凋亡，下调FasL及TNFR1基因的转录和Caspase8及Caspase3的活性。而活血复方对于T细胞的过度凋亡无显著作用。结论：激活诱导的T细胞过量凋亡与肾虚密切相关，两个补肾复方均可下调促凋亡基因FasL和TNFR1的转录，从而抑制老年大鼠过度的T细胞凋亡，是补肾法所特有的对老年T细胞凋亡相关基因的调控模式。     

多球壳菌素诱导系膜细胞凋亡及对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响

目的观察多球壳菌素(ISP-1)对体外培养的正常大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的促凋亡作用,研究ISP-1对细胞周期调节蛋白基因表达谱和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法体外培养大鼠GMC,加入100μmol/L ISP-1干预,分别于作用6、12、24、48 h后以流式细胞术检测GMC凋亡,Hoechst33258/PI染色观察凋亡细胞形态变化,琼脂糖DNA凝胶电泳法观察凋亡细胞核小体DNA的断裂现象,并通过SuperArray Real-Time PCR细胞周期基因芯片测定ISP-1对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响,Western blotting法观察Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果ISP-1可显著诱导GMC凋亡,并呈一定的时间依赖性,作用48 h后细胞凋亡最显著,Hoechst33258/PI荧光染色法可见亮蓝色的凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯度的出现;PCR细胞周期基因芯片检测结果发现ISP-1可显著上调GMC Rad51、Atm、Brcal、Caspase3、cyclinA2、cyclinC、chek1、cyclinB1、cyclinB2、cyclinD2、cyclinF、Cdc25a和P27等一些与DNA损伤、凋亡和细胞周期调节蛋白相关的基因的表达;Western blotting发现ISP-1可显著上调GMC Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。结论ISP-1可时间依赖性诱导体外培养的正常大鼠GMC凋亡,其机制与影响细胞周期调节蛋白及凋亡相关基因的表达有关。     

理冲汤对体外培养人子宫肌瘤细胞 p53信号通路基因表达谱的影响

目的:研究理冲汤对体外培养人子宫肌瘤细胞p53信号通路基因表达谱的影响。方法:体外原代培养子宫肌瘤细胞并传代后,加入理冲汤含药血清,继续培养。选用功能分类PCR p53信号通路基因芯片(PCR p53 Signaling PathwayMicroarray),从空白对照组、理冲汤组子宫肌瘤细胞中进行样品的RNA抽提及纯化,采用紫外吸收测定法及变性琼脂糖凝胶电泳进行RNA质量检测,合成cDNA,最后进行实时定量PCR。结果:所采用的PCR p53信号通路基因芯片共检测96条基因,理冲汤组与空白对照组比较,共17条(17.7%)基因表达发生明显变化,其中10条基因表达量明显下降(Fold Down-Regulation<-2),7条基因表达量上升(Fold Up-Regulation>2)。按功能将其进行大体分类,涉及到细胞凋亡、细胞周期、细胞生长增殖和分化、DNA修复等多方面。结论:理冲汤对子宫肌瘤p53信号通路的细胞凋亡、细胞周期、细胞生长增殖和分化、DNA修复等相关基因均有调节作用,提示细胞内外的信号传导是子宫肌瘤发病的关键环节,理冲汤对子宫肌瘤p53信号通路相关基因表达具有调控作用。