尿酸刺激树突状细胞成熟与Toll样受体mRNA表达的关系

目的 观察未成熟树突状细胞(DC)经尿酸刺激成熟过程中,Toll样受体(TLRs)Mrna的表达情况.方法 分离培养小鼠骨髓来源未成熟 DC.以尿酸体外刺激48 h后,RT-PCR方法检测DC TLR2 Mrna、TLR3 Mrna、TLR4 Mrna 、IL-12 p70 Mrna等的表达,ELISA法检测上清IL-12 p70水平.尿酸及NF-Κb抑制剂PDTC刺激不同时间点时,免疫印迹法检测DC NF-Κb p65活化情况.结果 尿酸刺激后DC TLRs Mrna 表达出现明显的变化,与培养基对照组相比,TLR2 Mrna、TLR3 Mrna、TLR4 Mrna表达下降(P＜0.05),以TLR4 Mrna下降最明显;IL-12 p70表达显著增高(P＜0.05);与LPS组相比,TLRs Mrna 与IL-12 p70表达水平相似(P＞0.05).尿酸刺激后15～45 min,DC核因子NF-Κb p65显著活化.结论 尿酸能调节未成熟DC TLR2 Mrna、TLR3 Mrna、TLR4 Mrna及IL-12 p70的表达,促进NF-Κb向核内转移,促进DC成熟.TLRs Mrna的动态变化可能为其诱导 DC 成熟及免疫功能提高的机制之一.     

系统性红斑狼疮病人外周血浆细胞样树突状细胞中Toll样受体7的表达及其意义

目的:检测系统性红斑狼疮（SLE）病人外周血中浆细胞样树突状细胞（pDC）中Toll样受体7（TLR7）的表达,探讨其意义。方法:选取SLE病人52例（SLE组）和正常健康人28名（对照组）,利用流式细胞术检测外周血TLR7+的pDC细胞在各组中的比例。结果:SLE病人外周血单核细胞（PBMC）中pDC相对计数显著低于对照组（P<0.01）,SLE组和正常对照组髓样树突状细胞水平差异无统计学意义（P>0.05）。感染组SLE病人外周血pDC水平显著低于非感染组（P<0.01）,初发组SLE病人外周血髓样树突状细胞水平低于复发组（P<0.05）,pDC水平与外周血CRP呈负相关关系（P<0.05）。SLE病人外周血PBMC内pDC中TLR7+细胞的比例显著高于对照组（P<0.01）。血液系统受累组pDC内TLR7+细胞比例高于无血液系统受累组（P<0.05）。TLR7+pDC细胞比例在抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体阳性组及阴性组之间差异均无统计学意义（P>0.05）;TLR7+pDC细胞比例和蛋白尿分级呈显著正相关关系（P<0.01）。结论:SLE病人外周血TLR7+的pDC细胞比例显著升高,且与临床病情活动性有一定的相关性。     

Toll样受体在骨关节炎中的作用研究新进展

Toll样受体(TLRs)是固有免疫系统中一类重要的模式识别受体(PRRs),通过对不同病原相关分子模式(PAMPs)和内源性危险信号相关分子模式(DAMPs)的识别,触发髓样分化因子88(MyD88)依赖和非依赖途径,激活NF-KB信号转导通路,引起细胞因子和炎性介质的分泌,启动固有免疫应答,在骨关节炎的进程中发挥着重要的作用.研究TLR家族分子及其介导的NF-κB信号转导通路及其在OA中的作用,对进一步阐明OA发生发展机制、提供更有效的预防及治疗方案提供理论依据.     

肠易激综合征患者结肠黏膜Toll样受体4表达及信号通路的研究

目的 研究Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白(MD)-2与核因子κB在肠易激综合征(IBS)患者结肠黏膜的表达,了解TLR4在IBS发病机制中的作用及其信号传导通路.方法 采用免疫组化方法检测30例IBS腹泻型患者(IBS组)及12名健康志愿者(健康对照组)结肠黏膜TLR4、MD-2和核因子κB的表达,半定量分析TLR4平均A值,分析MD-2和核因子κB的刚性表达率.结果 IBS患者较健康对照者结肠黏膜TLR4 A值高(0.40±0.10 vs 0.30±0.05,P=0.001).正常肠上皮细胞(IEC)MD-2无表达,炎症部位MD-2低表达;IBS组肠上皮固有层MD-2阳性细胞数较健康对照组多(26/30 vs 7/12).IBS组核因子κB表达阳性率及强度均高于健康对照组(A值0.31±0.04vs 0.25±0.04,P=0.003).结论 IBS患者的肠道黏膜存在炎症因子核因子κB信号传导通路的活化,炎症在IBS的致病机制中发挥重要的作用;TLR4在IBS发病中可能起一定作用;MD-2在IEC低表达或无表达,可能参与肠黏膜对肠道菌群的耐受.     

Toll样受体7和NF-κB在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨Toll样受体7(TLR7)和NF-κB在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测20例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中TLR7和NF-κB mRNA的表达;采用免疫组织化学方法检测90例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中TLR7和NF-κB蛋白的表达。结果 (1)食管鳞癌组织中TLR7和NF-κB mRNA的表达量为(0.72±0.59)、(0.69±0.32),显著高于癌旁正常组织的(0.45±0.36)、(0.47±0.16),其表达差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)食管鳞癌组织中TLR7和NF-κB蛋白的阳性表达率为77.6%(68/90)、75.4%(67/90),明显高于癌旁正常组织的18.9%(17/90)、33.3%(30/90),其表达差异均有统计学意义(P<0.05);TLR7蛋白表达与肿瘤的分化程度和肿瘤浸润深度密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05);NF-κB蛋白(p65)表达与肿瘤的分化程度和淋巴结转移密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)食管癌组织中TLR7和NF-κB蛋白的表达呈正相关(r=0.259,P=0.014)。结论 TLR7可能通过上调NF-κB mRNA和蛋白的表达,促进食管鳞癌的发生与发展。     

Mu受体在小鼠树突状细胞中的诱导表达

目的研究Mu受体在小鼠树突状细胞中的诱导表达。方法取7～8周龄的C57BL/6J雌鼠骨髓细胞培养,培养7d后,用CD11c＋磁珠,采用磁性分选的方法纯化树突状细胞。用免疫荧光染色PCR检测Mu受体及其基因在树突状细胞中的表达。并用流式细胞仪对树突状细胞的表型进行分析。结果Mu受体在激活的树突状细胞上有明显（P〈0.05）表达。不同Toll样受体的配体诱导不同程度的Mu受体表达。结论活化的树突状细胞可诱导表达Mu受体。     

Toll样受体在辐射防护中的作用

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是近年来发现的在宿主抗病原微生物免疫应答中发挥重要作用的受体分子,它在天然免疫中可识别病原微生物相关分子模式,激活先天性免疫应答。本文阐述了部分Toll样受体(TLR4、TLR5、TLR9)在辐射防护中的作用及其相关机制,为进一步研究Toll样受体在辐射防护中的作用提供理论依据。     

Toll样受体在树突状细胞的表达及其功能研究进展

树突状细胞(dendritic cells,DCs)是体内功能最强的抗原提呈细胞,它通过Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)识别病原相关模式分子,在固有免疫应答和适应性免疫应答中起桥梁和纽带作用,并调控免疫应答的强度和质量.文中就近年来TLRs在DCs的表达和功能研究进展作一综述.     

Toll样受体与心血管疾病相关研究进展

天然免疫系统被认为是抵御外来病原体入侵的第一道防线。然而，近年越来越多的研究认为，组织坏死与损伤等非病原因素也可激活天然免疫。因此，引起天然免疫系统反应的危险信号既可以是外源性的病原体也可以是内源性的自身因素。     

尖锐湿疣患者外周血CD14^＋单核细胞Toll样受体的表达

目的探讨CD14+单核细胞Toll样受体(TLRs)的表达在尖锐湿疣发病机制中的作用. 方法采用双色免疫荧光染色流式细胞术检测了34例尖锐湿疣患者外周血CD14+单核细胞表面TLR1、TLR2及TLR4的表达. 结果尖锐湿疣患者外周血CD14+单核细胞TLR4表达水平为(4.8±1.7)%,明显高于对照组的(2.6±1.0)%(P＜0.001);CD14+单核细胞TLR1的表达水平为(11.8±3.8)%,明显低于对照组的(16.4±5.1)%(P＜0.001);TLR2为(90.8±6.6)%,与对照组的(90.4±6.7)%相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论单核细胞表面的TLR4在对病毒识别、增强特异性的信号传导、启动抗病毒的固有免疫反应中起着重要作用.     

TRAIL及其受体在人树突状细胞分化过程中的表达及其调控

目的：检测人单核细胞（monocyte）和CD34^ 干细胞来源的树突状细胞（DC）--MoDC和CD34DC,在分化发育不同阶段表达TRAIL及TRAIL受体（TRAIL-Rs）的情况和外源性因子LPS或IFN-β刺激未成熟DC后TRAIL-Rs的表达变化。方法：采用RT-PCR和FACS两种方法检测人DC表达TRAIL和TRAIL-Rs的水平。结果：人CD34^ 干细胞在向CD34DC分化过程中,表达TRAIL和TRAIL-Rs的先后顺序为DCR1和DCR2( 0d),DR4和DR5( 5d),TRAIL( 8d)。成熟DC表达中度水平的TRAIL、DR4、DR5、DCR2,不表达DCR1。除了DCR1外,MoDC和未经诱导的单核细胞表达TRAIL及其4个膜受体的水平基本一致,DCR1在诱导过程中逐渐降低。未成熟的MoDC在LPS的刺激下,表达DR5和DR4的水平增高,在IFN-β刺激下表达DR5的水平增高。结论：TRAIL和TRAIL-Rs可能参与DC分化或其功能的发挥。LPS或IFN-β能够增加DC对TRAIL诱导凋亡的敏感性,表明它们参与机体的免疫调控。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中树突状细胞的变化

目的 了解慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺组织中的DCsmRNA表达变化.方法 通过烟熏＋脂多糖（LPS）方法建立COPD大鼠模型.HE染色观察气道及肺组织病理学的改变,同时用荧光定量RT-PCR检测CD86mRNA及OX-62mRNA在肺组织中的表达变化.结果 COPD模型组大鼠肺组织HE染色符合慢性支气管炎及肺气肿的病理改变.与正常对照组相比,COPD模型组大鼠CD86mRNA及OX-62mRNA表达均增加（P＜0.01）.结论 COPD模型组大鼠第28天病理表现符合人类COPD的特征性病理改变,提示COPD大鼠模型建立成功.COPD模型组大鼠肺组织中CD86mRNA及OX-62mRNA的表达较正常对照组明显升高,提示树突状细胞（DCs）在COPD大鼠肺部表达增加,这可能是COPD发生发展的重要因素.     

Toll样受体与自身免疫性疾病关系的研究进展

Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)是一类跨膜受体,主要表达于抗原提呈细胞及一些上皮细胞,通过识别特异性配体来激活免疫反应。除外源性配体外,TLRs还可识别一些内源性分子,信号的过度活化则可导致自身免疫性疾病。本文综述了TLRs的种类及配体、相应的信号通路及功能调节,重点介绍了TLRs在一些自身免疫性疾病中的研究现状,最后探讨了TLRs在自身免疫性疾病治疗中的作用。     

中性粒细胞诱导适应性免疫应答过程中树突状细胞成熟活化

目的 探讨T辅助（Th）1细胞免疫应答过程中,中性粒细胞（PMN）对树突状细胞（DC）的调节作用。方法 将脂多糖（LPS）刺激的中性粒细胞（LPS-PMN）和未成熟树突状细胞（imDC）共培养,流式细胞术检测DC表面CD40和CD86,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白细胞介素12（IL-12）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）。将与LPS—PMN共培养后DC（PMN-DC）提纯,与FITC标记的卵清蛋白（FITC-OVA）培养,检测其吞噬功能。将PMN-DC与D011．10T细胞和OVA17肽共培养,计活细胞数,胞内染色测干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素4（IL-4）。结果 LPS-PMN可刺激imDC CD40和CD86上调并分泌IL-12、肿瘤坏死因子（TNF）-α,且这种能力能被抗TNF-α单抗所抑制。与imDC对照,PMN—DC吞噬功能下降,能显著刺激D011．10T细胞增殖,分泌高水平IFN-γ、少量IL-4。结论 LPS-PMN具有促使imDC成熟活化,刺激其分泌细胞因子,发挥其在Th1免疫应答中抗原呈递,促进Th1分化的作用。     

细菌脂多糖作用下角膜上皮细胞Toll样受体2、4动态变化研究

目的:观察角膜上皮细胞在细菌脂多糖作用后不同时间Toll样受体(TLR)2、4表达的动态变化,初步明确TLR在角膜细菌感染和保持免疫稳态中的作用。方法:培养永生化人角膜上皮细胞系,分别用10ng/ml和1μg/ml的细菌脂多糖(LPS)刺激,作用2h、4h、8h后检测TLR2、4的表达,4h、8h、12h后检测细胞分泌IL-6能力。结果:不同浓度LPS刺激后,细胞TLR2、4的mRNA表达水平在不同时点均明显增高,但随着刺激时间延长,细胞表面蛋白表达和IL-6的分泌水平则呈现先升后降的趋势。结论:人角膜上皮细胞(HCE)能够表达功能性的TLR2、4,并且在接受刺激后,TLR蛋白表达和炎症因子分泌具有负反馈抑制。     

Rapamycin Modulates the Maturation of Rat Bone Marrow-derived Dendritic Cells

The purpose of the study was to observe the effect of rapamycin （RAPA） on the differentiation and maturation of rat bone marrow-derived dendritic cells （BMDCs） in vitro. BMDCs from Wistar rats were cultured with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor plus interleukin-4 in the presence or absence of RAPA （20 ng/mL）, and stimulated with lipopolysaccharide （LPS） for 24 h before cells and supernatants were collected. Surface phenotype of BMDCs was flow-cytometrically detected to determine the expression of maturation markers, MHC class Ⅱ and CD86. Supernatants were analyzed for the production of IL-12 and IFN-γ cytokines by using ELISA. BMDCs were co-cultured with T cells from Lewis rats and mixed lymphocyte reaction was assessed by MTT method. The morphology of BMDCs stimulated with LPS remained immature after RAPA pretreatment. RAPA significantly decreased the CD86 expression, impaired the IL-12 and IFN-γ production of BMDCs stimulated with LPS, and inhibited the proliferation of allogeneic T cells. In conclusion, RAPA can inhibit the maturation of BMDCs stimulated with LPS in terms of the morphology, surface phenotype, cytokine production, and ability of BMDCs to stimulate the proliferation of allogeneic T cells in vitro.     

阻断乳腺癌细胞PD-L1减弱对共培养树突状细胞成熟的抑制作用

目的探讨表达PD-L1的乳腺癌细胞是否通过激活树突状细胞的PD-L1/PD-1信号通路抑制树突状细胞成熟。方法人单 核细胞用GM-CSF和IL-4诱导为不成熟树状突细胞,再用TNF-α诱导为成熟树状突细胞;表达PD-L1的乳腺癌细胞系MDAMB- 231与树状突细胞接触共培养;PD-L1阻断抗体处理共培的的乳腺癌细胞和树状突细胞;重组人PD-L1蛋白处理TNF-α诱 导的树突状细胞;流式细胞仪检测乳腺癌细胞膜PD-L1的表达和树突状细胞的成熟分化标志HLA-DR和CD83。结果乳腺癌 细胞MDA-MB-231细胞系中,细胞膜表面PD-L1阳性细胞高达（99.7±0.15）%;HLA-DR和CD83阳性细胞在成熟树状突细胞对 照组分别为（88.8±6.96）%和（18.36±3.07）%,在MDA-MB-231共培养实验组树状突细胞群分别降至（42.76±10.52）%和（9.93± 2.74）%,两组比较差异有统计学意义（P<0.01,P<0.05）;HLA-DR和CD83 阳性细胞在PD-L1 抗体同型对照组分别为（45.17± 10.19）%和（10.15±2.54）%,在PD-L1抗体处理组分别升至（63.46±1.72）%和（16.46±2.58）%,两组相比差异均有统计学意义（P< 0.05）;和成熟树状突细胞对照组相比,人重组PD-L1蛋白处理组HLA-DR和CD83阳性细胞率较低,组间统计学差异有统计学 意义（P<0.05）。结论PD-L1抗体对三阴性乳腺癌患者的治疗的效果,可能部分基于抗体阻断乳腺癌细胞表面的PD-L1,从而 减弱其对肿瘤微环境中的树突状细胞成熟的抑制作用。