直接法McAb-Dot-ELISA检测日本血吸虫感染耕牛血清循环抗原的研究

将抗日本血吸虫单克隆抗体标记辣根过氧化物酶,进行直接法单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(McAb-Dot-ELISA),检测日本血吸虫感染耕牛的血清循环抗原。结果,该方法对实验感染耕牛的阳性检出率为100％(32/32);对安徽、江西和湖南3省血吸虫病流行区自然感染耕牛(粪孵阳性)的阳性检出率分别为93.93％(418/445),88.50％(100/113)和81.71％(143/175);对健康耕牛的阴性符合率为98.51％(66/77),对16份感染锥虫和8份实验感染肝片吸虫的耕牛血清均未见交叉反应。提示,该方法具有操作简便、快速等优点,可作为一种新的耕牛血吸虫病免疫诊断方法在疫区基层推广应用。     

McAb-RIHA检测日本血吸虫循环抗原

目的观察单克隆抗体反向间接红细胞凝集试验(McAb-RIHA)检测血吸虫循环抗原的敏感性和特异性。方法采用McAb-RIHA双盲法测定正常人与各种类型血吸虫病人血清,同时进行交叉反应与重复性试验。结果McAb-RIHA检测正常人血清,假阳性率为2.17%;对急性、慢性及晚期血吸虫病人阳性率分别为99.39%、84.00%、28.57%,与粪检阳性病人阳性符合率为84.00%。急性血吸虫病人体内循环抗原含量高于慢性血吸虫病人及晚期血吸虫病人,反应滴度的平均几何均数为慢性血吸虫病人的13.3倍,晚期血吸虫病人的36.4倍;而不同感染度的慢性血吸虫病人体内循环抗原的滴度与粪虫卵数无明显关系。结论McAb-RIHA检测日本血吸虫循环抗原有较好的敏感性和特异性     

McAb-RIHA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的效果

本文报告了用抗日本血吸虫肠相关趋阴极抗原单克隆抗体致敏血球建立反向间接血凝试验,对66例急性血吸虫病,123例慢性血吸虫病,57例肝吸虫病,54例钩虫病和82例非疫区健康人血清的检测效果。结果显示,该方法检测急、慢性血吸虫病血清的敏感性分别达到98.5％和81.3％,与肝吸虫病血清交叉反应率为10.5％,与钩虫病血清未见交叉反应,与非疫区健康人血清仅有1.2％的假阳性反应。与平行对照的McAb-Dot-ELISA反应结果相比,两者在检测敏感性和特异性上差别均无显著意义,具有较高符合率,表明McAb-RIHA试验是一种诊断效率和可靠性较高的检测日本血吸虫病血清循环抗原的方法,尤其适宜基层和现场应用。     

单克隆抗体74D_(11)、SJA_(111)检测慢性日本血吸虫病循环抗原的研究

本研究用双抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测慢性日本血吸虫病人血清循环抗原，观察血吸虫感染家兔血清循环抗原的动态变化。该方法采用兔抗ＡＷＡ－ＩｇＧ作包被抗体，抗日本血吸虫成虫和虫卵单抗ＳＪＡ１１１和７４Ｄ１１组合作Ⅱ抗，１７２例经粪孵毛蚴确诊的血吸虫病人中，１３６例循环抗原阳性（７９．１％），其中轻度（毛蚴数＜５只／２０克粪）、中度（６－２０）、重度（大于２０）感染者循环抗原阳性率分别为７３．４％、８７．７％、９２．８％，检测６５例健康献血员，２０例肺吸虫病人，１２例华支睾吸虫病人，１０倒包虫病人，交叉反应率依次为１．５％、５％、０％、０％，４２例经吡喹酮治疗后的血吸虫病人用该方法复查，治后３月和６月随访粪孵毛蚴阴转者中，循环抗原阴转率分别为７８．０％和９２．１％，考核疗效明显优于检测循环抗体。用单抗ＳＪＡ１１１检测感染家兔循环抗原动态变化，循环抗原于感染后３—４周可检出，７周达高峰，以后逐渐消退，而循环抗体（ＩｇＧ）推迟１周出现，８－９周达高峰。实验结果表明，血吸虫病血清ＣＡｇ阳性率与感染度有关，可在早期检出，检测方法具有较高敏感性和特异性，可用于早期诊断和疗效考核。     

单克隆抗体74D11,SJA111检测慢性日本血吸虫病循环抗原的研究

本研究用双抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测慢性日本血吸虫病人血清循环抗原，观察血吸虫感染家兔血清循环抗原的动态变化。该方法采用兔抗ＡＷＡ－ＩｇＧ作包被抗体，抗日本血吸虫成虫和血卵单抗ＳＪＡ１１１和７４Ｄ１１组合作Ⅱ抗，１７２例经粪孵毛蚴确诊的血吸虫病人中，１３６例循环抗原阳性（７９．１％），其中轻度（毛蚴数〈５只／２０克粪）、中度（－２０）、重度（大于２０）感染者循环抗原阳性率分别为７３．４％、８７．７％、     

建立BSAS—ELISA检测日本血吸虫循环抗原的研究

目的建立BSAS－ELISA技术以提高检测日本血吸虫循环抗原的敏感性。方法在夹心ELISA的基础上，引入高度放大的生物素一链霉亲和素系统（BSAS），建立BSAS－ELISA基本检测技术及其改良的二步法。结果应用单抗3D10以该技术的基本法与二步法检测感染兔血清，检出率可达90．00％；用单抗MG2以二步法经盲法检测，慢性血吸虫病患者的检出率达86．00％，3D10对正常人的假阳性率为4．76％，MGZ为33．33％。结论BSAS－ELISA检测日本血吸虫循环抗原可提高其敏感性。本实验所用二种单抗的特异性不甚理想，进一步提高敏感性及改进特异性的关键在于筛选出更理想的单抗。     

基于A1E3及BIC4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原ELISA法的建立及现场初步应用

目的建立基于AlE3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）,并对其应用情况进行初步评价。方法采用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹试验（Westernblot-ring）对A1E3及B1C4单克隆抗体进行特性分析,用ELISA法测定B1C4、A1E3单克隆抗体效价。采用棋盘格滴定法确定双单抗夹心ELISA法检测循环抗原的最佳工作浓度。在最佳条件下,分别检测20份急性血吸虫病病人血清、46份慢性m吸虫病病人血清及20份止常人血清,评价其检测敏感性和特异性。用建立的双单抗夹心ELISA法和市售检测血吸虫循环抗原的ELISA试剂盒检测湖北省江陵县IHA阳性血吸虫病病人血清72份,以评估双单抗夹心ELlSA法的检测效能。结果经SDS-PAGE和Westernblotting分析,纯化后的A1E3及B1C4在相对分子质量（M,）88000和52000处各有一条清晰重链,在吖．20000处有一条相同的轻链,且A1E3及B1c4可与可溶性虫卯抗原（SEA）及急性血口发虫病病人血清发牛特异性反应。BlC4单抗效价可达1：10^5,A1E3单抗效价可达1：30000。用B1C4、A1E3双单抗夹心ELISA法检测急、慢性血吸虫病病人粗清阳性率分别为100％和86．9％,检测20份正常人血清特异性为100％。双单抗夹心ELISA法及市售EIJJsA试剂盒检测日本血吸虫循环抗原阳性率分别为45．8％及43．1％。结论成功建立了基于A1E3及B1C4双单抗夹心ELISA法,该法检测日本m吸虫循环抗原具有较高的敏感性及特异性。     

血吸虫循环抗原检测在血吸虫病普查中的应用

目的了解血吸虫循环抗原（ScAg）检测在普查中的应用效果，发挥ScAg检测在血吸虫病传播阻断中的作用。方法在现场单盲试验普查条件下测试血吸虫病血清库质控血清，应用ScAg在不同程度感染的血吸虫病流行区批量检测。对ScAg阳性者作9送9检粪孵追踪观察。结果ScAg检测EPG≤8的血吸虫病患者血清阳性率为95．45％，EPG≥16的血吸虫病患者血清阳性为100．00％，对正常人和华支睾吸虫病患者血清的特异性为100．00％。对高、中、低流行区普查ScAg的阳性率分别为7．27％、3．06％、2．70％。对ScAg阳性的病例粪孵9送9检累计阳性率为34．29％，粪检累计总阳性数中，第1次只检出16．67％，连续第3次的累计阳性率仅为50．00％。连续化疗地区ScAg检测阳性的粪孵阳性率为12．50％，间歇性选择化疗地区ScAg阳性者的粪孵阳性率占75．00％以上。结论9送9检粪孵累计阳性结果显示，检出率随粪检次数增加而升高，粪检漏检多、工作量大、不能正确反映当地疫情。ScAg检测是一种敏感性高，特异性好的简便快速方法，普查结果能反映不同感染度流行地区的实际状况，有利于制定防治策略，了解防治后成效。     

快速诊断家畜日本血吸虫病免疫层析试纸条的研制与初步应用

目的开发研制敏感、简便、快速、经济的日本血吸虫病诊断试纸条。方法利用双抗原夹心法,以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)为检测抗原,以胶体金标记SEA为探针,采用自行设计的免疫层析试纸条装置,检测家畜血清中血吸虫特异性IgG抗体,并用ELISA方法进行比较。结果用该试纸条检测107份人工感染血吸虫病羊血清,其检出率为91.6%;检测80份健康绵羊血清,阴性符合率为87.5%;检测20份粪检阳性水牛血清及15份粪检阴性血清,其阳性符合率为100.0%,阴性符合率为86.7%;检测24份肝片形吸虫病羊血清,交叉反应率为12.5%,与锥虫病牛血清未见交叉反应;与ELISA检测结果比较,两种方法具有良好的一致性。结论应用试纸条诊断家畜日本血吸虫病敏感性高、特异性强,且操作简便、快速,不需特殊仪器设备,适合于基层使用。     

基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原ELISA法的建立及现场初步应用

目的 目的 建立基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的夹心酶联免疫吸附试验 （ELISA）, 并对其 应用情况进行初步评价。 方法 方法 采用十二烷基磺酸钠?聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS?PAGE） 和免疫印迹试验 （Western blot? ting） 对A1E3及B1C4单克隆抗体进行特性分析, 用ELISA 法测定B1C4、 A1E3单克隆抗体效价。采用棋盘格滴定法确定双 单抗夹心ELISA法检测循环抗原的最佳工作浓度。在最佳条件下, 分别检测20份急性血吸虫病病人血清、 46份慢性血吸 虫病病人血清及20份正常人血清, 评价其检测敏感性和特异性。用建立的双单抗夹心ELISA法和市售检测血吸虫循环抗 原的ELISA试剂盒检测湖北省江陵县IHA阳性血吸虫病病人血清72份, 以评估双单抗夹心ELISA法的检测效能。 结果 结果 经SDS?PAGE和Western blotting分析, 纯化后的A1E3及B1C4在相对分子质量 （Mr ） 88 000和52 000处各有一条清晰重链, 在Mr 20 000处有一条相同的轻链, 且A1E3及B1C4可与可溶性虫卵抗原 （SEA） 及急性血吸虫病病人血清发生特异性反 应。B1C4单抗效价可达1∶105 , A1E3单抗效价可达1∶30 000。用B1C4、 A1E3双单抗夹心ELISA法检测急、 慢性血吸虫病 病人血清阳性率分别为100%和86.9%, 检测20份正常人血清特异性为100%。双单抗夹心ELISA法及市售ELISA试剂盒 检测日本血吸虫循环抗原阳性率分别为45.8%及43.1%。 结论 结论 成功建立了基于A1E3及B1C4双单抗夹心ELISA法, 该 法检测日本血吸虫循环抗原具有较高的敏感性及特异性。     

应用McAb法检测包虫病人尿液抗原

用ＭｃＡｂ－Ｓａｎｄｗｉｃｈ－ＥＬＩＳＥ（夹心法）及ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ（点免疫法）同步检测了４６例包虫病人及４２例正常人的不同抗原样品,结果表明：ＭｃＡｂ夹心法对患血清,尿液抗原阳性检出率分别为：８０．４３％、７８．２６％,明显高于对照组（Ｐ〈０．０５）,且血清与尿液抗原检测结果无差别（Ｐ〉０．０５）,具有相关性（Ｐ〈０．０５）;点免疫法抗原检出率分别为７３．９１％、５８．７９％。两法     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅱ

制备血吸虫病单克隆抗体诊断试剂盒,将其用于Dot—ELISA,分别检测江苏、安徽流行区急性血吸虫病患者及四川、江西、安徽流行区慢性血吸虫病患者血清中循环抗原。结果不同流行区Dot—ELISA反应的平均“+”值、阳性率和抗原滴度的几何均数不同,循环抗原水平可以反映流行区的疫情。另将Dot—ELISA、ELISA检测四川慢性血吸虫病人治前及治后半年、1年的血清循环抗原及抗体,结果循环抗原在病人治疗后很快下降,治后1年77.8％(35/45)病人的循环抗原转为阴性。循环抗体在病人治疗后也逐渐下降,但速度甚为缓慢。治疗后1年,仅21.7％(10/46)病人转为阴性。上述结果表明,循环抗原能更直接、更真实地反映防治效果。     

Dot－ELISA检测抗原与IHA、COPT检测抗体诊断血吸虫病的比较

本文比较了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测循环抗原，间接血凝试验（ＩＨＡ）、环卵沉淀试验（ＣＯＰＴ）检测抗体诊断血吸虫病的效果。１２例急性血吸虫病患者血清３种方法检测均为阳性；２７７例慢性血吸虫病患者血清３种方法检测阳性率分别为７９．４２％、６４．６２％和６３．１８％。１４例华支睾吸虫病患者血清和８９例健康人血清Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测均为阴性。１０例急性血吸虫病患者，在离开流行区经吡喹酮治疗后３７周时粪检全部转阴，检测血清循环抗原４例转阴，其余６例滴度大幅度下降；ＩＨＡ检测３例转阴，其余７例几何平均倒数滴度（ＧＭＲＴ）由４７．５７降至９．３５；ＣＯＰＴ检测平均环沉率由２１．５％降至４．１２％。结果表明Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测血吸虫循环抗原具有较好的敏感性和特异性。这３种方法在血吸虫病诊断及疗效考核中均有一定价值。     

微量血清血吸虫抗体检测层析卡的研制与评价

目的 研制血清用量少的血吸虫抗体检测层析卡。方法 采用Sephacryl S?300HR柱层析分离血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）,保留具有特异性反应活性的抗原蛋白组分。并研究标记浓度及稀释剂配方、样品缓冲液成分,组成最佳反应体系,建立血清用量5 μl的血吸虫抗体检测层析卡。结果 血吸虫抗体检测层析卡对血吸虫虫卵阳性病人的敏感性为93.7%,EPG <24的低感染度检出率达91.3%,健康人群的特异性为97.1%,并殖吸虫病人的交叉反应率为5.6 %,Youden指数为0.91。与ELISA平行检测流动人口的总符合率为96.1％,Kappa值为0.81。结论 血吸虫抗体检测层析卡具有血清用量少、敏感性高、特异性强、 交叉反应低、应用范围广等特点,具有现场实用价值。     

Dot-IGSS检测日本血吸虫病人血清抗体的研究

运用斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)检测了日本血吸虫病人血清抗体,并与斑点酶联免疫试验(Dot-ELISA)作了比较。检测了急性血吸虫病人血清38份,两法结果全部阳性;慢性血吸虫病人血清70份,Dot-IGSS阳性69份(98.6％),Dot-ELISA阳性65份(92.9％);治疗后血吸虫病人血清40份,Dot-IGSS阳性15份(37.5％),Dot-ELlSA阳性11份(27.5％)。用两法检测华枝睾吸虫病人血清20份,均有1份为阳性;检测正常人血清40份,均未出现阳性反应。将8份阳性血清作倍比稀释(1:20～1:61440)后分别用该两法检测,Dot-IGSS的敏感性明显高于Dot-ELISA(P<0.05)。对120例过去无血吸虫病史、接触疫水且皮试阳性者血清检测结果表明,Dot-IGSS的阳性检出率明显高于Dot-ELISA、COPT及循环抗原测定法(P<0.01)。     

日本血吸虫病患者尿液中循环抗原和抗体联合检测的诊断价值

[目的 ]探讨尿液中血吸虫循环抗原和抗体检测对日本血吸虫病的诊断价值。 [方法 ]用单克隆抗体夹心 ELISA法检测日本血吸虫病患者尿液中循环抗原 ,间接ELISA检测尿液中特异性抗体。 [结果 ]10例急性血吸虫病和 6 1例慢性血吸虫病患者尿液中循环抗原的阳性率分别为 6 0 %和 40 % ,特异性抗体的阳性率分别为 80 %和 6 1 7%。两者联合检测的总阳性率分别为 10 0 %和 71 7%。 10 0例健康对照者尿液中仅 3%出现假阳性。 [结论 ]检测尿液中日本血吸虫循环抗原和特异性抗体简便、实用 ,为一种非损伤性的血吸虫病诊断方法。     

日本血吸虫病患者体内自然抗独特型抗体的初步研究

成用杂交瘤技术所制备的鼠抗日本血吸虫可溶性抗原(SEA)单克隆抗体5B5H腹水经饱和硫酸铵提纯后制成亲和层析柱,血吸虫病人血清过此柱后获得抗Id抗体提取物。经McAb-ELISA测试,提取物与5B5H单抗特异性结合,与另一株抗SEA单抗W_(29)及抗成虫单抗W_(46)均不结合,补体结合试验表明此提取物不含有免疫复合物。SEA可显著竞争抑制Id(5B5H)-抗Id抗体的结合,提示抗Id抗体所针对的5B5H单抗的Id位于抗原结合部位或其邻近。用5B5H-ELISA检测两个不同地区血吸虫病患者的抗Id抗体,阳性率分别为35.1％和60％,与姜片虫病人血清(0/15)、华支睾吸虫病人血清(0/15)无交叉反应,在并殖吸虫病人血清中出现一例阳性(1/20),与健康人也无假阳性反应(0/50)。     

两种血吸虫病免疫诊断试剂的比较研究

目的评价日本血吸虫抗体磁分离酶联免疫试剂盒(magnetic particle antibody immunoassay,MPAIA)与血吸虫循环抗原酶联免疫吸附试剂盒(ELISA)在血吸虫病免疫诊断中的应用效果.方法采取随机单盲法,分别用MPAIA法和ELISA法检测经病原学确诊的急性和慢性日本血吸虫病、并殖吸虫病、钩虫病、旋毛虫病、囊尾蚴病、华支睾吸虫病、乙肝患者血清及非疫区健康人血清,评价这两种试剂盒的灵敏度、特异度、Youden指数、一致百分率、阳性似然比和阴性似然比等指标. 结果MPAIA法和ELISA法检测确诊急性日本血吸虫病患者血清阳性符合率分别为100%和89.13%,MPAIA与ELISA法的差别无统计学意义(χ2=1.125,P>0.05),两者检出结果呈高度一致(kappa=0.891);检测确诊慢性日本血吸虫病患者血清阳性符合率分别为100%和17.65%,MPAIA法显著高于ELISA法(χ2=36.36,P<0.05),两者结果一致性低(kappa=0.194).检测非疫区健康人特异度分别为100%和98%;MPAIA法除与并殖吸虫交叉反应率为8.33%外,与其他寄生蠕虫病无交叉反应发生,ELISA法与其他寄生蠕虫无交叉反应现象,根据金标准确定的血吸虫病阳性检测结果和非疫区健康人检测结果,上述两种检测试剂的Youden指数为1和0.5436,一致百分率为100%和76.19%,阳性似然比为∞和28.18,阴性似然比为0和0.44. 结论MPAIA与ELISA法均可用于现场筛查,但MPAIA在检测慢性血吸虫方面检测性能优于ELISA.     

单克隆抗体夹心ABC-ELISA检测包虫病人循环抗原

应用生物素标记单克隆抗体进行夹心ABC-ELISA检测包虫病人血清循环抗原(HcAg),共检测包虫病人血清103份,62价呈阳性(60.19％);检测囊虫病人血清22份,其它寄生虫病血清54份,正常人血清101份,均未出现假阳性反应。常规ELISA血清抗体阴性的10例包虫病人HcAg 5例呈阳性。HcAg的检测对血清抗体阴性的包虫病人具有辅助诊断意义。