羟基喜树碱包衣纳米脂质体的处方及制备工艺研究

 目的研究羟基喜树碱包衣纳米脂质体的处方筛选及制备工艺。方法采用薄膜分散法制备羟基喜树碱脂质体;用柱色谱法分离游离药物;用紫外分光光度法测定包封率;用正交实验优选处方;用氯化壳聚糖包被脂质体,经高压乳匀得到纳米脂质体(<100nm)并测定Zeta电位、粒径大小及分布;用不同冻干保护剂进行冷冻干燥,以筛选合适的保护剂。结果最佳处方制备的药物平均包封率为(68.8±0.9)%(n=3);包衣纳米脂质体的Zeta电位为55.1mV,平均粒径为90.9nm,粒径分布为20～120nm;以15%海藻糖做冻干保护剂的脂质体冻干前后粒径变化最小。结论本试验制备的羟基喜树碱包衣纳米脂质体具有包封率高,稳定性好,表面带正电荷等特点,为其进一步研究奠定了基础。     

pH敏感前体阳离子脂质体的制备及瘤内分布研究

 目的 以羟喜树碱作为模型药物研究pH敏感前体阳离子脂质体用于包载抗癌药物的制备工艺并考察其pH敏感性及荷瘤鼠体内药动学特性。方法 采用薄膜分散法制备羟喜树碱阳离子脂质体;用羧甲基壳聚糖物理修饰阳离子脂质体;分离游离药物后测定包封率;用激光粒度分析仪测定Zeta电位、粒径大小;采用鸡红细胞溶血实验分析其pH敏感性并考察不同时刻药物在荷瘤小鼠血浆及瘤内浓度。结果 平均包封率为(78.5±0.9)％(n=3);Zeta电位为-31.3 mV,平均粒径为96 nm。溶血实验显示pH敏感前体阳离子脂质体与红细胞膜融合作用有明显的pH值敏感性,荷瘤小鼠体内实验显示pH敏感前体阳离子脂质体瘤内分布较高。结论 本方法制备的pH敏感前体阳离子脂质体作用机制独特,瘤内浓度高,有望成为靶向肿瘤药物的传递系统。
     

羟基喜树碱包衣纳米脂质体的制备及在小鼠体内组织分布的研究

 目的研究羟基喜树碱(HCPT)氯化壳聚糖(CS-HCl)包衣纳米脂质体(nanoliposomes)的制备方法,并考察其在小鼠体内的组织分布。方法采用薄膜分散法制备HCPT脂质体,用CS-HCl包衣后乳匀,得到CS-HCl包衣的HCPT纳米脂质体(平均粒径<100 nm)。除去游离HCPT后,测定其包封率(EE%)、平均粒径、粒径分布及Zeta电位。以5 mg·kg^-1羟基喜树碱的剂量小鼠尾静脉注射HCPT注射液、普通HCPT脂质体、HCPT纳米脂质体、包衣HCPT纳米脂质体,测定血浆及肝、脾组织中的血药浓度。结果包衣HCPT纳米脂质体的EE%为(61.2±1.20)%,平均粒径为(91.9±8.78)nm,Zeta电位为(55.1±1.04)mV(n=3)。包衣HCPT纳米脂质体在血液中AUC_0～48为HCPT纳米脂质体的1.3倍,为普通HCPT脂质体的4.7倍,为注射液的25.4倍。AUC_plasma/AUC_RES表明,包衣HCPT纳米脂质体为HCPT纳米脂质体的1.4倍,为普通脂质体的8.7倍,为注射液的3.4倍。结论该包衣HCPT纳米脂质体具有大小均匀,带有较大正电荷,能显著延长药物在血液循环中的时间,减少RES对脂质体的吞噬作用等特点。     

肺靶向羟基喜树碱脂质体的制备及体外释药性质研究

 目的研究肺靶向羟基喜树碱阳离子脂质体的制备方法并考察其体外释药性质。方法采用薄膜-冻融法制备羟基喜树碱脂质体;用D-甘露糖修饰脂质体并添加适量十八胺调节脂质体表面电荷;用葡聚糖凝胶柱-高效液相色谱法测定包封率;用正交实验优选处方;用透析法考察药物体外释放性质。结果制得的脂质体平均粒径为2.286μm,表面电荷为+21.5 mV,包封率大于65%,稳定性好。药物体外释药符合Higuchi方程。结论采用薄膜-冻融法,用D-甘露糖修饰并添加十八胺可制得具有较高包封率及稳定性的羟基喜树碱脂质体,有助于提高羟基喜树碱的肺靶向性。     

黄芩苷柔性纳米脂质体的制备

目的:制备黄芩苷柔性纳米脂质体。方法:采用薄膜分散法制备柔性纳米脂质体混悬液,以黄芩苷的含量作为工艺研究中包封率的评价指标,以粒径、粒径分散系数,Zeta电位及包封率为考察指标,采用正交试验筛选最佳处方和制备工艺条件,并考察其物理化学性质。结果:最佳处方和制备工艺条件为卵磷脂与胆酸钠的质量比6∶1,卵磷脂与黄芩苷的质量比10∶1,探头超声时间15 min。包封率60.11%,所得的柔性纳米脂质体为类球形实体粒子,平均粒径175 nm,平均Zeta电位-78.9 mV。结论:黄芩苷柔性纳米脂质体处方和制备工艺基本可行。     

聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯修饰多柔比星脂质体的制备和性质

 目的 制备聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(TPGS)修饰的脂质体,并对其理化性质进行考察。方法 采用薄膜超声法制备脂质体,用硫酸铵梯度法制备将多柔比星载入脂质体内,阳离子交换树脂吸附法测定药物包封率,用透析法测定其体外释放,透射电镜观察脂质体形态,激光粒度测定仪测定粒度分布和Zeta电势,并考查脂质体稳定常数Ke、药物泄漏率以及胎牛血清对脂质体粒度的影响。结果 TPGS修饰的脂质体形态规整,药物包封率为（95±2.13）%（n=3）;Zeta电位为-3.06 mV,平均粒径为68.7 nm,多分散指数为0.186;TPGS修饰后能显著提高脂质体的贮藏以及在血清中的稳定性,大大降低药物泄漏率,而体外释放快于普通脂质体。结论 TPGS修饰的多柔比星脂质体具有包封率高、粒径小、稳定性好等优点。     

尼莫地平纳米脂质体冻干粉的质量评价方法

 目的 研究尼莫地平纳米脂质体冻干粉的性质，建立其质量评价方法。方法 考察处方的粒径分布、Zeta电位、溶血性、沉降稳定性，用反透析法测其包封率、脂质体的血浆稳定性，观察其基本形态。结果 尼莫地平纳米脂质体的平均粒径为24.8 nm,多分散系数为0.326，包封率为86.1%，体外稳定性好,人血浆稳定期约为1 h。结论 上述方法适用于尼莫地平纳米脂质体冻干粉的质量评价,可有效地反映其各方面的性质。     

鱼精蛋白凝聚法测定脂质体和纳米脂质体包封率

 目的建立鱼精蛋白凝聚法测定脂质体、纳米脂质体包封率的方法。方法鱼精蛋白凝聚法分离脂质体、纳米脂质体,以高效液相色谱法为分析手段,测定脂质体药物包封率,并与葡聚糖凝胶柱色谱法比较。考察脂质体粒径、脂质体Zeta电位、鱼精蛋白用量以及药物不同溶解性、荷电性、分子量大小等因素对鱼精蛋白凝聚法测定脂质体包封率的影响。结果鱼精蛋白凝聚法可以准确测定不同溶解性质药物脂质体的包封率;应用葡聚糖凝胶G-50柱色谱法与鱼精蛋白凝聚法均能很好测定粒径≥220 nm碘海醇脂质体的包封率。脂质体粒径减小,葡聚糖凝胶柱色谱法药物回收率下降;碘海醇脂质体粒径小于200 nm时,葡聚糖凝胶G-50柱色谱法测得药物回收率较鱼精蛋白凝聚法低。葡聚糖凝胶柱色谱法不适合脂溶性药物脂质体的分离且不能准确测定脂溶性药物托氟啶脂质体的药物包封率;鱼精蛋白凝聚法可准确测定粒径在100～500 nm的托氟啶脂质体的药物包封率。脂质体荷电性影响鱼精蛋白凝聚法测定脂质体包封率;调节介质pH值使托氟啶脂质体Zeta电位分别为-44.07,-4.76和14.5 mV,鱼精蛋白凝聚法方法回收率分别为98.1%,95.3%和86.6%。不同荷电性小分子药物不影响鱼精蛋白凝聚法测定脂质体包封率,但大分子药物荷电性有影响;解离的奥沙西罗(荷负电)和pH 2的胰岛素(荷正电)回收率较好,而pH 7的胰岛素(荷负电)的回收率则较低。结论鱼精蛋白凝聚法可以测定不同溶解性质药物脂质体、纳米脂质体的包封率,此法适合小分子药物及正电荷大分子药物脂质体的测定;适于中性或负电荷脂质体的测定。     

TPGS修饰的地榆皂苷I长循环脂质体的制备及质量评价

目的 制备聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯（D-α-tocopherol polyethylene glycol 1000 succinate,TPGS）修饰的地榆皂苷I长循环脂质体,并对其进行质量评价。方法 采用薄膜分散法制备TPGS包衣脂质体,在单因素实验基础上,通过Box-Behnken响应面分析法对处方进行优化,采用超滤离心法测定药物包封率,透射电镜（TEM）观察脂质体微观形态,激光粒度仪测定脂质体的粒径、多分散性和Zeta电位,并对其稳定性和体外释放情况进行考察。结果 所制得的TPGS包衣脂质体微观形态呈球形或类球形双层结构、外观带淡蓝色乳光,粒径为（95.79±0.81）nm,多分散系数（PDI）为0.048±0.007,Zeta电位为（-38.60±0.97）mV,包封率为79.89%,载药量为10.48%。体外释放研究表明,与游离地榆皂苷I溶液相比,TPGS包衣脂质体具有明显的缓释效果。结论 通过优化后的处方和制备工艺,制备了外观均一稳定、包封率较高的TPGS修饰的地榆皂苷I长循环脂质体,可用于进一步的研究。     

β-谷甾醇替代胆固醇制备槲皮素脂质体的可行性研究

目的 探讨用β-谷甾醇替代胆固醇制备槲皮素脂质体的可行性,并筛选最佳制备工艺与处方。方法 以卵磷脂和β-谷甾醇为膜材制备不含胆固醇的槲皮素脂质体;以离心沉淀法测定脂质体的包封率;以包封率和载药量为评定指标,筛选该新型槲皮素脂质体的最佳制备方法;用正交设计优化该脂质体的制备工艺;用粒径、Zeta电位、AFM电镜、体外释放表征该新型槲皮素脂质体。结果 该新型脂质体的最佳制备方法为薄膜分散法,通过正交设计得最佳工艺为槲皮素与卵磷脂的质量比为1∶5,卵磷脂与β-谷甾醇的质量比为6∶1,PBS缓冲溶液pH值为6.0,水化时间为2 h。制备的槲皮素脂质体的包封率为（82.55±1.10）%,载药量为（11.40±1.14）%,粒径为（194.60±4.38）nm,Zeta电位为（?30.45±0.42）mV;AFM电镜验证表明该新型脂质体呈规则球形,粒径均一;新型脂质体体外释放与普通脂质体无差异。结论 用β-谷甾醇替代胆固醇制备槲皮素脂质体方法可行,采用最佳工艺制备的槲皮素脂质体包封率高,形态和粒径均较好,重现性好,可应用于工业化生产。     

大鼠静脉注射羟喜树碱脂质体的胆汁排泄研究

 目的研究羟喜树碱不同制剂经大鼠静脉注射给药后的胆汁排泄特征。方法大鼠分别静脉给予羟喜树碱脂质体和羟喜树碱注射液,24 h内收集胆汁并采用HPLC进行测定。结果大鼠静脉注射羟喜树碱脂质体和羟喜树碱注射液24 h累积胆汁排泄量基本一致,羟喜树碱脂质体组平均排泄11%,羟喜树碱注射液组平均排泄13%。结论脂质体不改变羟喜树碱的胆汁排泄途径。     

羟基喜树碱包衣纳米脂质体在小鼠体内的抗肿瘤活性研究

 目的比较羟基喜树碱(HCPT)氯化壳聚糖包衣纳米脂质体与HCPT注射液、HCPT脂质体、HCPT纳米脂质体在小鼠体内的抗肿瘤活性。方法采用动物移植性肿瘤的瘤重实验法,用小鼠艾氏腹水瘤癌细胞接种于小鼠右侧背部皮下形成实体瘤。以5mg·kg^-1HCPT的剂量给药,考察不同制剂对实体瘤的瘤重抑制率及肿瘤坏死范围。结果HCPT包衣纳米脂质体给药组的瘤重抑制率及肿瘤坏死范围均显著高于其他几种制剂给药组(P<0.05)。结论同HCPT注射液、HCPT脂质体及HCPT纳米脂质体相比,HCPT包衣纳米脂质体的抗肿瘤活性有显著提高。     

羟基喜树碱磁性脂质体的制备及其靶向性特征试验

目的:优选羟基喜树碱(HCPT)磁性脂质体的制备工艺并验证其体内靶向聚集性.方法:以经油酸表面改性的Fe3O4磁性纳米粒作为材料,大豆卵磷脂、胆固醇为原料,利用薄膜分散-超声法制备羟基喜树碱磁性脂质体,以包封率为评价指标,采用正交试验法对羟基喜树碱脂质体的制备工艺进行优选.引入微透析技术,动态、连续地考察磁性脂质体的肿瘤局部聚集性.结果:羟基喜树碱磁性脂质体的最佳制备工艺为药脂比25:1,磷脂-胆固醇80:30,制备温度45 ℃,水化介质pH6.8的磷酸盐缓冲液(PBS).在此条件下,最高包封率66.8％,载药量2.57％.在荷瘤小鼠体内磁靶向定位试验中,HCPT磁性脂质体外加磁场组的肿瘤部位药物浓度较不加磁场组和注射液组高,表明HCPT磁性脂质体在外加磁场引导下具有明显的磁靶向性效果.结论:使用油酸改性的Fe3O4联合应用薄膜分散-超声法制备的HCPT磁性脂质体粒径均一,稳定分散,包封率较高,磁靶向性好.     

脂质体对羟喜树碱内酯环的保护

 目的考察脂质体对羟喜树碱的结构中α-羟基内酯环的保护作用。方法采用HPLC测定模拟生理pH下(pH7.4磷酸盐缓冲液,37℃)羟喜树碱脂质体中羟喜树碱以内酯环结构存在的含量。色谱条件为:色谱柱为C₁₈柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇-水(60:40),检测波长为266 nm。结果在模拟生理pH下24 h受脂质体包裹的羟喜树碱的闭环率仍大于90%。结论说明脂质体对羟喜树碱结构具有较好的保护作用,能有效地保护羟喜树碱的α-羟基内酯环。     

中心组合设计-效应面法优化长春碱亲水基修饰阳离子脂质体的处方

目的采用中心组合设计-效应面法优化长春碱亲水基修饰阳离子脂质体的最佳处方。方法以主动载药-pH梯度法制备亲水基修饰阳离子脂质体,以包封率、Zeta电位为指标,考察长春碱与二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)质量比、DPPC与3β-[N-(N′,N′-二甲基胺乙基)胺基甲酰胺基]胆固醇(DC-Chol)物质的量之比、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG 2000)的质量分数3个因素对考察指标的影响,并对各个因素进行二项式拟合,通过响应面分析选取最佳处方。结果优化出的长春碱亲水基修饰阳离子脂质体的处方为长春碱与DPPC质量比为0.06、DPPC与DC-Chol物质的量之比为1.00、DSPE-PEG 2000的质量分数为7%。结论中心组合设计-效应面法应用简便、预测性好,制备的长春碱亲水基修饰阳离子脂质体符合设计要求。     

反义寡核苷酸/司盘修饰阳离子脂质体复合物的制备和特性

 目的 通过采用司盘系列表面活性剂对阳离子脂质体进行修饰,以提高基因传递效率,寻找高效的基因载体。方法 采用逆相蒸发法制备司盘阳离子脂质体。通过静电作用,得到反义寡核苷酸／阳离子脂质体自组装复合物,并运用电镜、激光 粒度及Zeta电位测定、琼脂糖电泳和荧光光谱等技术手段对司盘阳离子脂质体和自组装复合物进行了物理表征。并在体外 培养细胞系——COS7和RKO进行了摄取实验,对此载体进行生物学评价。结果 体外细胞摄取实验表明,司盘阳离子脂质 体与普通阳离子脂质体相比,可提高细胞对反义寡核苷酸的摄取,司盘40修饰阳离子脂质体效果最为显著。结论 采用表面 活性剂司盘修饰是提高基因传递效率切实可行的方法。表面活性剂司盘修饰阳离子脂质体为颇具发展潜力的非病毒载体。