大鼠肾阳虚证的代谢组学研究

目的 利用代谢组学技术观察糖皮质激素所造的肾阳虚证大鼠模型的内源性代谢物特征.方法 将24只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组和模型给药组各8只;肌注氢化可的松琥珀酸钠造模;造模成功后,给予模型给药组大鼠白附片溶液灌胃,连续14 d;末次给药24 h后取血制备血浆;采用高效液相色谱-质谱联用的代谢组学技术检测内源性代谢物.结果 正常组与模型组相比,溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)和468.4m/z的未知化合物的谱峰峰形改变较为明显.发生改变的代谢物可作为肾阳虚证的生物标志物做进一步研究.结论 从代谢组学分析中找出特异的标志性代谢产物,以利于深入研究中医证候的生物学本质.     

肝肾阳虚型抑郁症大鼠模型的建立与评价

目的:建立肝肾阳虚型抑郁症大鼠模型。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、应激组、利血平和氢化可的松低剂量组、利血平和氢化可的松中剂量组、利血平和氢化可的松高剂量组。观察造模前后大鼠的证候特征及行为学改变。实验第22天采血,测定血中环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)含量。结果:利血平和氢化可的松各剂量组大鼠表现出行为性抑郁,阳虚大鼠数量和气虚大鼠数量较空白组显著增加,c AMP含量、c AMP/c GMP比值降低。结论:利血平联合氢化可的松注射是建立肝肾阳虚型抑郁症动物模型的可行方法。     

制首乌对肾阳虚、肾阴虚证大鼠肝线粒体COX及mPTP开放的影响

目的:探讨制首乌对肾阳虚、肾阴虚证大鼠肝线粒体COX及mPTP开放的影响。方法:将90只SD大鼠随机分成9组,即空白组、肾阳虚模型对照组、肾阳虚高、中、低剂量组、肾阴虚模型对照组、肾阴虚高、中、低剂量组,每组10只。空白组予生理盐水。肾阳虚造模给予皮下注射氢化可的松,25 mg/kg,1次/d,连续14 d,肾阴虚造模在肾阳虚证大鼠开始造模后第8天,开始腹腔注射氢化可的松,50 mg/kg,1次/d,连续7 d。肾阳、阴虚造模后模型对照组予生理盐水,其余高、中、低剂量组分别给予制首乌高(24 g/kg)、中(12 g/kg)、低剂量(6 g/kg)灌胃3个月,提取肝线粒体,测定COX活力及mPTP开放。结果:肾阴虚证大鼠肝线粒体COX活力增强,PTP通透性减小。结论:制首乌肝毒性成分可能在肾阴虚证大鼠体内毒性减弱。     

基于证候理论观察白附片对正常和肾阳虚证大鼠心肌酶的影响

目的:观察白附片对正常大鼠和肾阳虚证大鼠心肌酶的影响,探索其对两种大鼠心脏毒性的差异。方法:80只SD雄性大鼠随机平均分为肾阳虚模型组和正常组;肾阳虚模型组采用肌注氢化可的松琥珀酸钠的方法造模;造模结束后,把两组大鼠各自随机分为低剂量、小剂量、中剂量和大剂量给药组和空白对照组,每组8只;对各给药组大鼠连续14dig不同浓度的白附片溶液;末次给药24h后处死动物,制备血清和心肌组织匀浆;检测血液肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH),放射性免疫法检测促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(COR)、环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP),免疫比浊法检测心肌琥珀酸脱氢酶(SDH)和钠-钾三磷酸腺苷酶(Na+-K⁺-ATPase)。结果:与正常大鼠比较,模型大鼠血液中ACTH、COR、cAMP水平降低而cGMP升高;白附片可引起正常大鼠CK的升高和Na⁺-K⁺-ATPase的下降,而对模型大鼠没有影响;随着白附片剂量的增加,正常和模型大鼠的LDH有升高的趋势,而SDH有下降的趋势,而且正常大鼠变化的幅度更大。结论:白附片对正常大鼠的心脏毒性比对肾阳虚模型大鼠更突出;该研究为在证候理论指导下进行中药毒性评价的合理性和必要性提供了客观依据。     

基于血清代谢组学的栀子肝肾毒性机制研究

目的:通过代谢组学技术考察栀子对大鼠内源性代谢物的影响,探讨其毒性代谢途径和可能机制。方法:以栀子为示例药物,以大鼠为研究对象,分为正常组和栀子组(给药组,灌胃栀子溶液),连续给予21 d。采集大鼠血清样本进行UPLC-MS检测,用主成分分析(PCA)结合正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)进行代谢差异表征,寻找差异代谢物及可能的代谢通路。结果:代谢组学分析显示,组间代谢差异明显,与正常组比较,栀子组血清样本中分别鉴定出11个差异代谢物,这些代谢物水平存在明显的变化。结论:栀子对肝、肾脏具有一定的毒性;栀子产生肝肾毒性的机制可能与葡萄糖、尿苷、肌苷、溶血磷脂酰胆碱(LPC16:0、LPC18:2)下降有关。栀子组sn-甘油基-3-胆碱磷酸明显上升,D-谷氨酰胺、葡萄糖、尿苷、肌苷、十八碳烯酸、紫胶桐酸、十二碳六烯酸、LPC 16:0、LPC 18:2、l-α-磷脂酰乙醇胺(大豆)明显下降。     

抗衰灵膏对肾阳虚证模型大鼠免疫功能的影响

目的:研究抗衰灵膏对氢化可的松致肾阳虚证模型大鼠免疫功能的影响。方法:将SD雄性大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,右归丸组及抗衰灵膏高、中、低剂量组,氢化可的松肌肉注射14天制备肾阳虚证大鼠模型,造模成功后分别按照各组剂量灌胃,给药28天后测定各组大鼠的胸腺及脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬能力以及脾淋巴细胞增殖能力。结果:抗衰灵膏可显著增加肾阳虚大鼠体重,提高大鼠胸腺及脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬能力以及脾淋巴细胞增殖水平。结论:抗衰灵膏能显著改善肾阳虚证大鼠免疫功能并具有很好的免疫调节作用。     

白附片对正常和肾阳虚大鼠血液生化指标的影响

目的探索白附片对正常和肾阳虚大鼠血液生化指标影响的差异。方法80只SD雄性大鼠随机平均分为肾阳虚模型组和正常组;采用肌注氢化可的松琥珀酸钠的方法造模。造模结束后,将2组大鼠各自随机分为低剂量、小剂量、中剂量和大剂量给药组和空白对照组,每组8只;对各给药组大鼠连续14d灌胃给予不同浓度的白附片溶液。末次给药24h后取血进行放免和生化检测。结果给药前模型组环磷酸腺苷（cAMP）／环磷酸鸟苷（cGMP）和促肾上腺皮质激素（ACTH）低于正常组,随着给药剂量的增加,两者有升高的趋势;给药前模型组血糖（GLU）低于正常组,随着给药剂量的增加,模型组GLU有升高的趋势,而正常组有下降的趋势;中剂量给药时模型组总胆固醇（CHO）显著高于正常组：随着给药剂量的增加,2组丙氨酸氨基转移酶（ALT）均有升高的趋势,且正常组ALT升高的幅度更大;给药前模型组尿素氮（BUN）高于正常组,低、小剂量给药有降低模型组BUN的趋势。结论白附片对正常大鼠和肾阳虚模型大鼠血液生化指标的影响不同,对正常大鼠的毒性效应更明显。     

4种肾阳虚模型的评价

目的对4种肾阳虚模型进行比较,为模型选择提供依据。方法 40只健康雄性大鼠,随机分为空白组、氢化可的松组、腺嘌呤组、他巴唑组、氢化可的松联合腺嘌呤组,通过腿部肌肉注射氢化可的松(25 mg/kg)、灌胃腺嘌呤(200 mg/kg)、灌胃他巴唑(每周灌胃30 mg/kg)、腿部肌肉注射氢化可的松联合灌胃腺嘌呤(25 mg/kg,150 mg/kg)造模21 d,检测各组大鼠体质量、抓力、体温、脏器系数、骨骼强度变化情况评价肾阳虚模型。结果造模21 d后,除空白组外,各组大鼠均出现体质量减轻、抓力下降、体温下降、脏器系数改变以及骨骼强度下降,氢化可的松联合腺嘌呤组症状最为明显,腿部肌肉注射氢化可的松组大鼠症状较明显。结论腿部肌肉注射氢化可的松为较理想的模型,氢化可的松联合腺嘌呤的造模方式初步可行,有待继续探究。     

强肌健力饮对肾阳虚证大鼠环核苷酸水平的调节作用

目的:观察强肌健力饮对肾阳虚证大鼠血浆环核苷酸水平的影响,探讨该方防治肾阳虚证的作用机理。方法:选用SD雄性大鼠,随机分为正常对照组,肾阳虚模型组,强肌健力饮低、中、高剂量组、右归丸组;采用氢化可的松致肾阳虚证大鼠模型,观察各组动物胸腺和肾上腺重量指数,以及血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量和cAMP/cGMP比值的变化。结果:肾阳虚模型组大鼠血浆cAMP含量及cAMP/cGMP比值与正常对照组相比均降低(P<0.01),cGMP含量则显著升高(P<0.01)。而强肌健力饮各剂量均能使cAMP含量和cAMP/cGMP比值升高及降低cGMP含量(P<0.01),又可使胸腺指数增大等作用。结论:强肌健力饮能够改善肾阳虚证大鼠的肾虚症状,其作用机理与调节cAMP、cGMP水平有关。     

从"肾主生殖"角度评价腺嘌呤与氢化可的松诱导的肾阳虚模型

目的从“肾主生殖”角度，比较腺嘌呤诱导与氢化可的松诱导的SD大鼠肾阳虚模型的优劣，从而得到在形态学及性腺指标方面更符合中医“肾阳虚”证的动物模型，以供科研、教学使用。方法雄性SD大鼠100只，随机分成正常组、腺嘌呤组及氢化可的松低、中、高剂量组，每组20只。造模4周后通过HE染色，观察模型大鼠睾丸、精囊、前列腺、肾上腺、组织形态变化；放免法检测大鼠睾酮、雌二醇的改变情况。结果腺嘌呤制作的SD大鼠肾阳虚证动物模型在肾上腺、前列腺、精囊、睾丸组织形态改变及睾酮、雌二醇等性腺指标的变化较氢化可的松诱导组明显。结论腺嘌呤诱导的肾阳虚证SD大鼠模型在形态学与性腺指标方面更符合中医肾阳虚形态学表现。     

尿毒康对慢性肾衰竭阳虚大鼠肾组织纤维化的影响

目的：观察尿毒康对慢性肾衰阳虚型模型大鼠肾纤维化的影响。方法：40只SD雄性大白鼠随机抽取10只作为正常对照组,其余30只采用5／6肾切除改良法配合丙基硫氧嘧啶灌胃制成慢性肾衰阳虚模型。造模成功后,再随机分为慢性肾衰阳虚组以及尿毒康组各15只。8周后处死大鼠取肾脏进行免疫组织化学染色,检测Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子β1（TGFβ1）、基质金属蛋白酶-2（MMP2）在肾组织中的表达。结果：与正常对照组比较,慢性肾衰阳虚组Ⅳ型胶原、FN、TGFβ1均表达较强（P〈0．01）,而MMP2表达较弱（P〈0．01）;与慢性肾衰阳虚模型组比较,尿毒康组Ⅳ胶原、FN、TGFβ1的表达均明显较弱（P〈0．05,P〈0．01）,MMP2表达较强（P〈0．05）。结论：尿毒康能减轻慢性肾衰阳虚型大鼠肾纤维化,作用机制可能与上调MMP2的表达及降低TGFβ1表达有关。     

真武汤对肾阳虚型慢性肾功衰竭模型大鼠肾组织AQP1表达的影响

[目的]观察CRF大鼠肾组织AQP1表达变化,研究真武汤对肾阳虚型CRF大鼠肾组织AQP1表达的影响。[方法]健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组和真武汤组,采用腺嘌呤灌胃法建立肾阳虚慢性肾衰大鼠模型。成模后模型组及真武汤组大鼠每日上午继续灌服腺嘌呤,下午分别灌服生理盐水和真武汤连续21天后,采用免疫组化方法检测肾组织AQP1表达。[结果]与对照组比较,模型组大鼠肾组织AQP1表达水平降低(P<0.05);与模型组比较真武汤组大鼠肾组织AQP1表达明显升高(P<0.05)。[结论]CRF大鼠肾组织AQP1表达降低,真武汤能够提高慢性肾衰大鼠肾组织AQP1的表达水平。     

四逆汤对肾、脾、心阳虚大鼠线粒体MDA/GSH-px的影响

目的:观察四逆汤对脾阳虚、肾阳虚、心阳虚大鼠线粒体MDA/GSH-px的影响,揭示四逆汤的抗氧化机制。方法:将SPF级SD大鼠140只,随机分为7组:正常对照组、肾阳虚模型组、脾阳虚模型组、心阳虚模型组、肾阳虚干预组、脾阳虚干预组、心阳虚干预组,每组20只。造模成功后均予四逆汤灌胃15d,测定MDA含量和GSH-px活性。结果:造模成功后,肾阳虚、心阳虚、脾阳虚模型大鼠线粒体MDA含量增高,GSH-px活性降低,GSH-px/MDA比值下降,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。经四逆汤干预后,MDA含量降低,GSH-px活性增高,GSH-px/MDA比值升高,与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:四逆汤具有提高机体GSH-px活力,减轻自由基损伤和抑制脂质过氧化物反应的作用。     

膝骨关节炎肾阳虚动物模型的建立与评价

目的:建立和评价膝骨关节炎(KOA)肾阳虚大鼠模型。方法:24只大鼠随机分成正常组、KOA组、KOA去势组、KOA腺嘌呤组,每组6只。Hulth法建立KOA模型,去势法与腺嘌呤灌胃建立肾阳虚模型。通过Mankin’s和OARSI评分评价KOA模型;通过肾阳虚症状体征评价表及甲状腺轴、性腺轴、肾上腺轴激素水平等评价肾阳虚模型。结果:KOA组、KOA去势组、KOA腺嘌呤组均符合KOA病理表现,OARSI分级分别为2级、3级和4级。与其余3组比较,KOA腺嘌呤组肾阳虚症状体征积分最高(P<0.01,P<0.05),体质量增长最少(P<0.05),肛温最低(P<0.05),T3、T4、FSH、LH、T水平最低(P<0.05),E2水平最高(P<0.05);各组间CORT水平差异无统计学意义。结论:相较于Hulth+去势法,Hulth+腺嘌呤灌胃是构建KOA肾阳虚病证结合模型的更适宜方法。     

天蚕壮阳散对肾阳虚雄性亚健康大鼠免疫功能的影响

目的:探讨天蚕壮阳散对肾阳虚雄性亚健康大鼠免疫功能的影响。方法:运用维生素B4(嘌呤法)建立肾阳虚雄性亚健康大鼠模型,造模成功后分为肾阳虚亚健康模型组、天蚕壮阳散组、金匮肾气丸组、古汉养生精组。分别运用药物干预大鼠,观察各组大鼠的体质量、活动情况、胸腺指数、脾脏指数,使用ELISA法检测大鼠血清IgG、IgA、IgM水平,进行统计分析后评价大鼠免疫功能状况。结果:天蚕壮阳散能改善模型组大鼠肾阳虚症状,提高模型组大鼠胸腺指数、脾指数,提高模型组大鼠血清IgA、IgG、IgM水平。结论:天蚕壮阳散可以提高肾阳虚雄性亚健康大鼠的免疫功能。     

基于方差分析的肾气丸、右归丸、右归饮3首补肾阳类方配伍规律研究

目的:用方差分析的方法评价肾气丸、右归丸和右归饮3首补肾阳类方的疗效,探究其中的核心药和边缘药以及核心药中的补阴药和补阳药之间的配伍规律。方法:把大鼠分为:正常组、肾阳虚模型组以及3首补肾阳类方各自的原方组、核心药组和边缘药组,共11组。分别检测其T、CORT、T4。利用方差分析的方法检验各个药方组药效的差别,结合9个药方组所含的药物及药量的不同分析不同药物配伍对药效的影响。结果:3首补肾阳类方的核心药组的药效均远高于边缘药组;核心药组中药效最好的是右归丸,而右归丸的核心药中补阳药与补阴药药味和药量都是3首补肾阳类方中最多的。结论:3首补肾阳类方的核心药均对提高药效起关键作用;补肾阳类方的配伍注重阴阳并补、阴阳互济,补阴药配伍补阳药构成该类方的基本组成。     

补肾药对肾阳虚大鼠下丘脑组织蛋白激酶活性的影响

目的：研究蛋白激酶A和蛋白激酶C在肾阳虚发病中的作用及补肾药对其调整作用。方法：用长期大量糖皮质激素造成肾阳虚大鼠模型,用^32P—ATP参入反应底物中的摩尔数表示蛋白激酶的活性,用放免法测定cAMP,cGMP含量。结果：肾阳虚大鼠血浆中cAMP水平下降,cGMP水平升高,cAMP／cGMP比值降低,下丘脑组织中PKA和PKC活性在胞液和胞膜中的活性较正常组明显降低。补肾方药对PKA和PKC的活性均有不同程度的调整作用。结论：PKA和PKC可能参与了肾阳虚大鼠的发病机制,补肾方药可部分调整PKA和PKC的活性,从而改善肾阳虚症状。     

金刚酒对肾阳虚大、小鼠模型的影响

目的:观察金刚酒对大、小鼠肾阳虚模型补肾壮阳,提高机体性功能作用的影响。方法:60只雄性KM小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、金匮肾气丸组、金刚酒组:高剂量、中剂量、低剂量。采用im 5%氢化可的松0.02 mL·g-1,连续给药10 d,制作肾阳虚模型,通过观察小鼠的体重、自主活动次数、低温游泳存活时间、前列腺与精液囊湿重、正常小鼠耐缺氧时间,以及观察60只去势雄性SD大鼠附性器官指标的变化,研究金刚酒的药效作用。结果:金刚酒不同剂量组对肾阳虚模型小鼠的体重增长率、前列腺与精液囊湿重、延长游泳时间和自主活动的总次数,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对正常小鼠的耐缺氧能力,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中高剂量组的体重增长率最高为24.44%,自主活动次数高出模型组54次/min,小鼠的存活时间的高剂量组时间值与正常组值仅相差43.2 s。对去势雄性大鼠阴茎勃起时间,大鼠前列腺+精液囊和提肛肌附性器官指数,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:金刚酒具有补肾壮阳,改善性腺萎缩与生殖性功能的作用。     

滋肺阴合补肝肾法对阴虚阳亢型肾性高血压大鼠收缩压、内皮素-1及血管紧张素Ⅱ的影响

目的:探讨滋肺阴合补肝肾法对阴虚阳亢型肾性高血压大鼠(RHR)的降压机制。方法:筛选2月龄健康雄性SD大鼠78只,随机分为假手术组13只与手术组65只。手术组通过结扎左侧肾动脉的方法建立肾性高血压模型,以尾套法测血压筛选高血压大鼠,成功模型再给予附子汤4周,并每隔1天激惹大鼠使其打斗,制备阴虚阳亢证模型。筛选造模成功的阴虚阳亢证RHR,随机分为模型组、卡托普利组、滋肺阴组、补肝肾组、滋肺阴合补肝肾组(简称综合组)。假手术组与模型组给予等量生理盐水,用药组每日晨8时灌胃给药1次,连续4周。末次给药24 h后测血压,腹主动脉取血8 mL,制备血清和血浆。ELISA法测定血浆ET-1、ANGⅡ的浓度。结果:各治疗组阴虚阳亢型RHR血压的变化①基础血压:模型组、卡托普利组、滋肺阴组、补肝肾组、综合组血压与假手术组比较均无统计学意义(P0.05)。②手术后第2周末血压:与假手术组比较,模型组、卡托普利组、滋肺阴组、补肝肾组、综合组血压均明显增高(P0.05)。③治疗后各组血压的变化:治疗4周后,与模型组比较,卡托普利组、补肝肾组及综合组血压明显降低(P0.05),滋肺阴组有所降低但无统计学意义(P0.05);与滋肺阴组比较,卡托普利组、补肝肾组及综合组明显降低(P0.05);与卡托普利组比较,综合组明显降低(P0.05),补肝肾组无统计学意义(P0.05)。滋肺阴合补肝肾法对阴虚阳亢型RHR血浆ANGⅡ、ET-1及血清NO的影响①与假手术组比较,模型组血浆ANGⅡ、ET-1均明显升高(P0.05)。②与模型组比较,卡托普利组、补肝肾组及综合组血浆ANGⅡ、ET-1明显降低(P0.05);滋肺阴组血浆ANGⅡ、ET-1有降低,但无统计学意义(P0.05)。③与滋肺阴组比较,卡托普利组、补肝肾组及综合组有统计学意义(P0.05);④与卡托普利组比较,综合组血浆ANGⅡ、ET-1明显降低(P0.05),补肝肾组无统计学意义(P0.05)。结论:滋肺阴合补肝肾法对阴虚阳亢型RHR的降压机制在于:减少缩血管ET-1的形成,削弱ET所致心肌收缩力增强、心排量增大及血管壁增厚;减少ANGⅡ形成,对抗ANGⅡ所致血管收缩、血管壁增厚及顺应性降低。     

化瘀导滞汤防治庆大霉素所致大鼠肾损伤的实验研究

目的:探讨化瘀导滞汤防治庆大霉素所致肾毒性损伤的作用和部分机理。方法:18只健康雄性W ister大鼠随机分为3组,每组6只:正常组、模型组、治疗组。给予庆大霉素造成肾毒性损伤,于造模后5天取材,光镜和电镜下观察肾组织形态学改变,计算肾系数、检测血肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白总量,氧化应激相关指标SOD、MDA、NOS的变化,检测NF-кB蛋白表达水平。结果:模型组大鼠与正常组比较:光镜下可见肾小管上皮细胞以变性为主,部分坏死;有较多的蛋白管型和少量的细胞管型、颗粒管型。电镜下可见肾小管上皮细胞胞浆中有大量脂滴存在,细胞的线粒体肿胀、内质网明显扩张,治疗组病变轻于模型组。模型组肾系数、血肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白总量、NF-кB蛋白表达水平以及MDA、NOS明显高于正常组,SOD明显低于正常组(P<0.01),治疗组除24h尿蛋白总量外,其余指标与模型组相比有明显改善(P<0.01)。结论:化瘀导滞汤有良好的防治庆大霉素所致肾毒性损伤的作用,并提示与早期抗脂质过氧化损伤有关。