1型糖尿病脂肪来源间充质干细胞成骨分化的实验研究

目的 探究1型糖尿病小鼠脂肪来源间充质干细胞的成骨分化能力。方法 10只21～28日龄C57BL/6雄鼠随机分为两组,糖尿病组小鼠（n=5）腹腔注射链脲佐菌素溶液（STZ）诱导小鼠1型糖尿病（T1DM）模型,正常组小鼠（n=5）注射柠檬酸钠缓冲液作为对照,连续注射5 d,1周后监测小鼠随机血糖,连续测量3 d。分别提取两组小鼠腹股沟和性腺脂肪,分离培养脂肪间充质干细胞（ADSC）,通过细胞形态、流式细胞术检测细胞表型,体外多向诱导分化鉴定细胞特性。为进一步比较两组细胞成骨分化能力的差异,取第3代（P3代）两组ADSC进行体外成骨诱导分化,分别在诱导的第3、5、7天进行碱性磷酸酶（ALP）染色,实时荧光定量PCR(qPCR)和Western印迹检测细胞成骨分化关键转录因子表达。结果 T1DM组小鼠连续3 d随机血糖≥16.7 mmol/L,并出现多饮、多食、多尿及体重增长缓慢的典型表现;两组小鼠脂肪组织来源的培养细胞均呈梭形纤维样、贴壁漩涡状生长;流式细胞术结果显示,两组细胞高表达CD29、CD90,低表达或不表达CD11b、CD34、CD45、MHC-Ⅱ;体外诱导分化结果显示,二者均具...     

脂肪间充质干细胞促进肝脏糖酵解对2型糖尿病大鼠高血糖的改善作用研究

目的 观察脂肪间充质干细胞(AD-MSCs)输注对2型糖尿病大鼠的短期降糖效应,并初步探讨其通过肝脏糖代谢途径调控血糖的作用机制.方法 SD大鼠高脂喂养8周后腹腔单次注射小剂量链脲佐菌素(STZ,25mg/kg)建立2型糖尿病大鼠模型,输注脂肪间充质干细胞后于指定时间点(0、3、6、12、24h)尾静脉取血测定血糖,同时于相应时间点处死大鼠留取肝脏组织标本,利用Real-time qPCR和Western blotting分别检测各组大鼠肝脏组织中糖酵解过程关键限速酶[葡萄糖激酶(GK)、丙酮酸激酶(PK)、磷酸果糖激酶(PFK)]的mRNA和蛋白表达情况.结果 将成功提取的脂肪间充质于细胞经尾静脉输注到2型糖尿病大鼠体内(2×106个/只),大鼠血糖水平在短时间内明显降低,分别为30.55±1.49mmol/L(0h)、18.90±0.85mmol/L(3h)、23.70±1.13mmol/L(6h)、21.90±1.00mmol/L(12h).PCR结果显示细胞输注后3h糖尿病大鼠肝脏组织中GK、PFK均有上调的趋势,在6h时PK明显上调(P＜0.05).Western blotting结果显示,细胞输注后PK和GK蛋白水平在不同时间点均明显上调(P＜0.05).结论 脂肪间充质干细胞可以在短时间内有效改善2型糖尿病大鼠的高血糖状态,其机制可能是通过促进肝脏糖酵解而调节血糖水平.     

胰岛素抑制糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的作用及机制

目的 观察胰岛素治疗2型糖尿病(T2DM)大鼠后心肌细胞线粒体凋亡的变化,探讨胰岛素通过线粒体发挥抗凋亡作用的机制.方法 雄性Wistar大鼠采用链脲佐菌素(STZ)+高脂饮食诱发2型糖尿病.22只大鼠随机分为早干预组(IE组,n=7)、晚干预组(IL组,n=7)和糖尿病组(DM组,n=8),另选8只在鼠作为正常对照组.IE组和IL组分别于成模第1、4周给予诺和灵30R皮下注射,而DM组和正常对照组予以等量生理盐水皮下注射.8周后比较各组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、心肌细胞凋亡指数的差异,并观察各组心肌细胞超微结构变化、线粒体膜电位及活性氧改变.结果 与正常对照组相比,DM组大鼠血糖、心重(HW)/体重(BW)比值升高(P<0.05),SOD、GSH、膜电位均明显降低(P<0.01),而MDA、TUNEL凋亡指数则明显升高(P<0.01),活性氧产生速率增快.电镜下DM组大鼠线粒体嵴断裂,溶解、空泡化.与DM组比较,IE组上述指标均有改善(P<0.05),但IL组上述指标的改善不明显.结论 胰岛素干预对糖尿病大鼠心肌细胞有抗凋亡作用,且早期干预优于晚期干预.     

C肽和胰高血糖素测定对肝源性糖尿病的临床意义

目的探讨C肽释放试验及胰高血糖素测定对肝源性糖尿病(HD)的临床意义。方法对102例HD、95例2型糖尿病(T2DM)及110例正常对照者(NC)行葡萄糖耐量试验,测定不同时间点血糖、胰岛素、C肽及胰高血糖素水平。采用稳态模型法的胰岛β细胞功能(Homa-β)、同样方法的胰岛素抵抗指数(Homa-IR)及空腹血糖/空腹胰岛素(FPG/FINS)来评估胰岛素抵抗,用胰岛素敏感指数(ISI)评估胰岛素敏感性。结果 HD组FPG低于T2DM组(P<0.05),胰岛素分泌呈高峰延迟型,60、120 min胰岛素及C肽高于T2DM组(P<0.05)。HD组Homa-β及ISI高于T2DM组,FPG/FINS低于T2DM组(P均<0.05)。T2DM组Homa-IR高于NC组,ISI低于NC组(P均<0.05)。HD组胰高血糖素水平高于NC组及T2DM组(P<0.05),60 min达到高峰,180 min恢复正常。结论 C肽释放试验及胰高血糖素测定对鉴别HD有一定价值,对肝细胞损伤程度的判定及预后有一定的临床意义。     

hGLP-1类似物基因转染对糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响

目的 研究尾静脉注射人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val~2-hGLP-1)重组表达质粒对糖尿病模型大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响.方法 建立链脲佐黹素(STZ)诱导SD糖尿病大鼠模型,随机分为含有hGLP-1类似物基因的重组质粒(plRFLS2-FGFP/Val~2-hGLP-1)转染组、空质粒(pIRES2-EGFP)转染组、糖尿病模型对照组,每组8只.另取8只未经处理的SD大鼠作为正常对照组.重组质粒转染组和空质粒转染组分别通过尾静脉注射含相应质粒(110μg/只)的溶液,糖尿病模型对照组和正常对照组给予等量的生理盐水.实验动物共干预30d,实验结束后,观察各组大鼠血糖及血清胰岛素水半的变化,采用糖耐量及胰岛素耐量实验检测大鼠胰岛素敏感性然后处死动物,HE染色观察胰岛细胞病变情况,免疫组化法分析胰岛素分泌情况.结果 与正常对照组、糖尿病模型对照组和空质粒转染组比较,重组质粒转染组血糖水平明显降低(P<0.01),血清胰岛素水平显著升高(P<0.01).基因治疗改善了糖尿病大鼠的糖耐量,降低了胰岛素抵抗,提高了机体对胰岛素的敏感性(P<0.01).空质粒转染组与糖尿病模型对照组比较,以上指标的差异均无统计学意义(P>0.05).同时,重组质粒转染组的胰岛素分泌水平提高,与糖尿病模型对照组比较,胰岛细胞病变程度明显改善.结论 hGLP-1类似物基因转染可促进胰岛细胞增殖,提高胰岛素敏感性,从而显著降低糖尿病大鼠的血糖水平,并改善胰岛组织病变程度.     

游泳运动对2型糖尿病大鼠腓肠肌AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路和自噬的影响

目的:探讨游泳运动干预对2型糖尿病(T2DM)大鼠腓肠肌AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路和自噬相关蛋白表达的影响,分析运动改善T2DM骨骼肌胰岛素抵抗的作用机制。方法:63只SD大鼠随机分为正常饮食对照组(NC组,n=9)和高糖高脂饮食组(n=54),8周高糖高脂饮食后小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导T2DM大鼠模型,将成功诱导的T2DM大鼠(n=49)随机分为糖尿病模型组(DM组,n=24)和糖尿病运动干预组(DME组,n=25)。NC组和DM组正常饲养,DME组进行8周不负重游泳运动干预,第1周运动时间15 min,每周递增15 min,直至延长为90 min,每天运动1次,每周5天。定期检测各组大鼠空腹血糖,8周运动干预后检测胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和口服糖耐量,采用Western blot方法检测腓肠肌AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路、自噬、凋亡以及胰岛素信号通路相关蛋白表达。结果:(1)与NC组相比,DM组大鼠空腹血糖、HOMA-IR和口服糖耐量水平显著增加(P<0.01),p-IRS-1/IRS-1、GLUT4、pAMPK/AMPK、SIRT1和PGC-1α、Atg7、Beclin1、LC-3Ⅱ/Ⅰ、Bcl-2及Bcl-2/Bax显著下降(P<0.05),Bax和p62显著增加(P<0.05);(2)运动干预后,与DM组相比,DME组大鼠空腹血糖、HOMA-IR和口服糖耐量水平显著改善(P<0.05),p-IRS-1/IRS-1、GLUT4、p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC-1α、Atg7、Beclin1、LC-3Ⅱ/Ⅰ、Bcl-2及Bcl-2/Bax显著增加(P<0.05),Bax和p62显著降低(P<0.05)。结论:8周游泳运动可改善T2DM大鼠骨骼肌胰岛素抵抗,其机制可能与运动激活AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路上调自噬有关。     

间充质干细胞对2型糖尿病小鼠糖尿病肾病进展的影响及其机制

目的 探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)早期注射对2型糖尿病(T2DM)小鼠糖尿病肾病进展的影响及其可能机制。方法 选取20只5周龄雄性db/db小鼠构建T2DM小鼠模型，随机分为干细胞治疗组(MSCs组，n=10)和T2DM组(n=10)；另设置鼠龄匹配的db/m小鼠为正常对照组(NC组，n=10)。MSCs组小鼠行连续6周的人UCMSCs(1×10⁶/0.2 ml生理盐水)尾静脉输注治疗，NC组及T2DM组尾静脉输注等体积生理盐水，每周1次，连续输注6次。每周监测各组小鼠的血糖和体重。第6次治疗结束后，心脏灌流处死各组小鼠并采集血液、留取肾脏组织，行生化和组织病理学检查。采用Western blotting检测各组肾脏沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白以及紧密连接蛋白1(Claudin-1)的表达情况，并采用免疫组化检测SIRT1、Claudin-1、Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、Col Ⅳ的表达情况。电镜观察各组小鼠肾小球的形态。取对数生长期HK-2细胞，将细胞分为对照组、高糖诱导模型组(HG组)、高糖诱导siRNA组(HG+siRNA组)、MSCs组(...     

老年男性高胰岛素血症患者的临床特点分析

目的分析老年男性高胰岛素血症患者的临床特征及其影响因素。方法对521例经糖尿病筛查的老年男性高危人群行口服75g葡萄糖耐量试验(OGTT),根据胰岛素测定结果分为高胰岛素血症组(n=195)和正常胰岛素组(n=326),对其临床特征、糖代谢状态构成比、胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗指标、合并其他疾病情况进行比较,并分析高胰岛素血症患者2~10年间糖代谢状态转化与体重变化之间的关系。结果高胰岛素血症组的体重指数(BMI)、腰围、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(2hPBG)、甘油三酯(TG)、收缩压、舒张压均明显高于正常胰岛素组(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)明显低于正常胰岛素组(P<0.01),年龄、总胆固醇(TC)、腰臀比值(WHR)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)与正常胰岛素组比较无明显差异。高胰岛素血症组的糖代谢异常检出率(73.3%)明显高于正常胰岛素组(39.3%),其中高胰岛素血症组中新患2型糖尿病42例(21.5%),糖调节受损者101例(51.8%),正常糖耐量者52例(26.7%),正常胰岛素组中新患2型糖尿病16例(4.9%),糖调节受损者112例(34.4%),正常糖耐量者198例(60.7%)。高胰岛素血症组胰岛β细胞功能、胰岛素抵抗指标也明显高于正常胰岛素组,在不同糖代谢状态分组中表现一致。高胰岛素血症组合并肥胖、高血压、高尿酸血症、血脂紊乱、心血管病的比例均高于正常胰岛素组。高胰岛素组中糖代谢状态转化情况显示体重增加或减少与糖耐量恶化或好转相关。结论老年男性糖尿病早期高危人群中,高胰岛素血症患者胰岛β细胞功能大多在正常范围,但多项代谢指标及合并其他代谢异常以及心脑血管疾病的比例均高于正常胰岛素者,应引起重视并给予综合防治。     

磁共振波谱成像评估初发2型糖尿病患者骨髓脂肪含量

目的探讨磁共振波谱成像(MRS)定量评估初发2型糖尿病(T2DM)骨髓脂肪含量变化及其与胰岛素抵抗的相关性。方法初发T2DM患者及年龄匹配的正常对照组(n=32/组)行双能X线骨密度测定及股骨颈MRS扫描,分别获得骨密度(BMD)及骨髓脂肪分数(FF)。检查2组研究对象空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、胰岛素(FINS)及血脂指标(TC、TG、HDL-C、LDL-C),利用稳态模式评估法评价胰岛素抵抗(HOMA-IR)。结果初发T2DM组BMD值与对照组无统计学差异。初发T2DM组FF值显著高于正常对照组(P0.001),校正糖代谢、脂代谢及BMD值,2组间FF值仍存在统计学差异(F值=16.763,P=0.012)。FF与HOMA-IR呈中度正相关性(r=0.683,P0.001),校正BMI,FF与HOMA-IR仍然存在正相关性(r=0.592,P=0.018)。结论初发T2DM患者骨髓脂肪增高,骨髓脂肪增多可能是胰岛素抵抗的影响因素之一。     

胰肾联合移植对糖尿病患者胰岛功能的影响

目的 了解胰肾联合移植术后糖尿病患者胰岛功能的恢复状况及对糖尿病疗效的影响。方法 检测手术前后血糖,C肽和胰高血糖素,并进行比较,术后180d时测定胰岛素释放试验和葡萄糖耐量试验。结果 术前病人的C肽水平明显低于正常,胰高血糖素高于正常,尽管使用了较大量的胰岛素,血糖仍然较高。术后第1天开始C肽分泌明显增加,几乎超过正常,胰高血糖素分泌技术前几乎减少一半,30d后降到正常;术后第7天血糖降到正常,第20天停用胰岛素,240d内血糖仍然在还范围,术后180d时检测葡萄糖耐量试验和胰岛素释放试验结果均正常。结论 胰肾联合移植既能改善1型糖尿病肾病病人的肾功能,又能通过提高胰腺β细胞的分泌功能,达到治疗糖尿病的目的。胰肾联合移植是治疗1型糖尿病晚期肾病的最佳方法。     

急、慢性髓性白血病细胞低温冻存后诱生的树突状细胞生物特性研究

目的 观察急、慢性髓性白血病原代细胞经低温冻存后诱生的白血病源性树突状细胞的生物特性.方法 取急、慢性髓性白血病原代细胞,一部分细胞立即培养,一部分细胞用5%二甲基亚砜-6%羟乙基淀粉为保护剂,-80℃冰箱降温,液氮保存一定时间后复温培养.培养时细胞内加重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子、白介素-4、肿瘤坏死因子-α等细胞因子,培养12 d,为白血病源性树突状细胞,观察细胞形态及免疫表型、自身混合淋巴细胞反应及细胞毒T淋巴细胞杀伤自身白血病细胞活性.结果 急、慢性髓性白血病新鲜或冻存的原代细胞,经组合细胞因子培养,细胞均不同程度地出现典型的树突状形态,细胞表面CD80、CD54、人白细胞表面抗原DR、CD1a、CD83、CD86表达上调,CD14下调;冻存原代细胞经培养生成的白血病源性树突状细胞,还表现为自体混合淋巴细胞反应和T淋巴细胞杀伤自体白血病细胞活性明显.结论 急、慢性髓性白血病新鲜或经低温冻存的原代细胞可诱生为白血病源性树突状细胞,这种细胞可诱导T淋巴细胞杀伤自身白血病细胞,为用树突状细胞免疫治疗微小残留病提供了实验依据.     

Radiation Chemical and Physical Mechanisms of Radiosensitization of Single Cell Systems by Iothalamate

Summary

The radiosensitizing effect of iothalamate (ITA) has been investigated in bacterial and mammalian cells in order to obtain a better understanding of the physical and radiation chemical mechanisms of sensitization displayed by the drug. In order to distinguish between the two, Escherichia coli B/r cells were irradiated with 9 MeV electrons, which allow only the radiation chemical mechanism to operate, and V79 cells with 250 KVp X-rays, which instead make possible the occurrence of both mechanisms.

It has been shown that: (a) Maximum sensitization already occurs in bacteria with 10^?2 mol dm^?3 ITA (enhancement ratio (ER) 11·2 in oxygen, 2·7 in nitrogen), while in mammalian cells a concentration higher by a factor of 10 is required (ER 2·2 both in air and nitrogen). (b) ITA sensitization is inhibited when bacteria are irradiated in growth medium instead of buffer. Such inhibition does not occur with V79 cells. (c) Cysteine and glycerol completely cancel the sensitizing effect of ITA on bacterial cells in both gas phases. Dimethylsulphoxide (DMSO) does the same in nitrogen, while in oxygen it only reduces ITA sensitization to about 50 per cent of the level observed in control conditions. With mammalian cells, all the three scavengers do not modify significantly the enhancement produced by ITA, either in air or in nitrogen. The experimental results are consistent with both postulated mechanisms of sensitization.     

TPO基因修饰的基质细胞对巨核系细胞的定向扩增作用

目的研究TPO基因修饰的基质细胞对CD34+造血细胞向巨核系细胞定向增殖分化的影响.方法将TPO cDNA构建到pBabe/pura中,通过"乒乓转染法"获得产高滴度逆转录病毒载体的包装细胞;利用所获的病毒上清转染基质细胞HFCL,用Northern blot检测细胞中TPO基因的表达,并利用TPO依赖株检测上清中的TPO活性;以未转基因的HFCL为对照,将CD34+造血细胞在TPO基因修饰的HFCL支持下扩增,用流式细胞仪检测扩增细胞中表型为CD34+CD41+和表型为CD41-CD61+细胞的比例.结果基质细胞HFCL能够有效表达外源性TPO基因,在HFCL/TPO培养上清中有0 75 ng/ml水平的TPO活性;并且在HFCL/TPO支持下,CD34+造血细胞经过7 d扩增后,CD34+CD41+细胞的比例为(13.7±2.0)%,HFCL为(6.5±1.8)%(P＜0.01);CD41+CD61+细胞的比例为(11.9±0.7)%,略高于HFCL的(10.6±1.5)%(P＞0.05).结论基质细胞能够有效表达外源性TPO基因和其蛋白,而且TPO基因修饰的基质细胞能显著促进CD34+CD41+巨核祖细胞的扩增,但对较成熟的CD41+CD61+巨核细胞影响不明显.     

High Radiosensitivity of the MOLT-4 Leukaemic Cell Line

Summary

Radiation survival of MOLT-4, a leukaemic T-lymphocyte cell line, was measured by counting colonies formed in 0·8 per cent methyl cellulose. The survival curve was a simple exponential and showed the cells to be radiation sensitive, with D₀ = 0·49 ± 0·02 Gy and extrapolation number n = 0·92 ± 0·09. No increase in survival as measured by colony-forming ability or trypan blue dye exclusion was seen when the dose was split into two fractions, separated by a 5 h incubation period. Electron microscopy and trypan blue dye exclusion showed that 5 h after exposure to high doses, MOLT-4 cells began to die and displayed condensed, marginated chromatin and cellular vesticulation.     

脂肪间充质干细胞分化为肾小管上皮细胞的实验研究

目的 探讨脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMCSs)是否能分化为肾小管上皮细胞,用于急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的治疗.方法 体外分离和培养ADMSCs,用一种携带有荧光素酶和红色荧光蛋白(fluc-mrfp)报告基因的慢病毒转染ADMSCs;构建SD大鼠缺血再灌注诱导的AKI模型,将病毒转染ADMSCs直接从肾实质注射移植2×106细胞量.使用生物发光成像仪(bioluminescence imaging,BLI)示踪移植后的ADMSCs在大鼠体内的分布;免疫荧光染色法检测ADMSCs在体内的分化.结果 ADMSCs高表达CD29、CD90,不表达CD31、CD45、CD34;慢病毒转染后的ADMSCs稳定表达fluc和mrfp报告基因.体内ADMSCs移植后,BLI可以检测到荧光信号一直持续到第14天;免疫荧光结果进一步证实移植的ADMSCs可能分化为肾小管上皮细胞.结论 ADMSCs在体内可以分化为肾小管上皮细胞,为进一步研究ADMSCs治疗AKI提供实验基础.     

低温等离子体联合辐射对三种癌细胞系放射增敏效应的研究

目的 探讨低温等离子体对人肝癌细胞系HepG2、非小细胞肺癌细胞系A549及人宫颈癌细胞系HeLa的放射增敏作用及其机制。方法 应用克隆形成实验观察低温等离子体对3种细胞的放射增敏作用;流式细胞仪分析3种细胞周期分布、凋亡率及活性氧含量;Western blot法检测单纯照射(R组)、单纯等离子体作用(P组)及其联合辐射(P+R组)对3种细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响。结果 低温等离子体对HepG2、A549及HeLa细胞均有放射增敏作用,放射增敏比(SER_D0)分别为1.28、1.32、1.29。HepG2、A549及HeLa细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与R组比较均明显增高(t_G2/M期=9.52、8.24、9.53,P<0.05;t_凋亡率=10.67、38.56、6.74,P<0.05;t_{活性氧含量}=9.41、15.42、13.53,P<0.05)。HepG2和A549细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与P组比较均明显升高(t_G2/M期=8.75、20.37,P<0.05;t_凋亡率=8.43、9.99,P<0.05;t_{活性氧含量}=4.82、5.27,P<0.05)。3种癌细胞中P+R组Bcl-2蛋白表达较R组降低,而Caspase-3蛋白表达升高。结论 低温等离子体可提高HepG2、A549及HeLa细胞系的放射敏感性,其对HepG2及A549细胞系的放射增敏机制可能与抑制亚致死损伤修复,使细胞周期阻滞在G₂/M期,以及提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡有关。     

树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养后对人肝癌细胞株HEP-3杀伤活性的研究

 目的 研究树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后增殖活性、表型的变化和其对人肝癌细胞株HEP-3杀伤活性的影响.方法 分离外周血单个核细胞(PBMC),经不同细胞因子作用后定向分化成DC和CIK细胞,将收获的DC与CIK共培养3d,以流式细胞仪检测CIK 细胞膜表面分子表达,MTT 法检测共培养后CIK细胞对HEP-3杀伤活性的变化.结果 CIK与DC 共培养3d 后增殖活性开始显著提高,与DC共培养的CIK较单独培养的CIK具有更强的杀瘤活性.结论 共培养后DC能够促进CIK增殖,提高其对肝癌细胞的杀伤活性,为指导临床应用DC与CIK联合治疗原发性肝癌提供了实验依据.     

人胎盘来源干/祖细胞生物学特性研究进展

胎盘通过分离可得到许多表型可塑性的细胞类型,现已成为再生医学新的细胞来源途径。目前已发表的众多文献使用了不同的分离鉴定方法,描述了来自胎盘不同区域的干细胞。本文系统整理人胎盘来源的各种干/祖细胞的生物学特性,并提示这些细胞在将来临床应用的可能性。     

新生大鼠肌源性干细胞跨胚层分化为胰岛素分泌细胞的研究

目的探讨新生大鼠肌源性干细胞(MDSCs)在体外跨胚层转分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)的可能性。方法提取新生大鼠MDSCs原代细胞,差速贴壁培养后行Desmin免疫细胞化学鉴定。然后将细胞分为3组:胰腺提取液诱导组、化学方法诱导组、空白对照组,分别诱导并同期观察细胞的生长形态,采用双硫腙(DTZ)染色鉴定胰岛素分泌细胞,RT-PCR方法检测诱导后细胞的基因表达情况。结果获得高纯度的MDSCs,且Desmin免疫细胞化学鉴定呈阳性。胰腺提取液诱导组诱导后4d,相差显微镜下可见细胞团结构,诱导后6d呈半贴壁状态,诱导后12d形成典型的胰岛样细胞团,较化学方法诱导组诱导时间缩短3d。RT-PCR检测显示:胰腺提取液诱导组诱导6d后可检测到胰岛前体细胞相关基因Ngn3、nestin、PDX-1的表达;诱导12d后可检测到胰岛素基因的表达,但未检测到Ngn3、nestin、PDX-1的表达。结论胰腺提取液可模仿胰岛细胞发育的微环境,并诱导大鼠MDSCs跨胚层分化为胰岛素分泌细胞。     

猴骨髓间充质干细胞的分离及原代培养特性的研究

目的：探讨猴骨髓间充质干细胞(MSCs)低分化干细胞方面的特性。方法：以Percoll(质量密度1073g/L)非连续密度梯度离心分离出骨髓悬液中的骨髓间充质干细胞，用含100mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养，观察细脑的形态、生长状况及其超微结构。结果：原代培养的骨横间充质干细胞增殖缓侵，细胞增殖率和形态分化不均一。如有一些细脑在4wk的培养时间内末见明显增殖，这些增殖不明显的细胞有的未见明显的伸展，呈圆形，有的伸展充分，成片状；在培养2wk后也可见一些明显增殖的细胞，分别形成克隆团状或条状的增生细胞群；培养过程中可见有神经元样及多核细胞出现。原代培养的骨髓间充质干细胞的超微结构也显示了低分化的干细胞特点，如细胞表面具有微绒毛，脑浆内内质网丰富、激离核糖体数量多、线粒体小，核仁大而不规则、可见核裂，超微结构还显示了一些中胚层来源于细瘤的结构特点，如大量的微丝。结论：经Percoll细胞分离介质分离出的骨髓间充质干细胞，在非诱导条件下原代培养过程中，从形态分化、增殖率等方面显示了其多向分化潜能；从超微结构等方面显示了其中胚层来源低分化细胞的特点。这些特点可作为骨髓间充质干细胞鉴定的佐证之一，说明Percoll非连续密度梯度离心法对骨髓间充质干细胞的分离具有可靠性。