miR-320a调控非小细胞肺癌细胞的上皮细胞间质化过程研究

 目的 探讨miR-320a对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)细胞上皮细胞间质化过程的调控作用及其可能的作用机制。方法 选取2017-07至2018-12于菏泽市立医院住院并进行手术治疗的NSCLC患者60例,术中取切除的癌组织和癌旁组织,RT-PCR和Western Blot检测癌组织和癌旁组织miR-320a和FoxM1表达;miR-320a mimics、miR-320a NC和miR-320a inhibitor转染A549细胞,24 h后划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,双荧光素酶报告基因系统预测miR-320a与FoxM1的靶向关系,Western Blot检测FoxM1、E-Cadherin和Vimentin蛋白表达。结果 癌旁组织内miR-320a的表达高于癌组织(P<0.001),FoxM1的阳性细胞率低于癌组织(P<0.001);miR-320a NC组细胞迁移和侵袭能力低于miR-320a mimics组(P<0.001),而高于miR-320a inhibitor组(P<0.001);miR-320a可靶向下调FoxM1的表达水平;FoxM1-WT A549细胞中,miR-320a mimics组细胞E-cadherin表达显著高于miR-320a NC组(P<0.001),Vimentin表达显著低于miR-320a NC组(P<0.001);miR-320a inhibitor组细胞E-cadherin表达显著低于miR-320a NC组(P<0.001),Vimentin表达显著高于miR-320a NC组(P<0.001)。结论 miR-320a在NSCLC中可能作为抑癌基因发挥作用,这种作用可能是通过靶向抑制FoxM1的表达,从而抑制NSCLC细胞的上皮细胞间质化过程而实现的。     

微小核糖核酸- 29b通过靶向髓样细胞白血病- 1影响脑缺血/再灌注损伤时神经细胞凋亡

【摘要】 目的 确定微小核糖核酸（microRNA,miRNA,miR）在脑缺血/再灌注（I/R）损伤中对神经细胞凋亡的影响,并探讨其潜在机制。方法 培养小鼠成神经细胞瘤（N2a）细胞,构建氧糖剥夺（OGD）/复氧（R）模型,模拟体外脑I/R状态。N2a细胞随机分为空白对照组（control）、OGD/R组（OGD/R）、OGD/R＋转染miR-29b模拟物组（mimics）、OGD/R＋转染miR-29b抑制剂组（inhibitor）、OGD/R＋转染miR-29b模拟物阴性对照组（mimics NC）、OGD/R＋转染miR-29b抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）。实时定量聚合酶链反应（PCR）检测各组miR-29表达变化。细胞计数试剂盒（CCK）-8和流式细胞术分别检测miR-29b和miR-29b抑制剂对N2a细胞活力和凋亡的影响。免疫印迹法检测抗凋亡蛋白髓样细胞白血病（MCL）-1、B淋巴细胞瘤（BCL）-2及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）-3表达。双荧光素酶分析验证miR-29b与MCL-1间相互作用。结果 与control组相比,OGD/R组miR-29b表达明显升高。与OGD/R组相比,mimics组N2a细胞凋亡增加,存活率降低,MCL-1、BCL-2表达下调,caspase-3表达上调,而这种效应在inhibitor组受到逆转。双荧光素酶分析显示miR-29b可通过与MCL-1的3’非翻译区（UTR）端结合下调MCL-1表达。结论 miR-29b在脑I/R损伤过程中通过靶向MCL-1促进神经细胞凋亡。这为缺血性脑卒中治疗提供了一潜在的新靶点。     

小鼠DUSP1 3’-UTR双荧光素酶报告基因表达系统的建立及功能鉴定

目的 建立小鼠双特异性磷酸酶1(DUSPl)3’端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因表达系统,并对其进行功能鉴定.方法 提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA,以其为模板通过PCR扩增获得小鼠DUSP1 3'-UTR全长序列,酶切后克隆至pGL3-control载体荧光素酶编码基因的下游,获得重组载体LuDP,经PCR、限制性内切酶酶切、DNA序列分析鉴定正确后与内参照质粒pRL-TK共转染NIH3T3细胞,48h后检测双荧光素酶报告基因的表达.将含有小鼠DUSP1 3’-UTR的荧光素酶表达模块与来源于pRL-TK质粒的RL表达模块克隆至pLenti6-TR质粒中,获得双荧光素酶报告基因表达载体LuDP/RL,将其与RNA结合蛋白HuR表达载体(pcDNA3.1-HuR-FLAG)、mmu-miR-101a分别共t转染NIH3T3细胞,检测双荧光素酶的活性,分析HuR、mmu-miR-101对荧光素酶基因表达活性的影响.结果 成功构建了双荧光素酶报告基因表达载体.小鼠DUSP1 mRNA 3'-UTR可显著下调与其相连的荧光素酶的表达活性(0.14±0.01倍,P＜0.01);共转染HuR可上调荧光素酶的表达活性(1.40±0.20倍,P＜0.05),共转染mmu-miR-101a则可下调荧光素酶表达活性(0.57±0.18倍,P＜0.05).结论 成功构建了DUSP1 3’-UTR双荧光素酶报告基因表达系统,该系统可用于转录后调控元件对小鼠DUSP1基因表达的调控机制研究.     

miRNA-218在膀胱癌中表达及意义

目的探讨miRNA-218在膀胱癌细胞中的表达及其对膀胱癌5637细胞活性与侵袭增殖能力的影响。方法采用RT-PCR法检测正常膀胱细胞与膀胱癌细胞中miRNA-218的表达情况;分别在膀胱癌5637细胞中加入miRNA-218序列模拟物(miRNA-218 mimics)与无关序列模拟物(scramble mimics)后,采用MTT法检测细胞活性、Transwell法检测细胞侵袭增殖能力。结果 miRNA-218在正常膀胱细胞中的表达明显高于低级别与高级别尿路上皮癌,差异有统计学意义(P<0.05)。与未处理的膀胱癌5637细胞比较,加入miRNA-218 mimics的膀胱癌5637细胞中,miRNA-218表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);加入scramble mimics的膀胱癌5637细胞中,miRNA-218表达差异无统计学意义(P>0.05)。加入miRNA-218mimics的膀胱癌5637细胞的活性与侵袭增殖能力明显低于未处理的膀胱癌5637细胞与加入scramble mimics的膀胱癌5637细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-218与膀胱癌的发生、侵袭转移有关,miRNA-218表达上调可抑制膀胱癌。     

miR-29a抑制胃癌细胞内靶基因VEGF-A的表达及意义

目的 验证胃癌细胞株SGC-7901内miR-29a对靶基因VEGF-A的直接调控作用.方法 采用负载miR-29a的腺病毒载体（Ad-miR29a）感染人胃癌细胞株SGC-7901,上调SGC-7901细胞内miR-29a的表达丰度后,采用RT-qPCR及Western blot法分别检测SGC-7901细胞内VEGF-A在mRNA及蛋白水平的表达;进一步采用双荧光素酶实验及突变实验,验证miR-29a是否通过结合在VEGF-A 3＇UTR而直接抑制靶基因表达.结果 与感染阴性对照Ad-LacZ的SGC-7901细胞相比,感染Ad-miR29a的SGC-7901细胞内VEGF-A蛋白表达下降（0.42±0.02 vs.0.91±0.03,P＜0.01）,且VEGF-A mRNA水平亦下调（0.75±0.21 vs.1.15±0.25,P＜0.05）;荧光素酶实验显示,与阴性对照相比,转染miR-29a mimic后,HEK293细胞萤火虫荧光素酶活性明显下降（0.56±0.13 vs.0.93±0.06,P＜0.05）;而在VEGF-A 3＇UTR与miR-29a的结合位点被突变之后,HEK293细胞萤火虫荧光素酶活性得以恢复.结论 miR-29a通过结合于VEGF-A 3＇UTR相应位点,直接抑制VEGF-A在mRNA及蛋白水平的表达.miR-29a可能成为胃癌基因治疗的有效靶标.     

人Puma启动子荧光素酶报告基因的构建和鉴定

目的：克隆人Puma基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并在细胞内检测其活性。方法：采用PCR技术,从人HepG2细胞中扩增出Puma启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,测序所扩增的DNA序列,并将其转染入H1299细胞中检测其活性。结果：测序结果表明,扩增的Puma启动子序列正确;双报告基因实验检测荧光素酶活力表明,构建的报告基因具有启动子活性。结论：Puma启动子的克隆及人Puma启动子报告基因的成功构建,为p53家族凋亡通路的功能研究提供了必要的实验材料。     

外源表达miR-34a对H1299细胞辐射敏感性的影响

目的 研究miR-34a对H1299细胞辐射敏感性的影响.方法 采用pre-miR-34a瞬时转染H1299细胞,接受不同剂量(0、2、4、6和8 Gy)γ射线照射后,利用CCK-8试剂盒检测细胞活性.流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,real-time PCR检测miR-34a靶基因bcl-2、bax、CDK4、CDK6及cyclinD1的表达水平.结果 不同剂量(0、2、4、6和8 Gy)γ射线照射后,与阴性对照转染组相比,pre-miR-34a转染组各剂量点细胞活力明显降低(t=-2.39、-3.12、-4.98、-4.03、-3.06,P＜0.05),并与阴性对照转染组的差值呈剂量依赖性的增加.6 Gyγ射线照射后,与阴性对照转染组相比,pre-miR-34a转染组细胞凋亡率明显增加(t=7.06,P＜0.05),细胞G0/G1期阻滞(t =3.94,P＜0.05),S期细胞减少(t=6.23,P＜0.05),bcl-2、CDK4及CDK6明显下调(t=3.39、12.88、6.21,P＜0.05),cyclinD1有下降趋势,但差异无统计学意义,而bax明显上调(t=-4.35,P＜0.05),是阴性对照转染组的1.94倍,bcl-2/bax比值下降.结论 miR-34促进H1299细胞凋亡,诱导细胞G0/G1期阻滞,抑制细胞活性,进而提高H1299细胞的辐射敏感性.     

染料木黄酮联合5-FU对结肠癌HCT-116细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨染料木黄酮联合5-氟尿嘧啶对HCT-116细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法经不同浓度的Gen和(或)5-FU处理HCT-116细胞后,用MTT法检测细胞的生长抑制效应;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化情况;RT-PCR检测Suvivin表达水平。结果 Gen与5-FU联合应用后能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞发生S期阻滞,均较对照组和单用药组作用增强,并且下调了Suvivin的mRNA表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Gen可抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖,将细胞阻滞于S期,并诱导细胞的凋亡,与5-FU联合应用具有显著协同效应,其机制可能与下调Suvivin表达有关。     

DMRIE-C、Lipofectamine2000和TransMessenger转染HCV RNA效率比较

目的比较和优化DMRIE-C、Lipofectamine2000和TransMessenger3种转染试剂的转染效率,选择适合建立丙型肝炎病毒（HCV）复制子或感染克隆的转染试剂和条件。方法将含有萤火虫荧光素酶报告基因的HCVRNA,分别通过上述3种转染试剂转染Huh7和Huh7.5.1细胞系,于转染24h后裂解细胞,测定荧光素酶活性。2~3周后,结晶紫染色细胞集落。结果在Huh7和Huh7.5.1细胞中,DMRIE-C比Lipofectamine2000和TransMes-senger的转染效率高。在Huh7细胞中,4μlDMRIE-C转染试剂组的荧光素酶活性比其他组高（P〈0.05）。在Huh7.5.1细胞中,3μlDMRIE-C转染试剂组的荧光素酶活性比其他组高（P〈0.05）。在细胞集落形成实验中,DMRIE-C组的细胞克隆数多于其他两种转染试剂组。结论在Huh7和Huh7.5.1细胞中,DMRIE-C比Lipo-fectamine2000和TransMessenger的转染效率高。当建立HCV复制子或感染克隆试验时,既要选择合适的RNA转染试剂,又要考虑细胞生长状态的影响。     

小鼠脊髓损伤组织高表达的microRNA-21对neuro-2a细胞PDCD4的影响

目的验证小鼠损伤脊髓中高表达的microRNA-21(miR-21)在neuro-2a细胞中对程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的作用,初步探讨miR-21在脊髓损伤过程中的作用。方法将neuro-2a细胞在体外培养16h,分别按相应体系转染miR-21 mimics,继续培养48h,提取6孔板内细胞总蛋白和总RNA行蛋白印记和实时定量PCR检测,利用HEK293细胞行荧光素酶报告基因检测。结果 neuro-2a细胞转染miR-21 mimics后,其内源性程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的表达在蛋白和mRNA水平均明显降低。双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-21对PDCD4 3'非翻译区(3'-UTR)的预测位点有直接抑制作用,而将此位点突变后,miR-21对PDCD4 3'-UTR预测位点的抑制作用消失。结论 miR-21通过直接作用于PDCD4 3'-UTR靶位点从而在mRNA和蛋白水平抑制PDCD4的表达。miR-21可能在脊髓损伤过程中具有重要的保护作用。     

Study of age of fusion of hyoid bone

The present study was conducted to determine the age of fusion of greater cornua with the body of hyoid bone. Age of fusion of hyoid bone can help in determining the age of an individual, especially of unknown dead bodies where only skeletal remains are available. A victim of compression of neck will more likely have fracture of hyoid bone if his hyoid bone is fused. Indian authors have reported that the fusion of hyoid bone occurs after 40 years of age. Studies done by foreign workers observed that hyoid bone fused at an earlier age (30-40 years). A total of 170 excised hyoid bones from dead bodies belonging to the age group of 20-65 years were studied. Fusion occurred earlier in females as compared to males by about 5 years. The mean age of unilateral and bilateral fusion in males was 38.25 and 53.16 years, respectively. The mean age of unilateral and bilateral fusion in females was 38.00 and 48.50 years, respectively. All the hyoid bones were fused after the age of 60 years. No significant differences were found between the fusion on right and left side.     

湿润烧伤膏治疗婴儿湿疹的临床疗效观察

目的观察、探讨湿润烧伤膏(MEBO)治疗婴儿湿疹的临床疗效。方法将84例婴儿湿疹患儿随机分为治疗组(44例)和对照组(40例),治疗组外涂湿润烧伤膏治疗,对照组外涂湿疹膏治疗,连续治疗1周后,观察两组疗效。结果治疗组有效率为97.73%,对照组有效率为82.50%;两组疗效经秩和检验,差异具有统计学意义(P0.05);随访1个月,治疗组未见复发,对照组有2例患儿复发。结论湿润烧伤膏治疗婴儿湿疹疗效好,无毒副作用,安全可靠。     

延迟性脾破裂误漏诊原因分析

目的探讨延迟性脾破裂误漏诊原因和预防措施.方法回顾性分析总结12例延迟性脾破裂中的诊断和误漏诊的经验与教训.结果本组延迟性脾破裂的误漏诊5例(41.66%).对多发伤与脾破裂并存可能认识不足,外伤史轻微或伤员隐瞒外伤史,缺乏腹痛-缓解-突然再腹痛的典型病史,缺乏“对冲性脾破裂”力学分析和整体化诊断思路等为其误漏诊的主要原因.结论详细的外伤史和全面系统检查,重视腹以外多发伤掩盖腹内脏器伤及延迟性脾破裂可能.确立外伤-腹内脏器伤-脾破裂整体化诊断思路.不间断地辅以B超检查脾形态学变化和腹内有无积液,腹腔穿刺确定有无血腹、X线胸腹部检查观察左侧胸肋角和膈肌运动情况、必要时CT检查以尽早发现脾包膜下血肿,降低延迟性脾破裂误漏诊率.     

Analysis of the results of the international comparison of activity measurements of a solution of Fe

The results of an international comparison of activity measurements of a solution of ⁵⁵Fe organized by the BIPM in 2005 are reported and analysed. This exercise, which follows the procedures of the CIPM mutual recognition arrangement to update older comparisons, is a renewal of the comparison organized by the BIPM that took place in 1978. A EUROMET comparison was organized in 1996 specifically to compare activity measurements of a ⁵⁵Fe solution by means of liquid-scintillation techniques. Results of these three comparisons are presented and discussed in this paper.

The radionuclide solution was provided by the NPL, which also distributed the samples to the participants. The activity of the ampoules was measured by 16 laboratories using 12 methods producing 25 results. Some general considerations on uncertainty assessments pertaining to the different techniques used are drawn. The outcome of four different estimators is compared from which the presence of at least one outlier can be confirmed. Further measurements should be made to try to reduce the discrepancy between the results. To date the outcome of the present comparison does not show an improvement to that of the 1996 comparison.     

海马头部浅沟消失对海马硬化诊断价值的探讨

目的　探讨海马头部浅沟消失对海马硬化的诊断价值。方法　对 18例经组织学检查证实的海马硬化患者的MRI检查资料和 18例年龄相匹配的对照组进行回顾性分析 ,观察海马头部浅沟的显示情况、海马头部大小和信号改变。结果　 18例海马硬化患者中 ,16例硬化侧海马头部浅沟消失 ,1例硬化侧海马头部浅沟明显变浅 ,几乎消失 ,1例硬化侧海马头部浅沟存在。硬化侧海马头部均有萎缩 ,并在T2 WI和液体衰减恢复 (FLAIR)成像呈高信号。海马头部浅沟消失对海马硬化诊断的敏感性为 88.9% ,特异性为 10 0 %。结论　海马头部浅沟消失是诊断海马硬化的一个可靠征象 ,结合患侧海马有萎缩性改变和T2 加权成像信号增高 ,可肯定诊断海马硬化。     

The value of information of duration of pregnancy in establishment of paternity

Summary In order to get an idea of the value of the information on the duration of pregnancy in establishment of paternity, 511 records from 17 lower courts in Sweden were studied.It was found that when a blood group investigation has been performed, only a small number of cases remain where the paternity claim should be rejected by a court of law for the reason that the period of pregnancy has been extremely long or short.It was shown that only very extreme probability values (percentages) should give reason for rejection of paternity claims if a larger risk of error is to be avoided. The risk is somewhat smaller with long pregnancies than with short ones.The results of this study emphasize the difficulties involved in probability assessment in paternity suits.This report was presented at the Seventh International Medical-Legal Seminar, Stockholm 1971.     

济源市人民医院烧伤科患者病原菌分布特点及抗菌药物使用情况分析

目的研究济源市人民医院烧伤科患者的病原菌分布特点,分析其抗菌药物使用情况。方法将2013-2015年济源市人民医院烧伤科收治的375例烧伤患者作为研究对象,每周收集1次创面分泌物进行细菌培养,对其中检出的部分细菌做抗菌药物敏感性检测,并对部分抗菌药物的使用情况予以分析。结果 2013-2015年病原菌阳性检出率呈逐年下降趋势;铜绿假单胞菌对阿米卡星、氨曲南、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、美罗培南及妥布霉素等抗菌药物的敏感性呈逐年增高趋势,对头孢替坦、头孢曲松及头孢唑啉则呈现出较高的耐药性;鲍曼不动杆菌对一、二代头孢菌素及环丙沙星等抗菌药物的耐药性较高,对亚胺培南、阿米卡星、美罗培南等抗菌药物的敏感性较高;金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌对克林霉素和红霉素的耐药性较高,对其他抗菌药物的敏感性较高;环丙沙星、头孢吡肟、头孢他啶、庆大霉素及四环素的使用强度呈逐年下降趋势,而左氧氟沙星与利奈唑胺的使用强度则呈逐年升高趋势。结论医生在治疗过程叶中,应遵循早期、联合、足量的用药原则,根据药物敏感试验结果进行抗感染治疗;医院应高度重视感染的控制工作,定期开展感染隐患排查,结合病原菌分布特点,及时阔整抗菌药物使用强度,以减少和避免耐药菌的产生。     

应用结肠支架治疗左半结肠肿瘤性梗阻

目的　探讨结肠支架在左半结肠肿瘤性梗阻中的应用价值。方法　结合文献 ,分析了 3例经手术病理证实的左半结肠肿瘤的临床资料。结果　结肠支架植入技术成功率高 ,近期疗效理想 ,多数可在 2 4h内解除梗阻。结论　结肠支架植入是治疗左半结肠肿瘤性梗阻的理想方法 ,为临床进一步治疗准备了条件     

靶控吸入七氟烷与传统吸入七氟烷模式麻醉效果比较

目的比较靶控吸入模式与新鲜气体控制吸入模式两种七氟烷吸入模式下手术患者脑电双频指数（BIS）波动、血流动力学稳定性、辅助药物应用、七氟烷消耗量、苏醒情况与术中知晓等方面的差异。方法选择80例拟行脊柱手术的患者,随机分为靶控吸入组（T组）和新鲜气体控制吸入组（F组）,每组40例。两组麻醉诱导相同,顺序静注咪达唑仑0.05 mg/kg和芬太尼4μg/kg后,吸入8%的七氟烷,然后静注维库溴胺0.1 mg/kg,3 min后气管插管。术中麻醉,T组靶控呼出七氟烷浓度为2.3%,F组持续吸入2.3%七氟烷（氧流量1.5 L/min）,两组舒芬太尼按0.15 ng/ml目标血浆浓度靶控输注（TCI）,按需追加维库溴胺。记录并比较两组患者的脑电双频指数（BIS）值、血压、心率、辅助药物剂量、七氟烷消耗量、苏醒时间、苏醒期躁动和术中知晓等情况。结果两组患者均顺利完成手术,T组在术中和结束时的BIS值高于F组（P〈0.05）,T组术中平均动脉压（MAP）高于F组（P〈0.05）,去氧肾上腺素和七氟烷用量明显低于F组（P〈0.05或P〈0.01）,苏醒时间明显短于F组（P〈0.01）,其余指标两组间无显著性差异。结论七氟烷靶控吸入麻醉模式麻醉深度确实可靠,术中血流动力学稳定,七氟烷消耗量低,术后苏醒迅速完全,值得推广应用。     

消妇炎胶囊辅料的合理性实验研究

目的确定消妇炎胶囊的辅料及用量。方法以浸膏粉的吸湿率和流动性为考察指标,对加入淀粉、糊精及微晶纤维素3种不同辅料后制得的颗粒进行考察,优选出最佳辅料后,再对最佳辅料的不同用量进行考察。结果加入辅料后,颗粒的抗吸湿能力和流动性都明显改善,其中加入淀粉后,分别在6、12、24、48、60 h测得的吸湿率为2.01%、4.03%、5.98%、6.66%、7.31%,休止角为34.61°,均小于糊精与微晶纤维素,表明加入淀粉颗粒质量最好;每80 g浸膏粉中分别加入30、45、60 g淀粉,综合判定45 g较好。结论每80 g浸膏粉加入淀粉45 g为辅料用量参数,制得颗粒的抗吸湿能力和流动性均好,可节约成本。