硫辛酸对糖尿病及其慢性并发症的作用机制研究进展

糖尿病及糖尿病肾病患病率的快速增长,给家庭及社会造成了极大的负担。由于缺乏有效的治疗方法,目前临床上只能防止糖尿病肾病的发生、进展,或肾脏替代治疗。硫辛酸具有强大的抗氧化效应,并通过下丘脑及外周组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路调节机体能量代谢,因而对糖尿病及其慢性并发症发挥保护作用。硫辛酸可通过增强组织细胞AMPK活性进而抑制雷帕霉素靶蛋白信号通路,对细胞生长和蛋白质合成发挥调节作用。该文就硫辛酸对糖尿病及其慢性并发症的作用机制研究进展予以综述。     

AMPK对高糖环境下人牙周膜细胞中RANKL表达的调节作用

目的：高糖可在一定程度上影响牙周膜细胞的生物学功能。本研究皆在探讨高糖对人牙周膜细胞中RANKL表达的影响及该影响是否可被AMPK活化所调节 方法：Real-time PCR和Western blot方法检测细胞中RANKL和 OPG表达,并通过检测AMPK活化特异性底物SAMS及Westernblot检测AMPK磷酸化,观察细胞中AMPK活性变化。此外,通过通过Real-time PCR和Western blot方法检测AMPK活化对牙周膜细胞中RANKL表达的影响 结果：高糖作用下人牙周膜细胞中RANKL mRNA和蛋白表达增高,且AMPK活性明显下降;Compound C可通过抑制AMPK活性上调RANKL表达,而二甲双胍可通过激活AMPK下调RANKL表达;另外,我们还发现二甲双胍可通过激活AMPK显著减少高糖环境下牙周膜细胞中RANKL表达 结论：结果提示高糖作用下牙周膜细胞中RANKL表达升高与AMPK的磷酸化及活性受到抑制有关,且AMPK活化可参与调节牙周膜细胞中RANKL表达     

激活腺苷酸活化蛋白激酶改善离体小鼠心脏缺血再灌注后心肌胰岛素抵抗

目的探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对离体小鼠心脏缺血/再灌注(I/R)后心肌胰岛素抵抗的影响及机制。方法 AMPK基因敲除(AMPKα2-/-)和C57BL/6小鼠各18只,均各随机分为对照(Control)组、I/R组、AICAR(AMPK激活剂)处理(ARCAR+I/R)组。建立Langendorff离体小鼠心脏灌注模型,检测灌注前后灌注液中葡萄糖浓度;灌注结束后,检测灌注液中肌酸激酶(CK)及肌钙蛋白I(c Tn I)浓度;实验结束后,用TTC染色法检测心肌梗死面积;胱天蛋白酶-3活性检测法检测心肌细胞凋亡。结果与Control组相比,I/R组心肌葡萄糖摄取量下降,但是在C57BL/6小鼠,预给予AMPK的激活剂AICAR,可以改善I/R后心肌对葡萄糖的摄取。在AMPKα2-/-小鼠,给予AMPK的激活剂AICAR并不能改善I/R引起的心肌葡萄糖摄取下降。进一步研究发现,在C57BL/6小鼠中,与I/R组相比,给予AMPK的激活剂AICAR能明显降低I/R心脏的心肌损伤,表现为血清中CK及c Tn I含量降低(P 0.05)、心肌梗死面积减小(P 0.05)及心肌细胞凋亡减少(P 0.05)。但是,在AMPKα2-/-小鼠中,AICAR处理并不能有效地改善I/R后心肌的损伤(P0.05)。通过采用心率压力指数进一步衡量I/R后心脏功能,结果发现,在C57BL/6小鼠,给予AICAR促进I/R后心脏收缩舒张功能恢复,但上述保护作用在AMPKα2-/-小鼠消失。结论心脏I/R会引起心肌胰岛素抵抗,引起心肌损伤,但是通过激活AMPK可以部分改善I/R引起的心肌胰岛素抵抗,进而发挥心肌保护作用。     

内毒素对体外培养肝细胞脂质过氧化损伤的作用

本研究通过体外实验,探讨了内毒素对肝细胞脂质过氧化损伤的作用以及SOD的保护效应。用分离的大鼠肝细胞与内毒素(500ng/ml)共同孵育,6h肝细胞MDA、LDH和SOD水平均显著上升(P<0.05～0.01),而且LDH和SOD升高早于MDA;预先将PMN经内毒素处理后,再与肝细胞共孵,激活的PMN能显著损伤肝细胞,引起肝细胞MDA升高和LDH释放增加(P<0.01),SOD活性下降(P<0.05)。给予SOD治疗能部分抑制PMN对肝细胞的损伤作用。上述结果提示,内毒素对PMN引起肝细胞的损伤具有增强作用,内毒素亦可直接诱导肝细胞脂质过氧化损伤,但其机制尚待进一步阐明。     

不同强度短期间歇性减压低氧对血液及心血管组织抗氧化物质的影响

目的 研究不同强度的短期间歇性减压低氧(IHH)对大鼠血液及心血管组织中抗氧化物质的影响.方法 将30只6周龄雄性SD大鼠分为对照组(n=10)、IHH 3 500 m组(n=10)和IHH 5 000 m组(n=10).IHH 3 500 m组和IHH 5 000 m组动物置于低压氧舱分别接受相当3 500 m和5 000 m海拔高度的减压低氧处理,每天4 h,共持续8 d.对照组动物除不接受低氧处理外,其他条件与低氧动物相同.低氧实验结束后,测定血浆、心肌及主动脉组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性与丙二醛(MDA)含量,并测定血浆中尿酸含量.结果 与对照组相比,IHH 5000 m组大鼠血浆CuZn-SOD活性增强,Mn-SOD活性降低,心肌总SOD及Mn-SOD活性均增强,血浆和心肌中的CAT活性增强,MDA含量增加,血浆尿酸含量增加(P<0.05);但IHH 5 000 m组大鼠的主动脉SOD、CAT、MDA与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05).与对照组相比,IHH 3 500 m组大鼠血浆Mn-SOD活性增强,差异有统计学意义(P<0.05);但血浆尿酸、心肌与主动脉的CAT、MDA差异均无统计学意义(P>0.05).结论 中等强度的短期IHH可诱导血液及心肌组织抗氧化物质升高.     

高压氧暴露对小鼠脑内一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

近年来,越来越多的资料表明一氧化氮(NO)具有广泛的生理功能,NO/环磷酸鸟苷(cGMP)信号转导途径在哺乳动物对抗低氧、扩张血管与增加组织灌流中发挥保护组织器官的作用.研究表明,高压氧预处理可保护一过性脑缺血,降低局灶性脑缺血梗死面积[1];并具有减轻心肌缺血/再灌注损伤的保护作用.我们前期实验也发现,高压氧反复暴露可显著增强小鼠低氧耐受能力,说明高压氧预处理可提高机体对缺血、缺氧的耐受能力.反复高压氧暴露是否影响与低氧耐受有着密切联系的NO及NOS的表达?这是否是高压氧诱导低氧耐受效应的机制之一?目前尚未见文献报道.本实验通过硝酸还原酶法、组织化学方法观察高压氧反复暴露对下丘脑及海马中NO含量和NOS活性的影响,以探讨高压氧反复暴露诱导低氧耐受和治疗缺血、缺氧性疾病的可能机制.     

AMPK在内皮细胞中对血管形成的影响

在真核细胞中,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是细胞及全身能量稳态的一个重要调节器,受体内AMP/ATP比率调节,通常被称为代谢敏感性激酶。新近的研究发现,AMPK的激活参与了许多细胞(如骨骼肌细胞、内皮细胞)的分化、迁移和管腔形成。该文就AMPK在血管生成这一生物效应中的显像和作用机制予以综述。     

内毒素对幼鼠肝脏NOS和CcO的影响

目的：探讨内毒素对SD幼鼠肝细胞一氧化氮合酶(Nitfic oxide synthase，NOS)和细胞色素氧化酶(Cytochrome oxidase，CcO)的影响.方法：用组织化学方法观察在内毒素刺激后，SD幼鼠肝细胞NOS和CcO反应产物分布和活性变化．结果：内毒素刺激6h肝细胞内NOS活性最强，内毒素刺激后1～31，，CcO活性呈现逐渐减弱趋势。内毒素刺激6h，CcO活性明显减弱。结论：内毒素可刺激肝细胞NOS活性增强，表明肝细胞内NOS属于诱导性NOS(iNOS)；同时内毒素也可间接使肝细胞CcO活性减弱。     

非甾醇类抗炎药物对晶状体抗氧化酶失活的保护作用

目的　研究非甾醇类抗炎药物对抗氧化酶失活的作用 .方法　以超氧化物歧化酶 ( SOD)和过氧化氢酶 ( CAT)分别与糖加阿斯匹林、布洛芬和扑热息痛孵育 ,于相应的孵育时间采用分光光度计测定酶的活性 .结果　糖与酶的孵育导致时间依赖性的 SOD和 CAT失活 .果糖表现出比 6-磷酸葡萄糖 ( G6P)和葡萄糖更快速的失活效应 .酶孵育 6d后 ,2 0mmol· L- 1阿斯匹林可部分保护 5 0 mm ol· L- 1果糖和 G6P诱导 SOD的失活 ,5 mm ol· L- 1 G6P和 10 mmol· L- 1 葡萄糖诱导 CAT的失活 ,未观察到保护 5 mmol· L- 1 果糖诱导CAT的失活 .而布洛芬有限地保护糖基化诱导 CAT的失活 ,对 SOD的失活无保护作用 .扑热息痛对两者均无保护作用 .结论　阿斯匹林和布洛芬可部分保护糖基化诱导 CAT和 SOD的失活 .这可能在阿斯匹林类药物抑制白内障发病的作用机制中起重要作用 .     

白细胞介素22在肝炎发病机制中的作用研究进展

近年来发现一个新型CD4+T细胞亚群——Th22细胞,白细胞介素(IL)22是其分泌的重要细胞因子。一系列研究发现,刀豆蛋白A诱导的急性肝损害及酒精性肝炎中,IL-22具有抗炎效应并对肝细胞存活发挥着一定的保护作用。但最新研究报道,IL-22在乙肝病毒感染的小鼠模型中促进肝脏炎症发生、发展。据此推测,IL-22在肝炎中可能既有宿主防御、组织修复作用,也有促炎、致病性作用,但这看似矛盾的双重作用功能的具体调节机制并不十分明确。因此,对IL-22细胞深入研究将会有助于对肝脏疾病进一步认识,并为肝脏疾病的有效预防及治疗提供新策略。     

连翘酯苷B抑制小鼠脑缺血/再灌注引起的氧化应激损伤：基于激活AAMPK/DAF-16/FOXO3通路

目的 研究连翘酯苷B(FB)对脑缺血/再灌注（I/R）引起的氧化应激损伤的保护作用及作用机制。方法 将90只C57BL/6小鼠随机分为5组,假手术组（Sham）,模型组（model）,FB低、中、高剂量组（10、20、40 mg/kg）,采用大脑中动脉阻塞（MCAO）2 h,再灌注24 h,制备脑I/R模型。试剂盒检测小鼠脑组织ROS、MDA、PCO、8-OhdG、SOD、GSTα4、CAT、GPx水平,Western blot检测小鼠脑组织AMPK、P-AMPK、DAF-16、FOXO3、P-FOXO3蛋白表达。在此基础上,采用AMPK抑制剂Compound C(CC)验证FB是否通过AMPK发挥抑制氧化应激损伤作用,将36只C57BL/6小鼠随机分为,Sham组、model组、FB(40 mg/kg)组、FB(40 mg/kg)+CC(10 mg/kg)组。TTC染色检测脑梗死体积,试剂盒检测ROS、SOD水平,Western blot检测小鼠脑组织AMPK、P-AMPK、DAF-16、FOXO3、P-FOXO3蛋白表达。结果 与model组比较,FB可降低小鼠脑组织ROS、MDA...     

重组杀菌渗透性增加蛋白21在大鼠内毒素血症中保护机制的探讨

目的探讨重组杀菌渗透性增加蛋白21(rBPI21)在大鼠内毒素血症中保护效应的机制。方法给内毒素血症大鼠注射不同剂量的rBPI21,动态观察rBPI21不同剂量组大鼠血液中内毒素(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的变化。结果rBPI21治疗1组(rBPI21剂量为0.625mg/kg)大鼠,6,12h血浆LPS含量明显低于内毒素组大鼠相同时间点LPS含量(P<0.01),血清TNF-α含量各检测时间点均明显低于内毒素组大鼠相同时间点的含量(P<0.01)。与内毒素组大鼠相比,rBPI21治疗2、3、4组(rBPI21剂量分别为1.25,2.5,5.0mg/kg)大鼠各检测时间点血浆LPS、血清TNF-α含量均明显降低(P<0.01)。结论rBPI21对内毒素血症大鼠的保护作用机制主要是通过促进体内LPS的聚合和清除,降低LPS活性,减少TNF-α等细胞因子的过度表达。     

酸枣仁脂肪油提取物对大鼠血脂及SOD、CAT活性的影响

目的观察酸枣仁脂肪油提取物对高血脂大鼠血脂的调节作用,以及对血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、全血氧化氢酶(CAT)活性的影响。方法取雄性SD大鼠50只,随机分为生理盐水组,高脂血症组,酸枣仁脂肪油提取物高、中、低剂量组;灌胃30d后,取血测其总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL),以及全血CAT、血清SOD、MDA活性。结果与高血脂组相比,酸枣仁脂肪油提取物各剂量组大鼠血清TC、TG、LDL含量均明显降低(P<0.05);血清SOD及全血CAT含量均明显增强(P<0.05),而MDA含量则明显降低。结论酸枣仁脂肪油具有调节血脂作用,并可增强SOD、CAT活力,减少脂质过氧化损伤。     

甘氨酸对ATP耗竭诱生性细胞自噬的作用及其机制

目的:研究甘氨酸(Gly)在ATP耗竭性细胞自噬中的作用及其可能机制?方法:用脂质体转染法将绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3(GFP-LC3)质粒导入犬肾细胞(MDCK)中,在倒置荧光显微镜下观察细胞内自噬体的生成?同时收集细胞总蛋白,用Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达,并检测AMP激活的蛋白激酶(AMPK)的磷酸化活性改变?结果:MDCK细胞经转染GFP-LC3质粒后,可见细胞浆内散布明显的点状荧光颗粒;转染细胞被剥夺ATP后,发现细胞内自噬体数目明显增多,GFP-LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显增高,AMPK的磷酸化水平增强?用甘氨酸处理细胞后,发现自噬体较ATP耗竭组明显减少,GFP-LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显降低,细胞AMPK的磷酸化水平也有所降低?结论:ATP耗竭能诱导细胞的自噬性死亡,Gly可抑制ATP耗竭细胞的自噬,其机制可能与AMPK活性受抑有关?     

内毒素预处理对大鼠前脑缺血再灌注后海马神经元保护效应的研究

目的 探讨内毒素预处理对大鼠前脑缺血再灌注后海马神经元的保护效应及其可能机制。方法 采用大鼠前脑缺血再灌注模型，动态观察内毒素预处理对脑组织SOD、GSH-PX、MDA活性的影响及海马CA1区神经元计数的变化。结果 内毒素预处理后脑组织内生性SOD、GSH-PX活性显著增高，MDA活性降低，海马CA1区神经元计数下降幅度减少。结论 ①内毒素预处理对前脑缺血再灌注后海马神经元的损伤有明显保护作用；②其机制可能与增强中枢神经系统内生性抗过氧化物酶类的活性有关。     

肥胖大鼠骨骼肌AMPK表达及其与糖脂代谢的关系

目的 探讨肥胖大鼠骨骼肌组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的表达及其对糖脂代谢的影响.方法 将28只6周龄雄性SD大鼠随机分为普通饮食组(NC组,15只)和高脂饮食组(HF组,13只),分别测体重(BW)、血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)等指标.采用免疫印迹法测定各组大鼠骨骼肌中AMPK和磷酸化AMPK(p-AMPK)的水平.以p-AMPK/AMPK代表AMPK的活性.结果 与NC组大鼠相比,HF组大鼠的BW、FFA、TG、FPG、FINS均明显升高(P＜0.05),骨骼肌中AMPK表达降低,但差异无统计学意义(P＞0.05),p-AMPK表达及AMPK活性(p-AMPK/AMPK)降低显著(均P＜0.05).骨骼肌组织p-AMPK表达水平与FPG、FFA呈负相关(P＜0.05),AMPK活性与FPG、FFA、TG呈负相关(P＜0.05),与FINS无相关性.结论 高脂饮食诱导大鼠营养性肥胖,降低AMPK的活性,从而导致TG和TCH的合成增加,血糖升高,脂质在外周组织沉积增加.     

枸杞子多糖、黄芪多糖、刺五加多糖和鼠伤寒杆菌内毒素多糖对LAK活性的调节作用

采用~(125)IUdR释放法测定了不同浓度的枸杞子多糖、黄芪多糖、刺五加多糖及鼠伤寒杆菌内毒素多糖对不同剂量rIL-2激活的杀伤细胞(LAK)抗肿瘤活性的影响,发现4种多糖在一定浓度条件下均可在体外增强LAK活性。枸杞子多糖在0.01～0.1mg·ml~(-1)、黄芪多糖和刺五加多糖在0.01mg·ml~(-1)时增强作用最显著(P<0.001),内毒素多糖在0.0001～0.1μg·ml~(-1)时可增强LAK活性,在0.0001μg·ml~(-1)时最显著。4种多糖浓度过低或过高则不能增强,甚至抑制LAK活性。     

腺苷脱氨酶、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性与幽门螺杆菌的关系

该文旨在研究腺苷脱氨酶(ADA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性与幽门螺杆菌(H P)的关系。99例患者纳入该研究。每例患者获取8份胃窦黏膜活检组织以进行ADA、CAT和SOD活性的生化与组织学评估。根据更新的悉尼方法评价H P的密度。根据悉尼分类法,患者被分为3组。目前研究发现有H P感染的患者ADA活性较高,且H P密度高的患者ADA活性更高。该研究也发现随着H P密度的增加SOD水平显著升高(P<0.05)。此外,H P阳性患者SOD活性明显高于阴性者。在一些胃窦活组织标本中未发现CAT活性。H P感染患者显著高水平的ADA活…     

重组白细胞介素2对乙型肝炎患者自然杀伤活性的调节

应用~(125)I释放法同时观察了38例乙型病毒性肝炎病人及22例正常人外周血单个核细胞经重组白细胞介素2作用前后自然杀伤细胞活性,并对其活性改变及调节机制进行探讨。发现慢性活动性肝炎和重症肝炎病人血清中存在某种抑制因子,该抑制因子能抑制白细胞介素2活性或阻断其作用的发挥。     

电针通过增强AMPK/mTOR通路介导的自噬治疗神经源性尿潴留

目的：电针可通过增强自噬流、促进神经元再生、重塑轴突和髓鞘等实现对脊髓损伤的保护作用,但其在神经源性尿潴留中的作用尚不明确。本研究探讨电针通过增强腺苷活化蛋白激酶(AMP activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路介导的自噬治疗神经源性尿潴留的作用机制。方法：建立骶髓损伤后神经源性尿潴留大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、电针组(采用电子刺激针对次髎、中极、三阴交行电针,每天1次,每次20 min,共7 d)、电针+AMPK抑制剂组(在电针组处理的基础上,在第1和4天,于L2～3椎间隙周围肌内注射100μg的AMPK抑制剂compound C)。另设正常组不进行任何处理。采用多通道生理记录仪记录膀胱最大容量、膀胱基础压力、漏尿点压力、膀胱顺应性;HE染色观察膀胱组织形态;透射电镜观察自噬情况;免疫荧光染色观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)II、Beclin1蛋白质的表达;蛋白质印迹法检测膀胱组织中AMPK、磷酸化的AMPK(p-AMPK)、mTOR、磷酸化的mTO...