2012-2018年山东省济南市A族β溶血性链球菌分子分型特征研究

目的了解济南市A族β溶血性链球菌（GAS)的emm分型特点，为猩红热病原学监测提供数据。方法收集2012 — 2018年济南市GAS菌株，应用PCR方法扩增emm基因，扩增产物经测序、比对，获得菌株emm基因型。结果共获得GAS菌株143株，检测到5个emm基因型，其中emm12占55.2%（79/143），emm1占42.0%（60/143），其他emm基因型占2.8%（4/143）。 2015年和2016年仅分到11株菌，均为emm12。 患者分离菌株116株，分为4种emm基因型，emm1（46株）和emm12（67株）共占97.4%（113/116），emm22（1株）和emm75（2株）共占2.6%（3/116）。 143株GAS菌株中，菌株数量排在前3位的分别为市中区（85株）、槐荫区（35株）和历城区（9株）。结论2012 — 2018年济南市GAS菌株优势基因型为emm12和emm1。 2013年和2014年以emm1为主，其余年份以emm12为主。     

深圳西部地区儿童A族链球菌感染的emn基因型与T型关系与作用

选择深圳西部地区常见疾病感染GAS的儿童为研究对象。采用聚合酶链式反应扩增GAS的M蛋白的N末端,对产物进行测序分析。结果 200份标本中,共分离出GAS 92株,阳性率为46.00%(92/200)。主要流行菌株基因型emm1和emm12,在性别、年龄、临床诊断中的差异无统计学意义(P0.05)。emm基因型方法快速、准确,深圳西部地区GAS菌株emm基因型主导型的emm1和emm12等,且和T分型的对应关系良好,在不同人群及疾病中的分布差异不明显。     

深圳地区儿童A群致病性链球菌感染流行现状及M蛋白基因分型分析

目的 了解深圳地区儿童A群致病性链球菌(group A streptococcus,GAS)感染流行现状及其M蛋白基因(emm)分布状况,为该区GAS疫苗的研制提供科学依据。方法 收集2014年3月～2015年12月来医院门诊和住院部就诊的急性咽炎、急性化脓性扁桃体炎、风湿热及猩红热患儿的咽拭子及皮肤化脓性感染伤口分泌物共1 634例,分别对标本进行细胞培养与鉴定,分析不同年龄儿童GAS感染流行情况,并对GAS的M蛋白N末端进行PCR扩增测序,分析GAS的emm基因分型及其在疾病中的分布情况。结果 1 634例标本中共分离鉴定出61株GAS,检出率为3.73%(61/1 634),其中学龄前和学龄儿童分别检测出14株和47株,检出率分别为22.95%(14/61)和77.05%(47/61),学龄儿童GAS感染率明显高于学龄前儿童,两者结果之间差异有统计学意义(χ2=32.035,P<0.01),但学龄儿童不同年龄段GAS感染率之间比较差异无统计学意义(χ2=1.572,P>0.05); GAS在急性咽炎和化脓性扁桃体炎的患儿中检出率最高,分别为34.43%(21/61)和27.87%(17/61); 61株GAS的emm基因型以emml和emm12最为多见,分别占40.98%(25/61)和29.51%(18/61)。结论 深圳地区学龄儿童GAS感染率明显高于学龄前儿童,且以急性咽炎和急性化脓性扁桃体炎患儿检出率最高。61株GAS感染的emm基因以emm1和emm12为主,因此,各地加强GAS的emm基因分型研究,可为该区GAS疫苗的研制提供重要的分子流行病学依据。     

2011年北京市朝阳区儿童A组溶血性链球菌的emm基因分型及耐药性分析

目的 了解2011年北京市朝阳区儿童感染A组溶血性链球菌(GAS)的emm基因分型及对红霉素和克林霉素的耐药情况及耐药基因谱的特点。 方法 从猩红热或咽峡炎及扁桃体炎儿童患者的咽拭子培养分离获得71株GAS,应用PCR扩增emm基因及红霉素耐药基因mefA、ermA、ermB和转座子基因Tn916;采用E-test法进行药敏试验并分析耐药情况。 结果 北京市朝阳区儿童感染GAS的emm12.0基因型占87.4%,其次为emm1.0型(9.8%)、emm22.0型(1.4%)、emm75.0型(1.4%);GAS对红霉素和克林霉素的耐药率为100%和95.8%,两种药物的交叉耐药率为95.8%;耐药基因ermA、ermB、mefA和转座子基因Tn916的携带率分别为5.6%、90.1%、4.2%和90.1%。 结论 北京市朝阳区2011年儿童感染GAS的主要流行株为emm12.0型,对红霉素普遍具有较高的耐药率且与克林霉素之间存在显著的交叉耐药;ermB基因是决定本地区2011年儿童感染GAS对红霉素耐药的重要基因;而Tn916转座子基因在GAS菌株间耐药基因扩散中起重要作用。     

上海成人和儿童患者分离的A群链球菌分子流行病学分析

目的研究和比较上海成人和儿童患者分离的A群链球菌(GAS)耐药、克隆分型、emm分型、生物膜形成及毒力因子携带等分子特征,为感染控制及治疗提供临床流行病学信息。方法 39株成人(13株)和儿童(26株)患者分离的GAS,用K-B纸片法测定对9种常用抗菌药物的敏感性;采用多位点序列分型(MLST)方法进行克隆分型;采用编码M蛋白的emm基因序列分析进行基因分型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法分析不同emm型菌株的基因组特征;采用半定量生物膜形成试验分析其生物膜形成。聚合酶链反应(PCR)方法检测20个包括超抗原在内的GAS主要毒力基因。结果 39株GAS主要基因型为emm12-ST36(64.1%),emm1-ST28(17.9%);成人和儿童均以emm12-ST36为主。儿童菌株对红霉素和克林霉素的耐药率显著高于成人(P=0.008 7)。相同emm分型-克隆分型菌株在PFGE脉冲场带型中呈现高度聚集。生物膜形成与emm1型菌株明显相关(P=0.005),与红霉素和克林霉素耐药密切相关(P=0.000 3),儿童菌株的生物膜形成强于成人菌株(P0.000 1)。毒力基因speG、speB、sdaB、Mac全部阳性;speA、speJ、spd3与emm1型菌株有明显相关(分别为P0.000 1、P=0.005 5、P0.000 1);speI、sic与emm12型菌株有明显相关(均为P0.000 1);speH、ssa在emm12和emm1型菌株中有明显分布差异(分别为P=0.036 4、P=0.025 8);20个毒力基因在成人和儿童emm12型菌株中均没有明显分布差异(均为P0.05)。结论 emm分型与克隆分型、PFGE、毒力基因有很好相关性。成人和儿童菌株在耐药情况、生物膜形成中均存在差异。特定emm型菌株与抗生素耐药和致病力密切相关,为感染控制提供依据。重要毒力基因将是未来研制新型疫苗降低GAS感染的新型靶标。     

2011-2014年北京地区儿童咽扁桃体炎感染病例A组链球菌emm分型研究

目的 了解2011-2014年北京市儿童咽扁桃体炎感染病例A组链球菌(group A streptococcus,GAS)emm基因型别分布情况。 方法 采集2011-2014年北京地区36家医院儿科门、急诊咽扁桃体炎感染病例咽拭子标本,分离GAS菌株,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增emm基因进行测序和分型,分析不同人群,和临床诊断结果的emm型别特征。 结果 共有739个病例纳入研究,检测到10种emm基因型和32种emm基因亚型。主要基因型为emm12和emm1,分别占所有型别比例的62.2%和35.0%;主要基因亚型为emm12.00和emm1.00,分别占所有亚型的比例为53.2%和31.9%;发现两种新的emm亚型,分别为st1258和st485。基因型emm12 GAS感染人群主要分布在中心城区,占59.8%;基因型emm1 GAS感染人群主要分布在北部郊区,占49.4%。这两种基因型的地区分布,时间分布和感染人群的平均年龄差异均有明显的统计学意义,人群性别构成差异无统计学意义。 结论 北京地区儿童GAS咽扁桃体炎感染病例emm基因优势型别为emm12和emm1,这两种型别在不同地区和年龄人群中的分布存在明显差异。     

纤维结合蛋白基因在儿科A族β溶血性链球菌的分布及与大环内酯类抗生素耐药的关系

目的研究纤维结合蛋白基因在我国儿科A族β溶血性链球菌(GAS)中的分布及与大环内酯类耐药之间的关系。方法收集3所儿童医院191株病原菌株,48株健康携带株,采用琼脂稀释法测定5种大环内酯类抗生素的MIC值,确定其药物敏感性;PCR扩增及测序对菌株进行emm分型;PCR检测纤维结合蛋白基因prtF1、prtF2和大环内酯类抗生素耐药基因ermB、ermTR和mefA。结果分离株的ermB阳性的有186株,ermTR阳性的有11株,prtF1、prtF2及两者同为阳性的菌株携带率分别为67.36%、66.11%和59.00%,prtF1在病原菌株和健康携带株中没有差别,prtF2在健康分离株携带率高于病原菌株,prtF1、prtF2两者集中在emm12,emm22型菌株中阳性率高,而在emm1、emm4型中很少存在。prtF1和prtF2同时阳性在ermB阳性大环内酯类抗生素耐药菌株中更为常见。结论在我国儿科GAS分离株中,以共同携带prtF1/prtF2基因的emm12型菌株为主,多存在于健康儿童中,这可能是造成我国的GAS感染耐药水平高,而侵袭性不高的原因之一。     

上海市嘉定地区感染患儿分离的化脓链球菌分子流行病学分析

目的了解上海市嘉定地区感染患儿分离的化脓链球菌emm分型及其耐药特点,为临床治疗和感染控制提供相关信息。方法收集2014年11月至2015年7月在上海交通大学医学院附属瑞金医院北院门诊就诊的急性上呼吸道感染、急性扁桃体炎、急性咽炎等患儿或带菌者咽拭子样本分离的化脓链球菌75株。应用API 20 Strep链球菌鉴定板条进行菌株鉴定,并用纸片扩散法检测菌株对8种常用抗菌药物的敏感性。应用聚合酶链反应(PCR)扩增编码M蛋白的emm基因,对PCR扩增后的emm基因产物进行测序,通过比对,获得菌株的emm分型结果。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析不同emm基因型菌株的特征,并将75株化脓链球菌结果导入Bio Numerics软件进行聚类分析。结果上海市嘉定地区化脓链球菌对红霉素、克林霉素的耐药率分别为94.7%和97.3%,对红霉素和克林霉素的双重耐药率为93.3%。具有相同emm基因型的菌株在PFGE带型上高度聚集,其中存在占优势的PFGE型。在临床分离的75株化脓链球菌中,emm1基因型菌株25株(33.3%,25/75),emm12基因型菌株49株(65.3%,49/75),emm22基因型菌株仅1株(1.3%,1/75)。结论目前上海市嘉定地区儿童咽拭子样本分离得到的化脓链球菌对红霉素普遍耐药,且与克林霉素存在较严重的交叉耐药现象。emm12或emm1基因型菌株是上海市嘉定地区儿童主要感染的化脓链球菌类型。     

2005-2017年广东省猩红热流行特征分析

目的分析2005 — 2017年广东省猩红热的流行特征,为防控猩红热提供科学依据。方法应用描述性流行病学方法分析国家疾病监测信息报告管理系统中2005 — 2017年广东省猩红热病例时间、地区和人群分布特征;应用Joinpoint软件估计发病率平均年度变化百分比（AAPC）,分析猩红热发病趋势;对2017年分离的66株A族β溶血性链球菌（GAS）进行emm基因分型和抗生素敏感性分析。结果2005 — 2017年广东省共报告猩红热病例20 157例,年均发病率为1.46/10万,无死亡病例。 发病呈夏、冬两季高发特点;报告发病率高的地区为珠江三角洲地区,病例数占全省的95.79%;病例主要集中在3 ~ 7岁,以托幼儿童、散居儿童和学生为主。 广东省猩红热发病水平总体呈上升趋势,AAPC为26.4%（95%CI:16.9% ~ 36.7%）。 GAS菌株emm基因型别以emm12型为主（65.12%）,emm1型次之（32.56%）;菌株对红霉素、克林霉素、四环素耐药;对青霉素、头孢噻肟和左旋氧氟沙星均敏感。结论2005 — 2017年广东省猩红热发病水平总体呈上升趋势,三间分布特征未见明显变化;当前GAS菌株流行基因型为emm12和emm1,且菌株对青霉素敏感。     

我国四省市儿童A族链球菌T型分布状况

A组链球菌 (GAS)M分型多达 80多个血清型 ,由于M分型血清难以制备 ,目前大部分GAS分型仍以T分型作为辅助分型的方法 ,因为每个T分型相对应于数个特定的M分型 ,因而结合OF分型可以初步判断GAS的M分型状况。我们在 1 993～ 1 994年对包括重庆市、湖北省、吉林省和广东省 4个省市的小学生进行GAS调查研究。一 .对象和方法1 .对象 :以北方吉林、西南重庆市、华中湖北、华南广东四、五年级 8～ 1 3岁的小学学生作为观察对象 ,采用随机整群抽样的方法 ,分别在吉林丰满区选择 6个班 2 1 6名、重庆市九龙坡区和江北县 7个班 2 83名、湖北荆…     

北京地区儿童A组链球菌感染临床分离株的emm分型研究

目的了解2015年北京地区分离自呼吸道感染患儿的A组链球菌(GAS)emm型别分布情况。方法采集2015年5月至7月北京市16个区16家医院儿科门、急诊临床猩红热病例和咽部感染病例咽拭子标本分离的GAS菌株。应用PCR扩增联合基因测序技术,测定emm型别,并比较不同特征组间的emm基因型别差异。结果从各区医院采集的咽拭子标本中分离247株GAS菌株。其中来自猩红热患儿73株(29.6%,73/247),咽部感染患儿174株(70.4%,174/247)。共检测到6种emm基因型,emm12占53.4%(132/247),emm1占44.1%(109/247),其他型别(emm22、emm75、emm131、emm241)占2.5%(6/247)。emm型别的分布在不同年龄组间存在差异,且差异有统计学意义(P0.05),emm1在6~12岁年龄组中的构成比较高,emm12在1~5岁组中构成比较高。emm型别在地区、性别、疾病类型间差异无统计学意义(P0.05)。结论 2015年北京地区儿童A组链球菌的emm基因型中,主要的流行型别为emm12和emm1,其分布不同年龄组间存在差异。     

应用PCR－SSP对异基因骨髓移植供受者HLA－DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ＿１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ＿１位点的纯合体和杂合体等位基因，并能检测出单一碱基的点突变；它将ＰＣＲ扩增和检测两个步骤合并为一次完成，操作更简便、快速。并已将ＰＣＲ－ＳＳＰ方法成功地用于１５对异基因骨髓移植的供、受者的分型。ＰＣＲ－ＳＳＰ作为基因分型的有效技术，可为骨髓来源提供直接的科学依据。     

SARS冠状病毒Mc区克隆及序列分析

目的：构建SARS冠状病毒（SARS-CoV）GD322株M基因膜内区（Mc区）重组表达质粒，并对目的序列进行序列分析。方法：根据GenBank中公布的SARS-CoV Tor2株M基因序列，设计一对引物，采用RT-PCR法从SARS-CoV GD322株基因组中扩增Mc区．克隆至pET-32a（＋）载体中，转化大肠杆菌BL21后测序，利用Clustal X分析所测序列翻译的氨基酸与81株SARS-CoVMc区翻译的氨基酸序列的差异。结果：测序结果表明该区与Tor2株对应核苷酸序列同源性为100％。与已收集的81株SARS-CoVMc区所译氨基酸（Mc蛋白）相比，与77株（占95．1％）Mc蛋白完全同源．与4株（占4．9％）仅有一个氨基酸改变。结论：本试验成功构建SARS-CoV Mc区重组表达质粒：SARS-CoV各毒株间Mc蛋白氨基酸序列差异极小，提示利用任一毒株Mc蛋白制备单抗和疫苗具有普遍意义．     

九江市首例人感染猪链球菌病的病原学特征分析

摘要：目的 通过对九江市 １ 例人感染猪链球菌患者脑脊液标本分离的菌株进行鉴定分型，了解菌株的分子特征。 方法 提 取病例脑脊液标本中 ＤＮＡ，ＰＣＲ 检测 １６Ｓ ｒＲＮＡ、血清 ２ 型猪链球菌特异性荚膜多糖编码基因片段 ｃｐｓ２Ｊ、猪链球菌毒力基因溶 菌酶释放相关蛋白编码基因（ｍｒｐ）、溶血素基因（ｓｌｙ）及细胞外蛋白因子编码基因（ｅｆ），Ｅ?ｔｅｓｔ 条测定 １３ 种药物的敏感性，并进 行多位点序列分型（ＭＬＳＴ）。 结果 病例标本中猪链球菌 １６Ｓ ｒＲＮＡ、ｃｐｓ２Ｊ 和 ３ 种毒力基因（ｍｒｐ、ｓｌｙ、ｅｆ）均为阳性，药敏检测显 示对链霉素、壮观霉素、头孢克肟、庆大霉素、氯霉素、青霉素、利福平、万古霉素、复方磺胺甲噁唑和克林霉素敏感，红霉素、四 环素和阿奇霉素耐药， ＭＬＳＴ 分析结果为 ＳＴ１ 型。 结论 该病例的病原菌是携带 ３ 种毒力基因的 ＳＴ１ 型猪链球菌血清 ２ 型菌 株，具有较强毒力。     

化脓链球菌致中毒性休克综合征临床分析

目的了解化脓链球菌致中毒性休克综合征(STSS)的实验室检查特征,为临床诊治和流行病学调查提供参考依据。方法回顾性分析1例化脓链球菌感染致STSS患者的临床诊治经过和实验室检查数据,对分离株进行emm基因分型,并检测其常见超抗原基因。结果该患者因左脚趾皮肤溃破致左下肢严重感染,并伴多器官功能衰竭及STSS。伤口分泌物分离出化脓链球菌,对青霉素敏感。分离株为emm 1.1型,携带speA、speC、spek、ssa和smeZ等5种超抗原基因。临床采取清创、负压封闭引流技术(VSD)和青霉素联合克林霉素抗感染等综合治疗,患者痊愈出院。结论化脓链球菌致STSS可引起严重的临床症状,与其携带多种超抗原基因有关。外科治疗和有效抗感染是保证治疗成功的关键。     

无乳链球菌的分子分型及耐药特征分析

目的了解北京一家三级医院临床分离无乳链球菌的血清型、耐药性、毒力基因的特征及多位点序列分型（MLST）特征。方法收集2018年一家医院住院患者分离到的无乳链球菌,通过聚合酶链式反应方法进行分子血清型分型和毒力基因检测,用MLST方法进行分子分型,通过VITEK 2药敏分析仪对菌株耐药性进行分析。结果该院2018年分离到31株无乳链球菌,MLST以序列分型（ST）10为主,占29.03%,其次为ST17、ST19、ST1、ST12、ST24和ST485,另有2株菌为新的ST;血清型分型以Ⅰb 为主,占45.16%,其次为Ⅲ、Ⅴ及Ⅰa型。 31株无乳链球菌中对氨苄西林、奎奴普汀、利奈唑胺和万古霉素全敏感,对四环素耐药率最高（64.52%）,其次为左氧氟沙星（58.06%）和克林霉素（38.71%）。 克林霉素耐药仅发现于Ⅰb 和Ⅴ型。本研究的31株无乳链球菌,hylB、cylE、cfb和lmb毒力基因检测均为阳性;毒力基因bac和fbsA在不同分型中携带率有差异,其中bac及fbsA在Ⅰb型中携带率较高。结论本研究基于MLST分型和血清分型,表明不同型别间耐药性和毒力基因的差异,提示Ⅰb和Ⅴ型的耐药性及Ⅰb型的毒力需要引起关注。     

Ax新基因的序列分析及其家系的研究

目的探讨Ax亚型中国汉族家系的ABO基因的分子生物学特点。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应扩增法对血清学定为Ax血型的家系总共5份样本做基因分型，对其中4份样本进行直接测序，发现2份有异常杂合序列，进一步采用单倍体特异性引物进行序列测定。结果这个家系中2份ABO基因序列与ABO＊A101相比有3个位点发生了突变（467C〉T、829G〉A，1009A〉G），定为舭新基因，Genbank注册号为DQ092380。结论829位突变导致编码ABO糖基转移酶的277位氨基酸由缬氨酸（Val）转变为甲硫氨酸（Met），很大程度上降低了A2糖基转移酶的活性。推测277位氨基酸处于ABO血型基因编码的转移酶的活性区域。     

范可尼贫血患者FANCA基因突变研究

目的研究范可尼贫血（FA）患者致病基因的突变类型及其蛋白质的表达和功能。方法以3例来自FA-A型患者的原始淋巴细胞系为研究对象，用Western blot和免疫沉淀法分析FANCA、FANCD2蛋白的表达以及FANCA与FANCF蛋白的相互作用，RT-PCR方法检测FANCA基因的转录，多重性连接依赖的探针扩增（MLPA）法以及DNA序列测定确定FANCA基因的突变类型。结果3例FA-A型患者均未检测列FANCA蛋白的表达，FANCD2蛋白不能发生单泛素化（monoubiqitination）修饰，并发现其FANCA基因均存在双等位基因的病理性突变。结论3例FA-A型患者均无功能性FANCA蛋白表达；基因缺失、移码突变和剪切位点突变是FANCA基因的主要失活方式。     

ABO血型系统的基因分型

本文介绍了ＡＢＯ血型系统的分子基础及在此基础上对ＡＢＯ血型系统的基因分型的几种主要方法：ＰＣＲ－ＤＮＡ测序法、ＰＣＲ－限制性内切酶酶切法、ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、ＰＣＲ－序列特异性引物（ＳＳＰ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）等。另外还介绍了基因分型技术在ＡＢＯ亚型研究中的应用。     

汉坦病毒M基因区核苷酸序列及G1膜蛋白部分氨基酸共享序列分析

目的对青岛地区31株汉坦病毒分离株M区基因序列测定及基因分型研究，为疫苗接种提供依据。方法从64例肾综合征出血热(HFRS)患者发热期血清标本中提取RNA，应用套式逆转录聚合酶链反应扩增汉坦病毒基因组M片段，G1基因区克隆并测定核苷酸序列和部分共享氨基酸序列，且对测定结果应用DNA Star和Prosis软件进行分析。结果64份标本中测出汉滩型(HTN)6份，占9％；汉城型(SEO)25份，占39％；总阳性率48％。SEO型汉坦病毒间核苷酸序列的差异相对较小，其基因的离散度为0．3％～8．9％。HTN型汉坦病毒变异率较高，基因的离散度为2．6％～11．2％。结论SEO型汉坦病毒基因型相对保守，而HTN型变异率较高；M区段可编码一个具有稳定的保守抗原表位。