杂交瘤细胞染色体制备及生物学意义初探

目的:改进杂交瘤细胞培养及染色体制备方法。方法:取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0常规融合,用不同的培养基制备杂交瘤细胞,并在制备杂交瘤染色体时改变秋水仙素作用的时间。结果:12孔板中加入DMEM培养液的杂交瘤细胞株生长良好,其中6孔板加秋水仙素培养1h,染色体形态最佳,数目稳定。结论:DMEM培养液更适合此种杂交瘤细胞的培养。制作染色体时缩短秋水仙素培养时间,使得杂交瘤细胞染色体形态更接近于两种亲本细胞。     

临床检验中影响外周血淋巴细胞培养的因素分析

目的:观察与分析影响外周血染色体标本制备的细胞培养环节的主要因素。方法:以规模化生产的淋巴细胞培养液为材料,观察秋水仙素浓度与处理时间、外周血用量、培养时间等对淋巴细胞培养及染色体标本制备的影响。结果:秋水仙素浓度与处理时间、外周血用量等对全血淋巴细胞的培养和染色体形态观察的效果有显著的影响。结论:5ml培养液中,加入0.2～0.4ml外周血培养68～69h、以0.064μg/ml秋水仙素处理3h,可获得高分裂相与高分辨率染色体的淋巴细胞。     

秋水仙素在人类染色体G显带制作中的应用与讨论

人类外周血淋巴细胞培养及染色体G显带标本制作技术,是诊断染色体畸变的常用方法。染色体G显带制作技术较局限,每一个处理步骤及使用试剂的阈值均可决定制备的成败,其中秋水仙素处理是获得标本相的关键步骤。经过多次实验观察,笔者分析、总结了实验中每一个步骤的精确数值,细胞培养至68小时已具备旺盛的分裂能力,在阻断培养的4小时内任意时间加入相应剂量的秋水仙素,能获得形态完好、大小适中、分散均匀、轮廓清楚的中期染色体标本相。     

秋水仙素对染色体制备的影响研究

目的探究秋水仙素的浓度和处理时间对淋巴细胞染色体制备的影响。方法研究不同秋水仙素终浓度(0. 2μg/ml,0. 3μg/ml,0. 4μg/ml)在不同秋水仙素处理时间(6 h,8 h,10 h)作用下对染色体中期分裂相的影响。结果秋水仙素终浓度和秋水仙素处理时间的交互作用对分裂指数(F=11. 982,P=0. 000 0. 05)和分裂相合格率(F=4. 632,P=0. 004 0. 05)影响差异有统计学意义。通过简单效应分析和事后多重比较分析,0. 3μg/ml秋水仙素处理8 h后,染色体分裂指数和分裂相合格率均较高,分别为58. 8%和55. 8%。结论对秋水仙素终浓度和处理时间定量控制,试验重现性良好,染色体中期分裂相数目充盈,形态良好,染色体畸变分析更准确客观。     

染色体平衡易位致流产及胎儿畸形3例

染色体平衡易位因无遗传物质丢失 ,故表型正常 ,临床称之为平衡易位携带者 ,其妊娠结局常表现为流产、死胎或胎儿畸形。 2 0 0 0～ 2 0 0 1年 ,我们在染色体常规检查中 ,发现女性平衡易位携带者 3例 (3/ 2 0 1) ,现报告如下。1　临床资料抽取受检夫妇双方肘静脉血 1～ 2 ml,进行常规微量外周血染色体培养 ,收获前 1～ 2小时秋水仙素阻断细胞有丝分裂 ,培养至 72小时收获细胞。并在 6 0℃下老化 6～ 8小时 ,然后胰酶分带、吉姆萨染色 ,最后进行镜下核型分析。每例标本分析核型30个。[例 1]2 3岁 ,第一次妊娠 3个月 ,阴道出血 ,B型超声报告无…     

蓝氏贾第鞭毛虫染色体的制备

目的:探讨蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)在分裂过程中是否形成典型的凝集染色体以及染色体的数目.方法:用改良的TYI-S-33培养基培养贾第虫滋养体.分别在不同浓度的秋水仙素(0、0.05、0.10、0.20、0.40和0.80 mg/L)、低渗处理不同时间(30、50、55、65和80 min)和不同固定液[V(甲醇):V(冰醋酸)为3:1和2:1]等条件下制备贾第虫染色体.结果和结论:在制备贾第虫染色体时,秋水仙素的最佳作用浓度为0.20 mg/L,最佳低渗处理时间为55 min,固定液推荐V(甲醇):V(冰醋酸)为3:1.贾第虫在分裂过程中形成典型的凝集染色体,染色体数目为2n=10.     

牛带绦虫染色体标本制作的实验研究

目的探讨绦虫染色体标本制作的影响因素。方法采用RPMI-1640培养液加秋水仙素体外培养—低渗处理—空气干燥技术,观察1640培养液不同液量、培养时间、秋水仙素不同剂量及不同的低渗液在标本制作过程中的效应。结果牛带绦虫成节生殖细胞有丝分裂指数在培养4h最高;培养液量以每节片6ml的1640培养液最好;秋水仙素剂量以0.1mg/ml为适宜,有良好的促进有丝分裂的作用;低渗液处理以0.075M氯化钾为佳,染色体清晰、分散程度好。结论以0.1mg/ml秋水仙素的1640培养液(6ml每节片)在37℃连续培养牛带绦虫生殖细胞4h,然后用0.075M氯化钾低渗空气干燥技术制作的染色体标本,效果最佳。     

四倍体平贝母的诱导及鉴定

目的 运用组织培养技术诱导平贝母四倍体。方法 采用不同质量浓度（200、500、1 000、2 000 mg/L）秋水仙素和不同的诱导时间（12～72 h）处理平贝母愈伤组织。结果 离体培养条件下,平贝母激素自养型培养材料在秋水仙素诱导下得到四倍体,四倍体染色体4n＝44,四倍体植株出现明显的多倍体特征。结论 500 mg/L秋水仙素处理24 h为最佳组合,可以诱导四倍体平贝母以平贝母子球做鉴定材料,获得较好的结果。     

人外周血细胞中21号染色体不分离与年龄的关系

我们采用荧光原位杂交 (Fluoresxenceinsituhybridization ,FISH)技术 ,研究经过培养的第一次分裂后人淋巴细胞中 2 1号染色体自发性分离异常与年龄的关系 ,以及不含 2 1号染色体微核出现的频率 ,以阐明 2 1号染色体分离异常与年龄的关系。材料与方法一、对象 :68名健康实验对象的年龄及分组情况见表 1。二、双核淋巴细胞标本的制备每人抽取外周血 2ml ,按常规法建立淋巴细胞培养物 ,培养至 44小时后 ,加入细胞松弛素B(cytochalasin B ,CB)至终浓度为 6μg/ml ,再避光培养 2 8小时 ,收获细胞 ,空气干燥法滴片。三、FISH及所用人 2 1号…     

秋水仙素诱导茴香多倍体的研究

目的 探讨不同秋水仙素浓度和不同处理时间诱导茴香多倍体的效果。方法 采用种子浸泡法以不同秋水仙素浓度、不同处理时间诱导下的种子的萌发率和诱变率、胚根诱变体的外部形态、染色体数量、内部组织构造以及精油量和成分进行了比较。结果 诱导液质量浓度为0.13%,处理时间为24 h时的诱导效果最好;诱导后的突变体胚根与对照相比,表现粗大、染色体数目明显增加、胚根的内部细胞数量明显增多、4种主要精油成分中除莳萝芹菜脑略低于对照外,柠檬酸、反式茴香脑和莰烯3种成分均显著提高。 结论 秋水仙素诱导的突变体可以较大幅度地提高茴香主要精油成分的量,为茴香高精油量多倍体新品种的培育提供了依据。     

兔外周血间充质干细胞生物学性状的研究

目的应用G—CSF动员骨髓干细胞后分离外周血间充质干细胞（MSCs）,并体外培养扩增然后进行鉴定。方法应用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、培养兔外周血MSCs,并用显微镜观察细胞形态,测定细胞的生长曲线并用流式细胞仪鉴定。结果@MSCs于体外培养2h开始贴壁生长,细胞形态为梭形、多角形及纺锤状等。传代MSCs变为形态均一、排列有序的长梭形细胞,增殖活跃,细胞平均倍增时间为30h;②流式细胞仪检测MSCs表面抗原CD34、CD45呈阴性表达,CD44呈阳性表达。结论采用密度梯度离心法和贴壁法可以有效获得应用G—CSF动员后的外周血MSCs,且细胞纯度高,生长增殖活性好。     

介绍一种同时显示G-11染色和SCD的新方法

为了对人类第9号染色体进行 SCE 分析,我们参照 Bobrow 等、Gagne 等的 Giemsa-11染色方法和 Alvec(3)的碱性溶液直接姊妹染色单体差别染色 Sister Chromatid Differentiation,SCD),摸索建立了同时显示 G—11染色和 SCD 的新方法,现介绍于下。一、细胞培养和染色体标本制备 经肝素抗凝的外周血0.3ml 接种于5ml 培养基内(含 RPMI16404ml、小牛血清1ml、广州产 PHA 400μg、青霉素、链霉素各500国际单位),置37℃培养24～26小时,加入BrdU(最终浓度10μg/ml)避光继续培养44～46小时,培养终止前2小时加入秋水仙素(最终浓度0.8     

组织块重复贴壁使用在原代细胞培养中的实验意义

目的旨在提高采用人脐静脉组织块贴壁法进行平滑肌细胞原代培养组织块的重复利用率,进而缩短采用细胞培养进行实验的培养周期。方法以改良人脐静脉平滑肌细胞贴壁培养法为基础,当原代培养细胞(对照组)进行第1次细胞传代后,将培养组织块再次接种于新培养瓶中继续培养(实验组),分别记录两组细胞爬出时间、第1次传代时间、以及第1次传代后24、48、72、96h的细胞计数,通过倒置显微镜对两组细胞进行形态学观察,采用抗α-actin免疫细胞化学方法,对两组传代细胞的类型和性质进行鉴定。结果与对照组比较,实验组细胞爬出时间及第1次传代时间均明显缩短(P<0.05);两组第1次传代后24、48、72、96h细胞计数差异均无统计学意义(P>0.05);两组细胞形态经α-actin鉴定差异无统计学意义。结论人脐静脉组织块重复贴壁培养后,经传代其细胞数量、细胞形态与原代组织块贴壁培养的细胞差别均无统计学意义。     

咀嚼口香糖对开腹手术后胃肠功能恢复的影响

目的 评估开腹手术后咀嚼口香糖对促进肠蠕动恢复的有效性和安全性.方法 将外科2009年1月至2011年12月开腹手术时间＞120 min的患者93例随机分为实验组(46例)和对照组(47例).术后2组均给予常规治疗,包括支持、补液、调节电解质及酸碱平衡,早期床上活动及下床活动.实验组在此基础上术后6h开始咀嚼木糖醇无糖口香糖,每2小时咀嚼1次,每次10 min,直到第1次肛门排气,夜间正常睡觉,不咀嚼.对照组仅给予常规治疗,术后禁食至肛门排气.观察比较2组肠功能恢复情况.结果 实验组与对照组手术后第1次听到肠鸣音时间分别为(11.2±1.2)、(13.8±1.6)h;第1次肛门排气时间分别为(22.0±3.5)、(31.4±3.9)h;第1次排便时间分别为(39.7±9.5)、(52.8±10.4)h;差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 开腹手术后咀嚼口香糖对促进肠蠕动恢复、缩短肠麻痹时间安全有效.     

分析染色体畸变人外周血淋巴细胞培养时间的探讨

本文对人外周血中淋巴细胞培养时间进行了研究,在动态观察中外周血的淋巴细胞36小时开始出现分裂相、40小时达第一次高峰,分裂指数为7.2％,分裂细胞全部为M_1期。52小时M_2细胞相达51.3％,M_3细胞相为0.3％。40小时淋巴细胞培养的分裂相10例均值为9.08％,分裂相中的中期为74.0％,全部为M_1细胞相,因而质量完全符合需要,故40小时培养的人外周血淋巴细胞实验法是分析染色体畸变的较好的方法。     

耳穴贴压促进妇科腹腔镜患者术后排气的观察

目的观察耳穴贴压对促进妇科腹腔镜术后患者排气的效果。方法对56例妇科腹腔镜患者术后4h开始以王不留行籽贴压耳穴并按摩耳穴5-10min，每2h一次，观察至排气止所有时间，并与30例术后常规护理的对照组进行对比。结果实验组患者术后排气较对照组明显提前（平均提前6．48h），术后平均住院日缩短2，49d，经统计学处理，2组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论耳穴贴压按摩法能使妇科腹腔镜患者术后第一次排气时间提前，有利于术后恢复，缩短住院日。     

穴位按摩配合足底按摩对妇科腹腔镜术后患者排气的观察

目的 观察穴位按摩配合足底按摩对妇科腹腔镜术后患者第一次排气时间的影响。方法 将60例行妇科腹腔镜手术的患者随机分为实验组（30例）与对照组（30例），实验组在常规护理基础上采用术后6h开始进行双侧足三里、三阴交、合谷、内关和足底的胃肠反射区按摩，每天3次，对照组按常规护理。比较两组患者术后第一次排气的时间。结果 实验组患者术后第一次排气较对照组平均提前10．18h，经统计学处理，两组有显著差异（P〈0．01）。结论 穴位按摩配合足底按摩能缩短妇科腹腔镜手术患者第一次排气的时间，有利于术后的康复。     

高分辨染色体制备及显带方法的改良效果分析

目的寻找简单实用的高分辨染色体制备及显带方法。方法比较常规制片和秋水仙素与低渗同时处理的方法对提高染色体高分辨的作用,以及常规显带与改良胰蛋白酶磷酸（PBS）显带方法对染色体核型分析结果的影响。结果采用秋水仙素与低渗同时处理进行常规染色体制备,结果显示在5000个分裂相中对照组大于400条带的为482个,占9.64%,实验组为1655个,占33.1%,明显高于对照组（P〈0.01）;用PBS法进行染色体显带,各条带之间能明显区分,便于染色体核型分析。结论秋水仙素与低渗同时处理可使染色体加长,高分辨染色体出现率明显增高,用PBS法进行染色体显带,操作简单,可明显缩短显带时间。     

本地实验犬淋巴细胞染色体核型分析

目的通过犬的染色体核型分析,为诊断犬染色体病以及进行犬的分子细胞学研究奠定了基础。方法采集13条正常本地犬(6条雌性、7条雄性)外周血进行淋巴细胞培养,经秋水仙素处理后制备常规及G带染色体标本并进行核型分析。结果本地犬的染色体形态结构表现出很好的一致性,其染色体数为2n=78,雌性染色体核型为78,XX,雄性染色体核型为78,XY。39对染色体中有38对常染色体均为端着丝粒染色体,长度逐渐递减;1对性染色体为中央着丝粒,X染色体最大并与人X染色体形态极其相似,Y染色体最小。结论染色体G带核型分析发现,可以明确鉴别犬第1～21号常染色体和性染色体,但很难可靠地鉴别其余的17对常染色体。     

早孕期绒毛短期培养后染色体制备方法的改进

目的在以往研究的基础上,改进早孕期绒毛短期培养后染色体制备的方法。方法采用的培养液血清浓度为5%,绒毛细胞经过48 h培养,将酶解离细胞、低渗处理与高浓度秋水仙素处理简化为一步,使用冰醋酸分步解离。结果染色体分散好,带型清晰。结论该技术简单省时,易于操作,成功率较高,便于临床推广使用。