大鼠睾丸支持细胞的原代培养、鉴定与抑制素的表达

目的:研究大鼠睾丸支持细胞体外培养的有效方法,探讨支持细胞抑制素的表达.方法:对18～22 d的大鼠睾丸支持细胞进行分离培养,观察支持细胞体外培养的生物学特性,用免疫组化方法检测支持细胞抑制素α、βA、βB亚基的表达.结果:在体外成功培养出大鼠睾丸支持细胞,细胞纯度可达到90%以上.支持细胞中抑制素(INH)α、βA、βB亚基均为强阳性表达.结论:建立了大鼠睾丸支持细胞纯化培养方法,支持细胞中INHα、βA、βB亚基表达均为强阳性表达,证实支持细胞能够合成、分泌INH.     

大鼠睾丸支持细胞的原代培养、鉴定与抑制素的表达

目的:研究大鼠睾丸支持细胞体外培养的有效方法,探讨支持细胞抑制素的表达.方法:对18～22 d的大鼠睾丸支持细胞进行分离培养,观察支持细胞体外培养的生物学特性,用免疫组化方法检测支持细胞抑制素α、βA、βB亚基的表达.结果:在体外成功培养出大鼠睾丸支持细胞,细胞纯度可达到90%以上.支持细胞中抑制素(INH)α、βA、βB亚基均为强阳性表达.结论:建立了大鼠睾丸支持细胞纯化培养方法,支持细胞中INHα、βA、βB亚基表达均为强阳性表达,证实支持细胞能够合成、分泌INH.     

丙泊酚对BV-2小胶质细胞活化的影响

目的探讨丙泊酚对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞活化的影响及其可能机制。方法体外培养小鼠BV-2小胶质细胞,随机分为LPS 1μg/ml组(A组)、丙泊酚30μM组(B组)、LPS 1μg/ml+丙泊酚30μM组(C组)和空白对照组(D组)。采用RT-PCR检测各组细胞中IL-1β和TNF-αmRNA表达量,Western blot检测总糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)的蛋白表达水平。结果 A、C组IL-1β、TNF-α及p-GSK-3表达量均较D组明显增加(P<0.05或P<0.01)。与A组相比,C组IL-1β和TNF-αmRNA表达量降低,而p-GSK-3β蛋白表达量增加(P<0.05)。结论丙泊酚30μM能在体外减轻LPS诱导的BV-2小胶质细胞释放IL-1β和TNF-α的水平,此作用可能与抑制GSK-3β活性有关。     

沙利度胺对人T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨沙利度胺(Thd)对健康人外周血T淋巴细胞的免疫调节作用.方法 健康人外周血T淋巴细胞经不同浓度Thd作用后,用MTT比色法检测其增殖情况,用流式细胞术检测其早期凋亡及CD28、CD152表达,用RT PCR检测其白细胞介素6(IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平.结果 在体外,与阴性对照组相比,500μg/ml Thd组可促进T淋巴细胞的增殖、早期凋亡,抑制T淋巴细胞CD28的表达.100μg/ml Thd组可促进T淋巴细胞CD152表达.各剂量组均能抑制IL-6、TNF-α mRNA表达,100μg/ml和500μg/ml Thd可增强IL-10 mRNA的表达.结论 Thd可以通过影响T淋巴细胞的增殖、早期凋亡以及CD152、CD28,IL-6、TNF-α、IL-10 mRNA的表达,对健康人T淋巴细胞具有免疫调节作用.     

槲皮素抑制TGF-β1诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生EMT的效果研究

目的旨在研究槲皮素抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生上皮-间质转化(EMT)的效果。方法将肝癌细胞分为对照组(10 ng/ml TGF-β1)、低剂量组(50 nmol/l槲皮素+10 ng/ml TGF-β1)、高剂量组(10 ng/ml TGF-β1+100 nmol/l槲皮素),分别处理6 h,光学显微镜观察肝癌细胞形态学变化。6、12和24 h后,观察肝癌细胞迁移及侵袭能力。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝癌细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA表达。Western blot法测定肝癌细胞E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白。结果经TGF-β1诱导后,肝癌细胞发生明显EMT。划痕实验结果显示,12和24 h时,高剂量组和低剂量组肝癌细胞迁移划痕空隙长度明显低于对照组(P0.05)。侵袭实验中,与对照组比较,低和高剂量组每视野穿膜肝癌细胞数明显降低,且高剂量组穿膜高于低剂量组(P0.05)。RT-PCR实验结果显示,对照组E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组和低剂量组(P0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组和低剂量组(P0.01)。低剂量E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组(P0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组(P0.01)。Western blot实验结果显示,对照组E-cadherin蛋白表达明显低于高剂量组和低剂量组(P0.01),N-cadherin、Vimentin蛋白明显高于高剂量组和低剂量组(P0.01)。高剂量组E-cadherin蛋白表达明显高于低剂量组(P0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显低于低剂量组(P0.01)。结论槲皮素通过增加E-cadherin蛋白表达表达,降低N-cadherin、Vimentin蛋白表达,使得TGF-β1诱导的肝癌细胞EMT得到明显抑制。     

槲皮素抑制TGF-β1诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生EMT的效果研究CSCD

目的旨在研究槲皮素抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生上皮-间质转化(EMT)的效果。方法将肝癌细胞分为对照组(10 ng/ml TGF-β1)、低剂量组(50 nmol/l槲皮素+10 ng/ml TGF-β1)、高剂量组(10 ng/ml TGF-β1+100 nmol/l槲皮素),分别处理6 h,光学显微镜观察肝癌细胞形态学变化。6、12和24 h后,观察肝癌细胞迁移及侵袭能力。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝癌细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA表达。Western blot法测定肝癌细胞E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白。结果经TGF-β1诱导后,肝癌细胞发生明显EMT。划痕实验结果显示,12和24 h时,高剂量组和低剂量组肝癌细胞迁移划痕空隙长度明显低于对照组(P<0.05)。侵袭实验中,与对照组比较,低和高剂量组每视野穿膜肝癌细胞数明显降低,且高剂量组穿膜高于低剂量组(P<0.05)。RT-PCR实验结果显示,对照组E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组和低剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组和低剂量组(P<0.01)。低剂量E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组(P<0.01)。Western blot实验结果显示,对照组E-cadherin蛋白表达明显低于高剂量组和低剂量组(P<0.01),N-cadherin、Vimentin蛋白明显高于高剂量组和低剂量组(P<0.01)。高剂量组E-cadherin蛋白表达明显高于低剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显低于低剂量组(P<0.01)。结论槲皮素通过增加E-cadherin蛋白表达表达,降低N-cadherin、Vimentin蛋白表达,使得TGF-β1诱导的肝癌细胞EMT得到明显抑制。     

Effect of fibronectin on expression of integrin α5β1 in trabecular meshwork cell in patients with primary open-angle glaucoma

目的 探讨纤维连接蛋白(FN)对体外培养的原发性开角型青光眼(POAG)患者小梁网细胞整合素α5β1表达及细胞存活的影响.方法 体外培养POAG患者小梁网细胞,分别加入不同浓度的FN(0、5、10、20、40、100μg/ml)培养.采用免疫细胞化学法观察各组细胞整合素α5β1的表达及细胞存活情况.结果 随着FN浓度增加,整合素α5β1表达增强.在FN低浓度(0-40 μg/ml)范围内,阳性细胞面积增多;而在FN 100μg/ml时阳性细胞面积减少.结论 FN影响小梁网细胞外基质,参与眼内压的调节.     

BMP-7对TGF-β_1诱导人肾小管上皮细胞外基质表达的影响

目的观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对TGF-β1诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质(ECM)成分表达的影响,以探讨其延缓肾间质纤维化病变的作用机制。方法将体外培养的HK-2细胞分为空白对照组,3μg.L-1TGF-β1组,BMP-7组,TGF-β1加不同浓度BMP-7组。免疫荧光检测FN的表达;RT-PCR和Western blot分别检测FN、ColⅠα1mRNA及蛋白的表达。结果免疫荧光检测结果显示,3μg.L-1TGF-β1刺激HK-2细胞48h后,FN表达明显增强;加入200μg.L-1BMP-7干预后荧光明显减弱。RT-PCR和Western blot结果显示,TGF-β1刺激HK-2细胞48h后,FN、ColⅠα1mRNA及蛋白表达均明显高于对照组(P<0.01);BMP-7(100～400μg.L-1)可在mRNA及蛋白水平呈剂量依赖性下调TGF-β1诱导的FN、ColⅠα1的表达。结论BMP-7能抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞FN、ColⅠα1的合成。表明BMP-7抑制肾小管间质纤维化的进展、改善肾功能的作用,部分是通过抑制肾小管上皮细胞分泌细胞外基质实现的。     

Effect of propofol on lipopolysaccharides-induced activation of BV-2 microglia cells

目的 探讨丙泊酚对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞活化的影响及其可能机制.方法 体外培养小鼠BV-2小胶质细胞,随机分为LPS 1μg/ml组(A组)、丙泊酚30μM组(B组)、LPS1 μg/ml+丙泊酚30μM组(C组)和空白对照组(D组).采用RT-PCR检测各组细胞中IL-1β和TNF-α mRNA表达量,Western blot检测总糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化GSK-3β (p-GSK-3β)的蛋白表达水平.结果 A、C组IL-1β、TNF-α及p-GSK-3表达量均较D组明显增加(P＜0.05或P＜0.01).与A组相比,C组IL-1β和TNF-α mRNA表达量降低,而p-GSK-3β蛋白表达量增加(P＜0.05).结论 丙泊酚30 μM能在体外减轻LPS诱导的BV-2小胶质细胞释放IL-1β 和TNF-α的水平,此作用可能与抑制GSK-3β活性有关.     

颗粒蛋白前体衍生物 Atsttrin对骨关节炎的保护作用及对 CD+4T细胞的调节作用

目的 揭示颗粒蛋白前体衍生物Atsttrin对骨关节炎的保护作用及对CD+4 T细胞的调节作用.方法 本研究起止时间为2018年10月至2019年12月,60只5周龄SD雄性大鼠购自西安交通大学医学部实验动物中心.采用膝关节前交叉韧带横断法建立骨关节炎大鼠模型,通过关节内注射15μL Atsttrin(1μg/μL)对模型大鼠进行治疗,每周注射1次,连续注射4周.通过番红O固绿染色检测软骨损伤程度,采用OARSI评分系统评价软骨退化情况.ELISA法检测大鼠血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)和转化生长因子-β(TGF-β)水平.流式细胞仪分析血清Th1、Th2、Th17和Treg细胞比例.应用终浓度为10μg/L的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导滑膜细胞和软骨细胞48 h,并分别用终浓度为10μg/L、20μg/L、50μg/L的Atsttrin处理滑膜细胞和软骨细胞48 h.通过5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)细胞增殖测定试剂盒检测滑膜或软骨细胞的增殖.通过RT-PCR和Western blotting检测软骨细胞中解聚蛋白样金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、IFN-γ、IL-4、IL-17和TGF-β的信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达.结果 与模型组相比,Atsttrin组大鼠的膝关节软骨破坏情况明显减轻(P<0.05).与模型组相比,Atsttrin组大鼠国际骨关节炎研究学会(OARSI)评分显著降低[(2.56±0.21)比(1.08±0.11),P=0.001].Atsttrin组大鼠的血清IFN-γ和IL-17水平显著低于模型组,而IL-4和TGF-β水平显著高于模型组(P<0.05).Atsttrin组大鼠的血清Th1和Th17细胞比例显著低于模型组,而Th2和Treg细胞比例显著高于模型组(P<0.05).Atst?trin处理显著降低了TNF-α诱导的滑膜细胞的增殖能力,并提高了TNF-α诱导的软骨细胞的增殖能力(P<0.05).Atsttrin显著下调了TNF-α诱导的软骨细胞中ADAMTS-4、MMP-13、IFN-γ和IL-17的mRNA和蛋白表达水平,并上调了IL-4和TGF-β的表达水平(P<0.05).结论 Atsttrin可有效抑制骨关节炎大鼠模型的软骨病变并提高关节功能.Atsttrin可通过抑制滑膜细胞增殖、促进软骨细胞增殖、抑制软骨机制降解来维持关节内微环境的稳定.此外,Atsttrin的关节软骨保护作用与纠正Th1/Th2细胞以及Th17/Treg细胞的失衡有关.     

贝那普利对氧化低密度脂蛋白诱导的肾小管上皮细胞间质转化及转化生长因子-β/Smad通路的影响

目的探讨贝那普利对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化(EMT)及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为对照组、ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL)、贝那普利组(50μg/mL ox-LDL+10μmol/L贝那普利)、TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1)、贝那普利+TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1+10μmol/L贝那普利)。高倍光学显微镜观察各组NRK-52E细胞表型变化;免疫荧光染色法检测EMT标志性蛋白α-SMA、E-cadherin荧光强度;免疫印迹法检测各组NRK-52E细胞中α-SMA、E-cadherin蛋白及TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组梭形或不规则形细胞增多,α-SMA荧光强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05);E-cadherin荧光表达强度减弱,蛋白量明显降低(P0.05)。与ox-LDL组比较,贝那普利组细胞表型改变明显减轻,α-SMA荧光表达强度明显减弱,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05);TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),Ecadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与贝那普利组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度明显增强,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与TGF-β1组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、pSmad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05)。结论贝那普利可逆转ox-LDL诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化的发生,机制可能是通过抑制TGF-β/Smad通路活化而发挥作用。     

双酚A损伤睾丸支持细胞的实验研究

目的观察双酚A(BPA)在不同剂量与处理时间条件下对支持细胞存活率、囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)表达水平、痛敏肽表达水平和乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响,初步探讨BPA损伤雄性生殖系统功能的机制。方法小鼠睾丸支持细胞TM4细胞系传代增长至对数期时,经不同剂量(5、10、100、500和1 000μg/ml) BPA处理2、8和24 h,MTT法检测细胞存活率、微量酶标法检测LDH活性、ELISA法检测CFTR与痛敏肽表达水平。采用方差分析比较不同BPA剂量、处理时间各自的主效应及其交互作用。结果与阴性对照组相比,各处理组睾丸支持细胞存活率均明显降低(P0. 01);处理剂量与时间的交互作用对LDH活性与CFTR表达水平均有影响;处理24 h后,BPA剂量为100μg/ml时LDH活性、痛敏肽表达水平最低,CFTR蛋白表达水平最高,组间差异有统计学意义(P0. 05)。结论 BPA对睾丸支持细胞有一定毒性作用,可能影响支持细胞对精子细胞的能量供给与营养支持。     

黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇通过STAT3-NF-κB途径对胃癌细胞的作用研究

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇对胃癌细胞的作用及其可能的机制。方法黄芪甲苷Ⅳ和紫杉醇按给药剂量分为0μg/ml组、5μg/ml组、10μg/ml组、20μg/ml组、40μg/ml组、80μg/ml组和160μg/ml组处理胃癌细胞AGS。CCK-8试剂盒检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2和STAT3-NF-κB途径相关蛋白的表达;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果黄芪甲苷Ⅳ在20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml浓度下可明显抑制AGS细胞活力,黄芪甲苷Ⅳ IC_(50)=63.99μg/ml;紫杉醇在10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml浓度下可明显抑制AGS细胞活力,紫杉醇IC_(50)=40.08μg/ml。与对照组相比,黄芪甲苷Ⅳ组、紫杉醇组和联合组的细胞活力、克隆形成数、细胞迁移和侵袭数明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达明显升高(P<0.05),Bcl-2、pSTAT3/STAT3和pNF-κB/NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.05);与联合组比较,黄芪甲苷Ⅳ组和紫杉醇组的细胞活力、克隆形成数、细胞迁移和侵袭数明显升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达明显降低(P<0.05),Bcl-2、pSTAT3/STAT3和pNF-κB/NF-κB蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,该作用可能是通过抑制STAT3-NF-κB途径实现的。     

龙葵碱对小鼠睾丸支持细胞波形蛋白表达的影响

目的探讨龙葵碱对小鼠睾丸支持细胞波形蛋白表达的影响。方法将40只雄性昆明小鼠随机分为4组,A组腹腔注射等剂量0.9%NaCl,B、C、D组分别腹腔注射龙葵碱5、10和20 mg/kg,连续染毒14 d,取出睾丸组织。利用苏木素-伊红(HE)染色、睾丸重量、脏器系数的改变观察小鼠睾丸的病理学变化;利用免疫组织化学法检测睾丸波形蛋白的表达和变化。结果 实验表明,与对照组相比,20 mg/kg组的小鼠睾丸组织切片病理变化明显,曲细精管明显萎缩,大量细胞脱落至管腔及管腔外面,生精细胞与支持细胞分离,管腔内细胞排列紊乱,精子生成数大量减少;10和20mg/kg组的小鼠睾丸脏器系数(0.346±0.020、0.222±0.050)明显低于对照组(0.416±0.065),结果具有统计学意义(P0.05);20 mg/kg组小鼠睾丸波形蛋白表达明显下降,排列无序,阳性支持细胞脱落至曲细精管官腔之中。结论在本试验条件下,龙葵碱可能通过影响支持细胞波形蛋白的表达产生雄性生殖毒性。     

锰对PC12细胞毒性作用的研究

目的研究不同剂量的锰(Mn)对PC12细胞生长增殖的影响。方法体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,以100~900μmol/L MnCl2染毒后进行四唑盐比色实验(MTT)观察MnCl2对细胞的抑制作用,TUNEL法观察细胞凋亡,Western blot检测α-共核蛋白(-αSYN)表达情况。结果MTT结果显示100~900μmol/L MnCl2对细胞的生长增殖有显著的抑制作用(P<0.01)。TUNEL染色结果显示MnCl2处理组TUNEL阳性细胞增多(P<0.05)。Western blot结果显示与对照组相比,100、300、500μmol/L MnCl2组-αSYN表达水平分别升高1.8、4.5、7.3倍(P<0.05)。结论一定剂量的MnCl2对PCl2细胞的生长增殖有明显的抑制作用,这一作用可能是通过诱导胞内-αSYN表达增高实现的。提示预防、阻止α-SYN在细胞中的聚集可能会降低Mn对多巴胺能神经细胞的损伤。     

脑源性神经营养因子对丙烯酰胺致NB-1细胞损伤的保护作用

目的在体外实验条件下探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对丙烯酰胺(acrylamide,ACR)所致神经损伤的干预效应。方法 MTT法检测不同剂量ACR(0、10、20、40、60、80和100μg/ml)作用时NB-1细胞的相对存活率并计算半数抑制浓度(IC50);根据ACR细胞毒性测试结果设对照组、ACR染毒组(60μg/ml ACR)、BDNF干预组:BDNF1(50 ng/ml BDNF+60μg/ml ACR)、BDNF2(75 ng/ml BDNF+60μg/ml ACR)、BDNF3(100 ng/ml BDNF+60μg/ml ACR);光学显微镜观察神经细胞形态变化,MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞术检测胞内游离钙离子浓度;Western-blot检测突触素I(synapsin I)蛋白表达。结果 ACR对NB-1细胞的IC50为69.8μg/ml(48 h)。50和75 ng/ml BDNF对ACR所致神经损伤具有一定的干预作用,与60μg/ml ACR单独染毒组比较,神经细胞形态异常减轻,细胞相对存活率增加,胞内钙离子浓度降低,synapsin I蛋白含量增加(P0.05);BDNF剂量增加到一定水平(100 ng/ml),干预效果减弱,细胞相对存活率、胞内钙离子浓度及synapsin I蛋白表达与60μg/ml ACR单独染毒组差异无统计学意义(P0.05)。结论适当剂量的BDNF在体外条件下对ACR所致神经损伤具有一定的保护作用,可能是通过对抗胞内钙超载,上调synapsin I蛋白表达,维持突触结构完整来实现的。     

罗格列酮对类胰蛋白酶诱导的大鼠肝星状细胞Ⅰ型胶原及过氧化物酶体增殖物活化受体γ表达的影响

目的观察罗格列酮对类胰蛋白酶诱导的大鼠肝星状细胞(HSC)Ⅰ型胶原及过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)表达的影响,探讨罗格列酮抑制肝纤维化的作用机制。方法将大鼠HSC-T6进行体外培养,取对数生长期细胞分为空白对照组,1、10、100 ng/ml类胰蛋白酶组,10 ng/ml类胰蛋白酶+(5、10、20μmol/L)罗格列酮组。用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HSCⅠ型胶原及PPARγ的表达。结果类胰蛋白酶可以诱导大鼠HSCⅠ型胶原表达并使HSC PPARγ表达减少(P<0.05),罗格列酮可以不同程度抑制类胰蛋白酶的上述效应,且各组Ⅰ型胶原的表达水平均低于10 ng/ml类胰蛋白酶组(P<0.05),各组PPARγ的表达水平均高于10 ng/ml类胰蛋白酶组(P<0.05),并呈剂量依赖性(P<0.05)。结论罗格列酮能够上调PPARγ表达并抑制类胰蛋白酶诱导的HSCⅠ型胶原的表达,抑制肝纤维化的发生。     

槲皮黄酮对Aβ诱导小神经胶质细胞损伤的保护机制研究

目的探讨槲皮黄酮对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导小神经胶质细胞(BV-2)损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养BV-2细胞,利用Aβ诱导BV-2细胞发生损伤;将低(10μg/m L)、中(20μg/m L)、高(40μg/m L)3种浓度槲皮黄酮对细胞进行处理,共24 h,采用CCK8实验对BV-2细胞的增殖情况进行评价,应用ELISA试剂盒对细胞培养基上清中炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平进行分析,采用免疫印迹技术分析β-分泌酶(BACE)、早老素(PS1)、呆蛋白(NCT)蛋白表达水平,并对脑啡肽酶(NEP)、胰岛素降解酶(IDE)表达水平进行检测。结果采用Aβ诱导可较好地构建BV-2细胞损伤模型,经过低、中、高3种剂量的槲皮黄酮处理后,BV-2细胞的相对存活率较模型组显著增加(P<0.05);药物处理组细胞培养基上清中IL-6、TNF-α表达水平低于模型组(P<0.05);Western blot结果显示,槲皮黄酮组BACE、PS1、NCT蛋白表达水平较模型组降低(P<0.05);槲皮黄酮可以促进Aβ消化酶NEP、IDE的表达。结论槲皮黄酮对Aβ诱导的BV-2细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制Aβ分泌酶表达和激活Aβ消化酶表达有关。     

雌激素功能性调节人内皮细胞的生长调节致癌基因α表达

目的：研究雌激素在体外调节人脐带静脉内皮细胞（HUVEC）的生长调节致癌基因α（GROα）。方法：以体外培养的HUVEC为模型,Northern法检测CXC族趋化因子GROα mRNA;ELISA方法检测细胞表面的GROα蛋白表达;静态细胞粘附实验测定细胞表面的GROα蛋白的生理意义。结果：17β－雌二醇（0．05μmol/L）明显抑制HUVEC产生GROα mRNA和蛋白表达水平;而且17β－雌二醇抑制其蛋白表达水平显示剂量依赖性关系;雌激素受体α拮抗剂他莫昔芬（0．1μmol/L）单独使用不影响其蛋白表达,但可显著逆转17β－雌二醇抑制的GROα蛋白表达,显著逆转17β－雌二醇抑制单核细胞系细胞U937细胞粘附的HUVEC的作用达。结论：通过内皮细胞上雌激素受体α,雌激素可能功能性调节人内皮细胞的GROα的表达。     

槲皮黄酮对脂多糖诱导BV-2小胶质细胞损伤的保护机制研究

目的：探讨槲皮黄酮对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小神经胶质细胞炎症反应的抑制作用及可能作用的机制。方法：体外培养BV-2细胞,采用LPS刺激细胞诱导炎症模型,将细胞分为正常对照组、炎症模型组和槲皮黄酮低（10 μg/ml）、中（20 μg/ml）、高（40 μg/ml）剂量药物组,CCK8实验检测槲皮黄酮对BV-2细胞增殖情况的影响,ELISA实验检测细胞上清中TNF-α和IL-6的表达量,免疫印迹实验检测iNOS、COX-2、Traf6、p65及p-p65蛋白的表达水平。结果：槲皮黄酮可显著促进BV-2细胞的增殖,并明显降低细胞的炎症反应。主要表现在槲皮黄酮可明显抑制TNF-α和IL-6的释放,还可显著抑制炎症相关蛋白iNOS及COX-2的表达,并且还可以抑制Traf6/p65信号通路的活化。结论：槲皮黄酮可明显抑制LPS诱导的BV-2细胞炎症反应,抑制炎症相关蛋白的表达,其可能作用机制是通过抑制Traf6/p65信号通路的活化实现的。