三氧化二砷抑制恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成的研究

目的:研究不同浓度的三氧化二砷(As2O3)对恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成抑制及诱导B16细胞凋亡的作用,探讨砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤的作用机制,为其治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据. 方法:采用3H-TdR和3H-UdR掺入肿瘤细胞DNA和RNA的方法,观察不同浓度的As2O3对恶性黑色素瘤B16细胞核酸生物合成的抑制作用; 用流式细胞术(FCM)检测As2O3诱导B16细胞的凋亡及细胞毒作用. 结果:As2O3 对恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成抑制和诱导凋亡及细胞毒作用有显著的浓度和时间依赖关系(P<0.01).结论:As2O3对恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成的抑制作用和诱导凋亡及细胞毒作用随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强.     

As2O3诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡与细胞内端粒酶活性关系的研究

目的探讨As2O3对HeLa细胞的诱导凋亡作用及对HeLa细胞端粒酶活性的影响.方法采用不同浓度的As2O3作用于人宫颈癌HeLa细胞不同生长时间段(24、48、72 h)后,显微镜下观察细胞凋亡,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)测定细胞生长抑制情况,TRAP-ELISA方法测定细胞内端粒酶活性变化.结果2 μmol*L-1的As2O3处理HeLa细胞48 h后可降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,细胞内端粒酶活性比对照组明显下降.随着As2O3 浓度增加、作用时间延长,作用效果越明显.结论As2O3诱导HeLa细胞凋亡可能与其抑制细胞内端粒酶活性有关.     

三氧化二砷对HL-60细胞端粒酶活性表达的抑制作用

目的:探讨不同浓度的三氧化二砷(As2O3 )与HL-60细胞共反应不同时间后对其端粒酶活性表达的抑制作用.方法:采用端粒重复序列扩增(TRAP)-银染法检测HL-60细胞的端粒酶活性,并经Smart view生物电泳图像分析系统扫描分析.结果:浓度分别为0.1 μmol/L、1.0 μmol/L、5.0 μmol/L的As2O3 与HL-60细胞共培养3天,HL-60细胞相对端粒酶活性由97.83%下降至9.62%,且具有剂量依赖性和时间依赖性.结论:As2O3可有效抑制HL-60细胞的端粒酶活性.     

维生素C增强As2O3诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的:探讨维生素C是否能影响三氧化二砷(As2O3)诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,以及它对细胞内端粒酶活性的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)法筛选出维生素C的最佳浓度250μmol.L-1,并用该浓度联合不同浓度的As2O3同时处理HeLa细胞后,用光镜、MTT法和流式细胞术研究细胞生长和凋亡的情况,用TRAP-ELISA法检测细胞内端粒酶活性的变化。结果:单独1μmol.L-1As2O3处理过的细胞生长未受到明显抑制,但联合250μmol.L-1维生素C处理细胞,则细胞生长受到抑制,且部分细胞出现凋亡形态学特征。2、51、0μmol.L-1As2O3联合维生素C用药组的细胞凋亡率也比单独用As2O3组明显增高,且出现凋亡的时间提早。端粒酶活性检测结果提示,联合用药组细胞内端粒酶活性均明显比单独用As2O3组低。结论:小剂量维生素C能增强As2O3诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,并能增强As2O3对细胞内端粒酶活性的抑制作用。     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡对端粒酶活性的影响

目的探讨三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡时对端粒酶活性的影响。方法不同浓度的As2O3溶液作用卵巢癌细胞SKOV3,在不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;FCM检测细胞凋亡率;TRAP-银染法观察端粒酶活性的变化。结果 As2O3溶液对SKOV3细胞有生长抑制和诱导凋亡的作用。As2O3作用SKOV3细胞24 h,端粒酶活性无明显下降,但有凋亡现象,凋亡率为6.15%。随着作用时间的延长,凋亡率逐渐上升,端粒酶活性逐渐下降。随着药物浓度的升高端粒酶活性也呈不断下降趋势,以至消失。结论 As2O3诱导SKOV3凋亡与端粒酶活性有一定相关性,但端粒酶活性的下降可能不是As2O3诱导细胞凋亡的早期事件。     

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡对端粒酶活性的影响

目的 探讨As2O3诱导细胞凋亡时对其端粒酶活性的影响及其作用机制.方法 采用光镜、电镜,PCRELISA,RT-PCR等技术,检测细胞凋亡,端粒酶活性及其催化亚单位的表达.结果 As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,但存在作用浓度,细胞株类型差异性;端粒酶活性随药物作用时间和浓度的增加而明显减弱,同时伴随hTERT mRNA表达水平的下降.结论 端粒酶活性和hTERT mRNA表达在As2O3诱导SKOV3、3AO细胞凋亡过程中共同发挥作用,两者有密切关系,是诱导细胞凋亡的分子机制之一.     

三氧化二砷诱导T淋巴细胞白血病细胞株凋亡研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)对T淋巴细胞白血病细胞株的作用及其机制.方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对细胞株的生长抑作用,流式细胞仪测定细胞凋亡峰,端粒重复扩增法检测端粒酶活性,实时RT-PCR测定端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达.结果2～6μmol/L As2O3可抑制Molt-4细胞生长,且随着时间的延长和药物剂量的增大,这种抑制作用更为明显(P<0.05).药物作用72h,As2O3对Molt-4细胞生长抑制半数致死量为4.68μmol/L.2～6μmol/L浓度范围内,As2O3诱导Molt-4细胞的凋亡率随时间的延长和药物剂量的增大而升高(P<0.05).6μmol/L药物作用96h,K562细胞和Molt-4细胞的凋亡率分别为83.44%±18.04%和77.93%±6.00%.As2O3能显著抑制Molt-4细胞株端粒酶活性,下调hTERT mRNA表达.结论As2O3有明显抑制T淋巴细胞白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用.通过下调hTERT mRNA表达,从而抑制端粒酶活性可能是As2O3的主要作用机制之一.     

三氧化二砷对Hela细胞hTERTmRNA表达的调节和对端粒酶活性的影响

目的：观察三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌细胞(Hela细胞)端粒酶活性及端粒酶逆转录酶(hTERTmRNA)表达的影响。方法：以2μmoL／L的As2O3作用于人宫颈癌Hela细胞，在不同时间点用MTT法检测Hela细胞活力的变化，用流式细胞仪检测细胞周期的变化，用RT-PCR法检测hTERTmRNA表达的变化，用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性的变化。结果：随着As2O3作用时间的延长，Hela细胞的活力逐渐降低，G0／G1期细胞所占比例升高，S期细胞所占比例减少，hTERTmRNA表达水平逐渐降低，端粒酶活性逐渐下降。结论：As2O3可引起Hela细胞周期阻滞，hTERTmRNA的表达水平下调，端粒酶活性降低。     

端粒在As2O3致L02和HepG2细胞凋亡及染色体畸变中的作用

目的 探索端粒、端粒酶活性及端粒逆转录酶基因表达在As2O3诱导L02和HepG2细胞凋亡及染色体畸变过程中的作用.方法 12μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞24、48、72 h,以处理0h作为对照组,流式细胞仪检测细胞凋亡;应用以PCR为基础的端粒重复序列扩增(TRAP-PCR)银染法检测端粒酶活性;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测端粒逆转录酶(hTERT)mRNA表达;0.625 μmol/LAs2O3处理L02和HepG2细胞2、4、6周,以处理0周作为对照组,染色体核型分析检测细胞染色体畸变;检测端粒酶活性及端粒逆转录(hTERT)mRNA表达.结果 12 μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞凋亡率较对照组增加(P＜0.05);端粒酶活性及hTERTmRNA的表达较对照组均明显下降(P＜0.05).0.625 μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞,染色体端-端融合及双微体的畸变率较对照组增加(P＜0.05);端粒酶活性及hTERTmRNA的表达增加(P＜0.05).结论 高浓度As2O3短期处理L02和HepG2细胞可诱导其凋亡.而低浓度As2O3长期处理L02和HepG2细胞可导致染色体畸变,畸变可使基因组不稳定是细胞癌变的基础.端粒、端粒活性及hTERTmRNA表达在此过程中的不同变化也许可部分解释As2O3抗癌和致癌的矛盾作用.     

三氧化二砷对恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用.方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的三氧化二砷诱导A375细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率.结果:As2O3浓度分别为5 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L时,A375细胞的早期凋亡率分别为9.75%、50.9%和43.7%,晚期凋亡率分别为2.10%、4.61%和11.2%,总凋亡率分别为11.85%、55.51%和54.9%.结论:As2O3可诱导A375细胞早期凋亡和晚期凋亡,10 μmol/L和20μmol/L的As2O3可明显增加A375细胞总凋亡率.     

三氧化二砷对小鼠恶性黑素瘤抑制机制的探讨

目的:探讨三氧化二砷(As₂O₃)对小鼠B₁₆细胞实体瘤的生长抑制作用及对端粒酶活性表达的影响,旨在为临床治疗黑素瘤提供理论和实验依据。方法:以不同浓度As₂O₃作用的鼠黑素瘤B₁₆细胞荷瘤小鼠,用TRAP-PAGE-银染法检测药物作用后瘤体组织端粒酶活性的表达;通过测定荷瘤小鼠瘤体大小和肿瘤组织内微血管密度来反映不同剂量As₂O₃的抑瘤作用。结果:As₂O₃能抑制鼠B₁₆细胞实体瘤的生长,破坏肿瘤组织微血管的形成(P<0.01);As₂O₃能明显抑制鼠B₁₆细胞实体瘤端粒酶的活性。结论:As₂O₃对于B₁₆细胞实体瘤的生长有显著的抑制作用,这可能与其抑制肿瘤组织内微血管的形成和端粒酶表达活性有关。     

三氧化二砷对黑素瘤B16细胞黏附和迁移的影响

目的:了解三氧化二砷(As₂O₃)对黑素瘤B16细胞迁移能力的影响,评价As₂O₃抗肿瘤侵袭和转移能力。方法:用Transwell侵袭转移模型评价As₂O₃抗黑素瘤B16细胞的侵袭和转移作用。MTT法检测B16细胞的黏附能力。流式细胞术检测B16细胞表面黏附分子CD44的表达情况。结果:As₂O₃可显著抑制B16细胞的迁移和黏附能力(P<0.05~P<0.01),降低细胞表面黏附分子CD44的表达(P<0.01)。结论:As₂O₃具有抗黑素瘤B16细胞侵袭和转移作用,降低细胞表面黏附分子CD44的表达可能是其机制之一。     

NF-κB特异性抑制剂PDTC对鼠黑素瘤B16细胞增殖及VEGF表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对鼠黑素瘤B16细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:不同浓度的PDTC作用于B16细胞不同时间后,MTT法测定其对B16细胞增殖的抑制率,ELISA检测PDTC作用下B16细胞VEGF的表达情况。结果:经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P0.01);与对照组相比,PDTC作用后B16细胞VEGF表达降低(P0.01)。结论:PDTC具有显著抑制鼠黑素瘤B16细胞生长及VEGF表达的作用,是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。     

三氧化二砷对NB4细胞珠端粒酶活性的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对NB4细胞珠端粒酶活性的影响,并探讨与细胞增殖、分化及细胞周期之间的关系。方法:应用MTT法、BNT法检测细胞的增殖抑制率、细胞分化率、流式细胞仪检测CD11b的表达率、细胞周期时相比率,以PCR为基础的TRAP法检测端粒酶活性。结果:As2O3能有效地使NB4细胞增殖抑制、诱导分化,伴随着端粒酶活性的变化为活性降低。细胞周期分析发现,G0/G1期高或S期低对应低水平端粒酶活性,G0/G1期低或S期高对应高水平端粒酶活性。结论:As2O3可抑制NB4细胞端粒酶活性,并与细胞分化、细胞周期时相有关。     

三氧化二砷对黑素瘤B16细胞内活性氧自由基的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对黑素瘤B16细胞增殖及细胞内活性氧自由基（ROS）水平的影响。方法：30μmol/LAs2O3与500μmol/L N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）分别单独或联合作用于B16细胞,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长抑制情况;流式细胞术检测ROS水平。结果：As2O3能明显抑制B16细胞的增殖,NAC可部分拮抗As2O3对黑素瘤细胞的杀伤效应及诱导凋亡效应。As2O3作用1 h后的B16细胞内ROS水平比对照组升高（P〈0.01）,4 h达到高峰,24 h有所下降,与对照组差异均有统计学意义（P〈0.01）。ROS升高的趋势可被抗氧化物NAC部分阻断（P〈0.05-P〈0.01）。结论：As2O3诱导B16细胞凋亡与ROS水平改变有关,As2O3可通过提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用,这也可能是As2O3抗黑素瘤的途径之一。     

As2O3对乳腺癌细胞的生长及端粒酶活性的影响

目的：探讨不同浓度As2O3对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231端粒酶及其亚单位hTERT-mRNA活性表达的影响,为临床治疗乳腺癌提供理论和实验依据。方法：将不同浓度的As2O3与MDA-MB-231细胞共培养不同时间后,MTT比色法检测As2O3对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用;TRAP-PAGE-银染法检测As2O3作用后细胞端粒酶活性的改变;RT-PCR法测定MDA-MB-231细胞hTERT-mRNA的表达。结果：As2O3可显著抑制MDA-MB-231细胞生长,且存在浓度、时间效应关系,其24 h IC50为24.73μmol/L,48 h IC50为6.99μmol/L;用终浓度分别为10、20、40μmol/L的As2O3与MDA-MB-231细胞作用24h、48 h,银染条带显示出端粒酶活性显著下降;RT-PCR产物电泳条带显示出hTERT-mRNA的表达明显下降。结论：As2O3在体外可显著抑制MDA-MB-231细胞的生长,具有较明显的细胞毒作用;As2O3能显著抑制MDA-MB-231细胞端粒酶及其亚单位端粒酶逆转录酶的活性,且抑制作用具有明显的时间和浓度依赖关系。     

As2O3对胃癌细胞周期及端粒酶活性的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对SGC－7901胃癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响及其机制。方法 细胞凋亡、细胞周期分布及相关蛋白的表达采用流式细胞术;端粒酶活性的检测采用端粒末端重复序列扩增－ELISA法（TRAP－ELISA）,端粒酶亚单位mRNA及c-myc mRNA的表达采用RT－PCR技术。结果 As2O3可明显抑制SGC-7901细胞的生长,细胞凋亡率明显增加,C0/G1期细胞减少,S和G2／M期细胞增加,Bcl-2、c-myc、PCNA蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加,端粒酶活性明显下降;端粒酶亚单位hTR是TP1 mRNA无明显变化,hTRT mRNA表达减少,同时,c-myc mRNA的表达亦减少。结论 As2O3对SGC－7901细胞的抑制作用可能是通过二条途径实现：一个是诱导细胞凋亡,另一个是通过下调hTRT mRNA的表达来下调端粒酶活性,其机制有可能与c-myc和Bcl-2基因的减少以及Bax基因的增加有关。     

三氧化二砷对人卵巢癌细胞株SKOV_3端粒酶活性表达的影响

目的:探讨三氧化二砷对卵巢癌细胞株SKOV3端粒酶活性的影响。方法:用不同浓度的AS2O3溶液作用卵巢癌细胞株SKOV3,于不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;TRAP-银染法观察端粒酶活性的变化。结果:AS2O3溶液对SKOV3有生长抑制的作用,与药物浓度和作用时间相关。AS2O3作用SKOV3细胞24h,其端粒酶活性无明显改变,随着作用时间的延长,端粒酶活性逐渐下降,随着药物浓度的升高端粒酶活性也呈不断下降趋势,以致消失。结论:AS2O3对于人卵巢癌细胞株的生长具有抑制作用,该作用可能与AS2O3能够抑制癌细胞的端粒酶活性密切相关。     

高三尖杉酯碱诱导HL60细胞端粒酶活性的变化

目的研究高三尖杉酯碱(Homohrringtonine,HHT)对HL60细胞端粒酶活性的影响.方法不同浓度HHT作用于HL60细胞12 h及0.02 mg/L HHT作用HL60细胞不同时间后,采用TRAP-PCR-ELISA检测HL60细胞端粒酶活性.结果HHT浓度增加至0.04 mg/L和0.05 mg/L时,HL60细胞端粒酶活性与0 mg/L组相比明显下降(P均＜0.05).0.02 mg/L HHT作用HL60细胞18 h、24 h、30 h后,HL60细胞端粒酶活性明显低于0 h组(P均＜0.05),且低于空白对照(P均＜0.05).结论HHT是一种有效的端粒酶活性抑制剂,其对端粒酶活性的抑制呈时间和浓度依赖性.