豚鼠前庭单个毛细胞的分离

从7只豚鼠前庭中取出壶腹嵴、位觉斑,放置在胶原酶溶液中孵育50min～60 min后行机械分离。获得均含有皮板和纤毛的两种类型活性毛细胞83(±23)个,其中Ⅰ型毛细胞里烧瓶状,细胞中部有明显的颈;Ⅱ型毛细胞呈圆形式椭圆形,胞体比Ⅰ型毛细胞小;Ⅰ、Ⅱ型毛细胞的比例是62:19;分离后5h仍有40％的毛细胞具有活性。另外,笔者还观察到失活的早期变化是胞内出现颗粒。实验结果表明,酶消化后辅以机械分离,可获得大量单个、离体的活性毛细胞,并且能利用进行哺乳动物前庭的生理学研究。     

豚鼠内耳前庭感觉毛细胞的分离

用机械分离法从豚鼠前庭感觉上皮中分离出不同种类的前庭感觉毛细胞（ＶＨＣ）。ＶＨＣ主要可分为Ⅰ型和Ⅱ型细胞。两种细胞形态虽有所差异，但一般均有四形或瓶形胞体，胞核位于细胞基部，胞颈和纤毛变化较大。细胞的活性可通过１％中性红染色鉴定，发现在室温下，１ｈ内大约９０％以上的分离ＶＨＣ可维持其正常形态和活性。并参照对外毛细胞形态的研究提出活性ＶＨＣ的鉴别标准。此项工作为进一步研究ＶＨＣ的感觉机制和某些疾病的发生机理打下了基础。     

耳蜗毛细胞分离方法的改良

目的探讨耳蜗毛细胞的分离方法。方法选出生３周的ＳＤ大白鼠，雌雄兼用，在自制的外淋巴液中取出耳蜗基底膜，置于０．２５ｍｇ／ｍｌ木瓜蛋白酶中，３７℃３０ｍｉｎ消化后，洗去酶液，用钢针在普通解剖镜下剥离毛细胞并置倒置相差显微镜下观察，记录成活时间。结果每侧耳蜗可获２００左右成活的毛细胞，５ｈ后仍有７０％的毛细胞成活。结论用自制改良外淋巴液，并简化了操作过程，可以满意地获得形态、功能完好的毛细胞     

新生期小鼠胰岛分离纯化方法的研究

目的:探讨新生期小鼠胰岛分离纯化方案?方法:采用胰腺局部充盈?胶原酶Ⅴ消化,对比不同消化时间及单纯显微镜下手挑胰岛或Histopaque-1077纯化对胰岛得率的影响,并通过胰岛素/胰高血糖素双染后流式细胞术检测胰岛β和α细胞构成比例?结果:在1 mg/ml酶浓度下,1周和3周小鼠胰岛的最适消化时间分别为23 min(胰岛/胰腺38.11 ± 2.78)和25 min(胰岛/胰腺66.06 ± 2.61)?1周以直径< 50 μm胰岛居多(P < 0.01),而3周以50~99 μm者居多(P < 0.01)?单纯手挑组胰岛得率显著高于Histopaque-1077纯化组(P < 0.05)?所得胰岛存活率和纯度均> 90%,且存在β和α细胞构成比例的动态变化(P < 0.05)?结论:胰腺局部充盈?胶原酶Ⅴ消化后镜下手挑胰岛是一种较好的新生期小鼠胰岛分离纯化方法,消化时间和纯化方法是其重要影响因素?     

牛蛙前庭毛细胞A型钾离子流的实验研究

为了进一步探讨前庭细胞膜上通道的类型及动力学特征,采用全细胞式膜片钳技术在牛蛙前庭毛细胞侧膜上研究了钾通道电流。结果表明阻断内向电流后,当钳制电位为-100mV,阶跃从-70mV至 20mV时,随着膜电位的去极化,可记录到快速瞬时的A型通道电流,激活电压为（-53±13）mV,4-Ap对其有特异性阻断作用;A型钾通道的数量在牛蛙毛细胞间存在差异;除A型钾通道外,细胞膜上还含有其它类型的通道,这种通道能被TEA阻断,其性质待定。     

AIF和PARP-1在庆大霉素致前庭毛细胞凋亡中的作用

目的 探讨凋亡诱导因子(AIF)和聚(ADP-核糖)聚合酶1(PARP-1)在庆大霉素损伤致前庭毛细胞凋亡中的作用及机制.方法 取出生后3 ～4d的大鼠球囊斑和椭圆囊斑行离体前庭器官培养,经培养过夜后再用2 mg/mL庆大霉素培养液继续培养72h.用流式细胞术检测前庭毛细胞凋亡,RT-PCR法检测AIF和PARP-1基因表达情况,Western blotting法分别检测AIF线粒体蛋白和胞浆蛋白的表达,Western blotting法检测PARP-1蛋白表达.结果 流式细胞术结果显示庆大霉素组前庭毛细胞凋亡率较对照组显著增加.RT-PCR显示庆大霉素损伤组AIF和PARP-1表达明显增加.Western blotting结果显示庆大霉素损伤组线粒体蛋白表达降低,而胞浆蛋白表达升高.庆大霉素损伤组PARP-1蛋白表达增加.结论 AIF介导的非Caspase依赖途径参与了庆大霉素损伤导致前庭毛细胞凋亡,PARP-1可能参与了AIF通路的激活.     

内耳毛细胞的再生研究

各种疾病、噪声、医源性及环境化学毒物所致的内耳感音神经性聋，其实质即在于内耳毛细胞发生了变性，甚至坏死，那么受损后的内耳毛细胞是否具有再生能力，这一直为人们所关注，是近年来人们在耳聋防治领域所研究的重要内容。感音神经性聋的防治甚是困难，而从毛细胞再生这一研究出发打开对耳聋进行防治突破口，不仅有助于研究和探明感音神经性聋的发病机理，而且可以为耳聋的防治提供客观证据，有着重要的理论价值及临床指导意义，同时又具有深远的社会意义。过去传统观念认为，在两栖类和某些鱼类，听感觉毛细胞能够终生产生，而且具有通…     

小鼠肝星状细胞分离方法的优化

目的：建立一种高效稳定的小鼠肝星状细胞的分离方法,为进一步研究肝纤维化的机制奠定基础。方法：采用Ⅳ型胶原酶灌注消化法分离肝星状细胞,省略链酶蛋白酶的使用,利用肝星状细胞密度低的特性,使用Nycodenz进行梯度密度离心。结果：同时分离两只小鼠,使得细胞得率大大提高,细胞存活率和活力也能满足后续实验。结论 ：同时分离两只小鼠解决了细胞得率低的难题,建立了一种稳定高效的分离方法。     

应用胰蛋白酶分离豚鼠耳蜗内毛细胞

目的：采用胰蛋白酶孵育后机械分离法以获得单离的豚鼠耳蜗内毛细胞。方法：豚鼠被迅速断头处死，暴露耳蜗，在解剖显微镜下去除耳蜗侧壁，经胰蛋白酶消化并轻轻吹打，以获得单离的豚鼠耳蜗内毛细胞。静置后在倒置相差显微镜下观察。结果：本法每侧耳分离出活性好的内毛细胞约5～20个，多数分离的内毛细胞能存活5h左右。结论：此技术能提供足量的单离内毛细胞，用于内毛细胞的电生理性质等研究。     

一种快速的小鼠心室肌细胞分离方法

报道一种快速简便的小鼠心室肌细胞分离方法，获得形态结构完整，电生理学特征正常的钙耐受性上心肌细胞。     

庆大霉素损伤后内耳毛细胞凋亡与Bcl-2基因蛋白表达

目的 :探讨庆大霉素损伤时毛细胞凋亡现象及凋亡调控机制。方法 :40只豚鼠分两组 ,分别腹腔注射庆大霉素和生理盐水。利用 TUNEL标记技术和免疫组化方法分别检测毛细胞凋亡和 Bcl- 2蛋白表达。结果 :庆大霉毒实验组毛细胞凋亡发生率为 52 .6% ,Bcl- 2阳性细胞表达率为 ( 2 8.30± 4.2 4 ) % ;对照组无毛细胞凋亡现象 ,其 Bcl- 2阳性细胞表达率为 ( 56.40± 5.43) %。实验组 Bcl- 2阳性细胞表达率明显低于对照组( P<0 .0 0 1 )。结论 :1细胞凋亡是庆大霉素损伤内耳毛细胞的一种方式。 2庆大霉素可能影响凋亡相关基因的表达。     

豚鼠内耳毛细胞的电镜样品制备方法

内耳毛细胞的电镜样品制备较为广泛，方法各不相同。我们介绍的是较为简单的方法，多年实践经验证明这种方法容易掌握，很适合研究生进行科研课题的研究，并能达到预期目的。     

小鼠前庭感觉器官发育的形态学研究

目的 :探讨小鼠前庭感觉器官发育的特点及规律。方法 :应用光镜对昆明种小白鼠的前庭感觉器官从胚胎第 10天 (ED10 )至出生后第 14天 (P14)的发育过程进行形态学研究。结果 :小鼠前庭感觉器官的形态发育过程可分为四个时期 :1)耳泡发育期 ;2 )前庭感觉器官上皮增殖期 ;3)前庭感觉器官上皮分化期 ;4)前庭感觉器官发育成熟期。结论 :小鼠在出生时 ,前庭感觉器官的上皮已充分分化发育 ,出生后 2周时已完全发育成熟     

在Sox2阳性细胞敲除β-catenin对小鼠内耳发育和极性的影响

 目的 探究经典Wnt/β-catenin信号通路的核心蛋白β-catenin敲除对小鼠内耳发育和极性的影响。方法 在胚胎小鼠内耳感觉上皮的前体细胞(Sox2阳性细胞)条件敲除β-catenin,观察内耳大体结构改变情况。对基底膜和椭圆囊斑、球囊斑行免疫荧光染色,观察毛细胞数量、排列和极性的变化情况。结果 与对照组比较,β-catenin条件敲除后,听泡体积变小,耳蜗和前庭器变小,前庭感觉上皮毛细胞减少(P<0.01)。耳蜗静纤毛方向紊乱,动纤毛在位置和数量上发生变化,前庭毛细胞方向也产生散在性紊乱。结论 β-catenin调控小鼠内耳发育和毛细胞极性,经典Wnt/β-catenin信号通路可能与非经典Wnt/PCP通路共同调控耳蜗伸展和内耳平面细胞极性。     

小鼠心室肌细胞分离方法的改进

目的：探索更简单实用和重复性好的小鼠心肌细胞分离技术．方法：实验于2005～05／09在大连大学医学院医学研究中心完成．选择8～16周龄昆明小鼠150只，雌雄不拘，体质量30～40g，由大连大学医学院动物中心提供．采用原位主动脉插管和动脉夹固定法酶解分离小鼠心室肌细胞，并在室温下进行全细胞膜片钳记录．结果：可将主动脉插管的时间控制在1．5min内，所获心室肌细胞横纹清晰，一次性复钙可获得50％～60％的耐钙细胞，分离所得细胞可在全细胞膜片钳方式下记录到一过性外向钾电流（Ito）.     

小鼠前庭感觉器官发育的形态学研究

目的：探讨小鼠前庭感觉器官发育的特点及规律。方法：应用光镜对昆明种小白鼠的前庭感觉器官从胚胎第10天（ED10）至出生后第14天（P14）的发育过程进行形态学研究。结果：小鼠前庭感觉器官的形态发育过程可分为四个时期：1）耳泡发育期；2）前庭感觉器官上皮增殖期；3）前庭感觉器官上皮分化期；4）前庭感觉器官发育成熟期。结论：小鼠在出生时，前庭感觉器官的上皮巳充分分化发育，出生后2周时巳完全发育成熟。     

新生小鼠肝细胞原代培养方法的改良

一种理想的肝细胞培养方法可以获取产率高、活性好、功能强的肝细胞.原位两步灌流法是分离肝细胞的经典方法,但具有操作复杂、费用高、易污染等缺点,不适合较小动物也不易在一般实验室开展.本研究采用非灌流胰蛋白酶消化法分离培养新生小鼠肝细胞获得满意结果.现报告如下: