广西南宁地区G6PD基因突变与新生儿黄疸的关系

目的：分析本地区最常见的三种基因突变型G1388A、G1376T和A95G与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）活性之间的相关性,并探讨G-6-PD基因突变对新生儿黄疸的影响。方法：124例广西南宁的高胆红素血症新生儿为研究对象。应用突变特异性扩增系统法检测G-6-PD基因突变,应用硝基四氮唑蓝（NBT）定量法检测G-6-PD活性。比较G-6-PD不同基因突变型之间以及与正常组之间胆红素脑病发生率、出生72 h后血清胆红素峰值组间的差异。采用非条件logistic回归分析血清胆红素值>340 μmol/L的危险度。结果：124例中有37例G-6-PD 基因突变（G1388A 20例,G1376T 14例,A95G 4例,1例同时存在G1388A与A95G突变）。20例G1388A突变者中5例（25%）G-6-PD酶活性正常,14例G1376T突变者中4例（29%）G-6-PD酶活性正常,4例A95G突变者G-6-PD 酶活性均缺乏。G1388A与G1376T组胆红素脑病发生率及出生72 h后血清胆红素峰值差异无显著性。G-6-PD 突变组出生72 h后血清胆红素峰值、胆红素脑病发生率及血清胆红素>340 μmol/L的危险度与G-6-PD正常组相比,差异无显著性。结论：广西南宁地区G-6-PD突变仍常见G1388A、G1376T和A95G基因型。NBT法诊断G-6-PD缺乏存在假阴性。不同基因型对出生72 h后血清胆红素峰值、胆红素脑病发生率的影响无差异。单独的G-6-PD基因突变对生后72 h血清胆红素峰值、急性胆红素脑病发生率及血清胆红素大于340 μmol/L危险性均无影响。［中国当代儿科杂志,2009,11（12）：970-972］     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患儿G-6-PDmRNA表达的研究

目的：检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症患者及其家系成员的G-6-PDmRNA表达水平,从转录水平探讨其可能的发病机制。方法：提取G-6-PD缺乏症患者及其直系家属(患者父亲和/或母亲等)外周血RNA,采用逆转录方法形成cDNA后,运用逆转录实时定量PCR(QuantitativeReal-TimePCR,QRT-PCR)技术,测定G-6-PDmRNA的表达量。使用SPSS10.0统计分析软件将3组进行组间两两比较。结果：G-6-PD缺乏症患儿组mRNA表达量为0.57±0.19,父系组为0.74±0.21,母系组为0.67±0.21,患儿组与父系组比较t=-3.18,(P<0.01);与母系组比较t=-2.54,(P<0.05)。结论：G-6-PD缺乏症患者的G-6-PD基因发生突变后其G-6-PDmRNA表达量发生了改变,提示该病的发生与在转录水平上发生变化有关,在G-6-PD缺乏症的发病过程中起到一定的作用。     

遗传因素在广西新生儿高胆红素血症中的作用

目的探讨UGT1A1 G71R突变、OATP2A388G突变和G-6-PD缺乏对在广西新生儿高胆红素血症发病的作用。方法用四氮唑蓝定量法（NBT法）测定G-6-PD酶活性。聚合酶链反应-等位基因特异性寡核苷酸探针点杂交（PCR-ASO）法确定G71R基因型。限制性片段长度多态性分析（RFLP）检测A388G基因型。测定109例新生儿脐血的G-6-PD活性及G71R基因型,其中101例同时检测了A388G基因型。据G-6-PD活性及G71R或A388G基因型分组,分析UGT1A1G71R突变、OATP2A388G突变和G-6-PD缺乏与足月新生儿高胆红素血症之间关系。结果G71R等位基因频率在G-6-PD缺乏组为22．03％,在G-6-PD正常组为28．00％。G-6-PD缺乏共存有G71R突变纯合子或杂合子的新生儿高胆红素血症发生率（95．50％）高于G-6-PD正常且G71R为野生型的新生儿（53．90％）,x^2=10．45,P=0．0012,前者发生高胆红素血症的机会比（95％可信区间）[OR（95％CI）]为18．00（2．12,152．9）。A388G等位基因频率在G-6-PD缺乏组为20．O％,在G-6-PD正常组为18．5％。G-6-PD缺乏共存有A388G突变新生儿的高胆红素血症发生率（90．0％）高于G-6-PD正常且A388G为野生型的新生）L（44．80％）,X2=10．39,P=0．0013,前者发生高胆红素血症的伽（95％CT）为11．08（2．15,56．48）。结论G71R突变与G-6-PD缺乏共存或A388G突变与G-6-PD缺乏共存对广西足月新生儿高胆红素血症的发生有协同作用。     

逆转录-PCR-变性梯度凝胶电泳法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因缺陷女性携带者

目的：探讨应用逆转录-PCR-变性梯度凝胶电泳法(RT-PCR-DGGE)对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因缺陷女性携带者人群进行分子诊断的可行性。方法：对54例G6PD基因缺陷可疑携带女性的血液标本,应用外周血提取总RNA并逆转录成cDNA;针对已报道的中国人群17种突变位点,以cDNA为模版,分段设计6对DGGE引物,PCR扩增、DGGE筛查分型,必要时进行测序验证。结果：54例可疑标本共检出1例1024C/T、20例1376G/T、12例1388G/A ,共检出杂合突变标本33例,总检出率为61.1%。结论： RT-PCR-DGGE对G6PD基因缺陷女性携带者人群具有较高的检出率,具有临床诊断意义。［中国当代儿科杂志,2009,11（8）：613-616］     

X连锁血小板减少症家系WASP基因分析

目的：对X连锁血小板减少症（XLT）家系进行病史调查和WASP基因分析,探讨其临床特点和发病机制。方法：应用PCR扩增,DNA直接测序技术对1例XLT患儿及家族3代人共13名家系成员进行WASP基因突变分析。结果：患儿WASP基因2号外显子291号碱基G/A突变,导致该基因所编码的第86号氨基酸由精氨酸变为组氨酸,为错义突变。患儿母亲为X染色体突变基因杂合子携带者。结论：WASP基因突变是XLT的分子学发病机制,G291A是WASP基因突变位点之一。［中国当代儿科杂志,2010,12（10）：784-787］     

两个A型尼曼-匹克病家系基因型和临床表型分析

目的 研究2个无关的A型尼曼-匹克病家系酸性神经鞘磷脂酶(ASM)基因SMPD1突变及遗传特征,分析基因型与表型关系.方法 收集2位先证者及其家庭成员的临床资料,采用基因组小剂量抽提试剂盒从2个家系共6名成员及100例健康对照者外周血中提取基因组DNA,根据人类基因组数据库中获得的基因序列(NM000543)设计4对引物,采用聚合酶链反应(PCR)进行扩增,并应用PCR产物回收试剂盒进行产物回收,采用DNA直接测序法进行基因突变检测,测序结果应用DNAman软件进行序列对比分析,确定基因突变位点,对测序异常的片段重新进行PCR扩增与测序,以验证结果的可靠性.结果 PCR扩增所得片段与预计扩增片段大小一致,无非特异扩增带,可以进行纯化与测序.将测序结果与正常序列进行对比分析后,在先证者1和2的SMPD1基因的第1号外显子均发现一个纯合突变T107C,遗传密码子由GTG变为GCG,从而导致36位缬氨酸被丙氨酸替代(p.V36A),最终致使ASM(E.C.3.1.4.12)活性缺陷,产生临床症状.先证者之父母为携带者,100例健康对照中未发现上述突变.结论 证实SMPD1基因是本研究中2个无关的A型尼曼-匹克病家系的致病基因.2个家系患儿均为SMPD1基因纯合突变致病,其父母为表型正常的基因突变携带者.     

6-丙酮酰-四氢蝶呤合成酶缺陷症的产前诊断

目前 对6－丙酮酰－四氢喋呤合成酶（6－myruvoyl tetrahydropterin synthase,PTPS)缺陷所致非经典型苯酮尿症家系先证母亲现孕的第3胎进行产前DNA突变分析,以确诊其是否受累。方法 用PCR和DNA测序在先证者及其父母身上找到PTPS基因突变。分离胎儿羊水细胞DNA,以PCR－限制酶识别突变位点的方法进行基因突变分析;同时以辅以高压液相（HPLC）测定羊水中的生物蝶呤／新喋呤＋生物蝶蛉比例（B％）,对照该家系的尿生物蝶呤水平进行生化检查。结果 该家系先证PTPS－对等位基因各有－286G→A和226G→A和226C→T的突变,分别来自父母;先证者姨母也是226C→T突变携带者,待测胎儿不含这两种突变。结论 对PTPS基因而言,该家系的待测胎儿为完全正常。     

糖原累积病Ⅰa型1例及其家系的临床和分子遗传分析

目的：研究1例糖原累积病Ⅰa型患者及其家系的基因突变情况。方法：应用聚合酶链反应扩增葡萄糖-6-磷酸酶基因（G6PC基因）全部5个外显子,通过DNA直接测序的方法,对糖原累积病Ⅰa型患者及其家系中父、母、姐姐的G6PC基因进行突变检测。结果：在患者G6PC基因的第5外显子上的第743碱基发生杂和突变,由G转变为A,导致G6Pase蛋白第222位氨基酸由甘氨酸变为精氨酸（G222R）,家系中父亲、姐姐均未发现该突变,而母亲携带与患者相同突变。结论：首次在国内报道G6PC基因的G222R突变,丰富了糖原累积病Ⅰa型在中国人群的突变谱。     

Wiskott-Aldrich综合征家系调查及基因突变分析

目的：对一个Wiskott-Aldrich综合征家系进行调查,并对候选突变基因WASP进行分析,探讨该病临床特点和发病机制。方法一例3代人Wiskott-Aldrich 综合征家系,调查家系14名成员病史,采集外周血样并提取DNA,采用PCR扩增、DNA直接测序技术进行WASP基因突变分析。结果 PCR-DNA直接测序证实先证者WASP基因2号外显子291号碱基G/A突变,导致该基因第86号氨基酸由精氨酸（R）变为组氨酸（H）,即WASP基因R86 H错义突变。家系中患者检出与先证者相同的突变,患者母亲均为突变携带者。结论 Wiskott-Aldrich综合征是X连锁隐性遗传病,X连锁血小板减少症是Wiskott-Aldrich综合征的一种轻型表现,WASP基因突变是该病的分子学发病机制。本研究发现的R86H突变是Wiskott-Aldrich综合征的热点突变位点。Wiskott-Aldrich综合征临床上缺乏特征性诊断依据,对该病认识的提高和基因诊断有助于早期识别和正确诊断。     

蚕豆病患儿父、母、子红细胞葡萄糖—6—磷酸脱氢酶活性测定的临床研究

了解蚕豆病患儿急性溶血期红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）活性变化及父、母、子同时检测G-6-PD活性对该病诊断及家系调查的意义；方法对急性溶血期蚕豆病患儿及其父母用酶学动力法测定红细胞G-6-PD活性。结果157例急性溶血期患儿G-6-PD活性低于正常143例，占91.08%（男135，女8），其中轻度减低42例、中度降低96例，重度降低5例，14例患儿急性溶血期G-6-PD活性检测结果正常，占8.92%，他们父母酶活性检测，12例母（12/14）、5例父（5/14）、3例父母（3/14）酶活性下降；157例母亲中129例G-6-PD活性下降（82.16%），其中143例男性患儿母亲中118例活性下降（82.52%）；157例父亲中53例活性下降（27.38%）；G-6-PD活性子、父、母均降低32例（20.38%），子、母降低父正常85例（54.14%）、子、父降低母正常10例（6.37%），子降低父、母正常16例（10.19%）。14例女性患儿中，父母酶活性均降低2例，为纯合子发病，2例父酶降低母酶正常，为父源性杂合子，其余10例为母源性杂合子起病。结论父母子同时检测红细胞G-6-PD活性有助于蚕豆病患儿特别对急性溶血期红细胞G-6-PD活性正常患儿的明确诊断，家系调查有助于推测患儿G-6-PD缺陷基因的遗传方式。     

Neonatal screening for glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency: sex distribution.

Eight hundred and six newborn infants at high risk for glucose-6-phosphate dehydrogenase (G-6-PD) deficiency were screened; 30.2% of the boys and 10.4% of the girls had severe G-6-PD deficiency. Surprisingly, 14% of the enzyme deficient girls had a father from a low risk ethnic group. Girls of high risk mothers should be screened for G-6-PD deficiency regardless of paternal origin.     

广西恭城县瑶族和汉族居民G-6-PD缺乏症发病率及基因频率的调查

目的研究广西恭城县瑶族和汉族居民的G-6-PD缺乏症发病率及基因频率。方法使用G-6-PD试纸法初筛,四氮唑蓝定量法测定确认的方法调查对2050名(男1126,女1124)瑶族和874名(男481,女393)汉族初中学生进行G-6-PD缺乏症的调查。结果瑶族男缺乏率5·75%(显著缺乏4·87%,中度缺乏0·97%),瑶族女性缺乏率1.95%(显著0·59%,中度1·36%),瑶族男女合并总缺乏率为3·85%;瑶族男性基因频率为:0·057,瑶族女性杂合子的估计值为10·84%:汉族男性缺乏率7·06%(显著缺乏6·03%,中度缺乏1·04%),汉族女性缺乏率3·56%(显著0·76%,中度2·80%),汉族男女合并总缺乏率为5·49%;汉族男性基因频率为0·0706,汉族女性杂合子的估计值为13·12%;全县瑶族和汉族合并缺乏率为4·34%。结论恭城县G-6-PD缺乏发病率,瑶族比汉族的稍低,但民族间的差异比地域间的差异相对要小。     

小儿蚕豆病基因突变的研究

蚕豆病是由于红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏引起的先天性溶血性贫血。我们检测了10例病人及其中5例患者的双亲，结果为6例病人为cDNA1388突变，3例病人为cDNA1376突变，未定型1例。5例患者的双亲均为携带者，其中3例患者的母亲为cDNA1388突变的携带者，2例患者的母亲为1376突变的携带者。说明cDNA1388及1376突变是最常见的突变类型。     

Leucocyte glucose-6-phosphate dehydrogenase (G-6-PD) activity in G-6-PD deficient subjects

The activity of glucose-6-phosphate dehydrogenase (G-6-PD) in leucocytes was studied in the following groups of Greek people.Group 1: 43 male children and 16 male students with mean values of enzyme activity of 27.7±16.6 units and 24.6±5.6 units, respectively.Group 2: 15 G-6-PD deficient male children who had never experienced an acute haemolytic episode with a mean value of 10.8±4.6 units.Group 3: 19 G-6-PD deficient male children during favism and 3 months after the haemolytic crisis with mean values of 8±4 units and 9.2±1.9 units, respectively.Group 4: 19 mothers of children from group 3 who by definition were carriers of G-6-PD deficiency had a mean value of 18.2±8.2 units.The difference between means for group 1 and groups 2, 3 and 4 is highly significant (P<0.001).Therefore the enzymatic defect in Greek people is not limited to the erythrocytes but can be also demonstrated in leucocytes.     

Genetic polymorphisms in Thai neonates with hyperbilirubinemia

Aim:  Polymorphisms of the UGT1A1 gene, SLCO1B1 gene and GST gene have been associated with significant hyperbilirubinemia. We would like to determine whether the variation of UGT1A1 gene, SLCO1B1 gene and GST gene may play a significant role in neonatal hyperbilirubinemia in Thai infants.
Methods:  Ninety-one study subjects (hyperbilirubinemic group) and 86 control subjects were studied.
Results:  The cause of neonatal hyperbilirubinemia could not be identified in 64 infants (70.3%), ABO blood group incompatibility in 14.3% and Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G-6-PD) deficiency in 8.8%. In the hyperbilirubinemic group, 23 of 91 (25.3%) infants demonstrated variant of UGT1A1 at nucleotides (nt) 211 as compared to 6 of 86 (7%) in the control group (p = 0.001). There were no significant differences between groups in the variants UGT1A1 at nt 686, SLCO1B1 gene at nt 388, 463 and the GST gene. Male infants with G-6-PD deficiency were associated with hyperbilirubinemia (21.2% vs. 4.8% in the control group) with an odds ratio (OR) of 5.37 (p =0.02). The relationship between G-6-PD and variant in UGT1A1 gene at nt 211 could not be determined.
Conclusion:  Thai infants with variant in the UGT1A1 at nt 211 or with G-6-PD deficiency are at higher risk for developing neonatal hyperbilirubinemia.     

不同G-6-PD活性新生儿光疗致溶血机制及其预防

目的探讨不同G6PD活性新生儿光疗溶血机制及预防。方法将G6PD正常与缺陷光疗患儿随机分为维生素E干预组和对照组,测定比较超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、总胆红素(TB)、血红蛋白(Hb)及光疗指数。结果光疗前G6PD缺陷组比正常组SOD和Hb低,ROS高;光疗中G6PD缺陷干预组比正常干预组SOD高,MDA低,光疗指数小,G6PD缺陷对照组比正常对照组ROS、MDA高,光疗指数大(各组比较均P<0.01或P<0.05)。光疗后G6PD缺陷对照组Hb下降,并比干预组低,G6PD正常两组Hb均下降,干预组比对照组高(各组比较均P<0.01或P<0.05)。结论光疗可致抗氧化能力下降,脂质过氧化损伤致G6PD缺陷光疗者溶血更突出,维生素E干预更有效。