EGCG干预LMP1激活的AP-1信号转导通路

目的　探讨EGCG对鼻咽癌细胞激活蛋白 1(AP 1)信号转导通路的干预作用 ,阐明在鼻咽癌细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)活化的AP 1信号转导通路中靶分子的机制。方法　采用EB病毒阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1 LMP1细胞。利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察EGCG对CNE1和CNE1 LMP1细胞的生存率的影响。采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对AP 1活性的作用。利用间接免疫荧光法观察EGCG对JNK核移位的影响 ,再分别提取CNE1和CNE1 LMP1的胞浆及胞核蛋白 ,Westernblot分析EGCG抑制JNK的核移位后 ,胞浆及胞核蛋白中JNK的变化。采用Westernblot分析EGCG对c Jun的磷酸化水平的影响。采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对cyclinD1启动子活性的影响 ,并用Westernblot分析EGCG对cyclinD1蛋白表达的作用。结果　EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性 ,并可抑制AP 1的活性。EGCG能抑制JNK的核移位 ,并抑制c Jun的磷酸化。EGCG对AP 1信号通路下游的靶基因cyclinD1的启动子活性及其蛋白表达都有抑制作用。结论　EGCG对信号转导通路上的AP 1、JNK、c Jun、cyclinD1多个靶点分子具有干预作用。LMP1是EB病毒这种编码的蛋白 ,因此 ,EGCG抑制与病毒相联系的信号转导通路 ,可能是EGCG抑制与病毒相关的肿瘤的分子机     

EB病毒潜伏膜蛋白1通过蛋白激酶C调节Annexin Ⅰ的丝氨酸磷酸化

背景与目的:在利用磷酸化蛋白质富集结合蛋白质组学技术分析EB病毒潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)调节的磷酸化蛋白质分子时,我们发现了包括Annexin Ⅰ在内的25个新的受EB病毒LMP1调节的磷酸化蛋白质分子.本实验探讨LMPl调节Annexin Ⅰ磷酸化的信号通路.方法:采用鼻咽癌细胞系CNE1和LMP1稳定表达的细胞系CNE1-LMP1,Western blot检测Annexi Ⅰ的蛋白表达水平;免疫沉淀结合Western blot检测Annexin Ⅰ的丝氨酸和酪氨酸磷酸化;激酶分析实验检测蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的活性.结果:LMP1对Annexin Ⅰ的蛋白表达水平没有影响,LMP1上调Annexin Ⅰ的丝氨酸磷酸化水平,而对酪氨酸磷酸化水平没有影响.在CNE1细胞中PKC的相对活性为0.97±0.05,CNE1-LMP1细胞中的PKC相对活性为1.22±0.10,CNE1与CNE1-LMP1细胞之间PKC的活性差异有统计学意义(P＜0.01,n=6),表明LMP1可以上调PKC活性.Annexin Ⅰ的丝氨酸磷酸化水平随PKC活性的变化而变化.结论:EB病毒LMP1通过PKC信号通路调节Annexin Ⅰ丝氨酸磷酸化.     

siRNA干扰KLF8表达对鼻咽癌细胞上皮间质转化的作用

目的 探讨下调KLF8的表达对鼻咽癌CNE1-LMP1细胞侵袭能力的影响及其机制。方法 通过脂质体转染法将KLF8 siRNA真核表达质粒稳定转染至鼻咽癌细胞株CNE1-LMP1。Western blot和RT-PCR法检测CNE1-LMP1细胞中KLF8、E-cadherin、N-cadherin蛋白和mRNA表达水平的变化。Transwell侵袭实验观察siRNA后对CNE1-LMP1细胞侵袭能力的影响。结果 KLF8 siRNA转染的CNE1-LMP1细胞株与其阴性对照NC-si组比较KLF8蛋白和mRNA表达水平均下调,证实稳转细胞株建立成功。KLF8 siRNA可上调CNE1-LMP1细胞中E-cadherin的表达,而下调N-cadherin的表达。Transwell侵袭实验显示siRNA干扰CNE1-LMP1细胞侵袭能力下降。结论 KLF8在鼻咽癌CNE1-LMP1细胞中高表达;通过siRNA下调KLF8的表达能干扰上皮间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达,阻断EMT过程,抑制CNE1-LMP1细胞侵袭转移。     

茶多酚干预信号转导通路的研究进展

芬多酚可干预以激活蛋白质-1(AP-1)和核转录因子-κB(NF-κB)为主的信号转导通路.茶多酚通过JNK通路抑制促癌物诱导的AP-1活性;通过降低抑制蛋白IκB磷酸化来调节NF-κB的活性.荼多酚选择性地阻断肿瘤细胞信号转导通路,从而破坏肿瘤控制性生长调节机制,为其抗癌机制研究开拓新的思路.     

神经酰胺通过非p53途径诱导鼻咽癌细胞中p21WAF1的表达

[目的]探讨第二信使神经酰胺信号传导诱导鼻咽癌细胞p21^WAF1表达的机理。[方法]Western blot法检测p53,p21,Jun,NFкB基因表达,试剂盒检测SAPK/JNK的活性。[结果]在鼻咽癌CNE2细胞中阿霉素能刺激p53表达,不能上调p21^WAF1的表达,可见在CNE2细胞中p53为功能异常型,C2-神经酰胺处理CNE2细胞后,可见p53蛋白呈现下降趋势;而p21^WAF1蛋白在处理4、16小时时,p21^WAF1表达明显增高,但36小时后p21^WAF1恢复到基础水平,在6.25μmmol/L,12.5μmmol/L,25μmmol/L的C2-神经酰胺处理24小时后p21^WAF1上升,而50μmmol/L的C2-神经酰胺处理24小时后,p21^WAF1开始下降,C2-神经酰胺处理CNE2细胞2小时后,JNK的活性开始增加,6小时时保持激活状态,12小时时下降,c-Jun/AP1蛋白在神经酰胺处理后3小时开始明显增高,持续到12小时,24小时下降至基础水平;C2-神经酰胺对CNE2细胞中NFкB蛋白表达没有明显的变化。[结论]C2-神经酰胺在鼻咽癌细胞CNE2中,通过p53非依赖性途径诱导p21^WAF1的表达,神经酰胺激活JNK,从而激活AP-1因子,可能是其诱导p21^WAF1表达的机理。     

携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞

目的 构建携带绿色荧光基因的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法 从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的ＥＢＶ潜伏膜蛋白2A（latent membrane protein 2A,LMP2A）序列,并定向克隆入pIRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞（实验组）,同时另设转染pIRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组。利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达。结果 双酶切及测序鉴定证实真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75%;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达。结论 成功构建了pIRES2-Zs-Green1- LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达。     

茶多酚诱导鼻咽癌细胞cyclin D1表达下调

目的：探索茶多酚及其单体抑制鼻咽癌增殖的分子机制。方法：应用光学显微镜、MTT测定、流式细胞仪、报告基因和Western blot分析等方法,研究茶多酚及其单体对细胞增殖和细胞周期的影响及分子机理。结果：茶多酚处理鼻咽癌细胞CNE1－LMP124h后,从裂相细胞显著减少,细胞增殖受到抑制,细胞的生存率从100％下降到38．1％（200μg/ml);S期细胞明显减少,从22．20％下降至13．16％（200μg/ml) ,G0/G1细胞所占百分率增加,从68．50％上升至74．08％,细胞出现G1／S阻滞,同时,cyclinD1基因启动子转录活性显著下调,与对照组比下降4－5倍,但相同浓度的茶多酚与（-)-epigallocatechin-3-gallate(EGCG)处理没有显著性差别,cyclinD1蛋白表达水平明显降低,采用荧光酶双报告基因系统分析,发现茶多酚处理12－14h后,AP－1、NFkB反式激活活性均匀显著下降,与对照组（0μg/ml)比分别下降5－6倍、7－8倍,且呈明显量效关系。结论：茶多酚能抑制鼻咽癌细胞CNE－LMP1增殖,茶多酚诱导致cyclinD1基因的转当和表达下调可能在其中起着重要作用。     

鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中EBV-LMP 1的表达

目的：探讨人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中EB病毒编码的LMP 1基因表达情况。方法：用免疫组化法及Western bolt法分别检测鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中LMP 1基因的表达情况。结果：免疫组化及Western bolt法均显示,CNE2Z细胞中LMP 1呈强阳性表达,而CNE1细胞中LMP 1呈阴性表达。结论：人高分化鼻咽癌细胞系CNE1中没有LMP 1的表达而人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中LMP 1呈阳性表达,鼻咽癌的恶性程度可能与LMP 1的表达有关。     

鼻咽癌细胞中大蒜素抑制MAPK信号通路的作用机制研究

目的:探讨大蒜素导致鼻咽癌细胞G1/S期阻滞的分子机制。方法:采用MTT法测定细胞增殖活性;激酶活性分析测定MAPK激酶的活性;报道基因分析检测转录因子AP-1的转录活性;Western blot法检测细胞周期蛋白CyclinD1的表达水平。结果:大蒜素呈浓度依赖性抑制鼻咽癌细胞增殖,细胞的存活率从100%降为52.8%(50μg/mL),P=0.0068;检测50μg/mL大蒜素处理时MAPK激酶的活性,发现其活性仅为未处理组的42.92%,说明大蒜素抑制了MAPK激酶活性;基因分析显示在大蒜素作用下,转录因子AP-1的转录活性也呈浓度依赖性的降低,从6.3×103U降低到3.8×103U(50μg/mL),P=0.0089,受AP-1调节的G1/S期调节蛋白CyclinD1的相对表达水平也从100%下降为32.2%。结论:大蒜素通过抑制MAPK信号通路而抑制转录因子AP-1的活性,从而下调CyclinD1表达,导致细胞G1/S期阻滞。     

EBV-LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1细胞凋亡的影响

背景与目的:已证实EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latentmembraneprotein,LMP1)具有转化致瘤作用,在鼻咽癌的发生发展中起重要作用。LMP1的转化致瘤作用可能与细胞凋亡有关,本实验目的是观察EBV-LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1细胞凋亡的影响,探索LMP1在鼻咽癌发生发展中的可能机制。方法:用电转染的方法将带有绿色荧光蛋白GFP报道系统的EB病毒LMP1基因真核表达质粒导入CNE1,用荧光显微镜检测报道基因GFP的表达情况;用免疫组化法及Westernblot法检测目的基因LMP1的表达情况;用流式细胞仪、荧光染色及DNA片段分析等方法检测在有地塞米松磷酸钠或无血清饥饿诱导的情况下LMP1对CNE1细胞凋亡的影响。结果:CNE1G细胞(转染空载质粒PAT-GFP的CNE1细胞)及CNE1GL(转染目的基因质粒PAT-GFP-LMP1的CNE1细胞)有绿色荧光蛋白表达,CNE1细胞(未经转染的CNE1细胞)无绿色荧光蛋白表达;CNE1GL细胞LMP1呈阳性表达,而CNE1及CNE1G细胞均为阴性。CNE1、CNE1G及CNE1GL3组细胞分别用地塞米松磷酸钠或无血清1640培养液处理后均有凋亡出现,且两种诱导方法均能使CNE1GL组细胞的凋亡指数(apoptosisindex,AI)较CNE1及CNE1G组明显增高(P<0.05),而CNE1与CNE1G组的凋亡指数无明显差别。3组细胞常规培养下则无凋亡出现。结论:LMP1基因成功导入CNE1细胞     

CRISPR-Cas9敲除Notch1对CNE2细胞增殖及辐射敏感性的影响

背景与目的：Notch信号转导通路对鼻咽癌的发生、发展及维持肿瘤干细胞的自我更新等具有重要作用，既往研究方法难以使Notch通路中特定基因功能完全丧失。本研究旨在利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建Notch1基因敲除的CNE2鼻咽癌细胞系，并观察Notch1敲除对CNE2细胞增殖、辐射敏感性的影响。方法：采用蛋白质印迹法（Western blot）检测人鼻咽癌细胞CNE2及鼻咽正常上皮细胞NP69中Notch1表达水平；利用sgRNA在线设计工具，针对Notch1设计sgRNA；利用PX459质粒构建含sgRNA的敲除载体PX459-Notch1-sgRNA；将质粒瞬时转染CNE2细胞，经过药物筛选、克隆化培养、Western blot检测、免疫荧光染色验证得到Notch1敲除的CNE2鼻咽癌细胞系；采用细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8）检测方法、克隆形成实验检测Notch1敲除组（Notch-KO）与未转染亲本组（Parental）、转染PX459空载体水平较的对照组（Ctrl）的增殖活性及辐射敏感性，并进一步采用流式细胞术检测侧群细胞比例。结果：与NP69细胞相比，CNE2细胞中Notch1蛋白水平较高；Western blot检测、免疫荧光染色验证Notch1基因被完全敲除。Notch1基因敲除可抑制细胞增殖活性（P<0.05）；Notch1-KO组的D₀、D_q和SF2值分别为1.160、1.881和0.630 Gy，低于Parental（1.176、2.533和0.824 Gy，P<0.001）和Ctrl组（1.182、2.516和0.819 Gy，P<0.001）；Notch1-KO中侧群细胞比例［（1.13±0.01）％］较Parental［（3.81±0.03）％］、Ctrl［（3.70±0.03）％］明显下降（P<0.001）。结论：运用CRISPRCas9技术可成功敲除CNE2细胞中的Notch1基因，Notch1基因敲除导致CNE2细胞增殖能力下降、辐射敏感性增加、侧群细胞比例降低。     

鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中EBV-LMP1的表达

目的:探讨人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中EB病毒编码的LMP 1基因表达情况.方法:用免疫组化法及Western bolt法分别检测鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中LMP 1基因的表达情况.结果:免疫组化及Western bolt 法均显示,CNE2Z细胞中LMP 1呈强阳性表达,而CNE1细胞中LMP 1呈阴性表达.结论:人高分化鼻咽癌细胞系CNE1中没有LMP 1的表达而人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中LMP 1呈阳性表达,鼻咽癌的恶性程度可能与LMP 1的表达有关.     

EB病毒LMP1对人鼻咽癌细胞转移能力的影响

背景与目的:EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)在鼻咽癌的浸润和转移过程中起重要的作用。本实验目的在于研究EB病毒LMP1对人鼻咽癌细胞转移能力的影响和探讨其中的相关机制。方法:应用免疫细胞化学RT-PCR法和Western blot检测LMP1、E-cadherin和intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1)在人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和转染了LMP1基因的CNE1-GL细胞中的表达。应用细胞-细胞粘附实验、细胞-基质粘附实验、划痕实验和细胞运动实验观察LMP1对鼻咽癌细胞粘附和运动能力的影响。结果:免疫细胞化学结果显示:LMP1在CNE1和CNE1-GL细胞中的阳性率分别为0和(96.60±3.03)%(P<0.01);E-cadherin蛋白的阳性率分别为(37.47±1.50)%和(19.53±1.92)%(P<0.01);ICAM-1蛋白的阳性率分别为(5.27±1.45)%和(93.33±4.23)%(P<0.01)。RT-PCR和Westernblot结果表明,与CNE1细胞相比较,CNE1-GL细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01),而ICAM-1的mRNA和蛋白表达则明显升高(P<0.01)。肿瘤细胞同质粘附实验显示,CNE1-GL细胞的同质粘附能力较CNE1细胞弱(P<0.05)。肿瘤细胞-基质粘附实验得出CNE1-GL细胞的异质粘附能力(A值=0.60±0.03)较CNE1细胞(A值=0.46±0.01)强(P<0.01)。肿瘤细胞运动实验显示,穿过PVPF膜的CNE1-GL细胞数多于CNE1细胞(119.3±6.0 vs 46.3±7.0,P<0.05)。结论:LMP1通过抑制E-cadherin表达、促进ICAM-1表达从而抑制肿瘤细胞的同质粘附能力、增强其异质粘附能力和运动能力来参与鼻咽癌的侵袭和转移。     

大黄素对人乳腺癌细胞MCF-7的促凋亡作用及其与JNK信号通路关系

目的探讨大黄素对人乳腺癌细胞MCF-7的促凋亡作用及其与JNK信号通路的关系。方法应用倒置显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7的生长情况,MTT法检测大黄素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用Western blot和免疫组织化学法检测JNK信号蛋白及其下游促凋亡蛋白AP-1的表达。结果大黄素可降低人乳腺癌细胞MCF-7增殖能力,具有时间依赖性和浓度依赖性。大黄素作用于人乳腺癌细胞MCF-7后,出现明显的早期凋亡现象(P0.05)。不同浓度大黄素处理人乳腺癌细胞MCF-7后,均可引起JNK和JNK下游信号分子AP-1表达增强(P0.05)。结论大黄素可降低人乳腺癌细胞MCF-7增殖能力,促进早期凋亡,可使人乳腺癌细胞MCF-7表达JNK和AP-1增强,促进人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡。大黄素通过活化JNK信号转导途径抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖、促进凋亡。     

明胶酶在不同类型鼻咽癌细胞株中的表达及其活性差异

目的:探讨明胶酶的表达与鼻咽癌细胞转移潜能的关系。方法:Real-time PCR和明胶酶谱法检测CNE1、CNE1-LMP1、CNE2、SUNE1-5-8F和SUNE1-6-10B 5株鼻咽癌细胞株中明胶酶mRNA的表达及分泌,并比较其差异。结果:明胶酶mRNA在5株鼻咽癌细胞中都有表达,其相对表达量为SUNE1-5-8F>CNE1-LMP1>SUNE1-6-10B>CNE2>CNE1,其中,明胶酶mRNA在SUNE1-5-8F细胞和SUNE1-6-10B之间以及CNE1-LMP1细胞和CNE1细胞之间的表达差异有统计学意义,P<0.001;在CNE2细胞和CNE1细胞之间,MMP-9 mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.001),而MMP-2 mR-NA的表达差异无统计学意义,P=0.078;明胶酶谱结果显示,明胶酶的活性在CNE1-LMP1细胞上清液中明显高于CNE1细胞(P≤0.001),在SUNE1-5-8F细胞上清液中明显高于SUNE1-6-10B细胞(P<0.001),而CEN2细胞分泌明胶酶的量为5株细胞中最低1株。结论:明胶酶的表达和分泌与鼻咽癌细胞的转移潜能密切相关。     

周期蛋白D1在鼻咽癌细胞系中功能及意义的深入研究

目的 深入研究周期蛋白D1在鼻咽癌细胞中的表达特征及生物学功能。以Western blot方法确定D型周期蛋白在鼻咽癌细胞系中的表达谱及表达水平；利用流式细胞术双参数法，确定cyclin D1在鼻咽癌细胞中的表达分布模式；结合反义硫代磷酸化寡聚脱氧核苷酸和抗体剔除实验，分别从mRNA及蛋白质水平抑制、中和cyclinD1的表达，探讨其在鼻咽癌细胞中的生物学功能。结果 在鼻咽癌细胞中，D型周期蛋白的表达谱为D1、D2、D3均表达型，cyclinD1在两株鼻咽癌细胞均有过表达。cyclinD1在鼻咽癌细胞系中的表达呈细胞周期依赖性，在G0／G1期表达最高，S期及G2／M期下降，但仍可检测到。反义cyclinD1硫代磷酸化寡聚脱氧核苷酸和抗体剔除实验可以有效抑制蛋白质表达，抑制细胞进入S期。结论 鼻咽癌细胞系中，D型周期蛋白的表达谱为D1、D2、D3均表达型,cyclinD1在鼻咽癌细胞中有过表达，且表达呈细胞周期依赖性，cyclinD1可能是鼻咽癌细胞G1／S期进行中必不可少的细胞周期调节因子。     

EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立

目的：建立表达Epstein-Barr(EB)病毒核抗原-l(EBNA1)的肿瘤细胞株，用于EB病毒相关肿瘤的研究。方法：将1200bp的EBNA1基因片段插入真核细胞表达载体pcDNA3中，使用脂质体介导pcDNA3／EBNA1质粒进入人鼻咽癌CNE2细胞和人宫颈癌Hela细胞，通过G418进行阳性克隆的筛选，PCR、RT-PCR进行鉴定。结果：成功建立EBNA1基因阳性的鼻咽癌和宫颈癌肿瘤细胞株，经PCR、RT-PCR检测证明两种转基因细胞株稳定表达EBNA1。结论：EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立，为体外进行EB病毒相关肿瘤的研究提供细胞模型：     

TNF-α通过JNK和AP-1途径调节乳腺癌MCF-7细胞VEGF的表达

目的: 探讨肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的机制.方法:以20 ng/ml TNF-α处理MCF-7细胞,用Western blotting检测MAPK(JNK,p38,ERK)信号通路中蛋白磷酸化水平的变化以及AP-1家族(c-Jun,Jun-B,c-Fos,Fra-1,Fra-2,JunD)的蛋白表达及磷酸化水平的变化;以免疫共沉淀法检测激活后的AP-1存在形式;以RT-PCR以及Western blotting检测VEGF mRNA和蛋白表达水平;以MAPK抑制剂预处理后,检测VEGF蛋白表达水平;运用ChIP的方法验证p-c-Jun结合在VEGF启动子区.结果:TNF-α通过激活JNK信号转导通路活化AP-1;被TNF-α激活后AP-1以p-c-Jun-c-Jun和p-c-Jun-JunB同源二聚体形式存在;TNF-α通过激活转录因子AP-1促进VEGF的转录,并增强VEGF的蛋白表达水平;p-c-jun通过与VEGF启动子AP-1结合参与对VEGF转录的调控.结论:在TNF-α作用下,AP-1通过p-c-jun同源二聚体结合在VEGF启动子的AP-1结合位点上,直接对VEGF转录进行调控.     

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF-κB

目的:为了探讨EB病毒(EBV)中LMP1的致瘤机制,对鼻咽癌LMP1激活重要的核转录因子NF-κB的机制进行了研究.方法:①以LMP1阴性的鼻咽癌细胞系HNE2及表达载体(pSG5)的鼻咽癌细胞系HNE2-pSG5为对照,采用免疫共沉淀-Western-blotting方法在稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2-LMP1中证实LMP1与TRAF2是否直接结合形成免疫共沉淀复合物;②在HNE2-LMP1细胞系导入TRAF2表达质粒或不同剂量TRAF2显性负性突变体(TRAF2Δ6～86)表达质粒,以NF-κB报道基因方法确定LMP1是否通过TRAF2活化NF-κB;③将LMP1(1～231)(CTAR2缺失区)或LMP1Δ187～351(CTAR1缺失区)及不同剂量TRAF2Δ6～86瞬时导入HNE2中以证实LMP1CTAR1或CTAR2是否介导了这种效应;④以转染或未转染TRAF2Δ6～86的HNE2-LMP1细胞系为材料,应用免疫共沉淀-Western-blotting方法,确定TRAF2Δ6～86是否竞争性抑制TRAF2与LMP1结合.结果:①在HNE2-LMP1中LMP1与TRAF2形成复合物沉淀,而HNE2-pSG5和HNE2为阴性.②在HNE2-LMP1细胞系导入TRAF2表达质粒,NF-κB活性增高20倍,而导入不同剂量TRAF2Δ6～86表达质粒时,随着剂量增大,NF-κB活性递减.③TRAF2强烈抑制LMP1(1～231)活化NF-κB,而仅部分抑制LMP1Δ187～351活化NF-κB.④TRAF2Δ6～86竞争性抑制TRAF2与LMP1结合.结论:在鼻咽癌中LMP1通过TRAF2而激活NF-κB,其中LMP1的CTAR1区主要介导了这种效应.这为我们进一步从信号传导通路来探讨LMP1的致癌机制提供了新的线索.     

Ap-1和胃癌关系的研究进展

AP-1是一种核转录因子,典型的AP-1复合物由c-Jun和c-Fos两个亚单位组成,通过形成亮氨酸拉链,以其α螺旋延伸处的碱性残基与DNA结合从而调控基因转录。近年来,AP-1信号转导通路与肿瘤关系的研究取得了较多进展,在与胃癌关系的研究中,人们研究了胃癌细胞生长的机制中AP-1的介导作用,AP-1在HP诱发胃癌作用中的角色及各种药物和化学物质是如何通过抑制AP-1活性来抑制癌细胞生长的等内容,但有关AP-1和其调控的下游靶基因在胃癌组织中表达的相关性研究尚缺乏。