HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷

目的 HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷4种有效成分的量,为更好控制杜仲皮质量提供依据.方法 采用Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)梯度洗脱,0～7 min,7％ A; 7～35 min,14％A; 35～45 min,15％A.体积流量1.0 mL/min,检测波长235 nm,柱温30℃.结果 在该色谱条件下,京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷分别在0.1025～0.5125 (r=0.9999)、0.0925～0.4625(r=0.9999)、0.1200～0.6000(r=0.9996)、0.0900～0.4500 μg/mL (r=0.9998)内与色谱峰峰面积呈现良好的线性关系,加样回收率分别为98.97％、98.71％、98.20％、100.44％,RSD分别为1.54％、1.30％、0.76％、1.13％.结论 该分析方法快速准确、重现性好,可为杜仲药材的质量控制与标准的完善提供可靠的检测依据.     

杜仲雄花生长发育动态及活性成分量变化

目的建立杜仲Eucommia ulmoides雄花6种活性成分的测定方法,分析杜仲雄花生长发育动态及活性成分的变化规律。方法采用超声法进行提取,采用Al Cl3比色法测定总黄酮,采用HPLC法测定其他6种成分,色谱柱为Thermo hypersil gold柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.5%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长:206 nm(0~15 min)、236 nm(15~55 min)、255 nm(55~100 min);体积流量1.0 m L/min。结果花径、花高、鲜质量、干质量、雄蕊长度和雄蕊数均在盛花期达到最大值;总黄酮、绿原酸以及活性成分总量均以花蕾期最高,始花期最低;桃叶珊瑚苷量总体呈下降趋势;京尼平苷酸量花蕾期最低,至盛花期达到最高值,末花期有所下降;京尼平苷、异槲皮苷和紫云英苷量均以盛花期最高,始花期最低。结论花期对杜仲雄花形态、产量、活性成分量及质量均有很大影响,为杜仲雄花质量控制及相关产品开发提供了重要依据。     

基于入血成分的杜仲药材的含量测定

建立杜仲药材中京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷3种原型入血成分的含量测定方法.采用LC-MS/MS检测技术确定大鼠灌胃杜仲提取物后吸收入血的药物成分,结合高效液相色谱技术检测23批杜仲样品中入血成分的含量.结果表明,大鼠口服杜仲提取液后,京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷均以原型入血;以杜仲药材中的京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖为对照品建立的含量测定方法线性范围良好,平均回收率分别为98.69%,100.8%,98.39%.该方法简便可行、回收率和重复性良好.     

RP-HPLC测定杜仲平压片中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷的含量

目的建立杜仲平压片(杜仲叶)中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷含量测定方法.方法采用反相高效液相色谱法,Diamonsil(钻石)C18色谱柱(5 μm,150 mm ×4.6 mm),甲醇-水-冰醋酸(15∶85∶1.5)为流动相,检测波长237 nm.结果该方法线性关系良好.京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷的精密度分别为1.93%、1.50%、1.66%,n=5.加样回收率分别为97.3%、97.2%、96.7%.结论本方法简便快捷、重现性好;可用于同时测定杜仲平压片中3种有效成分含量.     

杜仲中京尼平苷酸的精制工艺对比

目的：探索并对比中药杜仲中京尼平苷酸的精制工艺。方法：以京尼平苷酸为指标,在明确跨膜压力差、pH因素影响的基础上,采用Box-Behnken中心组和设计建立数学模型,考察膜孔径、跨膜压力差、pH,优选杜仲提取液的浓缩工艺,并与减压浓缩对比分析。结果：优化京尼平苷酸纳滤浓缩工艺为膜孔径400 Da,跨膜压力差1.40 MPa,pH 6.80,京尼平苷酸平均截留率为（93.7±1.8）%,与理论截留率为95.0%相近,且明显高于减压加热浓缩工艺。结论：Box-Behnken响应面法设计优化的杜仲中京尼平苷酸的精制工艺,工艺高效可行,可以避免热处理引起的成分转化损失。     

栀子中京尼平苷提取方法考察

目的 建立栀子中京尼平苷的含量测定方法,在此基础上考察栀子中京尼平苷的提取方案.方法 高效液相色谱法测定含量,采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(15∶85);流速为1.0 ml/min;检测波长为238.4 nm.栀子粉末先醋酸乙酯回流提取,滤渣再用80%乙醇回流,考察提取效率及京尼平苷纯度.结果 京尼平苷在12.5～200 μg/ml范围内呈良好线性关系,r=0.999 8.用乙醇回流的提取方式可使京尼平苷提取较完全,醋酸乙酯提取所得京尼平苷纯度较高.结论 提取溶剂的种类对栀子中京尼平苷的提取效率及纯度有较大影响,先醋酸乙酯再乙醇的提取方法,可以得到部分纯度较高的京尼平苷,且不浪费药材,减少纯化等后续处理的难度.高效液相色谱法检测栀子中京尼平苷,方法快速、准确、可行.     

杜仲中京尼平苷酸的提取工艺研究及应用

目的 :用正交试验法对杜仲中的活性成分京尼平苷酸的提取工艺进行了优选研究。方法 :采用正交表L₁₆ (4⁵ ) ,以提取时间、提取温度、提取次数、料液比以及提取有机溶剂乙醇含量为因素 ,以京尼平苷酸提取率为指标进行试验。采用反相高效液相色谱法 (RP-HPLC)测定京尼平苷酸提取率。结果 :最佳提取参数为 ,温度为 50℃ ,时间 1h ,提取 1次 ,80 %的乙醇 ,料液比为 1∶12。应用最佳提取工艺对杜仲原料进行了筛选。结论 :该工艺为杜仲中京尼平苷酸的大规模提取提供理论依据。     

不同产地杜仲雄花指纹图谱的建立及其化学模式识别研究

目的 建立4个产地21批杜仲Eucommia ulmoides雄花的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,为杜仲雄花的质量控制提供参考。方法 采用HPLC法,色谱柱为Agilent HC-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5.0μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液;梯度洗脱;体积流量0.8mL/min;柱温35℃;程序变化波长;进样量20μL。通过相似度评价、偏最小二乘法分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)、系统聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)以及气候因子相关性分析等对杜仲雄花指纹图谱进行分析评价。结果 建立4个产地杜仲雄花HPLC指纹图谱,共标定15个共有峰,指认出其中6个色谱峰,分别为桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、芦丁、槲皮素;21批杜仲雄花指纹图谱与对照图谱的相似度为0.911~0.989;PLS-DA分析表明不同产地杜仲雄花样品具有一定差异,根据变量投影重要性(variable importance in the projection,VIP)筛选出7个差异性成分;差异性成分峰面积结合气候因子的相关性分析结果<显示9号峰峰面积与3、4月平均最低气温呈显著正相关,15号峰槲皮素峰面积与3月平均降水天数呈显著负相关,其余差异性成分与气候因子未呈现出明显的相关性。结论 该方法可应用于杜仲雄花的质量评价,为杜仲雄花质量控制与资源开发提供参考。     

UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中杜仲的五个成分及其药代动力学研究

目的建立大鼠血浆中京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷的UPLC-MS/MS测定方法,并进行五种成分在大鼠体内药代动力学研究。方法大鼠静脉注射杜仲提取物后,采用甲醇沉淀血浆蛋白,以葛根素为内标,采用Waters BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,采用电喷雾电离源(ESI),以多反应监测(MRM)方式进行检测。结果京尼平苷酸等五种成分在血浆中呈良好线性关系。方法学考察均符合要求,日内、日间精密度、准确度和稳定性良好,提取回收率86.06%~104.39%,无基质效应。京尼平苷酸等5个指标成分在大鼠体内消除较快。结论建立的HPLC-MS/MS测定方法能快速灵敏地检测生物样品中京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷的血药浓度,可用于五种成分的药代动力学研究。     

甘草、牡蛎、续断与杜仲配伍对京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷煎出含量的影响

目的:建立杜仲水煎液中3种有效成分(京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷)的含量测定方法,考察药对"杜仲-甘草"、"杜仲-牡蛎"、"杜仲-续断"不同比例配伍过程中有效成分含量的变化规律,为杜仲临床配伍应用提供研究基础。方法:制备不同配伍比例(1∶0.5,1∶1,1∶2)杜仲与甘草、牡蛎、续断的合煎液,以杜仲单煎液为对照,采用HPLC-DAD法检测杜仲各样品中3种有效成分的含量,统计分析不同配伍对杜仲3种有效成分煎出含量的影响。结果:杜仲单煎液中京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量分别为0.649、0.069和0.440 mg/g。与杜仲对照组比较,杜仲-甘草配伍水煎液中京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量均随甘草比例的增加而升高,绿原酸的煎出含量随甘草比例的增加而降低;杜仲-牡蛎配伍水煎液中京尼平苷酸的煎出含量随牡蛎比例的增加而升高,绿原酸的煎出含量随牡蛎的占比增加而降低,而松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量无显著性变化;杜仲-续断配伍水煎液中京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量均随续断比例的增加显著升高。结论:药对"杜仲-甘草"、"杜仲-续断"配伍,对杜仲有效成分煎出含量影响较大,表明中医临床疗效与中药药对配伍剂量有密切关系。     

杜仲雄花HPLC指纹图谱及成分积累规律的研究

目的 建立杜仲雄花的HPLC指纹图谱,分析杜仲雄花中成分的积累规律.方法 采用Ameritech C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,甲醇-0.05％磷酸溶液梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长238 nm.结果 对不同日期采集的杜仲雄花的指纹图谱进行评价,生成对照指纹图谱,确定了22个共有峰.杜仲雄花的成分积累规律为京尼平苷酸含有量花蕾期最低,至盛花期最高.绿原酸含有量花蕾期最高,始花期最低,末花期上升.京尼平甘含有量始花期最低,盛花期最高.结论 杜仲雄花的盛花期是兼顾质量和产量的最佳采摘期.     

UPLC-MS测定杜仲的3种成分及其药代动力学研究

目的:通过超高效液相色谱联合质谱法测定杜仲的3种成分及其药代动力学研究。方法:本研究的质谱采用电喷雾电离源(ESI),通过多反应离子监测这一扫描方式对京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷等3种成分及内标用于定量分析的监测离子。结果:1)杜仲中京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷等3个指标性成分的分离良好,无内源性物质干扰,具有较好的专属性。2) UPLC方法严谨性,其精密度、稳定性试验、重复性试验、加样回收率等均良好。3)京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷在大鼠体内的药代动力学具有非线性特征,仅绿原酸存在线性特征;而CLz、Vz参数指标的差异比较大,显示大鼠血浆中杜仲提取物中的3种成分在大鼠体内的药代动力学代谢过程不一致。结论:UPLC-MS/MS的操作简单,结果具有较好的精密度、稳定性和重复性,可作为杜仲有效成分及药代动力学研究的可靠方法。     

杜仲板皮和枝皮中4种有效成分差异性比较

目的采用RP-HPLC法测定杜仲板皮和枝皮中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷的量。方法采用Cosmosil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液进行梯度洗脱,体积流量0.8 m L/min,检测波长208 nm,柱温25℃。结果杜仲板皮中桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷量大于枝皮,枝皮绿原酸、京尼平苷量大于板皮;在不同产地来源上,杜仲板皮和枝皮中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷平均质量分数有一定差异性。结论该方法简便、快速、准确可靠,为更全面合理科学地对杜仲药材质量的评价提供了技术支撑。     

基于有效成分含量变化探讨生杜仲及盐制品与甘草、续断的配伍比例

目的:考察生杜仲及炮制品盐杜仲与甘草、续断不同比例配伍后,杜仲中3种有效成分的变化规律。方法:制备生杜仲、盐杜仲、甘草、续断单煎液和生杜仲-甘草、盐杜仲-甘草、生杜仲-续断、盐杜仲-续断配伍的合煎液,采用HPLC法检测其京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量,计算各组煎出率并绘制有效成分煎出量与配伍比例的关系曲线。结果:杜仲盐制后,水煎液中京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出量均增加。生杜仲-甘草大部分配伍组中京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出量随甘草比例的增加而升高,而绿原酸的煎出量逐渐下降。盐杜仲-甘草配伍后,松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的煎出量大部分随甘草占比增加而显著减小,而京尼平苷酸的煎出量逐渐增加;生杜仲-续断配伍和盐杜仲-续断配伍后,京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出量变化趋势相近,均随续断的占比增加而增加。结论:杜仲盐炒及配伍有利于有效成分的煎出。杜仲、盐杜仲与甘草、续断联合用药时需注意配伍比例以增强临床疗效。     

栀子炮制前后7种成分的比较研究

目的比较栀子Gardenia jasminoides全果、果仁、果皮中7种成分炮制前后的变化。方法利用HPLC/DAD对栀子全果、果仁、果皮生品及其炮制品中京尼平苷酸、去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、绿原酸、西红花苷I和西红花苷II进行定量分析。结果栀子果皮中绿原酸和去乙酰车叶草酸甲酯的量较高,栀子果仁中京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷I和西红花苷II的量较高。栀子经过炮制后除京尼平苷酸的量升高外,京尼平龙胆二糖苷的量变化不大,去乙酰车叶草酸甲酯、栀子苷、绿原酸、西红花苷I和西红花苷II的量有所下降。结论栀子果仁、果皮中去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、绿原酸、西红花苷I和西红花苷II的量分布存在差异;炮制可降低栀子中大多数有效成分的量,升高栀子中京尼平苷酸的量。     

HPLC法同时测定杜仲雄花中5种活性成分

目的采用HPLC法测定不同产地杜仲雄花中5种活性成分的量。方法采用Thermal hypersil(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(B)-0.5%磷酸水溶液(C)为流动相,梯度洗脱;检测波长为206 nm(0¹5 min),236 nm(1515 min),236 nm(15⁵5 min);体积流量1.0 m L/min。结果桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、车叶草苷、京尼平苷分别在0.39555 min);体积流量1.0 m L/min。结果桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、车叶草苷、京尼平苷分别在0.395¹1.85μg、0.48111.85μg、0.481¹4.43μg、0.41614.43μg、0.416¹2.48μg、0.4812.48μg、0.48¹4.4μg、0.48114.4μg、0.481¹4.43μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.5%14.43μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.5%⁹8.3%。结论该方法简便快捷重复性好,可用于杜仲雄花的质量控制。     

栀子中京尼平苷的分离及其含量测定

栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实，味苦、性寒，主治热病心烦、黄疸尿赤，具有泻火除烦、清热利尿等作用。栀子化学成分复杂，主要成分为环烯醚萜苷类，京尼平苷(geniposide，栀子苷)为主要有效成分之一。京尼平苷的提取分离方法主要有铅盐沉淀法、活性炭吸附法、中性氧化铝除杂质法等。本实验根据京尼平苷的理化特性，通过硅胶柱色谱分离、醋酸乙酯-丙酮重结晶纯化，制备京尼平苷单体，并采用HPLC法对各产地栀子药材中京尼平苷的含量进行测定，为栀子的深入研究及质量控制提供可行方法。     

HPLC法测定杜仲皮、叶、雄花中8种成分

目的建立HPLC法测定杜仲皮、叶、雄花中桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸、京尼平苷、京尼平、绿原酸、槲皮素、白桦脂酸的含量。方法杜仲皮、叶、雄花甲醇提取物的分析采用Agilent Zorbax Eclipse Plus C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈?0.1%甲酸;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长194 nm(桃叶珊瑚苷)、202 nm(松脂醇二葡萄糖苷)、238 nm(京尼平苷酸、京尼平苷、京尼平)、320 nm(绿原酸)、368 nm(槲皮素)、210 nm(白桦脂酸)。结果8种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9990),平均加样回收率95.02%~104.33%,RSD 0.28%~1.96%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于杜仲的质量控制。     

杜仲不同炮制品化学成分研究

根据2010年版《中国药典》制备生杜仲、盐杜仲、杜仲炭3个规格炮制品,按照2010年版《中国药典》标准对各炮制品进行各项指标检测,均符合药典要求。运用HPLC-DAD对生杜仲、盐杜仲、杜仲炭及杜仲叶中化学成分进行比较分析,结果显示:1杜仲皮主要含有木脂素类化合物松脂醇二葡萄糖及环烯醚萜类化合物京尼平、京尼平苷、京尼平苷酸,而杜仲叶主要含有黄酮类化合物槲皮素和酚酸类化合物绿原酸;2杜仲皮中松脂醇二葡萄糖含量约是杜仲叶中含量的18倍,盐炙和炒炭后松脂醇二葡萄糖质量分数约分别下降30%,85%;3杜仲皮中京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸含量约为杜仲叶中京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸含量的3,23,28倍,盐炙后京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸质量分数分别降低25%,40%,40%,炒炭后京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸质量分数分别降低98%,70%,70%;4杜仲皮中咖啡酸含量约是杜仲叶中咖啡酸含量的3倍,盐炙后咖啡酸质量分数约下降50%,炒炭后咖啡酸质量分数下降约75%;杜仲皮中绿原酸含量约为杜仲叶中绿原酸含量的1/6,盐炙和炒炭后绿原酸质量分数分别下降40%,75%;杜仲皮中槲皮素含量仅为杜仲叶中1/40,盐炙和炒炭后槲皮素质量分数分别降低60%,50%。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中京尼平苷的浓度

目的建立大鼠血浆中京尼平苷液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)的快速检测方法。方法以芍药苷为内标,血浆样品用甲醇沉淀蛋白法处理,色谱柱为AgilentZORBAXEclipseplus-C18柱(2.1mm×150mm,3.5μm);流动相为甲醇-5mmol·L-1乙酸铵(含5mmol·L-1乙酸)(60∶40);采用电喷雾离子化(ESI)和正离子多反应离子监测(MRM)方式检测京尼平苷。结果京尼平苷在64.5~12900ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,定量下限为64.5ng·mL-1,日内精密度(相对标准偏差,RSD)5.2%,日间精密度(RSD)11.5%,准确度在98.8%~106.2%之间。结论本研究所建立的LC-MS/MS方法快速、准确、稳定,适用于京尼平苷在大鼠体内的血药浓度测定及药动学研究。