周期蛋白E在细胞周期调节中的作用

ｃｙｃｌｉｎ Ｅ是Ｇ１期的周期蛋白,基因定位于１９ｑ１２－１３,参与细胞周期的调节及肿瘤的发生。ｃｙｃｌｉｎ Ｅ与ＣＤＫ２结合在Ｇ１期末发挥作用,促进细胞进入Ｓ期。ｃｙｃｌｉｎ Ｅ的过量表达通过对ｐＲＢ及其它低物的磷酸化、释放出转录因子进而启动ＤＮＡ的合成,加速细胞的Ｇ１期进程。ｐ２１、ｐ２７及ＴＧＦ－β通过对ｃｙｃｌｉｎ Ｅ－ＣＤＫ２活性的抑制而减缓Ｇ１期的进程。ｃｙｃｌｉｎ Ｅ是周期进程的基本     

反义周期蛋白B1基因抑制HT29细胞的增殖

用ＤＮＡ重组技术将人类ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的全长ｃＤＮＡ，反向插入到真核表达载体ｐＸＪ４１－ｎｅｏ的ＢａｍＨ１位点，得到ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的反义ＲＮＡ表达载体ｐＡＳ－Ｂ１。利用ＤＮＡ磷酸钙共沉淀方法，将ｐＡＳ－Ｂ１转染进ＨＴ２９细胞。在含有Ｇ４１８的培养基中，挑选出独立的细胞克隆。利用ｃｙｃｌｉｎＢ１ｃＤＮＡ作探针，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交鉴定出一株内源性ｃｙｃｌｉｎＢ１ｍＲＮＡ受到抑制的细胞株ＨＴＢ１。比较ＨＴＢ１与对照细胞ＨＴ２９发现，ｃｙｃｌｉｎＢ１的反义ＲＮＡ明显抑制ＨＴ２９细胞的增殖，细胞内３Ｈ－ＴｄＲ参入量减少。流式细胞光度术分析，处于Ｇ１期细胞比率的升高与Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期细胞数量的下降都十分显著。     

细胞周期蛋白A对舌鳞癌细胞周期和抗原含量的影响

细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎ是调节细胞周期活动的重要蛋白质，在细胞的增殖及肿瘤的发生中具有重要作用。近年来，对细胞周期调控分子机制的研究有了突破性进展，已知细胞生长周期由一系列细胞分泌的蛋白控制，并证实哺乳动物的ｃｙｃｌｉｎ有８种，其中ｃｙｃｌｉｎＡ／Ｃｄｋ２为Ｓ期和Ｇ２期所必需的〔１〕。细胞在由Ｇ１→Ｓ→Ｇ２→Ｍ期的转换过程中，存在着几个限制点，其中Ｇ２／Ｓ限制点是调控细胞周期进程的关键〔２〕。ｃｙｃｌｉｎＡ的合成在细胞周期由Ｇ１→Ｓ期明显增加，证明ｃｙｃｌｉｎＡ为Ｓ期的特征性细胞周期蛋白，存在于…     

CKIs蛋白在视黄酸诱导HL-60细胞分化中的作用研究

从细胞周期调控这一途径探讨视黄酸抑制细胞增殖、诱导细胞分化的分子机制。结果显示：５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）及芳维甲（ＡＥ）处理的ＨＬ－６０细胞生长受抑,４ｄ后９０％细胞停滞于Ｇ０／Ｇ１期,Ｇ１→Ｓ期转换受阻,同时ＮＢＴ还原反应增强,ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析及免疫细胞化学染色表明处理后的细胞ｐ１６、ｐ２１两种细胞周期素依赖激酶抑制物（ＣＫＩｓ）表达增加,而ＣｙｃｌｉｎＤ１和ｐＲｂ蛋白则降低,其中尤以ＡＴＲＡ作用为明显。结果提示,细胞周期调控相关蛋白可能在视黄酸及其衍生物抑制细胞增殖、诱导细胞分化过程中起重要作用。     

人补体膜辅助调节蛋白MCP的基因克隆及共真核表达的研究

目的 克隆获得编码人补体膜辅助调节蛋白（ＭＣＰ）的ｃＤＮＡ，并对其在真核细胞的表达及功能进行研究。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ 方法，从Ｕ９３７细胞总ＲＮＡ中扩增编码人ＭＣＰ分子的ｃＤＮＡ片段，快速克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体，测定共序列。将该片段重组于ｐＬＸＳＮ载体，电穿孔转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，经ＦＡＣＳ检测筛选表达ＭＣＰ的阳性细胞克隆，用补体容破试验鉴定其抑制人补体溶破的功能。结果 ＲＴ－ＰＣＲ     

人朊蛋白基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样活性

目的 鉴定朊蛋白（ＰｒＰ）基因转录启动子位置。方法 利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增人ＰｒＰ基因外显子Ⅰ及其上游序列，序列鉴定后插入ＣＡＴ报道质粒ｐＢＬ－ＣＡＴ６，分别转染ＨｅＬａ、ＣＯＳ７和Ｓｈ－ｓｙ５ｙ细胞系，检测ＣＡＴ表达值；提取三种细胞蛋白，以条带移动实验检测细胞转录激活因子ＳＰ１含量。结果 人ＰｒＰ基因外显子Ｉ及其上游序列为ＧＣ富含，带有多个ＳＰ１可能性综合位点，但无明显ＴＡＴＡ盒；瞬时转染结果显示这段序列可诱导２～３倍的ＣＡＴ表达增强；定量移动条带实验证明ＨｅＬａ细胞中含有较高浓度的ＳＰ１，而ＣＯＳ７和Ｓｈ－ｓｙ５ｙ细胞中ＳＰＩ含量极低。结论 人ＰｒＰ基因外显子Ｉ及其上游序列具有启动子样功能，为弱的非ＴＡＴＡ盒启动子；不同组织来源的细胞中ＳＰ１含量不同，在神经细胞系Ｓｈ－ｓｙ５ｙ中人ＰｒＰ基因外显子Ｉ     

以Bacmid-杆状病毒-昆虫细胞系统表达人FGF-9

目的：在Ｂａｃｍｉｄ－杆状病毒－昆虫细胞系统中表达人ＦＧＦ－９。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ技术,自新鲜人脑胶质瘤组织获取人ＦＧＦ－９全编码区ｃＤＮＡ,将其克隆入ｐＣＲ＾ＴＭⅡ质粒及ｐＹＥＸ４Ｔ－１真核表达质粒,经ＤＮＡ自动测序仪进行ＤＮＡ序列测定。将人ＦＧＦ－９ｃＤＮＡ定向克隆入ｐＦａｓｔＢａｃ质粒,进一步将其转座入Ｂａｃｍｉｄ中,在昆虫细胞Ｓｆ９中进行表达,采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对表达产物进行分析。     

p53、c-erbB-2、PCNA和EGFR在膀胱癌中过表达及其意义

目的：研究癌基因和抑癌基因蛋白产物在膀胱移行细胞癌中异常表达与病理分级、临床分期、复发和预后的关系。方法：应用免疫组化Ｓ－Ｐ法检查１１７例膀胱移行细胞癌组织中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ的表达水平。结果：１１７例膀胱移行细胞癌中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ阳性表达率分别为４７．０％、２９．９％、５３．８％和４８．７％。ｐ５３和ＰＣＮＡ阳性表达产物定位于肿瘤细胞核内，ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达产物定位于细胞膜上，ＥＧＦＲ阳性表达产物定位于细胞膜或细胞浆内。结果表明ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ异常表达与膀胱癌的分级、分期、复发及术后生存率等之间有统计学意义。结论：ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ异常表达有助于评估膀胱癌预后，多基因异常表达作为预后评价指标更有意义。     

反义周期蛋白B1基因转染HT29细胞后若干细胞增殖调控相关基因表达的变化

用基因重组技术将插入有反义周期蛋白Ｂ１（ｃｙｃｌｉｎＢ１）基因ｐＸＪ４１－ｎｅｏ质粒，转染人结肠腺癌ＨＴ２９，获得了ＨＴＢ１细胞株。ＨＴＢ１细胞显示出ｃｙｃｌｉｎＢ１ｍＲＮＡ明显的表达抑制。为了探讨ＨＴＢ１细胞生长变慢和它的增殖相关基因表达之间的关系，我们用异硫氰酸胍－酚一步法提取ＨＴＢ１和ＨＴ２９细胞的总ＲＮＡ，并用一些有关的基因探针进行杂交实验。其结果表明：ｃ－ｍｙｃ和ＣＤＫ４在ＨＴＢ１中的表达低于在ＨＴ２９中的表达；而另一方面，ｐ５３、Ｒｂ、ＴＧＦβ和ｃｙｃｌｉｎＤ３在ＨＴＢ１细胞中的表达高于对照组。而ｃｄｃ２基因表达二者维持相似水平。根据研究结果我们发现，转染有反义ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的ＨＴＢ１细胞在一组正、负调节基因的协同作用下，导致细胞周期运转的变化。     

食管癌的癌基因和肿瘤抑制基因研究进展

食管癌的癌变机制及其发生发展过程是一多种癌基因及肿瘤抑制基因参与，突变异常，互相调控的复杂过程，其癌基因有Ｒａｓ、ｅｒｂＢ、ｃ－ｍｙｃ、ＣｙｃｌｉｎＤ１等基因；肿瘤抑制基因有ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ、ＭＣＣ、ＤＣＣ、ＭＴＳ等，本文重点介绍近３年来与食管癌有关的癌基因及肿瘤抑制基因的研究进展，有助于从分子水平上进一步研究食管癌的癌变机制。     

枸杞子提取物对人淋巴细胞表面IL-2R表达的影响

研究了枸杞子提取物(LBr)对白细胞介素2受体(IL—2R)表达的影响。用FACS法和APAAP法研究了LBr作用3天对PHA活化扁桃体单个核细胞(TMNC)表面IL—2Rα、IL—2Rβ表达的影响,发现合适浓度的LBr(1.9ng/ml～7.8μg/ml)可促进IL—2R的表达。对α链表达的促进作用于第1天即出现,第3天达高峰,第5天始明显下降以至消失。     

磁化水对小鼠血液过氧化氢酶及谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响

将小鼠随机分为饮用磁化水的实验组及饮用自来水的对照组，在组雌鼠８只，雄鼠９只。饲养一个月，测定其血液中的过氧化氢酶（ＣＡＴ）和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）活力。结果雌、雄实验组ＣＡＴ活性均显著高于对照组；雄鼠实验组ＧＳＨ－ＰＸＩ活力显著高于对照组，雌鼠实验组ＧＳＨ－ＰＸ活力与对照组无显著差异。显示饮用一定时间磁化水的雄鼠机体处理自由基能力显著提高。雌鼠处理自由基能力有一定提高。     

糖尿病大鼠肺部超微结构的变化

目的　观察糖尿病大鼠肺部超微结构的变化。　方法　将 2 0只大鼠分为正常对照组和糖尿病组 ,每组 10只。糖尿病组以STZ 6 0mg kg体重腹腔注射制成糖尿病模型。成模 6个月后杀检 ,电镜下观察肺组织的超微结构。　结果　糖尿病大鼠肺泡隔增宽 ,肺间质中胶原和弹性蛋白增生 ,部分肺泡萎缩甚至塌陷 ;肺泡毛细血管管腔狭窄甚至闭锁。糖尿病组大鼠肺泡毛细血管内皮细胞基板的平均厚度比正常对照组明显增厚 (P <0 0 1) ;Ⅱ型肺泡上皮细胞粗面内质网和高尔基复合体的扁平囊扩张。　结论　糖尿病肺部超微结构的变化可能引起呼吸功能异常 ,引发机体缺氧 ,加重糖尿病的各种并发症。     

血管活性肽在人胚胎脐血管内皮细胞中的发育

为说明人脐血管内皮细胞在胚胎发育过程中就可能合成和分泌多种血管活性物质。用免疫组织化学技术对不同发育时期人胚胎脐血管内皮细胞生长抑素、内皮素、神经肽Ｙ和５－羟色胺进行定性定位研究。结果显示：ＳＳ出现于胚胎第８周；５－ＨＴ出现于胚胎１２周；ＮＰＹ出现于胚胎第１６周；ＥＴ出现于胚胎第２０周。     

椎基底动脉供血不足患者的BAEP观察

本文分析报告了38例椎基底动脉供血不足患者的BAEP。异常率为86.84％。结果表明:该病各波潜伏期及其双耳差、各峰间期双耳差、各波振幅较健康对照组均有极显著性差异(P<0.01),波形不规整是椎基底动脉长期供血不足引致的一种严重的病理性改变。     

大鼠,金黄地鼠和家兔视网膜内一氧化氮合酶分布的比较

用ＮＡＤＰＨ黄递酶组织化学染色法观察了正常成年大鼠、金黄地鼠和家兔视网膜内一氧化氮合酶的分布，并比较了３种不同动物的区别。结果显示，在视网膜内ＮＯＳ阳性神经元主要为分布于内核层的无长突细胞、节细胞层的移位无长突细胞和少数节细胞，不同种类动物的视网膜内，ＮＯＳ阳性细胞的配布、密度和细胞形态均有差异。大鼠视网膜内ＮＯＳ阳性细胞多尾于内核层无长突细胞和节细胞层移位无长细胞，偶见于视网膜节细胞。金黄地鼠视     

光密度的由来及其物理意义

光密度（ＣＤ）及其衍生参量积分光密度（ＩＯＤ）是生物医学特别是分子生物学实验中所需测定的重要参数。ＯＤ来源于Ｌａｍｂｅｒ－Ｂｅｅｒ定律，它仅与样品中所测位置上的阳性物质的含量有关。ＩＯＤ为样品中的所测区域内的各点光密度的总和，它与样品中所测区域内的阳性物质总的含量有关。施加了本底修正，ＯＤ就能客观地、科学地反映出样品中所测位置上的阳性物质的真实含量。ＩＯＤ也是如此。在具体测定一批样品ＯＤ前，还必须注意诸如光源选择等问题。     

大鼠小肠肌间神经丛中NOS神经元的发育研究

为研究大鼠小肠肌间神经丛ＮＯＳ神经元的发育，用ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学法及图像分析对胚胎老年各时期小肠肌间丛的ＮＯＳ神经元发生进行观察。结果显示：ＮＯＳ神经元于Ｅ１３ｄ出现，但极稀少，之后逐渐增多，其密度至出衙后１周达到高峰，以后逐渐下降，至成年到最低值，直至老年无明显改变；ＮＯＳ神经元胞体大小逐渐增加，至成年时最大，约为出生时的２倍，直至老年无明显改变；     

大鼠坐骨神经移植段对受损的视网膜节细胞影响的形态学研究

选用成年大鼠,切断视神经后,将自体周围神经段(2mm/每段)植入眼球玻璃体内,存活2周,取视网膜沿视轴纵切开,Nissl染色,光镜观察,并用计算机图像分析仪(IBAS 2000)测量面积。结果发现,植入周围神经段的各组视网膜节细胞未见溃变现象,测量的视网膜节细胞胞体平均面积比正常动物者明显增加,每组均可见一些超过正常视网膜节细胞面积的巨大细胞,胞体呈椭圆形,其长轴与节细胞排列方向一致;当增加周围神经移植段数量或缩短两个周围神经移植段植入点的距离时,视网膜节细胞的平均面积和巨大节细胞构成比即随之增大。仅切断视神经的对照组动物视网膜神经节则出现溃变。     

李氏5号方对半乳糖老化小鼠海马神经元褪黑素受体和Nogo受体表达的影响

为了观察李氏5号方对半乳糖老化小鼠海马神经元褪黑素受体(MTR)和Nogo受体(NogoR)表达的影响。我们将昆明小鼠随机分为五组:正常对照组(C组)、D半乳糖模型组(D组)、李氏5号方大剂量药物治疗组(L组)、中剂量药物治疗组(M组)和小剂量药物治疗组(S组);D、L、M、S四组每日皮下注射半乳糖65mg/kg体重,持续三个月。应用免疫组织化学染色方法检测小鼠海马神经元MTR和NogoR的表达水平。NogoR免疫组化染色结果:D组海马阳性反应细胞着色浅,少有突起,细胞数目少,仅为正常小鼠的20%,三个剂量李氏5号方治疗组染色结果与C组相似。结果提示:半乳糖老化小鼠海马神经元MTR免疫反应阳性神经元数的上调可能是老化小鼠的一种代偿性反应;NogoR表达下调提示老化小鼠可能存在脑白质的损害,出于机体自我保护的需要,NogoR表达下调以避免神经元修复机制对大脑的进一步损害;不同剂量的李氏5号方水提取液对两种受体的调节作用极为明显,说明这两种受体的表达可受到外源性药物的干预。