SARS冠状病毒S蛋白在HeLa细胞中的表达

目的 探索非病毒载体转染的SARS冠状病毒S蛋白真核细胞内的定位和能否组装到细胞膜，及其在感染中可能发挥的作用。方法 构建能够表达融合绿色荧光蛋白的SARS-COV S蛋白的质粒，通过非病毒载体转染HeLa细胞，激光共聚焦荧光扫描显微镜观察融合蛋白的亚细胞定位；利用SARS患者康复血清进行蛋白印迹杂交，确定SARS-COV S蛋白在真核细胞中的存在形式。结果在镜下发现通过非病毒载体转染的S融合蛋白荧光弥散于被转染的整个细胞内，尤以细胞核区更为密集，而没有集中定位于细胞膜上。这种定位分布不随蛋白表达时间延长而发生显著变化；蛋白印迹杂交显示在80～90KD的区域有特异性条带。结论 非病毒载体转染的SARS冠状病毒S蛋白分布于真核细胞核及胞浆内，而不能组装到细胞膜上；其在HeLa细胞中不是以完整形式存在，有被蛋白酶切割的可能性。     

钙调素拮抗剂与钙通道阻滞剂对离体大鼠心脏钙反常损伤心肌保护作用的研究

目的:观察钙调素拮抗剂三氟拉嗪(TFP)及钙通道阻滞剂异博定(VP)对缺钙-复钙损伤心肌的保护作用。方法:应用TFP与VP对离体大鼠心脏进行灌流。检测心肌钙含量、灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)及心肌蛋白漏出量等指标。结果:TFP显著减少损伤心肌的钙含量、LDH及蛋白漏出量,与对照组相比差异显著(P＜0.01)。VP灌注组与对照组相比各项指标差异无显著(P＞0.05)。TFP与VP联合应用各项检测指标值明显低于单独应用TFP(P＜0.01)。结论:TFP有效减轻钙反常心肌损伤的程度;VP对钙反常心肌无保护作用。联合应用TFP与VP的心肌保护效果更佳。钙反常时Ca²⁺大量内流主要通过钙调素介导,但慢钙通道在钙超载形成过程中也可能起一定作用。     

二氟甲基鸟氨酸对HeLa细胞及其端粒酶活性的影响

探讨二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对人宫颈鳞癌细胞系HeLa细胞生长特性、凋亡和端粒酶活性的影响。采用细胞记数、形态观察、流式细胞术(FCM)分析、DNA电泳和端粒重复扩增技术(TRAP)，观察DFMO对HeLa细胞生长、凋亡和端粒酶活性的影响。DFMO能显著抑制HeLa细胞生长，诱导细胞凋亡，G1期细胞增多、S期细胞减少，细胞内端粒酶活性明显被抑制。外源性腐胺(Pu)的加入可阻止DFMO引起的上述变化。DFMO可抑制HeLa细胞的生长，诱导HeLa细胞凋亡；抑制HeLa细胞内端粒酶活性。DFMO引起的HeLa细胞生长抑制及凋亡诱导与端粒酶活性被抑制有关，这可能是抗肿瘤的分子机制之一。     

银杏叶提取物对LPS诱导HeLa细胞凋亡的影响

目的研究银杏叶提取物（Ginkgo biloba leaf extract,GbE）对细菌脂多糖（LPS）诱导的人宫颈癌细胞HeLa细胞凋亡的影响。结论将HeLa细胞分成LPS组、GbE＋LPS干预组和对照组,各组细胞加入相应药物干预8～72h。采用MTT法检测GbE对细胞的毒性作用;计算各组细胞不同时间段细胞数,测定各组细胞的增殖情况;通过细胞形态学检测（AO/EB染色）测定细胞凋亡发生情况。结果在72h内不同浓度GbE对HeLa细胞无明显细胞毒性作用,细胞存活率在90%～100%之间,差异无统计学意义（P〉0.05）;LPS组经LPS诱导8h后细胞在各时间段增殖均较其他两组活跃,细胞数明显高于其他两组（tGbE＋LPS=6.423,P〈0.001;t对照组=3.976,P〈0.005）;GbE＋LPS组培养48h后细胞凋亡数明显高于LPS组和对照组。结论 GbE具有抑制LPS诱导的HeLa细胞增殖及促进细胞凋亡的作用。     

外源性S100A8在体外抑制HeLa细胞的增殖和侵袭

目的 探讨外源性S100A8对宫颈癌细胞系HeLa的增殖、凋亡、克隆形成及迁移和侵袭的影响.方法 MTT法检测细胞增殖活性;Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞技术检测细胞周期;平板集落形成实验检测细胞集落形成;划痕和Transwell侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭.结果细胞培养3d时,浓度为100、300和10...     

钙调素拮抗剂EBB逆转HL60／Har细胞对抗肿瘤药的抗性

本文采用细胞增殖抑制、流式细胞术等方法研究钙调素拮抗剂０－４－乙氧基－丁基－小檗胺对ＨＬ６０／Ｈａｒ细胞多药抗性的逆转，发现２ｍｍｏｌ／ＬＥＢＢ与阿霉素联合用药可使细胞的ＩＣ５０值由阿霉素单独用药时的２．１６ｍｇ／Ｌ降低至０．２８ｍｇ／Ｌ。     

外源性S100A8在体外抑制HeLa细胞的增殖和侵袭

目的探讨外源性S100A8对宫颈癌细胞系HeLa的增殖、凋亡、克隆形成及迁移和侵袭的影响。方法 MTT法检测细胞增殖活性;Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞技术检测细胞周期;平板集落形成实验检测细胞集落形成;划痕和Transwell侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭。结果细胞培养3 d时,浓度为100、300和1 000 mg/L的GST-hS100A8组的A值较GST组减少13.64%、19.29%和25.06%(P<0.05);在浓度为100 mg/L时,GST-hS100A8组呈时间依赖性减少(P<0.05);GST-hS100A8组在第3天时细胞凋亡率较GST组增加5.18倍(P<0.05),同时,出现峰值为(19.9±0.76)%的凋亡峰,而对照组没有凋亡峰;GST-hS100A8组的集落形成率较GST组减少30.2%(P<0.005);划痕愈合率较GST组降低30.1%(P<0.05);穿膜细胞数减少48.9%(P<0.05)。结论外源性S100A8可能具有抑制宫颈癌的作用。     

抗膜抗原的单抗对痢疾杆菌入侵HeLa细胞的影响

目的 观察抗痢疾杆菌膜蛋白和LPS的单抗对痢疾菌入侵HeLa细胞的影响。方法 采用不同膜抗原的单抗处理痢疾杆菌后进行HeLa细胞入侵及阻断实验，观察不同膜抗原单抗对痢疾杆菌入侵的作用。结果 观察到抗菌膜蛋白IpaB的单抗和LPS的单抗均不能阻断细菌的入侵且能促进细菌的入侵，在HeLa细胞胞浆内出现成簇的S．flexneri-2a菌，入侵菌数远远超过未经单抗处理的S．.flexneri-2a菌感染的HeLa细胞组。结论 提示痢疾杆菌的抗菌膜蛋白单抗和LPS单抗所识别的表位，均具有调节S．flexneri-2a菌进入HeLa细胞的能力。     

喉癌和不典型增生上皮细胞的P53蛋白表达与S期组分

应用免疫组织化学方法和流式细胞技术对喉癌和不典型增生上皮的Ｐ５３蛋白表达和细胞周期中Ｓ期组分进行了研究。结果显示Ｐ５３蛋白在轻度中度、重度不典型增生上皮的表达率分别为４０．００％，６０．００％，７１．４３％和７３．６８％，声带息肉，不典型增生上皮和喉癌的Ｓ期组分分别为３４．５１％、５０．１８％和６２．２０％。其中有８例在２种指标中均为阳性，有两例均为阴性。结果表明Ｐ５３蛋白免疫组化和Ｓ期组分的测定     

抗钙调素抗体对抗体产生细胞分泌抗体功能的影响

以钙调素拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）和环抱素Ａ（ＣｓＡ）为对照，观察抗钙调素（抗ＣａＭ）抗体对绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）免疫的小鼠脾细胞及分泌抗巨细胞病毒（抗ＣＭＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞抗体分泌功能的影响。发现ＴＦＰ（０．１～１００μｍｏ／Ｌ）、ｃｓＡ（０．１～１００μ／Ｌ）明显抑制小鼠脾细胞与杂交瘤细胞分泌鼠Ｉｇ的功能，且此抑制作用随ＴＦＰ、ＣｓＡ剂量的增大而增强；与此不同，人和兔抗ＣａＭ对上述细胞分泌Ｉｇ有明显促进作用。     

神经肽对肥大细胞内钙离子水平的影响

采用新型的钙荧光指示剂Ｆｕｒａ－Ⅱ检测了神经肽刺激后ＲＰＭＣ内ｃａ２＋的变化情况。在细胞外无钙离子存在下，用能诱导组胺释放的最适浓度的Ｐ物质（１０μｍｏｌ／Ｌ）、β－内啡肽（６μｍｏｌ／Ｌ）和强啡肽（２μｍｏｌ／Ｌ）刺激ＲＰＭＣ后，胞内Ｃａ２＋迅速上升，然后很快下降，该过程约需１５秒钟左右。这与组胺释放的时间基本吻合。推测上述三种神经肽触发胞内钙池释放Ｃａ２＋可能与组胺的释放有关。     

钙调素对微管组装的调节作用

利用我们建成的钙调素表达可调细胞模型－ＲＣ３细胞，对ＣａＭ高表达时微管组装行为进行了研究，当用生理剂量的地塞米松处理ＲＣ３细胞，细胞内ＣａＭ水平提高，而管蛋白浓度没有变化，造成钙调素／管蛋白比值上升，ＭＴ解聚，但同时加入ＣａＭ拮抗剂三氟拉嗪处理时，则可抑制ＭＴ的解聚，Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２转化细胞ＣａＭ含量的增加是引起ＭＴ解聚的主要因素，ＴＦＰ处理可恢复ＭＴ组装。ＲＣ３细胞ＣａＭ高表达导致ＭＴ解聚的实     

CPT-环磷酸腺苷对视网膜节细胞再生的影响

目的　探讨玻璃体内插入外周神经和玻璃体内注射CPT 环磷酸腺苷对轴突损伤的视网膜节细胞再生的影响。　方法　 2 0只成年金黄地鼠随机分 4组 ,每组 5只。切断视神经 (ON)并缝接坐骨神经为再生对照组(attachedgraft,AG) ;ON切断并缝接坐骨神经后再于玻璃体内注射CPT cAMP和 或插入一小段自体坐骨神经 (SN)为实验组。采用逆行示踪标记术 ,观察视网膜平铺片节细胞数。　结果　 1 对照组 (AG) ,视网膜再生的节细胞数为 :142 8± 2 84个 ;2 外周神经组 (AG +SN) :每个视网膜再生的节细胞平均数为 2 2 2 0± 415个 ;3 CPT cAMP组 (AG+cAMP) :每个视网膜再生的节细胞平均数为 2 175± 36 4个 ;4 外周神经和CPT cAMP联合组 (AG +cAMP +SN) :每个视网膜再生的节细胞平均数为 42 5 5± 82 0个 ;其中 ,AG +SN、AG +CPT组同AG组相比存在差异显著性 (P <0 0 1) ;AG +CPT +SN组同AG、AG +CPT和AG +SN组相比均有差异显著性 (P <0 0 1)。　结论　研究结果提示玻璃体内注射CPT +cAMP或联合应用外周神经和CPT cAMP可大幅提高受损视网膜节细胞的再生。     

脑源性神经营养因子在体外诱导SH-SY5Y细胞分化过程中的作用

目的 探讨不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)在体外诱导SH-SY5Y细胞分化时,对G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的影响.方法 采用全反式维甲酸(RA)和低(1μg/L)、中(10μg/L)、高(100μg/L)3种不同浓度BDNF在无血清培养液中相继诱导SH-SY5Y细胞分化,形成均一的具有神经元形态的细胞.以一步法实时定量RT-PCR检测其G2期细胞周期相关蛋白mRNA的表达,荧光激活细胞分类术(FACS)检测各组细胞时相.结果 在各浓度BDNF组中周期蛋白B1(cyclin B1)的mRNA含量与对照组及RA组比较均明显降低(P<0.05);仅高浓度组cyclin B2和周期蛋白依赖性激酶1(Cdk1)的mRNA含量显著降低(P<0.05),;低浓度和中浓度BDNF组Cdk5 mRNA含量均高于RA组(P<0.05).BDNF各浓度组处于G1期的细胞百分率均显著高于RA和对照组(P<0.01),而处于S期的细胞百分率均显著低于对照组(P<0.01),且低浓度及高浓度组同时低于对照组(P<0.01).结论 提示BDNF在有效促进SH-SY5Y细胞进一步分化的同时,没有引起G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的异常升高,BDNF无诱导细胞凋亡的危险,可能有减缓AD进程的作用,并且呈剂量依赖性.     

CKIp15INK4B相关新基因p15rs对HeLa细胞增殖影响的初探

目的　探讨新克隆的CKIp15 INK4B 相关基因p15rs对细胞增殖的作用。　方法　克隆p15rs编码区cDNA ,通过基因转染技术将其导入HeLa细胞 ,检测细胞的生长曲线 ,细胞周期和集落形成能力。　结果　构建了p15rs高表达的细胞模型HPS2 1,发现p15rs高表达可使HeLa细胞增殖被显著抑制 ,细胞生长速率下降 ,倍增时间延长 ,G1 期细胞增加 ,S期细胞减少 ,集落形成能力下降。　结论　新基因p15rs具有抑制癌细胞增殖和对细胞周期进程进行负调节的作用。     

施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响

目的：探讨移植的施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响。方法：50只成年SD大鼠被分为实验组和对照组。在胸11脊髓段半横切后立即在损伤处移植入施万细胞。结果：脊髓半横切后，15d和25d对照组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数均比未损伤侧的明显减少。存活的神经元胞体出现明显皱缩，有些神经元呈现NADPH－d阳性。15d和25d施万细胞组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数则比同期对照组的明显增加，表达NOS的存活神经元数也随之增多。但存活的神经元胞体仍然是皱缩的。结论：移植的SCs可促进受损伤的背核神经元存活及其表达NOS，但不能阻止其胞体出现皱缩。     

动粒蛋白—B与HeLa细胞核骨架关系的研究

用间接免疫荧光和免疫印迹方法研究ＣＥＮＰ－Ｂ与ＨｅＬａ细胞核骨架的关系，并用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００、Ｔｗｅｅｎ－４０、脱氧胆酸钠、核酸酶及（ＮＨ４）２ＳＯ４选择性抽提ＨｅＬａ细胞，保留细胞非组蛋白支架。ＡＣＡ间接免疫荧光染色表明在细胞核区域有明亮的荧光斑点。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析抽提后的细胞核骨架，发现－蛋白与细胞核骨架紧密结合。