环核苷酸对心肌细胞bFGF与TGFβ_1基因表达的调控初探

目的 :探讨环核苷酸 (ｃＡＭＰ/ｃＧＭＰ)对心肌细胞碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)与转化生长因子 β1基因表达调节中的作用 ,为心肌肥大的防治提供一定的理论依据。方法 :将Ｗｉｓｔａｒ乳鼠无血清培养 2 4ｈ的细胞分为对照组、ｃＡＭＰ组 ( 8-Ｂｒｏｍｏ -ｃＡＭＰ 0 .1ｍｍｏｌ/Ｌ)、ｃＧＭＰ组 [加入一氧化氮 (ＮＯ)的供体 -硝普钠 1ｍｍｏｌ/Ｌ ,借此升高心肌细胞内ｃＧＭＰ浓度 ],并在 30ｍｉｎ、3ｈ、2 4ｈ、48ｈ、72ｈ等 5个时相点检测如下指标 :( 1 )细胞生长代谢活性 (ＭＴＴ法 ) ;( 2 )ｂＦＧＦ和ＴＧＦβ1 的ｍＲＮＡ表达 …     

cAMP,cGMP在大鼠心肌细胞bFGF基因表达调节中的 …

目的：研究ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ在心肌细胞碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达调节中的作用。方法：分离培养大鼠心肌细胞，加入８－溴－ｃＡＭＰ的硝普钠，升高细胞内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ浓度，用原位杂交及免疫细胞化学的方法观察细胞内ｂＦＧＦ的表达，图象分析检测ｂＦＧＦ表达量的变化。结果：在培养中加８－溴－ｃＡＭＰ的心肌细胞，２４ｈ时ｂＦＧＦ ｍＲＮＡ及蛋白表达均明显高于对照组，４８ｈ、７２ｈ仍然较强表达     

碱性成纤维细胞生长因子对异丙肾上腺素引起的大鼠心肌坏死的拮抗作用

目的和方法：观察了碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对异丙肾上腺素（ｉｓｏｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ,ＩＳＯ）引起的大鼠心肌坏死的拮抗作用及其机制。结果：ｂＦＧＦ明显减轻了ＩＳＯ引起的大鼠心肌坏死的程度,血浆ＬＤＨ、ＭＤＡ及心肌ＭＤＡ水平比单纯ＩＳＯ组动物分别降低２４８％、３２８％及２００％（Ｐ＜００１）;心肌胶原及心肌细胞线粒体钙含量分别降低１８２％及２０８％（Ｐ＜００５）;心肌ＡＴＰ含量增加３６７％（Ｐ＜００１）。结论：ｂＦＧＦ对ＩＳＯ引起的大鼠心肌坏死具有明显的保护作用,其机制与抗脂质过氧化及心肌细胞内钙超载有关。     

高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制备级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０￣５０ｍｌ腹水，回收率为８５％￣９０％。整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定，纯度〉９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００     

表达人HGF／MBP融合蛋白的pMAL—MBP／HGF重组质粒的构建及鉴定

将人ＨＧＦ完整编码区ｃＤＮＡ片段插入ＭＢＰ表达型ｐＭＡＬ－Ｃ２载体质粒中，构建了表达人ＨＧＦ／ＭＢＰ融合蛋白的ｐＭＡＬ－ＭＢＰ／ＨＧＦ重质粒。表达的ＨＧＦ／ＭＢＰＧＥ分析分子量约为１１０ｋＤ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ表明能被兔抗ＭＢＰ抗体和抗人ＨＧＦＭｃＡｂ所识别。     

白血病骨髓瘤单抗对白血病细胞株细胞内环核苷酸的影响

本文应用放射免疫测定法，检测了单克隆抗体作用于相应白血病瘤细胞后细胞内ｃＡＭＰ，ｃＧＭＰ的含量变化。结果发现：抗原、抗体比例在８０：１时经ＭｃＡｂ作用１６－２４ｈ后，瘤细胞内ｃＡＭＰ含量明显高于对照组，ｃＧＭＰ含量明显低于对照组（Ｐ＜０００２－０００１）。从而提示：ＭｃＡｂ可通过对细胞膜作用，调控细胞内ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ的水平。本文还对ＭｃＡｂ作用深度及作用时间进行了探讨。     

AngⅡ、mm-LDL和TNFα对ECV304细胞 PDGF-B链基因转录调控的影响

目的 :从基因转录水平探讨ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因表达的影响。方法 :( 1 )以ＧＡＰＤＨ为内参照 ,用反转录 -多聚酶链反应 (ＲＴ -ＰＣＲ)方法检测 1 0 - 6 ｍｏｌ/ＬＡｎｇⅡ、1 0 0 μｇ/ｍＬｍｍ -ＬＤＬ及 2 0 0Ｕ/ｍＬＴＮＦα作用于ＥＣＶ30 4细胞 1 8ｈ后各实验组ＰＤＧＦ -Ｂ链基因ｍＲＮＡ水平 ,分别为对照组的 1 5倍、2 0倍和 1 3倍 ,提示ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα在转录水平对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因的表达有促进作用。 ( 2 )构建一系列含人ＰＤＧＦ -Ｂ链基…     

NF-κB在过氧化氢所致心肌细胞凋亡的作用

目的和方法 :本文试图证明 :ＮＦ -ＫＢ信号通路的激活可能介导了过氧化氢 (Ｈ2 Ｏ2 )所致的心肌细胞凋亡 ,实验用体外培养的新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠心肌细胞 ,随机分为三组 :1 正常对照组 ( 37℃ ,3ｈ) ;2 Ｈ2 Ｏ2 ( 1ｍｍｏｌ/Ｌ)损伤组 ( 37℃ ,2 4ｈ) ;3 热休克预处理 ( 4 3℃ ,1ｈ ,37℃恢复 6ｈ) Ｈ2 Ｏ2 ( 1ｍｍｏｌ/Ｌ)损伤组 ( 37℃ ,3ｈ)。采用末端标记法及流式细胞仪检测凋亡发生 ,Ｗｅｓｔｅｒｎ -ｂｌｏｔ检测Ｈ2 Ｏ2 ( 1ｍｍｏｌ/Ｌ)损伤 5ｍｉｎ ,1 5ｍｉｎ ,30ｍｉｎ ,60ｍｉｎ后Ｉ-κΒα 量的变化及热休克预处理对这种变…     

血小板源生长因子对培养内皮细胞移行的影响及其与血管内皮细 …

一、材料与方法1 材料与试剂 :人脐静脉内皮细胞 (ＨＵＶＥＣ)株(ＥＣＶ30 4)由武汉大学菌种保存中心提供。ＰＤＧＦ ＢＢ、ＤＭＥＭ/Ｆ12 、胎牛血清 (ＦＢＳ)及青霉素 链霉素均为美国Ｇｉｂｃｏ公司产品。血管内皮细胞生长因子 (ＶＥＧＦ)抗血清为ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品。ＰＤＧＦ ＢＢ、ＳＡＢＣ试剂盒抗血清及二氨基联苯胺(ＤＡＢ)由博士德公司提供。2 血小板源生长因子 (ＰＤＧＦ)对培养ＨＵＶＥＣ移行的影响 :参照Ｇａｊｄｕｓｅｋ等[1] 介绍的方法 ,并加以改进。选用生长良好的ＨＵＶＥＣ悬液 ,调整细胞密度为 2× 10 4 个 /…     

链球菌蛋白G在固相放射免疫分析中的应用

链球菌蛋白Ｇ(ＳＰＧ)分子中 ,含有多个ＩｇＧＦｃ段结合区 ,两者结合不影响ＩｇＧＦａｂ段对抗原的结合 ;据此 ,用ＳＰＧ制备固相抗体应用于放射免疫分析。基因重组ＳＰＧ ,用 5 0ｍｍｏｌ/Ｌ、ｐＨ9 6碳酸盐缓冲液溶解 ,浓度为 0 1μｇ/ｍｌ。包被聚苯乙烯试管 :1ｍｌ/管 ,室温 8ｈ ,弃液 ,加洗涤液ＰＢＳＴ (10ｍｍｏｌ/Ｌ、ｐＨ7.4ＰＢＳ ,含 0 0 5 %Ｔｗｅｅｎ2 0 ) 1ｍｌ,洗 3遍。作者单位 :2 710 0 0泰安 ,泰山医学院附属医院核医学科通信作者 :高云朝每管加稀释后甲状腺素抗体 1ｍｌ,含0 1%明胶 ,室温过夜 ,ＰＢＳＴ洗 3遍 ,固相…     

CD27介导小鼠NK细胞活化

细胞活化不仅要有抗原特异性ＴＣＲ参与还要有共刺激信号 ,包括ＣＤ2 8或ＴＮＦ受体超家族分子 (ＣＤ2 7、ＣＤ3 0、ＣＤ1 3 4、ＣＤ1 3 7等 ) ;近来也有报道ＣＤ2 8、ＫＩＲ、ＮＫＰ Ｐ、ＣＤ94 ＮＫＧ2、ＣＤ2、ＣＤ1 6等ＮＫ细胞表面分子参与ＮＫ细胞活化。但迄今为止有关ＴＮＦ受体超家族分子与ＮＫ细胞活化关系仍少有报道。文章作者对ＮＫ细胞表面ＣＤ2 7分子的表达及功能进行了深入研究。雄性 6周龄Ｃ57ＢＬ/ 6(Ｂ6)小鼠 ,纯化的抗 ＣＤ1 6/ 3 2ＭｃＡｂ、ＦＩＴＣ标记的抗小鼠ＮＫＭｃＡｂ、生物素标记的抗小鼠ＣＤ2 7ＭｃＡｂ、Ｎ…     

乙酰胆碱对大鼠腹腔巨噬细胞内钙离子浓度和表面Ia抗原表达的影响

用Ｆｕｒａ－２作为荧光探针测定大鼠腹腔巨噬细胞（Ｍ）内钙离子浓度（［Ｃａ￣（２＋）］ｉ），ＡＰＡＡＰ桥联酶标法检测Ｍ表面Ｉａ抗原的表达。结果表明：５×１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ的乙酞胆碱（Ａｃｈ）可使Ｍ［Ｃａ￣（２＋）］ｉ；明显上升，可促进Ｍ表面Ｉ－Ａ和Ｉ－Ｅ抗原的表达，而阿托品（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）可阻断Ａｃｈ升高［Ｃａ￣（２＋）］ｉ的作用。阿托品、三氟啦嚎（ＴＦＰ，５０μｍｏｌ／Ｌ）、ＥＧＴＡ（６ｍｍｏｌ／Ｌ）均可阻断Ｍ促进ＭＩａ抗原表达的作用，ｃＡＭＰ依赖性蛋白激酶抑制剂（ＰＫＩ，２５μｇ／ｍｌ）对Ａｃｈ促进ＭＩａ抗原表达的作用无影响。     

AAV载体介导的人β_2-AR、EGFP基因导入心肌细胞的研究

目的 :观察腺相关病毒 (ａｄｅｎｏ -ａｓｓｏｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ,简称ＡＡＶ)载体介导的人β2 肾上腺素能受体 (简称β2 -ＡＲ)基因和增强型绿色荧光蛋白基因 (简称ＥＧＦＰ)对心肌细胞的转染及其表达。方法 :构建以串联方式携带 β2 -ＡＲ、ＥＧＦＰ基因的ＡＡＶ载体 ,转染大鼠的心肌细胞 ,检测心肌细胞 β2 -ＡＲ、ＥＧＦＰ的表达及ｃＡＭＰ的含量。结果 :Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交显示转染的心肌细胞表达人 β2 -ＡＲｍＲＮＡ ;Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹杂交分析表明转染的心肌细胞有人β2 -ＡＲ ;并在荧光显微镜下可观察到心肌细胞表达…     

血液动力学超负荷患者心肌肥大时bFGF、TGFβ_1的变化

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)和转化生长因子 (ＴＧＦβ1 )在容量或压力超负荷患者心肌肥大发病机制中的作用。方法 :本项研究心肌肥大病人 32例 ,均经二维超声心动图和病理组织学检查证实 :容量超负荷组 (ＶＧ)均系风心病二尖瓣闭锁不全伴狭窄的人工瓣膜置换术病人 1 6例的左室肥大心肌 ,平均年龄 2 8± 5( 2 4～ 50 )岁 ,压力超负荷组 (ＰＧ)系先心病法乐氏四联征或三联征病人 1 6例的右室肥大心肌 ,平均年龄 1 4± 6( 5～ 2 3)岁 ,正常的左、右心室心肌 (ＮＧ)各 5例 ,平均年龄 2 2± 4( 1 8～ 2 8)岁 ,均系无心脏疾病的…     

bcl-2在鸡马立克氏病肿瘤中的表达

目的 :从ｍＲＮＡ水平测定ｂｃｌ- 2在鸡马立克氏病ＭＤ肿瘤中的表达 ,阐明ｂｃｌ- 2与ＭＤ淋巴瘤形成的关系。方法 :用来克亨ＳＰＦ鸡复制ＭＤ肿瘤模型 ,取肿瘤和相应正常组织 ,液氮保存 ,用ＡＧＰＣ(ＡｃｉｄＧｕａｎｉｄｉｎｉｕｎＴｈｉｏｃｙａｎａｔｅ -Ｐｈｅｎｏｌ-Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ,一步法 )法提取组织总ＲＮＡ(ＴＲＮＡ) ,紫外测定其浓度 ,甲醛变性胶电泳观测其纯度。一个含鸡ｂｃｌ- 2 1 .2ｋｂ片段的质粒 (ｐＴＴＣＢ1 ) ,经转化扩增 ,提取质粒ＤＮＡ ,并用限制性内切酶 (ＲＥ)消化 ,回收纯化ｂｃｌ- 2片段 ,放射性 [α - …     

PDGF-B链基因上游序列中与HMGI结合 A-T丰富区的初步分离和鉴定

一些动脉粥样硬化相关致病因素可诱导内皮细胞和单核细胞中血小板源生长因子 -Ｂ链 (ＰＤＧＦ -Ｂ)基因表达 ,这一过程涉及众多反式作用因子和基因上游调控序列之间的相互作用。染色体结合蛋白———高迁移率蛋白Ⅰ (ＨＭＧＩ)可通过与ＤＮＡ上的Ａ -Ｔ丰富区结合 ,影响多种基因的转录。目的 :分离和鉴定ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游序列中与ＨＭＧＩ结合的Ａ -Ｔ丰富区 ,并初步分析其功能。方法 :ＤＮＡ重组技术和凝胶迁移率改变法 (ＥＭＳＡ)。结果 :重组人ＨＭＧＩ蛋白 (ｒＨＭＧＩ)可与ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游序列结合。在 - 1 758/ 4 3ｂ…     

急性心肌梗死患者溶栓前后血清VEGF水平的变化及临床意义

血管内皮细胞生长因子 (ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃ ｔｏｒ,ＶＥＧＦ)是近年发现的一种促血管生长因子 ,其相对分子质量 (Ｍｒ)为 3.5× 10 4～ 4.5× 10 4属于糖蛋白 ,由两个Ｍｒ为 1.7× 10 4～ 2 .2× 10 4相同的亚单位经二硫键形成二聚体[1 ] 。心肌细胞、平滑肌细胞及肿瘤细胞均可分泌ＶＥＧＦ。缺血、缺氧是刺激ＶＥＧＦ分泌的重要因素[2 ] ,如急性心肌梗死 (ａｃｕｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ ,ＡＭＩ)时 ,由于心肌缺血、损伤及坏死等病变 ,可导致血清ＶＥＧＦ的水平发生变化。静…     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析法的建立

本文应用兔抗ｈＡＦＰ ＩｇＧ包被板条，以异硫氰酸苯基－ＥＤＴＡ－Ｅｕ＾３＋标记抗ｈＡＦＰ ＭｃＡｂ，建立了固相“夹心”二步法分析ｈＡＦＰ技术，结果显示，分析范围是６．２５ｎｇ／ｍｌ－１００ｎｇ／ｍｌ（ｒ＝０．９９），变异系数在１．６７％－１７．７４％之间，ｈＡＦＰ最小可测值为０．３５ｎｇ／ｍｌ。测定７６例孕妇血清样品，同所购ＤＥＬＦＩＡ ｈＡＦＰ最小可测值为０．３５ｎｇ／ｍｌ。测定７６例孕妇血清样     

高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＰｈａｒｍａｃｉａＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ—３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０～５０ｍｌ腹水，回收率为８５％－９０％．整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测定，纯度＞９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ）。该法操作简单、快速，只要有一台核酸／蛋白检测仪，便可进行制备级水平的纯化。     

API_(0134)对LDL诱导单核细胞表达PDGF-B、bFGF及平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的和方法：应用免疫细胞化学方法，观察穿心莲成分ＡＰＩ０１３４对轻度氧化低密度脂蛋白（ｍｍＬＤＬ）诱导人血单核细胞表达血小板源生长因子Ｂ链蛋白（ＰＤＧＦ－Ｂ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的影响；并进行平滑肌细胞（ＳＭＣ）有丝分裂试验，观察ＡＰＩ０１３４作用后的单核细胞条件培养基（ＣＭ）对３Ｈ－ＴｄＲ掺入ＳＭＣＤＮＡ的影响。结果：ｍｍＬＤＬ可显著促进单核细胞表达ＰＤＧＦ－Ｂ和ｂＦＧＦ，ｍｍＬＤＬ作用后的ＣＭ亦可显著增加３Ｈ－ＴｄＲ的掺入量。ｍｍＬＤＬ的上述作用可被不同剂量的ＡＰＩ０１３４和ＡＰＩ０１３４作用后的ＣＭ所抑制。结论：ＡＰＩ０１３４的作用可能是抗动脉粥样硬化的机理之一。