去甲斑蝥素诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的研究新型抗癌药物去甲斑蝥素抑制人肝癌（ＢＥＬ－７４０２）细胞生长的机制。方法从细胞的形态学观察和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳等方面考察去甲斑蝥素作用人肝癌细胞的特点,并进一步用免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ等分析手段研究癌基因蛋白Ｂｃｌ－２在此过程中的表达情况。结果１０ｍｇ／Ｌ去甲斑蝥素作用人肝癌细胞２４ｈ,部分细胞出现固缩、细胞质膜突起、核染色质异常凝集等,并伴有膜包被的凋亡小体的形成。ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳显示,处理组部分细胞的ＤＮＡ已降解成以约２００ｂｐ为基数的ＤＮＡ片断,呈现典型的“梯状”带纹。免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析显示该过程伴随癌基因蛋白Ｂｃｌ－２表达的减弱。结论新型抗癌药物去甲斑蝥素可以诱导人肝癌细胞发生凋亡,该凋亡过程与癌基因蛋白Ｂｃｌ－２表达下调相关     

去甲斑蝥素增强Bel7402中ⅠkBα表达和抑制细胞增殖的研究

目的：从核转录因子NF－kB和其抑制分子ⅠkBα的相互作用揭示甲斑螯素的抗肿瘤作用机理，为其进一步开发利用理论依据。方法：选用人肝癌细胞株（Bel7402)。常规培养，分为细胞对照组及去甲斑蝥素不同浓度组，进行细胞生长曲线测定、细胞集落形成实验及MTT实验，同时对细胞进行Giemsa染色、免疫细胞化学染色（－抗分别为anti-p65,anti-ⅠkBα).Western blot检测ⅠkBα的表达。结果：生长曲线测定，细胞集落形成实验及MTT实验结果表明，去甲斑螯素对人肝癌细胞株的生长有明显的抑制；免疫细胞化学及Westernblot结果显示，去甲斑柔素可增强细胞内ⅠkBα的表达，并抑制NF－kB的表达与活性。结论：去甲斑蝥素有良好的抗肿瘤效应，其作用机理可能与其能增强核转录因子NF－kB的抑制分子ⅠkBα的表达有关。     

乳猪肝提取物和阿霉素对裸小鼠肾包膜下移植肝癌细胞？…

目的：探讨乳猪肝提取物（ＬＥ）和阿霉素对裸小鼠我膜下移植ＢＥＬ－７４０２肝癌细胞增殖、分化和凋亡的影响。方法：应用裸小鼠肾包膜下移植肝癌细胞，形态学观察，有丝分裂计数，超微结构观察和原位ＤＮＡ末端标记技术。结果：ＬＥ组和ＤＸＲ组均能明显抑制移植肝癌细胞的生长和促进凋亡。ＬＥ对肝癌细胞有丝分裂影响不明显，而ＤＸＲ能抑制其有丝分裂。电镜观察表明：ＬＥ能促进细胞凋亡超微结构的变化，表现为细胞固缩、微绒毛     

腺苷三磷酸对人横纹肌肉瘤细胞系P21和c-myc蛋白表达的影响

为进一步研究腺苷三磷酸抑制癌细胞增殖诱导分化的作用机理，用ＡＴＰ作用于人横纹肌肉瘤单细胞克隆亚系ＲＤＬ６细胞，用免疫荧光细胞化学方法观察ＡＴＰ作用后的ＲＤＬ６细胞核内Ｐ＾２１蛋白表达增强，ｃ－ｍｙｃ蛋白表达降低，膜下胞质内微丝束－应力纤维组改善，粘着斑内的主要粘附蛋白－纽蛋白（ｖｉｎｃｕｌｉｎ）表达增强，正常小鼠成肌细胞Ｃ２Ｃ１２细胞核内Ｐ＾２１蛋白高表达，ｃ－ｍｙｃ蛋白不表达。结果表明：ＲＤＬ６     

生物免疫刺激剂对大鼠肝大颗粒淋巴细胞抑肝癌细胞增殖的影响

为从大鼠肝分离出高纯度的大颗粒淋巴细胞，以干扰素、卡介苗或二者联合处理ＬＧＬ，用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定期对ＬＧＬ抑人肝癌细胞增殖作用的影响。结果显示：（１）分离肝ＬＧＬ电镜观察，细胞直径１０－１６μｍ，细胞表面有少量微绒毛，核多呈肾形或有切迹，胞质内可见数量不等的高电子密度颗粒。（２）ＬＧＬ对人肝癌细胞有自然抑增作用，抑制率为２７．３％，免疫刺激剂可增强ＬＧＬ的抑肝癌细胞增殖作     

肝癌细胞稳定转染B7.1后的免疫学特性

目的 探讨赋予肝癌细胞第二信号分子Ｂ７．１增强癌细胞与淋巴细胞之间的识别与激活作用,从而达到增强淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤或抑制作用。方法 利用逆转录方法,转染Ｂ７．１分子至包装细胞系ＰＡ３１７。筛选获得高滴度的克隆后,以病毒上清感染肝癌细胞,使其表达Ｂ７．１分子,最后以ＬＤＨ释放法测定ＬＡＫ细胞的细胞毒活性。结果 肝癌细胞可稳定表达Ｂ７．１分子,阳性率达９４．３％,未转染的细胞无表达,其所诱发的Ｌ     

HBVx基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响

目的：研究乙型肝炎病毒 Ｘ 基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响。方法：用分子生物学的方法构建 Ｈ Ｂ Ｖｘ 基因真核表达载体ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３１ Ｈ Ｂ Ｘ，用脂质体将真核表达载体ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３１ Ｈ Ｂ Ｘ转染入肝癌细胞 Ｈ Ｃ Ｃ９２０４ ， Ｇ４１８ ５００ ｍｇ· Ｌ－ １ 筛选，获得稳定表达 Ｈ Ｂｘ 蛋白的细胞，阿霉素２０ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 诱导细胞凋亡。电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：２０ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 阿霉素可诱导肝癌细胞凋亡，稳定表达 Ｈ Ｂｘ 蛋白的肝癌细胞凋亡率比未进行基因转染的肝癌细胞凋亡率低。结论： Ｈ Ｂｘ 蛋白可抑制阿霉素诱导的肝癌细胞调亡。     

抗CD28＋B7.1单抗共刺激PBLs诱导肝癌细胞凋亡的蛋白激酶信号转导

目的 研究Ｔ淋巴细胞活化、增殖、介导肝癌细胞凋亡过程中其蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）的活性变化。方法 用抗ＣＤ２８＋Ｂ７．１（ＣＤ８０）单克隆抗体共刺激正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬｓ）后作用于肝癌细胞（ＢＥＬ－７４０２）。结果 激活的Ｔ细胞中ＰＫＣ、ＴＰＫ活性明显增强,并与肝癌细胞凋亡程度呈正相关。结论 ＰＫＣ、ＴＰＫ在Ｔ细胞活化、增殖及诱导肝癌细胞凋亡的信号转导中起重要作用。     

McAb共激活T细胞介导肝癌细胞前后的膜分子与TCR Vβ基因的 …

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽的复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ用ＦＡＣＳ进行表型分析，结果发现：作用后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化，同时基因家族采用ＲＴ－ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹     

胎肝提取物对培养中4株肝癌细胞增殖和分化的影响

目的：观察４月胎肝提取物对ＱＧＹ－７７０３、ＢＥＬ－７４０２、ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞和ＨｅｐＡ小鼠肝瘤细胞增殖和分化的影响。方法：从４月胎肝中制备提取物,采用［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ比色法。结果：１００～５００ｍｇ／Ｌ的胎肝提取物能明显抑制ＱＧＹ－７７０３、ＢＥＬ－７４０２、ＳＭＭＣ－７７２１、ＨｅｐＡ等肝癌细胞的ＤＮＡ合成和脱氢酶活力。对ＤＮＡ合成的半数抑制浓度（ＩＣ５０）分别为３４６．９３、１５１．１８、１８２．３７、２３１．０３ｍｇ／Ｌ;对脱氢酶活力的抑制弱于对ＤＮＡ合成的抑制,ＩＣ５０分别为１３１８．１、１５９９．２、７９３．８、８１３．１ｍｇ／Ｌ。结论：胎肝提取物能够抑制上述４种细胞增殖和促进分化。     

HBVx基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋？…

目的：研究乙型为病毒Ｘ基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响。方法：用分子生物学的构建ＨＢＶｘ真核表达载体ｐ＾ＣＤＮＡ３．１．ＨＢＸ,用脂质体将真核表达载体Ｐ＾ＣＤＮＡ３．１－ＨＢＸ转染入肝癌细胞ＨＣＣ９２０４,Ｇ４１８ ５００ｍｇ·Ｌ＾－１筛选,获得稳定表达ＨＢｘ蛋白的细胞,阿霉素２０μｍｏｌ·Ｌ＾－１诱导细胞凋亡。电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：２０μｍｏｌ·Ｌ＾－     

EB病毒潜伏膜蛋白对人鼻咽癌细胞系CNE1生长分化的影响

目的 研究ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＥＢＶ－ＬＭＰ）对人高分化鼻咽癌细胞生长分化的影响。方法 以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象,采用电穿孔基因转染技术,将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒转染ＣＮＥ１细胞。以载体质粒转染及ＣＮＥ１细胞为对照,用细胞体外增殖实验、流式细胞信（ＦＣＭ）和裸鼠体内丰瘤实验等,观察细胞生长分化的变化。结果 ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞地增殖,实验组平均吸光度（Ａ）     

抗氧化剂PDTC抑制氧化的低密度脂蛋白诱导的人肾小球系膜细胞NF_(-k)B活化

目的 研究氧化的低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＨＭＣ）核因子－ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）活化的影响，以及抗氧化剂毗咯二硫氨基甲酸酯（Ｐ ＤＴＣ）对ＮＦ－ＫＢ活化的抑制作用，探讨ＯＸ－ＬＤＬ介导肾损害的基因调控机制及抗氧化剂ＰＤＴＣ防治脂质肾损害的可能性。方法 将Ｏｘ－ＬＤＬ或ＰＤＴＣ与ＨＭＣ共培养后，提取细胞核蛋白进行凝胶迁移率变动分析（ＥＭＳＡ）检测ＮＦ－ＫＢ的活化，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测细胞内ＩＫＢα蛋白含量的变化，反映ＩＫＢα的降解及免疫组化染色检测细胞内的Ｐ６５向核转位。结果 正常对照组未见ＮＦ－ＫＢ活化，当用不同浓度（１０、２５、５０及１００ｍｇ／Ｌ）的Ｏｘ－ＬＤＬ，刺激肾小球系膜细胞 ｌｈ后，均可引起细胞 ＮＦ－ＫＢ活化及 ＩＫＢα降解。与对只组相卜较差异显著（ｐ＜０．０５），以５０ｍｇ／Ｌ 的ＯＸ－ＬＤＬ刺激ＨＭＣ１ｈ，ＮＦ－ＫＢ活化及 ＩＫＢα降解最明显。ＮＦ－ＫＢ活化的同时，伴有Ｐ６５由胞浆向胞核的转位。１００μｍｏｌ／Ｌ ＰＤＴＣ，能明显抑制 ＮＦ－ＫＢ的活化、ＩＫＢα降解（ｐ＜０．０１）及 Ｐ６５的核转位。结论Ｏｘ－ＬＤＬ。能诱导ＨＭＣ的ＩＫＢαａ降解、Ｐ６５的核转位，最终使Ｎ     

McAb共激活T细胞介导肝癌细胞前后的膜分子与TCRVβ基因的表达

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽的复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ用ＦＡＣＳ进行表型分析，结果发现：作用后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化，同时基因家族采用ＲＴＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析ＴＣＲＶβ基因１～２０亚家族表达水平与特征，健康人ＰＢＬｓ分别加入ＩＬ２、ＰＨＡ、抗ＣＤ３和ＣＤ３＋ＣＤ２８、ＣＤ２８＋ＣＤ８０、ＣＤ２＋ＣＤ５８作用肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２）前表达水平平均约为５％，作用ＢＥＬ７４０２后表达水平约为１３％～２５％，其特征为Ｖβ７增高，这提示在癌抗原的参与下ＭｃＡｂ共刺激的Ｔ细胞活化，ＴＣＲ接受ＡＰＣ相应抗原的刺激，具有该ＴＣＲ的淋巴细胞迅速增殖而成为针对抗原的Ｔ细胞克隆，发挥其识别和杀伤癌细胞的作用，这将为肿瘤生物治疗的研究提供分子免疫学依据。     

特异性细胞毒性T细胞检测方法的建立及其在重组痘苗病毒活疫苗细胞免疫研究中的应用

报道了用ＣＢＡ／Ｊ小鼠、Ｌ９２９细胞及ＭＴＴ比色法建立的特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）的检测方法及其在重组痘苗病毒活疫苗细胞免疫研究中的应用。通过检测痘菌病毒特异性初发ＣＴＬ的动态变化及其二次反应ＣＴＬ，表明，本法能较好地检测初发及二次反应ＣＴＬ水平的变化。用本法检测了不同启动子控制下的表达Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｓ（ＥＢ）病毒膜抗原（ＥＢＶ－ＭＡ）的重组痘菌病毒ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ、以及与表达人白细胞介素－２的重组痘苗病毒联合免疫时的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ。结果表明，Ｐ７５００启动子表达的ＥＢＶ－ＭＡ比Ｐ１１０００启动子表达的ＥＢＶ－ＭＡ诱导的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ高，但无显著性差异。当上述重组痘苗病毒与表达人白细胞介素－２的重组痘苗病毒联合免疫时，均能使二者的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ增高，但增高幅度本身及其二者之间均无显著性差异。     

人工基膜对鼻咽癌细胞（CNE－2）间结构的重建及恶性表型的影响

用全反维甲酸（ＲＡ）１０~（－７）ｍｏｌ·Ｌ~（－１）对生长在玻璃皿（Ｇ）和人工基膜（ＡＢＭ）上的ＣＮＥ－２细胞进行９ｄ的诱导分化。结果显示生长在Ｇ上的癌细胞增殖受抑制，蛋白质含量增加，软琼脂内集落形成和裸鼠体内生长等恶性表型下降；生长在ＡＢＭ上的癌细胞则不受影响，但其表面微绒毛丰富、细胞间的紧密连接、交指状连接、桥粒或腺腔样结构多见，高尔基器、粗面内质网发育较好。上述结果表明不同的培养基质对ＲＡ的生物学作用有不同的影响，ＡＢＭ有拮抗ＲＡ抑制癌细胞增植和去恶化作用，但有助于癌细胞间结构的重建及细胞器的发育，提示在体外进行癌细胞诱导分化时应在近似体内微环境的培养系统中进行才能更确切地评价分化诱导剂的体内治疗反应。     

丁酸钠诱导BEL7402人肝癌细胞恶性表型逆转的研究

丁酸钠诱导ＢＥＬ７４０２人肝癌细胞恶性表型逆转的研究梁若斯胡梅香黄炜＊（广州医学院组胚教研室＊广州医学院肿瘤研究所）癌细胞能在某些因子的诱导作用下，恶性表型发生逆转。本研究旨在证明天然物质丁酸钠能诱导ＢＥＬ７４０２人肝癌细胞恶性表型逆转。我们使用四种...     

FasL mRNA在慢性乙型肝炎肝组织中的表达

目的 研究ＦａｓＬ－ｍＲＮＡ在慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）肝组织中的表达及意义。方法 采用人工合成ＦａｓＬ寡核苷酸探针对ＣＨＢ肝组织进行原位杂交检测。结果 肝组织浸润单个核细胞及肝细胞都不同程度检测出ＦａｓＬ－ｍＲＮＡ，阳性细胞主要分布在碎屑样坏死，灶状坏死周围。ＦａｓＬｍＲＮＡ还可在窦细胞中表达，结论 慢性乙型肝炎时肝细胞自身合成并表达ＦａｓＬ。同时ＦａｓＬ阳性细胞可能经Ｆａｓ机制发生“细胞自杀”或“     

合成聚肽膜渗透抗癌药物的研究

本文制备了聚谷氨酸苄酯膜，并进行皂化，得到了谷氨酸苄酯－谷氨酸共聚物膜．研究了不同聚合物膜对两种抗癌药物５－氟脲嘧啶（５Ｆｕ）及２－羟乙基－氧甲基－５－氟脲嘧啶（２－ＨＥＯＭ－５－ＦＵ）的渗透性能。结果表明Ｐ１（ＢＬＧ－ＬＧＡ）膜渗透５－Ｆｕ和２－ＨＥＯＭ－５－Ｆｕ的渗透系数分别是ＰＢＬＧ膜的４和１６倍，且Ｐ２（ＢＬＧ－ＬＧＡ）膜的渗透系数分别是ＰＢＬＧ膜的１３和２６倍．     

人工基膜对鼻咽癌细胞（CNE—2）间结构的重建及恶性表…

用全反维甲酸（ＲＡ）１０＾－７ｍｏｌ．Ｌ＾－１对生长对玻璃皿（Ｇ）和人工基膜（ＡＢＭ）上的ＣＮＥ－２细胞进行９ｄ的诱导分化，结果显示生长在Ｇ上的癌细胞增殖受抑制，蛋白质含量增加，软琼脂内集落形成和裸鼠体内生长等恶生表型下降，生长在ＡＢＭ上的癌细胞则不受影响，但其表面微绒毛丰富，细胞僮的紧密连接，交指状连接，桥粒或腺腔样结构多见，高尔基器，粗面内质网发育较好。上述结果表明不同的培养基质对ＲＡ的生物学