散射比浊法检测CRP的方法学评价研究

目的评价西门子BNII全自动特定蛋白分析仪检测CRP的分析性能。方法根据CLSI系列文件（EP15-A、EP9-A2、EP7-A2）和其他相关文献的实验方案,对BNII全自动特定蛋白分析仪CRP检测的精密度、准确度、比对实验、干扰等方面进行分析,并将结果与厂商声明的性能或公认的质量标准进行比较。结果 CRP含量在13.84mg/L和55.6mg/L时批内不精密度（CV）分别为3.32%和3.58%,小于厂家声明的CV为4.0%和5.7%;两个浓度校准品检测结果与靶值的相对偏倚分别为6.06%和6.16%,均少于1/2CLIA’88水平（12.5%）;与罗氏Modular全自动生化分析仪的免疫透射比浊法比较,相关系数为0.9995,线性回归方程为y=0.9527x＋0.3552,预期偏差可接受;干扰实验结果显示F-Bil0.2g/L、C-Bil0.4g/L、Hb4.82g/L、乳糜835浊度对CRP检测时干扰差异无统计学意义。结论西门子BNII全自动特定蛋白分析仪CRP检测的主要分析性能符合质量目标要求。     

QuikRead 101 C反应蛋白分析仪性能评价

QuikRead 101 CRP分析仪测量C反应蛋白(cneactvepro-tein,CRP)时能够做到全血、微量、快速、准确。本研究拟从精密度、准确性等方面对QuikRead 101 CRP分析仪检测CRP的性能进行评价,并验证了其参考区间,同时与德灵BNⅡ特定     

日立7600全自动生化分析仪检测系统性能验证

目的对日立7600全自动生化分析仪的检测系统进行性能验证。方法参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）的指南文件EP5-A、EP6-A,对日立7600全自动生化分析仪的精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围进行性能评价。结果批内精密度小于1／4TEa（实验室允许总误差）、日间精密度小于1／3TEa;正确度不超过1／2TEa;线性范围、临床可报告范围与厂家说明书提供的性能指标相符。结论日立7600全自动生化分析仪的分析性能符合质量目标要求。     

AFIAS-50全自动荧光免疫分析仪测定超敏C反应蛋白的性能

目的 对AFIAS-50全自动荧光免疫分析仪（简称AFLAS-50）检测超敏C反应蛋白（hs-CRP的性能进行分析和评价。方法 参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）标准,对AFIAS-50检测hs-CRP的检出限、精密度、准确度、线性、参考范围、抗干扰等主要性能进行分析和评价。结果 批内精密度和批间精密度[变异系数（CV%）]分别为2.28%～5.50%和1.13%～5.10%,均在要求范围内;检出限为0.5 mg/L,符合临床检测要求;准确度实验表明AFIAS-50与BNⅡ特定蛋白分析仪检测结果有较好的相关性（r=0.997 3,P<0.05）;参考范围验证显示,20名健康人结果均<8 mg/L,符合要求,可以引用厂商推荐的0～8.00 mg/L;三酰甘油（TG）和总胆红素（TBIL）对检测结果的影响度均<10%,在可接受的范围内,抗干扰能力符合要求。结论AFIAS-50全自动荧光免疫分析仪检测hs-CRP的各项性能指标良好,对临床诊断具有一定的应用价值。     

德灵BNII全自动蛋白分析仪的性能评价

目的对德灵BNII全自动蛋白分析仪的使用性能进行评价。方法采用质控样品和人血清样本,对BNII全自动蛋白分析仪测定免疫球蛋白G、A、M（IgG、IgA、IgM）3个项目的精密度、准确度、线性、参考区间和携带污染进行评价实验。结果各项目批内精密度小于CLIA’88的1/4的要求（〈5%）,批间精密度〈CLIA’88的1/3的要求（〈7.55%）。IgG、IgA、IgM的准确度分别为91.06%、94.83%和92.31%;线性实验表明,样本的稀释度与测定浓度值线性相关性良好;参考区间在允许范围内;携带污染符合要求。结论德灵BNII全自动蛋白分析仪的各项主要评价指标均较好,能够准确可靠地进行临床标本分析检测。     

贝克曼LX-20生化分析仪的性能验证

目的 评价美国Beckman-coulter公司LX-20生化分析仪检测系统的主要性能.方法 按美国CLSI的仪器性能验证文件EP5-A、EP6-A、EP10-A的方法 ,选定4个项目(ALT、BUN、GLU、K),对LX-20牛化分析仪的精密度、携带污染率、准确度和可报告范围进行验证.结果 LX-20全自动生化分析仪测定ALT、BUN、GLU、K各项目质控血清的批内不精密度、总不精密度测定、CV值均小于厂商声明的CV%;准确度实验结果 偏倚,低于1/4CLIA'88TEa;携带污染率<0.5%,可报告范围试验测定值结果 与厂商声明范围接近.结论 Beckman-coulter公司LX-20生化分析仪在精密度、准确度、携带污染率、可报告范围四个方面性能验证合格.     

强生干化学检测系统方法学性能验证实验结果分析

目的 应用美国临床检验标准化研究所(CLSI)评价方案对强生Vitros 950干化学分析仪的7个常用生化指标进行方法学性能验证与评价.方法 根据CLSI系列文件(EP15-A、EP6-A、EP9-A2)和其他相关文献的实验方案,对强生Vitros 950干化学分析仪7个常用生化指标的的精密度、线性及其与Roche Modular全自动生化分析仪的可比性进行分析,结果与厂商声明的性能或公认的质量目标进行比较.结果 精密度性能均通过验证,7个常用生化指标项目均呈一次线性,线性范围分别为:Na+:96～240 mmol/L,K+:1.05～14.93mmol/L,CI-:65～167 mmoFL,CO2:5.3～38.0 mmol/L,Glu:0.78～38.50 mmol/L,Urea:0.55-41.50 mmol/L,.Crea:4～1 143μmol/L;可比性研究结果显示,除二氧化碳低值医学决定水平(6 mmol/L)外,其他均有较好的可比性.结论 Vitros 950干化学分析仪7个常用生化指标检测的主要分析性能基本符合质量目标要求.     

POCT仪器和Immage分析仪C反应蛋白检测结果的比对试验

目的 通过对POCT和Immage分析仪两种不同检测系统进行方法比对分析,探讨各系统之间检测C反应蛋白(CRP)是否具有可比性.方法 参照NCCLSEP9-A文件的要求,以美国Beckman-Coulter Immage特定蛋白测定仪及其配套原装试剂、质控组成的检测系统为比较方法,挪威NycoCard Reader Ⅱ蛋白定量金标检测仪为实验方法测定血清CRP,检测3CRP含量分别为高、中、低水平的新鲜血清标本共40份.结果 两个检测系统测定CRP的精密度良好,两检测系统间的相关系数R>0.975.回归方程为Y=1.300 0.981X.结论 两种检测系统间相关性良好,两系统的检测结果存在一定的偏差,通过比对试验可对仪器进行校正,两者之间结果具有可比性.     

评价VAPRO 5520渗透压分析仪性能

目的对VAPRO 5520渗透压分析仪性能进行评价，判断其分析性能是否满足临床要求。方法按照国家实验室认可及CAP认可要求，依照NCCLS EP5-A文件，分析VAPRO 5520日内和日间精密度；用能力对比（PT）评价分析方法的准确度；按照NCCLS EP6-P文件评价分析方法的线性范围；评价分析方法的最低检测限；并对说明书的参考范围进行验证。结果VAPRO 5520日内精密度高、低值分别为0．78％和0．54％，日间精密度高、低值分别为1．23％和1，25％。分析方法的能力比对结果合格；分析方法的线性范围为50．0～1000．0mmol/kg，符合临床要求；分析方法提供的参考范围符合实验室需要；其它指标符合性能评价要求。结论VAPRO 5520渗透压分析仪性能符合实验室性能标准。     

红细胞叶酸检测仪性能评价

目的通过对国产红细胞叶酸检测仪进行性能分析,以验证其检测能力是否符合行业标准。方法参考美国临床和实验室标准化协会EP5-A2文件,通过20d测定2个水平质控物,获得精密度实验数据,计算批内、批间和实验室内变异系数(CV)并与生物学变异规定的要求相比较;按照EP9-A2文件,通过与Beckman Couter UniCel DxI800全自动免疫分析仪测定结果比对验证仪器的正确度;参照EP6-A文件,用多项式回归法进行线性评价;通过测定20例能够合理代表健康总体的样本对仪器给定的参考范围进行验证。结果批内CV小于6.67%(1/4生物学变异允许总误差),批间CV小于8.90%(1/3生物学变异允许总误差),实验室内CV小于13.35%(1/2生物学变异允许总误差);在医学决定水平处预期偏倚的可信区间小于允许的误差范围;二次和三次多项式系数与0比较差异均无统计学意义,检测系统呈线性;厂家给定的参考范围不适合本实验所在地人群。结论国产红细胞叶酸检测仪精密度、正确度和线性符合要求;实验室应建立适合当地人群的参考范围。     

自建新检测系统ALT测定的精密度和正确度评价

目的通过对自建新检测系统与参考系统ALT测定进行精密度和正确度评价,探讨自建新检测系统ALT测定结果的随机误差和系统误差,是否达到临床可接受标准。方法参照CLSI的EP5-A2和EP9-A2文件,以德灵全自动生化分析仪检测系统作为参考系统,自建新检测系统作为待评系统,分别用质控品和新鲜标本进行精密度评价和正确度评价。结果精密度评价:自建新检测系统天间不精密度和批内不精密度分别小于1/3和1/4允许误差;正确度评价:两个检测系统相关性良好,系统误差在临床允许误差范围内。结论自建新检测系统的误差达到临床可接受标准,检测结果具有可比性。     

两种校准品和3种双缩脲试剂测定血清总蛋白结果偏倚评估及方法学评价

目的评估两种校准品及3种双缩脲试剂盒测定血清总蛋白结果的偏倚,评价3种双缩脲试剂盒血清总蛋白的精密度、线性和灵敏度。方法用3种双缩脲试剂盒及两种校准品组合成6个检测系统,按NCCLS EP9-A文件,评估3种双缩脲试剂盒及两种校准品测定结果偏倚和统计学分析;按NCCLS EP5-A文件,评价3种双缩脲试剂盒批内、批间、日间和总CV%。按NCCLS EP6-P文件评价3种双缩脲试剂盒的线性;比较3种双缩脲试剂盒测定同一份血清在540nm处的吸光度。结果用Roche校准血清(c.f.a.s)校准仪器,双缩脲试剂盒B、C与试剂盒A比较,差异无统计学意义(P>0.05);用总蛋白标准液校准仪器,试剂盒B与试剂盒A比较,差异无统计学意义(P>0.05),试剂盒C与试剂盒A比较,差异具有统计学意义(P<0.01);3种双缩脲试剂盒测定血清总蛋白总CV为0.86%～1.16%;波长为540nm,试剂盒A的吸光度明显高于试剂盒B、C;试剂盒A和B线性良好(FF0.05)。结论测定血清总蛋白,建议用Doumas配方的双缩脲试剂和基质状态与病人血清相似的校准血清。     

补体分子Clq免疫透射比浊法的方法学评价

目的对Clq检测试剂盒进行方法学初步评价。方法根据美国临床和实验室标准协会颁布的《定量l临床检验方法的初步评价批准指南》第2版（EPl0．a2）提供的方法,按特定的顺序连续测定来自中山大学附属第一医院低、中、高浓度的病人标本5d,对该试剂盒检测方法的性能进行初步评价。结果当Clq低、中、高浓度的血清的靶值分别为98．02、194．28、290．54mg／L时,Clq测定的线性回归方程为Y=I．012X＋5．072,相关系数为0．997;绝对偏差分别是3．41、13．97、5．87mg／L;总不精密度（CV％）分别为2．43％、7．06％、5．28％。结论Clq检测试剂盒检测方法的线性、偏倚和抗交叉污染能力均达到EPl0．A2文件标准,符合临床应用要求。中值和高值的总不精密度提示超出可接受范围,需要进一步进行评估。     

不同生化分析系统间结果的可比性探讨

目的通过对同一实验室不同生化分析系统进行方法对比及偏差评估试验,探讨不同生化分析系统间检测结果的可比性。方法先按照NCCLS（EP5-T2）文件要求,对美国贝克曼库尔特CX4 PRO及CX9 ALX生化分析仪进行精密度试验;然后按照NCCLS（EP9-A2）文件要求,以CX4 PRO为对比方法,以CX9 ALX为试验方法,用患者血清对丙氨酸氨基转移酶（ALT）、清蛋白（ALB）、总胆固醇（TC）等20个生化项目进行检测,统计计算两方法间的相关系数和直线回归方程,并评估两分析系统间的预期偏差。结果两分析系统的批内及总精密度（CV）与厂商提供的参数相符;所有20个检测项目的测定结果的预期偏差均可接受。结论若同一实验室拥有2套或2套以上生化分析系统时,应当进行方法对比及偏差评估试验,以保证其检测结果准确一致。     

不同生化检测系统结果一致性修正方法的探讨

目的 探讨干、湿化学法两种生化分析系统检测结果的比对和修正方法, 使不同分析系统检测结果具有可比性。 方法 比对方法学参照EP9-A2文件, 并对数据进行偏倚分析, 计算修正参数, 重新设置实验检测系统后再做简单比对, 验证修正方案的可行性。 结果 10个比对项目中, 4个项目的结果比对偏倚超出规定误差范围, 以回归分析所获得的修正参数对干化学检测数据进行调整后, 新获得数据与对比仪器原始数据结果再次比对, 偏差落在规定误差范围内;以此修正系数进行仪器设定后进行简单比对, 结果可接受。 结论 不同原理检测系统参照本方案进行修正后, 仪器间的检测结果获得了可比性, 有利于临床工作中同一项目急诊(多为干化学法)与非急诊(多为湿化学法)检测结果之间变化的直接观察和分析。     

日立生化分析仪检测尿微量白蛋白结果评价与分析条件

研究生化分析仪在不同分析条件下检测尿微量白蛋白(MAU)的差异。方法基于全自动生化分析仪,以CLSI EP9-A2和EP7-A2方案为基础,设计3种检测方法(方法1:血、尿样本同批随机分析;方法2:尿样单独批次分析;方法3:批尿样插入血样同批分析)测相同样本中的MAU,并对检测数据进行统计学分析。结果与特定蛋白分析数据比较:方法1所得结果差异有统计学意义(P<0.001,r=0.968 2,偏倚=40.9);方法2所得结果差异无统计学意义(P>0.05,r=0.998 9,偏倚=0.8);方法3结果显示血清样本对后续多个MAU检测存在严重携带交叉污染,污染率最高可达341.3%。结论根据临床医学决定水平和CLIA’88(2003)及EP7-A2要求,方法1可能会误导临床诊断和治疗;方法3显示系统携带交叉污染会对后续多个检测结果造成干扰;方法2可满足临床应用要求。     

不同生化检测系统测定项目的可比性及临床可接受性研究

目的:通过对不同检测系统进行方法比对分析,探讨各系统之间检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)和血糖(GLU)五个项目测定结果具可比性。方法:依据美国临床实验室与标准化委员会(NCCLS)的EP-A2有关文件,选择具有代表性的五个检测项目,首先研究各个系统的精密度,再通过系统间的比对进行准确度、相关性分析。以日立(Hitachi)7600-110全自动生化分析仪作目标检测系统1,日立7170作实验检测系统2,强生(Vitros-)350全自动干式生化分析仪作为比对仪实验检测系统3,每天选取2份新鲜混合血清,分别在三台仪器上测定该五个项目,共测20次取其均值并记录结果。结果:五个项目在三个检测系统的日内精密度均小于CLIA’88(美国临床实验室修正法规)允许总误差(TEa)的1/4,日间精密度小于CLIA’88TEa的1/3;各个试验系统与目标系统比对的相关系数r>0.975,P>0.5,系统误差(SE%)小于CLIA’88规定的Ea的1/2。结论:三个检测系统的检测项目结果准确可靠,相关性良好,临床可以接受。     

新鲜全血比对在不同型号血液分析仪中的临床应用

目的 通过新鲜全血比对实验,评价同一品牌不同型号血液分析仪检测结果的一致性和准确性。方法对本室4台迈瑞BC系列血液分析仪采用NCCLS EP9-A2指南进行比对,采用10份新鲜全血检测,以BC-5500测定的值作为标准,其它仪器的测定值与其进行比对。结果 4台血液分析仪精密度好,所得结果均小于国际血液学标准化委员会（ICSH）和美国临床实验室标准委员会（NCCLS）的相关规定范围;符合1/2 CLIA’88的标准：WBC≤7.5%,RBC≤3.0%,HGB≤3.5%,HCT≤3.0%,MCV≤3.5%,MCH≤3.5%,MCHC≤3.5%,PLT≤12.5%;检测结果均在可接受范围内。结论 应用新鲜全血对血液分析仪进行比对试验,能及时发现仪器间的系统误差和提高同一实验室不同血液分析仪检测结果的准确性和一致性。     

表达A3C的HBV载体质粒抑制HBV的研究

目的 观察表达人类载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3C(A3C)的复制缺损型HBV载体质粒抑制乙型肝炎病毒(HBV)的作用.方法 利用PCR技术和基因重组方法构建表达A3C和人绿色荧光蛋白(hrGFP)的FIBV载体质粒pcH-LJ3-A3C、pCH-LJ3-hrGFP.分别与野生型HBV质粒pCH-3093共转染HepG2细胞,提取细胞裂解液及细胞培养上清液中病毒颗粒DNA进行Southern blot检测;提取细胞裂解液中核心蛋白相关的HBV DNA,PCR扩增,克隆,测序.结果 pCH-LJ3-A3C对细胞浆及细胞培养上清液中病毒颗粒DNA具有抑制作用,使细胞浆内HBV DNA减少31%,使上清液中子代病毒颗粒HBV DNA减少40%;对HBV DNA具有编辑作用,50个克隆测定HBV DNA序列,36克隆出现G-A突变,G-A突变总数量982位点.结论 pCH-LJ3-A3C可以抑制HBV复制,pCH-LJ3-A3C对HBV DNA的编辑作用是其发挥作用的主要原因,pCH-LJ3-A3C可以作为一种新型的抗病毒制剂治疗HBV感染.

Abstract：

Objective To observe the inhibitory effect of a replication-defective hepatitis B virus (HBV) vector plasmid expressing A3C on HBV replication in vitro. Methods The HBV vector plasmisd pCH-LJ3-A3C and pCH-LJ3-hrGFP expressing A3C and hrGFP were constructed using PCR and gene recombination technique. The two recombinant plasmids were separately cotranfected into HepG2 cells along with the wild-type HBV plasmid pCH-3093. The HBV DNA in the cell cytoplasmic lysates and in the cell culture supernatant was extracted for Southern blotting, and the nucleocapsid-associated HBV DNA were amplified by PCR, cloned and sequenced. Results pCH-LJ3-A3C showed obvious inhibitory effect on HBV DNA in the cytoplasmic lysates and cell culture supernatant, causing a reduction of the HBV DNA by 31% and 40%, respectively. The pCH-LJ3-A3C plasmid was capable of editing the HBV DNA. Among the 50 sequenced clones, 36 clones had G-A mutations, with a total of 982 such mutations. Conclusion pCH-LJ3-A3C can inhibit the replication of HBV primarily by editing HBV DNA. The pCH-LJ3-A3C plasmid may serve as a new antiviral agent against human HBV infection.