大骨节病儿童关节软骨蛋白多糖组分构成的定性观察

本文应用盐离子浓度不同的阿尔新蓝染色法,定性观察了正常儿童和大骨节病儿童关节软骨蛋白多糖组分构成不同。看到大骨节病儿童关节软骨硫酸角质素(KS)和硫酸软骨素(CS)都减少,相对(KS)比正常者有增加趋势。并对其可能发生的原因进行了探讨。     

大骨节病儿童及成人关节软骨中甲状旁腺激素相关肽的表达

目的 探索甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)在大骨节病儿童及成人关节软骨中的表达及分布。方法 应用免疫组化方法比较正常儿童和成人与大骨节病儿童和成人关节软骨中PTHrP的表达。结果 ①大骨节病儿童关节软骨表层、中层、深层PTHrP阳性细胞表达率分别为30％、24％和31％，中层、深层表达率比正常儿童明显增高(P＜0．01)；②大骨节病成人关节软骨表、中、深层PTHrP阳性细胞表达率分别为54％、46％和16％，各层细胞阳性表达率均明显高于正常组(P＜0．01)。②大骨节病儿童与成人比较各层软骨细胞PTHrP的阳性表达差异均有显著意义(P＜0．01)，表现为表、中层成人高于儿童，深层儿童高于成人。结论 大骨节病患者关节软骨中PTHrP阳性表达率高于正常对照。     

TGF-β在大骨节病儿童及成人关节软骨中的表达

为探索转化生长因子β（TGF-β）在大骨节病儿童及成人关节软骨中表达的分布情况,应用免疫组化方法比较正常的儿童和成人与大骨节病儿童和成人关节软骨中TGF－β的表达。结果显示,（1）大骨节病儿童关节软骨表层、中层、深层TGF－β阳性细胞表达率分别为30％,24％和31％,中层、深层表达率比正常儿童明显增高（P＜0．001）;（2）大骨节病成人关节软骨表、中、深层分别为54％,46％和16％,各层细胞阳性表达率均明显高于正常组（P＜0．001）;（3）大骨节病儿童与成人比较各层软骨细胞TGF－β的阳性表达均有显著性差异（P＜0．001）,表现为表、中层成人高于儿童,深层儿童高于成人。这提示大骨节病患者关节软骨中TGF－β阳性表达率高于正常对照。     

从软骨的病理改变研究大骨节病的病因

在研究大骨节病的病因时,作者认为主要应考虑(1)病因因素必须和流行病学调查相符合,(2)以病因因素作动物实验时,应能复制出类似人大骨节病病理改变的模型。 大骨节病软骨的病理改变为软骨细胞的坏死,因此作详细的光镜及电镜对比观察,判断哪一种因素引起的软骨细胞坏死,最近似人大骨节病的病理改变,这对于理解大骨节病的病因、发病机制及进行防治,都是有用的。     

骨膜移植关节成形术治疗大骨节病掌指关节功能障碍

大骨节病造成的掌指关节畸形和功能障碍在治疗上仍是一个比较难解决的问题。1975年Engkvist和Skoog首先报告临床应用软骨移植掌指关节成形术方法治疗掌指关节功能障碍以来,我科自1999~2005年,应用骨膜移植掌指关节成形术治疗大骨节病致掌指关节功能障碍取得了良好的临床效果。1     

大骨节病儿童血清对稳态培养牛关节软骨蛋白多糖合成代谢…

利用牛关节软骨稳态培养模型，我们研究了大骨节病患儿血清、病区正常儿童血清和非病区正常儿童血清对蛋白多糖合成代谢的影响。结果显示，与非病区儿童血清相比，大骨节病患儿血清显著抑制了培养软骨蛋白多糖的＾３６Ｓ掺入率及已糖醛酸含量。提示病区致病因子作用于血清中与软骨代谢有关的因子，导致了大骨节病软骨代谢的异常。     

大骨节病人骺板软骨超微结构的观察

本文用透射电镜观察5例大骨节病人指(趾)骨的骺板软骨。看到未见明显坏死的增殖细胞已出现致密化和空泡化。在明显坏变的增殖层细胞周围,基质胶原纤维间距增宽,蛋白多糖颗粒减少,以及下部增殖层细胞间纵隔基质检见带有最早的磷灰盐结晶的基质小泡,显示了钙化增强现象。     

儿童与成人大骨节病关节软骨X型胶原表型和bFGF的表达

目的探讨儿童与成人大骨节病关节软骨中X型胶原表型和bFGF表达的分布特点。方法用单克隆和多克隆免疫组化法检测大骨节病与对照组关节软骨X型胶原表型和bFGF表达。结果(1)儿童大骨节病关节软骨深层X型胶原表型表达率(35.0%)比儿童对照组(63.0%)明显减少(P<0.01);(2)儿童大骨节病关节软骨中层X型胶原表型表达(0.0%)较成人大骨节病组(34.0%)减弱(P<0.01);(3)儿童大骨节病软骨表层bFGF表达率(6.0%)低于对照组(21.0%)(P<0.01),而中、深层表达(分别为12.0%、37.0%)与对照组(无表达)相比明显增多(P<0.01)。成人大骨节病关节软骨bFGF表达阳性率(分别为47.0%、37.0%、11.0%)与对照组(分别为19.0%、15.0%、1.0%)比较明显增多;(4)成人大骨节病关节软骨bFGF阳性表达在表、中层表达明显高于儿童组(P<0.01),深层儿童大骨节病组高于成人组(P<0.01)。结论X型胶原表型和bFGF表达在儿童与成人大骨节病关节软骨的分布不同。     

大骨节病关节软骨真菌毒素环境反应基因表达谱研究

目的 比较分析真菌毒素环境反应基因在大骨节病(Kashin-Beck disease,KBD)和正常关节软骨中的表达谱差异,探讨真菌毒素环境反应基因与KBD软骨损伤的关系.方法 采集9例KBD患者和9例正常对照关节软骨样本,提取总RNA.采用Agilent基因表达芯片评估真菌毒素环境反应基因在软骨样品中的表达量,并计算每个基因在KBD和正常对照软骨中表达量的比率(简称表达率).采用GSEA软件计算每个基因功能分类表达量的NES指数及P值.结果 ①T-2毒素、脱氧镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1、伏马菌素B1和赫曲霉毒素A相关的15个环境反应基因在KBD和正常对照关节软骨中的表达水平存在差异(表达率＞2.0或＜0.5),其中13个基因在KBD软骨中上调,包括BAX、BCL2、COL5A2、FER1L3、GSTT2、IGFBP2、IGFBP4、PDE8B、SOCS3、THBS1、TMSL8、VGLL3和TUBB2A(表达率＞2.0);2个基因在KBD软骨中下调,包括POSTN和FABP4(表达率＜0.5).上述15个基因功能主要涉及胶原、细胞凋亡、代谢和生长发育等.②真菌毒素相关的4个凋亡基因功能分类和5个生长发育基因功能分类在KBD关节软骨中上调(NES＞0),包括ANTI_APOPTOSIS、REGULATION OF PROGRAMMED_CELL_DEATH、APOPTOSIS_GO、EGULATION_OF_APOPTOSIS、ORGAN MORPHOGENES IS、ANATOMICAL_STRUCTURE_ DEVELOPMENT、ORGAN_DEVELOPMENT、SYSTEM DEVELOPMENT和REGULATION—OF_DEVELOPMENTAL_PROCESS (NES＞0且P＜ 0.05).结论 KBD软骨中存在多种真菌毒素的环境反应基因表达且显著不同于正常对照,提示真菌毒素可能通过影响相关环境反应基因在关节软骨中的表达,诱发软骨细胞功能障碍和关节软骨损伤.     

大骨节病区患儿血清对体外培养兔软骨细胞影响的扫描电镜和透射电镜观察

本文研究了11例大骨节病患儿血清对培养兔软骨细胞的影响。传代兔关节软骨细胞在含5%病人血清的培养液内培养生长48小时及96小时、然后作扫描电镜和透射电镜观察。软骨细胞表面出现许多囊泡。粗面内质网扩张,线粒体肿胀和嵴断裂。胞浆内见到大量脂滴和髓鞘样结构。发生上述改变的原因有待进一步研究。     

大骨节病患者软骨中组织蛋白酶D的活性

本文测定了大骨节病和非骨关节病患者的关节软骨溶酶体组织蛋白酶 D 活性。结果表明 大骨节病患者组织蛋白酶 D 活性不论是游离型或是酶的总活性均较非骨关节病惠者的酶活性升高,游离型与酶总活性的比值也增大。     

雪腐镰刀菌烯醇致软骨细胞的损伤作用

应用不同浓度的雪腐镰刀菌烯醇（ＮＩＶ）作用于培养的兔软骨细胞，动态观察ＮＩＶ对软骨细胞生长代谢的影响。结果显示ＮＩＶ能使软骨细胞中的ＤＮＡ，基质中的葡萄糖醛酸（ＧＬｃＵＡ）和碱性磷酸酶（ＡＫＰ）含量降低。表明ＮＩＶ对软骨细胞具有明显的毒性损伤作用，能够引起软骨细胞的形态结构和代谢功能的改变。     

Characterization of the macromolecular components of the articular cartilage surface

The intact surface of articular cartilage is a highly organized structure composed of a variety of macromolecules. The studies reported here deal with a partial characterization of the non-covalently bound components of the outermost layer of articular cartilage. Normal bovine and human cartilage articular surfaces were extracted for 5 min with 4-M guanidine HCl solution. Analysis and quantitation of small proteoglycans in the extract were carried out by PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis), Western blot, and radioimmunoassays. The present studies indicate that the major proteins extracted from the articular surface of bovine and human cartilage are the collagen-binding small proteoglycans designated as fibromodulin and albumin. Fibronectin, decorin, and biglycan were also detected in smaller amounts. Immunoblotting of the surface material developed with a monoclonal antibody with keratan sulfate specificity confirmed the presence of fibromodulin coinciding with the major protein band of approximately 70–100-kDa molecular mass. Gel filtration chromatography of the surface material confirmed the previous results. Additional in vitro assays showed that the collagen-binding material extracted from the cartilage surface contained the small proteoglycans. Anti-human fibromodulin antibodies bound in significantly greater amounts to the intact articular surfaces than to cut surfaces of normal human cartilage. It is concluded that small, non-aggregating proteoglycans constitute the major proteoglycan species non-covalently bound to macromolecules at the articular surface of cartilage partially responsible for the interference of anti-collagen type II antibody binding and for the inhibition of cell adhesion to the intact surface. Received: 3 May 1998 / Accepted: 5 June 1998     

组织工程软骨修复兔膝关节软骨大面积深层缺损的实验研究

目的　将培养的软骨细胞埋在胶原凝胶中,观察其对家兔漆关节软骨大面积深层缺损的修复作用。方法体外培养软骨细胞,然后与胶原以一定比例混合培养,植入免膝关节股骨负重面的缺损（５ｍｍ ×４ｍｍ）部位,观察 ２、４、８．１２周软骨缺损的修复情况,并进行大体和组织学观察。结果移植后第 ８周,所修复组织的边缘变得模糊,与周围宿主整合得很好,缺损边缘不清晰。组织学观察,缺损处表面光滑,边缘与宿主完全整合,缺损处呈典型的关节软骨样组织,并且底部有新形成的软骨及骨小梁生成。对照组（未移植组）组织学观察缺损部位主要为纤维组织所填充,未见有由新生软骨细胞形成的软骨组织。结论埋在胶原凝胶中软骨细胞对家兔膝关节软骨深层缺损的修复作用。     

应用同种异体组织工程软骨修复关节软骨缺损观察

目的用胶原蛋白和人血纤维蛋白混合物为载体支架在体外进行软骨细胞三维立体培养,构建人工软骨组织,利用此人工软骨修复关节软骨缺损。方法取2周龄兔关节软骨,经消化、分离的软骨细胞体外培养。培养第3周时,进行免疫组织化学分析;利用培养3周的人工软骨对异体成兔的关节软骨损伤进行修复。结果培养物内软骨细胞均得到较好存活,形成软骨陷窝,出现同源性细胞簇,分泌软骨基质;DNA和糖胺多糖(GAG)在培养第24天时达到高峰,分别为(5.18±0.19)、(214.3±2.8)μg/块;对异体关节软骨损伤的移植修复结果良好,在12周时,移植物与周边正常组织结合紧密、齐高,移植的软骨细胞趋于柱状排列,为透明软骨组织。结论用胶原蛋白和人血纤维蛋白为载体支架体外培养软骨细胞,可构建较大的组织工程软骨,能较好地修复同种异体关节软骨缺损。     

Expression of CD44 in articular cartilage is associated with disease severity in knee osteoarthritis

Abstract

Objectives To investigate CD44 levels in articular cartilage of knee osteoarthritis (OA) and the relationship between CD44 and severity of the disease.

Methods All 50 cartilage tissues included normal and OA cartilage, and were ascribed to the following four groups on the basis of modified Mankin score: normal, mild lesions, moderate lesions and severe lesions. CD44 levels in articular cartilage were assessed by immunohistochemical methods.

Results CD44 levels were detected in all four groups. The difference in average gray value of CD44 expression showed statistical significance when compared between each group (P < 0.05). In addition, CD44 expression in each group correlated with disease severity, according to the modified Mankin score (ρ = ?0.848, P < 0.01).

Conclusions CD44 in articular cartilage is associated with progressive knee OA joint damage.     

透明质酸对体外培养大骨节病软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的 通过观察透明质酸(HA)对体外培养的大骨节病(Kashin-Beck disease,KBD)软骨细胞增殖、凋亡的影响,为临床上HA治疗KBD提供实验依据.方法 依据<大骨节病诊断标准>(GB 16003-1995)收集KBD患者和遭遇意外事故的病人(对照组)关节软骨,分离、体外培养关节软骨细胞.选用第2代细胞进行实验.两组软骨细胞分别给予不同剂量的HA,按HA剂量分为0、100、500 mg/L组.通过二苯甲唑溴盐(MTT)实验,测定第2、4、6天HA对KBD组、对照组软骨细胞增殖的影响.并通过流式细胞检测观察HA对软骨细胞凋亡的影响.结果 对照组在第4天时,500 mg/L组(0.140 ±0.049)促软骨细胞增殖作用大于0 mg/L组(0.116±0.021);KBD组在第6天时,500 mg/L组(0.179±0.081)与0 mg/L组(0.128 ±0.017)比较,显示了明显的促增殖作用(P<0.05).KBD组细胞凋亡率100、500 mg/L组(10.458±1.143、7.877±1.346)均较0 mg/L组(12.860±2.159)下降(P<0.05);对照组500 ms/L组(4.045±1.204)较0 mg/L组(7.128±1.244)细胞凋亡率下降(P<0.05).结论 HA对KBD软骨细胞具有促进增殖和抑制软骨细胞凋亡的作用,其中500 mg/L的HA改善KBD软骨细胞代谢的作用较100 mg/L明显.